專(zhuān)利名稱(chēng)：載藥脂質(zhì)體及其制備方法
載藥脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑學(xué)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種載藥脂質(zhì)體及其制備 方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體(liposomes)是一種由排列有序的脂質(zhì)雙分子層組成的單層或多層微囊。 脂質(zhì)體屬于膠體系統(tǒng)，具有類(lèi)似細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，與細(xì)胞膜親和力強(qiáng)，可以增加被包封藥物透過(guò) 細(xì)胞膜的能力。脂質(zhì)體生物相容性好，可實(shí)現(xiàn)藥物體內(nèi)靶向遞送，具有延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間、 增加藥物的體內(nèi)外穩(wěn)定性、降低藥物毒性，增強(qiáng)藥理作用等諸多優(yōu)點(diǎn)。近年隨著脂質(zhì)體研究的深入，個(gè)性化脂質(zhì)體越來(lái)越多，如磁性脂質(zhì)體、溫敏脂質(zhì) 體、免疫脂質(zhì)體等，并且根據(jù)需要，脂質(zhì)體可以將粒徑限定于微米級(jí)或納米級(jí)，尤其是納米 級(jí)脂質(zhì)體在靶向控釋、增強(qiáng)藥物穩(wěn)定性、提高載藥量、批量化生產(chǎn)和滅菌等方面具有較明顯 的優(yōu)點(diǎn)。早期研究制備的脂質(zhì)體主要成分是天然磷脂，如卵磷脂、腦磷脂、磷脂酰膽堿、磷 脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺等。由于其天然磷脂結(jié)構(gòu)中存在不飽和鍵，因此容易氧化，制成 的脂質(zhì)體穩(wěn)定性差，容易聚集，藥物容易滲漏出來(lái)。氫化或合成的磷脂材料不易氧化，可以合用膽固醇，也可以單獨(dú)應(yīng)用，制成的脂質(zhì) 體穩(wěn)定性明顯提高。已有報(bào)道的人工氫化或合成的磷脂材料制成的載藥脂質(zhì)體雖然比天然磷脂制成 的脂質(zhì)體穩(wěn)定性有了提高，但長(zhǎng)時(shí)間放置于環(huán)境中仍然存在聚集、熱穩(wěn)定性差、藥物滲漏等 問(wèn)題，因此影響其制劑的有效、安全和穩(wěn)定。羥乙基淀粉由支鏈淀粉衍生而出，是富含淀粉的復(fù)合物，為高分子膠體物質(zhì)。本品 按分子量的大小分為可細(xì)分為低分子羥乙基淀粉(羥乙基淀粉20，羥乙基淀粉40)、中分 子羥乙基淀粉(羥乙基淀粉130/0. 4，羥乙基淀粉200/0. 5)與高分子量高取代級(jí)的羥乙基 淀粉(羥乙基淀粉480/0. 7)。本品靜脈滴注后，較長(zhǎng)時(shí)間停留于血液中，提高血漿滲透壓， 擴(kuò)充血容量，使組織液回流增多，迅速增加血容量，稀釋血液，維持人體正常血壓。并能增加 細(xì)胞膜負(fù)電荷，使已聚集的細(xì)胞解聚，有抑制血管內(nèi)紅細(xì)胞聚集作用，降低全身血粘度，改 善微循環(huán)。目前羥乙基淀粉主要作為臨床代血漿，應(yīng)用于低血容量性休克。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有的載藥脂質(zhì)體及其制備方法的不足之處，提 供一種穩(wěn)定性高的載藥脂質(zhì)體及其制備方法。我們?cè)谘芯刻岣咧|(zhì)體的有效性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，羥乙基淀粉包被的氫化 磷脂或合成磷脂材料制備的脂質(zhì)體不但具有較好的物理穩(wěn)定性，明顯提高脂質(zhì)體對(duì)光、熱 的穩(wěn)定性，并且可以延長(zhǎng)藥物的釋放時(shí)間。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，利用干燥工藝將羥乙基淀粉包 被的載藥脂質(zhì)體制成固體后，便于制成各種制劑，也便于制劑的保存和運(yùn)輸，增加制劑體內(nèi)外的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間。經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，為提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案本發(fā)明的脂質(zhì)體中含有氫化磷脂或合成磷脂成分和保證脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的羥乙 基淀粉，還含有藥學(xué)上認(rèn)可的表面活性劑、多元醇或糖類(lèi)、大分子骨架支持劑，脂質(zhì)體中的 磷脂成分與羥乙基淀粉之間可為任意比例，當(dāng)磷脂成分包括兩種或兩種以上時(shí)，它們之間 也可為任意比例，該脂質(zhì)體包載具有治療、保健、美容作用的中藥、西藥或生物制品藥物。上述的氫化磷脂包括氫化蛋黃磷脂和/或氫化大豆磷脂，合成磷脂是指藥學(xué)已 公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物，包括二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰 膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂 酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物。上述的羥乙基淀粉包括低分子量羥乙基淀粉、中分子量羥乙基淀粉與高分子量高 取代級(jí)的羥乙基淀粉。上述的藥學(xué)上認(rèn)可的表面活性劑、多元醇或糖類(lèi)、骨架支持劑包括吐溫、司盤(pán)、油 酸、十六醇、十八醇、甘油、單硬脂酸甘油酯、丙二醇、甘露醇、海藻糖、葡萄糖、乳糖、殼聚糖、 聚乙二醇、泊洛沙姆、明膠。上述的載藥脂質(zhì)體的制備方法包括如下步驟步驟(a)磷脂類(lèi)成分加入到醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到含有表面活性劑的水溶液中， 利用注入法、超聲分散、攪拌或高壓均化作用使其充分混勻，可采用不同孔徑的濾膜過(guò)濾， 形成粒徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀微粒混懸液，羥乙基淀粉加入于所述含有表面活性劑 的水溶液中或所述乳狀微?；鞈乙褐?；步驟(b)加入適量的藥學(xué)公認(rèn)的骨架支持劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、PH調(diào)節(jié)劑、表面 活性劑中的一種或幾種，利用減壓蒸發(fā)、減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥方法中的一種或幾 種干燥方法的組合得到脂質(zhì)體固體或濃縮液。上述的醇溶液是指碳數(shù)在1-6范圍內(nèi)的直鏈或支鏈醇單獨(dú)或與其它溶劑混合使 用，優(yōu)選乙醇、叔丁醇。需要包載的藥物根據(jù)自身極性溶于醇溶液或水溶液中，同磷脂成分一起制備成載 藥脂質(zhì)體，或者利用被動(dòng)載藥方式或主動(dòng)載藥方式包裹到空白脂質(zhì)體中。上述的被動(dòng)載藥方式是指用將空白脂質(zhì)體加入到含有藥物的溶液中，藥物依靠自 身濃度梯度進(jìn)入空白脂質(zhì)體中形成載藥脂質(zhì)體。上述的主動(dòng)載藥方式是指利用硫酸銨離子濃度梯度或pH梯度驅(qū)使藥物進(jìn)入空白 脂質(zhì)體的方法，包括藥學(xué)上公認(rèn)的PH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈉梯度法、醋酸鈣梯度 法。上述的骨架支持劑包括聚乙二醇、乳糖、甘露醇、海藻糖、殼聚糖、泊洛沙姆。在步驟(b)之后還包括步驟(c)將步驟(b)得到的脂質(zhì)體固體分裝于小瓶中，并充入氟碳類(lèi)惰性氣體，封 蓋；步驟(d)用臨床常用的注射溶媒或含有藥物的水溶液加入到步驟(C)得到小瓶 中，輕微振搖，即可形成以含氣體核心的空心載藥脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體可以作為超聲靶向遞送 載體。
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上述載藥脂質(zhì)體具有以下優(yōu)點(diǎn)1.上述脂質(zhì)體應(yīng)用氫化磷脂或合成磷脂材料制備，因此不易氧化，比天然磷脂穩(wěn) 定，羥乙基淀粉增強(qiáng)脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，抑制脂質(zhì)體的絮凝、聚團(tuán)、沉淀等現(xiàn)象。2.上述脂質(zhì)體可以提高藥物包封率，減少突釋現(xiàn)象，明顯抑制包載藥物的滲漏，延 長(zhǎng)藥物釋放。3.上述脂質(zhì)體制成固體后，便于藥物制成各種制劑，也便于制劑的保存和運(yùn)輸，增 加制劑體內(nèi)外的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間。4.上述脂質(zhì)體適于包裹各種藥物，特別適用于難溶性藥物、熱敏感的藥物和生物 大分子藥物，并且適用劑型范圍廣，使用方便。5.上述制備的空心載藥脂質(zhì)體含有氣體核心，可以作為新型靶向遞送載體，應(yīng)用 于實(shí)質(zhì)器官腫瘤或血栓等疾病的超聲治療中。
具體實(shí)施方式現(xiàn)結(jié)合下列實(shí)例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明。以下通過(guò)幾個(gè)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1 重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體許多生物技術(shù)藥物雖然具有高度活性，但自身穩(wěn)定性差，需要包載到微粒中，以提 高其穩(wěn)定性，延長(zhǎng)釋藥作用。本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施方案以重組人生長(zhǎng)激素為靶藥，采用氫化 蛋黃磷脂和中分子量羥乙基淀粉為材料，采用被動(dòng)載藥方式制備重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體。空白脂質(zhì)體制備采用乙醇注入法，稱(chēng)取48mg氫化蛋黃磷脂和16mg膽固醇加 入到20ml無(wú)水乙醇中，超聲至完全溶解，構(gòu)成有機(jī)相。稱(chēng)取IOmg吐溫80加入pH = 7的 20ml 0.02mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)中，混勻，構(gòu)成水相。將有機(jī)相注入lOOOr/min攪拌的 (25士2) °C的水相中，lOOOr/min攪拌lOmin，形成脂質(zhì)體混懸液，水浴25°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡乙 醇，濃縮至總體積15ml，得到脂質(zhì)體混懸液，經(jīng)高壓通過(guò)0. 85 μ m濾膜后得到空白脂質(zhì)體， 激光粒徑分析儀測(cè)定，粒徑分布500-850nm，粒子分布均勻。重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體的制備將5ml 2mg/ml重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)溶液加入 到上述脂質(zhì)體混懸液中，10°c水浴中孵育30min，轉(zhuǎn)入IOml含0. 5g羥乙基淀粉130/0. 4的 水溶液中，加入IOOmg海藻糖作為骨架支持劑，混勻后轉(zhuǎn)入廣口瓶中，-20°C冷凍lh，冷凍干 燥(5X10-4Pa，20h)得到重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體固態(tài)凍干品。同法制備不含羥乙基淀粉的 重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體作為對(duì)照組。包封率測(cè)定取0. 5g重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體固態(tài)凍干品溶解于2ml水中形成重 組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體混懸液，取0. 5ml該液上樣于S^hadex G-50凝膠柱，以蒸餾水為洗脫 液，接取不同體積的洗脫部分，分離載rhGH脂質(zhì)體之后，以考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測(cè)定含 游離rhGH溶液中rhGH含量，計(jì)算包封率。放置考察實(shí)驗(yàn)組(含羥乙基淀粉的重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體)和對(duì)照組(不含羥 乙基淀粉的重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體)樣品各取一滴涂布于載玻片上，顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)觀 察，激光粒徑分析儀測(cè)定粒徑，并依據(jù)“包封率測(cè)定”方法測(cè)定包封率。重組人生長(zhǎng)激素脂 質(zhì)體混懸液樣品于15°C放置0. 5h后，再次進(jìn)行形態(tài)觀察和包封率測(cè)定。形態(tài)結(jié)果顯微鏡下，實(shí)驗(yàn)組微粒形態(tài)圓整，顆粒分布均勻，無(wú)聚團(tuán)或絮凝現(xiàn)象，激
5光粒徑分析儀測(cè)定粒徑分布800-1200nm，放置0. 5h后無(wú)顯著變化。對(duì)照組微粒形態(tài)圓整， 顆粒分布較均勻，有輕微聚團(tuán)現(xiàn)象，激光粒徑分析儀測(cè)定粒徑分布1000-1500·，放置0. 5h 后微粒明顯聚團(tuán)，體積增大。包封率結(jié)果見(jiàn)表1，實(shí)驗(yàn)組平均包封率高于對(duì)照組，放置0.5h后，實(shí)驗(yàn)組平均包 封率下降幅度較小，而對(duì)照組平均包封率下降幅度較大。結(jié)果顯示，本發(fā)明制備的重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體有效提高了藥物的包封率，提高 載藥脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，并抑制了藥物從脂質(zhì)體中的滲漏。表1重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體放置考察的包封率結(jié)果
、包封率(%)
分組
Oh0.5 h
對(duì)照組
(不含羥乙基淀粉的 72 土 640 士 5
重組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體) 實(shí)驗(yàn)組
(含羥乙基淀粉的重 85 ±778 土 6
組人生長(zhǎng)激素脂質(zhì)體)實(shí)施例2 紫杉醇脂質(zhì)體—些藥物需要發(fā)揮長(zhǎng)效作用，以降低給藥次數(shù)。本發(fā)明的第二個(gè)實(shí)施方案利用抗 腫瘤藥物紫杉醇為靶藥，采用合成磷脂和高分子量高取代級(jí)的羥乙基淀粉為材料制備紫杉 醇脂質(zhì)體。紫杉醇脂質(zhì)體的制備5mg紫杉醇、6mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、Img聚乙二醇 2000接枝的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)加入16ml氯仿甲醇(3 1，V/V)的 混合溶劑溶解，構(gòu)成有機(jī)相。稱(chēng)取IOmg吐溫80加入pH = 7的20ml 0. 02mol/L磷酸鹽緩沖 液(PBS)中，混勻，構(gòu)成水相。將有機(jī)相注入lOOOr/min攪拌的(25士2) °C的水相中，IOOOr/ min攪拌lOmin，形成脂質(zhì)體混懸液，水浴25°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，濃縮至總體積15ml， 得到脂質(zhì)體混懸液，經(jīng)高壓通過(guò)0. 85 μ m濾膜后，加入IOml含50mg羥乙基淀粉480/0. 7的 水溶液中，加入IOOmg甘露醇作為骨架支持劑，混勻后分裝西林瓶中，-20°C冷凍lh，冷凍干 燥(5X10-4Pa，20h)得到紫杉醇脂質(zhì)體固態(tài)凍干品。同法制備不含羥乙基淀粉的紫杉醇脂 質(zhì)體固態(tài)凍干品作為對(duì)照組。包封率測(cè)定取50mg紫杉醇脂質(zhì)體固態(tài)凍干品溶解于Iml水中形成紫杉醇脂質(zhì) 體混懸液，取200 μ 1紫杉醇脂質(zhì)體混懸液上樣于Si5Phadex GlOO柱上，以蒸餾水為洗脫液， 接取不同體積的洗脫部分，測(cè)定各洗脫部分中藥物的含量。將紫杉醇脂質(zhì)體混懸液用30% (體積分?jǐn)?shù))乙腈水溶液溶解后，過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣50μ 1，用高效液相法檢測(cè)其中紫杉醇 的含量，液相條件流動(dòng)相，乙腈水=7 3(體積比)，檢測(cè)波長(zhǎng)=227nm，流速=1. Oml/mirio藥物釋放測(cè)定將半透膜于蒸餾水中浸泡24h后，置于釋放池的中間固定。取紫杉 醇脂質(zhì)體混懸液于釋放池的上部，下部充滿(mǎn)30% (體積分?jǐn)?shù))乙醇水溶液的釋放液。整個(gè) 裝置置于37 °C的恒溫水浴中。分別于0. 5、1、2、4、8、12、16、24h吸取下部溶液100 μ 1，然后 再補(bǔ)充100 μ 1釋放液。用高效液相法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)釋放液中藥物的含量，高效液相條件 同上。藥物釋放結(jié)果本發(fā)明制備的紫杉醇脂質(zhì)體平均包封率均為95%，對(duì)照組(不含 羥乙基淀粉的紫杉醇脂質(zhì)體)平均包封率均為89%。藥物累積釋放率結(jié)果見(jiàn)表2，相比對(duì) 照組，含羥乙基淀粉的紫杉醇脂質(zhì)體延緩了藥物的釋放速度，延長(zhǎng)制劑的藥效。結(jié)果表明， 本發(fā)明制備的紫杉醇脂質(zhì)體包封率高，藥物釋放時(shí)間延長(zhǎng)，沒(méi)有突釋效應(yīng)。表2紫杉醇脂質(zhì)體藥物累積釋放率結(jié)果 實(shí)施例3 莪術(shù)油脂質(zhì)體植物揮發(fā)油等許多液態(tài)難溶性藥物，不適宜直接制成各類(lèi)制劑。本發(fā)明的第三個(gè) 實(shí)施方案以液態(tài)難溶性藥物莪術(shù)油為靶藥，采用氫化大豆磷脂和低分子量羥乙基淀粉制備 納米級(jí)莪術(shù)油脂質(zhì)體，便于其制成各類(lèi)制劑。莪術(shù)油脂質(zhì)體的制備取0. 5g吐溫80、Ig莪術(shù)油和0. 5g氫化大豆磷脂，加入IOml 乙醇，在70°C水浴下溶解，構(gòu)成有機(jī)相。稱(chēng)取Ig明膠和Ig羥乙基淀粉40溶于40ml 70°C蒸 餾水中，作為水相。在3000r/min攪拌條件下，用預(yù)熱過(guò)的注射器將油相緩慢注入水相中， 并高速攪拌lh，得到莪術(shù)油脂質(zhì)體混懸液，加入含Ig乳糖作為骨架支持劑，混合均勻，噴霧 干燥(進(jìn)風(fēng)溫度110°C )得到莪術(shù)油脂質(zhì)體干粉。同法制備不含羥乙基淀粉的莪術(shù)油脂質(zhì) 體作為對(duì)照組。熱穩(wěn)定性考察莪術(shù)油脂質(zhì)體干粉于35°C放置10天，于5天和10天取樣進(jìn)行形 態(tài)觀察。光穩(wěn)定性考察莪術(shù)油脂質(zhì)體干粉于照度為40001x 士 5001x的條件下放置10天，于5天和10天取樣進(jìn)行形態(tài)觀察。60Co輻射考察莪術(shù)油脂質(zhì)體干粉進(jìn)行60Co輻射滅菌(RAD = 150 180萬(wàn))后， 取樣進(jìn)行形態(tài)觀察。形態(tài)觀察方法取莪術(shù)油脂質(zhì)體粉末0. Ig加水Iml溶解，得到莪術(shù)油脂質(zhì)體混懸 液。取一滴樣品涂布于載玻片上，顯微鏡下觀察脂質(zhì)體形態(tài)。結(jié)果如表3、4、5，結(jié)果顯示，本發(fā)明制備的莪術(shù)油脂質(zhì)體有效提高了藥物對(duì)于熱、 光和60Co輻射的耐受性，提高載藥制劑的穩(wěn)定性，便于制劑的制備、儲(chǔ)存和運(yùn)輸。表3莪術(shù)油脂質(zhì)體干粉熱穩(wěn)定性考察結(jié)果 表4莪術(shù)油脂質(zhì)體干粉光穩(wěn)定性考察結(jié)果
油滴粒子析出，平均粒徑團(tuán)，無(wú)可見(jiàn)油滴粒子，平均 4.2|im粒徑 3.4fxm表5莪術(shù)油脂質(zhì)體干粉60Co輻射考察結(jié)果 實(shí)施例4 鹽酸阿霉素脂質(zhì)體本發(fā)明的第四個(gè)實(shí)施方案采用合成磷脂和中分子量的羥乙基淀粉為材料制備鹽 酸阿霉素空心脂質(zhì)體。鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體制備5mg 二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、lmg聚乙二醇2000接枝的二硬脂酰磷脂酰乙醇 胺(DSPE-PEG2000)加入20ml叔丁醇中，65°C溶解，構(gòu)成有機(jī)相。稱(chēng)取5mg鹽酸阿霉素、50mg 羥乙基淀粉130/0. 4和50mg泊洛沙姆188溶于4ml 70°C蒸餾水中，作為水相。在3000r/
微粒圓整，均勾，無(wú)聚 團(tuán)，無(wú)可見(jiàn)油滴粒子，平均 粒徑3.4nm
微粒圓整，均勻，無(wú)聚 團(tuán)，無(wú)可見(jiàn)油滴粒子，平均 粒徑3.4|im
微粒圓整，均勻，無(wú)聚min攪拌條件下，用預(yù)熱過(guò)的注射器將水相緩慢注入有機(jī)相中，形成乳狀微?；鞈乙?，裝于 西林瓶中，液氮速凍，冷凍干燥(5X10-4Pa，20h)得到鹽酸阿霉素脂質(zhì)體固態(tài)凍干品，西林 瓶中充入全氟丙烷氣體飽和，蓋橡膠塞，壓鋁蓋密封。使用前，隔塞注入蒸餾水2ml，輕微搖 動(dòng)，即得到鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體混懸液。同法制備不含羥乙基淀粉的鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體作為對(duì)照組。包封率測(cè)定取2ml鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體混懸液經(jīng)過(guò)2000r/min離心2min，可 以得到含有鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體的白色上層和含有游離藥物的下層溶液，吸取含有游離 藥物的下層溶液0. 5ml，于480nm測(cè)吸收度，代入鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用“包封率(％ ) =[(鹽酸阿霉素總量-游離鹽酸阿霉素量)/鹽酸阿霉素總量]X100”公式計(jì)算鹽酸阿霉 素脂質(zhì)體的包封率。鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體混懸液樣品25°c放置2h后再次測(cè)定包封率。鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱(chēng)取鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用蒸餾水配制成0. 25,0. 5， 1. 0，2. 0，5. Omg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，于480nm測(cè)吸收度，得到鹽酸阿霉素濃度與吸收度的 標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鹽酸阿霉素的濃度。結(jié)果鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體包封率平均值為81%，而對(duì)照組包封率平均值為 72%。25°C放置2h后鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體包封率平均值為73%，而對(duì)照組25°C放置2h 后包封率平均值降為32%。結(jié)果表明本發(fā)明制備的鹽酸阿霉素空心脂質(zhì)體有效抑制藥物的 泄漏，提高藥物制劑使用的安全性和穩(wěn)定性。實(shí)施例5 雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體本發(fā)明的第五個(gè)實(shí)施方案利用醋酸鈣梯度法主動(dòng)包載雙氯芬酸鈉制備雙氯芬酸 鈉脂質(zhì)體。雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體混懸液的制備40mg氫化大豆磷脂和10mg膽固醇脂質(zhì)溶于20ml乙醇，在65°C水浴下溶解，在 3000r/min攪拌條件下，注入30ml 65°C的120mmol/L醋酸鈣水溶液中，持續(xù)攪拌lh揮干 乙醇，得到空白脂質(zhì)體濃縮液，0. 22 um濾膜過(guò)濾，以lOOOmlO. 9% NaCl室溫下透析3次， 45 °C條件下加入8mg雙氯芬酸鈉，于45 °C恒溫振蕩器中孵育20min，加入50mg羥乙基淀粉 130/0. 4，溶解混勻，調(diào)整最終體積至40ml，45°C恒溫振蕩器中孵育lOmin。得到實(shí)驗(yàn)組的雙 氯芬酸鈉脂質(zhì)體混懸液。同法制備不含羥乙基淀粉的雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體混懸液作為對(duì)照組。包封率的測(cè)定取5ml雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體混懸液經(jīng)過(guò)lOOOOr/min離心5min，吸取 含有游離藥物的上層溶液2ml，于274nm測(cè)吸收度，代入雙氯芬酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用“包封率 (%)=[(雙氯芬酸鈉總量-游離雙氯芬酸鈉量)/雙氯芬酸鈉總量]X 100”公式計(jì)算雙 氯芬酸鈉脂質(zhì)體的包封率。雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體混懸液樣品25°C放置2h后再次測(cè)定包封率。雙氯芬酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱(chēng)取雙氯芬酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品，用蒸餾水配制成0. 1,0.2, 0. 5，1. 0，2. 5mg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，于274nm測(cè)吸收度，得到雙氯芬酸鈉濃度與吸收度的 標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算雙氯芬酸鈉的濃度。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體包封率平均值為65%，而對(duì)照組包封率平均值為 42%。25°C放置2h后實(shí)驗(yàn)組雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體包封率平均值為58%，而對(duì)照組25°C放置 2h后包封率平均值降為24%。結(jié)果表明本發(fā)明制備的雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體有效抑制藥物的 泄漏，提高藥物制劑使用的安全性和穩(wěn)定性。
在上述實(shí)施例中，僅對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了示范性描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本 專(zhuān)利申請(qǐng)后可以在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改。
權(quán)利要求
一種載藥脂質(zhì)體，其特征在于所述的脂質(zhì)體中含有氫化磷脂或合成氫化磷脂成分和保證脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的羥乙基淀粉，還含有藥學(xué)上認(rèn)可的表面活性劑、多元醇或糖類(lèi)、骨架支持劑，脂質(zhì)體中的磷脂成分與羥乙基淀粉之間為任意比例。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載藥脂質(zhì)體，其特征在于所述的氫化磷脂包括氫化蛋黃磷 脂和/或氫化大豆磷脂，所述的合成磷脂是指藥學(xué)已公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍 生物，包括二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻 酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸其中一種或幾 種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載藥脂質(zhì)體，其特征在于所述羥乙基淀粉包括低分子量羥 乙基淀粉、中分子量羥乙基淀粉與高分子量高取代級(jí)的羥乙基淀粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載藥脂質(zhì)體，其特征在于所述藥學(xué)上認(rèn)可的表面活性劑、多 元醇或糖類(lèi)、骨架支持劑包括吐溫、司盤(pán)、油酸、十六醇、十八醇、甘油、單硬脂酸甘油酯、丙 二醇、甘露醇、海藻糖、葡萄糖、乳糖、殼聚糖、聚乙二醇、泊洛沙姆、明膠。
5.一種載藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于該制備方法包括如下步驟步驟(a)磷脂類(lèi)成分加入到醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到含有表面活性劑的水溶液中，利用 注入法、超聲分散、攪拌或高壓均化作用使其充分混勻，采用不同孔徑的濾膜過(guò)濾，形成粒 徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀微?；鞈乙?，羥乙基淀粉加入所述含有表面活性劑的水溶液 中或所述乳狀微?；鞈乙褐?；步驟(b)加入適量的藥學(xué)公認(rèn)的骨架支持劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性 劑，利用減壓蒸發(fā)、減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥方法中的一種或幾種干燥方法的組合得 到脂質(zhì)體固體或濃縮液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的載藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述醇溶液是指碳數(shù) 在1-6范圍內(nèi)的直鏈或支鏈醇單獨(dú)或與其它溶劑混合形成的溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的載藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于需要包載的藥物根據(jù) 自身極性溶于醇溶液或水溶液中，同磷脂成分一起制備成載藥脂質(zhì)體，或者利用被動(dòng)載藥 方式或主動(dòng)載藥方式包裹到空白脂質(zhì)體中。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的載藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述被動(dòng)載藥方式是 指將空白脂質(zhì)體加入到含有藥物的溶液中，藥物依靠自身濃度梯度進(jìn)入空白脂質(zhì)體中形成 載藥脂質(zhì)體。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的載藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述主動(dòng)載藥方式是 指利用硫酸銨離子濃度梯度或PH梯度驅(qū)使藥物進(jìn)入空白脂質(zhì)體的方法，包括藥學(xué)上公認(rèn) 的PH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈉梯度法、醋酸鈣梯度法。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的載藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于在步驟(b)之后還包括步驟(c)將步驟(b)得到的脂質(zhì)體固體分裝于小瓶中，并充入氟碳類(lèi)惰性氣體，封蓋；步驟(d)用臨床常用的注射溶媒或含有藥物的水溶液加入到步驟(C)得到的小瓶中， 輕微振搖，即可形成以含氣體核心的空心載藥脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體可以作為超聲靶向遞送載 體，應(yīng)用于實(shí)質(zhì)器官腫瘤或血栓等疾病治療中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種載藥脂質(zhì)體及其制備方法。該脂質(zhì)體含有氫化磷脂或合成磷脂成分和保證脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的羥乙基淀粉。利用該脂質(zhì)體包載藥物，抑制脂質(zhì)體的絮凝、聚團(tuán)、沉淀等現(xiàn)象，減少包載藥物的滲漏，延長(zhǎng)藥物釋放，提高脂質(zhì)體制劑在液態(tài)和固態(tài)時(shí)的穩(wěn)定性，便于制劑的保存和運(yùn)輸。本發(fā)明的脂質(zhì)體適于包裹各種藥物，特別適用于難溶性藥物、熱敏感的藥物和生物大分子藥物，并且適用劑型范圍廣。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101926770SQ20091010819
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2009年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月25日
發(fā)明者趙應(yīng)征, 魯翠濤 申請(qǐng)人:浙江海正藥業(yè)股份有限公司