專利名稱：穩(wěn)定的抗乙型肝炎疫苗片的制作方法
發(fā)明簡述本發(fā)明包括穩(wěn)定表面抗原的方法，所述表面抗原可隨后給藥以對抗乙型肝炎。具體而言，該抗原為片劑，不需要冷藏，而且其舌下吸收消除了對抗乙型肝炎注射液的需要。這可通過穩(wěn)定劑來實現(xiàn)。
乙型肝炎是肝臟的一種炎癥，通常是由病毒感染導致的，但有時是由于毒性藥劑導致的。具體而言，乙型肝炎是由乙型肝炎病毒導致的潛伏期長的病毒性疾病，通常為50-160天，它通常由于注射已感染的血液、血液衍生物或由于使用已污染的針、刀或其他工具而被傳染。乙型肝炎在臨床上和病理學上與甲型病毒肝炎類似，但是沒有交叉保護性免疫。
通常情況下使用靜脈或皮下注射疫苗來對抗乙型肝炎疾病。但是，必需冷藏疫苗以保持其活性。本發(fā)明包括經(jīng)穩(wěn)定并因而不需要冷藏的抗乙型肝炎片。此等新型的片劑由經(jīng)穩(wěn)定的乙型肝炎表面抗原組成。
因此，由于缺乏適當?shù)睦洳卦O備而不能通過注射來使用乙型肝炎疫苗的個人即可使用該抗乙型肝炎疫苗片。這對于生活在第三世界中的患者具有特別現(xiàn)實的意義。
另外，這些片劑消除了對引起疼痛的注射液的需要，并降低了由已污染各種疾病的針頭導致可能的感染的危險，所述疾病包括肝炎和HIV等。
本發(fā)明的原理是基于以下事實舌下淋巴叢吸收抗原表面蛋白，因此可有效地繞過整個消化道和肝臟。淋巴叢最終將同時以自身穩(wěn)定機理傾注出表面蛋白至毛細血管，然后進入上腔靜脈，在此達到全身分布。因此，該方法達到的結果與通過皮下注射得到的結果相同。
具體而言，任何可被舌下淋巴叢接受的物質(即其組份中沒有一種的直徑大于淋巴毛細血管的直徑)將不會滲透至進入肝臟的門靜脈，但最終將會出現(xiàn)在胸導管中。該物質(例如抗原表面蛋白)將從胸導管通過上腔靜脈滲透至血流中(已繞過肝臟)，并直接通入右心房，在此將達到全身循環(huán)。
本發(fā)明的優(yōu)點有很多，其中包括消除了對冷藏的需要，這使產(chǎn)品特別適合于運輸至熱帶和第三世界的環(huán)境中。
本發(fā)明還消除了對注射的需要，由此降低了傳染如AIDS等疾病的可能性。而且，避免了注射引起的疼痛和不適。
最后，使用本發(fā)明的方法可使生產(chǎn)成本降低約60％。優(yōu)選實施方案的詳細描述實施例1本發(fā)明涉及一系列的混合步驟。乙型肝炎疫苗為經(jīng)穩(wěn)定的舌下片劑形式，首先混合20g經(jīng)凍干的乙型肝炎抗原表面蛋白(純度超過97％)和2500ml的重蒸餾水、500g醫(yī)藥級的乳糖以及4g經(jīng)凍干的高純(“HP”)白蛋白。然后在該溶液中混入125g的Na2HPO4和110g的NaH2PO4以及40g乙基汞硫代水楊酸鈉(thimerosal)。
將上述混合物與預制液混合。所述預制液必需是無醇的，其由以下物質制成用蒸餾水稀釋20倍1250g醫(yī)藥級的C5H10O5、7800g醫(yī)藥級的NaCl和8800g醫(yī)藥級的Al2HO3。該混合是在約40華氏度的溫度、約60％的相對濕度下進行的。該混合在手術無菌的環(huán)境下進行，并可用自動化的設備來完成。預制液的重要性主要是通常已知為阿拉伯膠的穩(wěn)定劑C5H10O5。
然后將上述混合物微細噴霧在88.35kg賦形劑顆粒上，所述賦形劑由50％乳糖和50％米淀粉制成，這兩種物質都是醫(yī)藥級的。稀釋液包含11.65kg的溶解固體。干燥后，總重量為100kg，足以壓制成1000000片分別重100mg的舌下片。對于上述重量，待壓片之顆粒的噴霧必需在不超過100分鐘的時間內(nèi)完成。在該過程中，所有的顆粒必需經(jīng)過徹底和高速的攪拌。片劑必需壓制成高密度的，而且其在舌下崩解的時間不應超過10分鐘。整個過程必需在完全與GMP標準一致的環(huán)境下進行。片劑然后在6-10℃的溫度下于真空中干燥。
最終產(chǎn)品必需在泡罩包裝板中儲存。在泡罩包裝后，最終產(chǎn)品不需要冷藏，并可安全地在最高至28℃的室溫下儲存。但是，為長期使用，從6個月-5年，建議在中等冷藏溫度(6-12℃)下儲存。該疫苗不必保持冷凍。
用于抗乙型肝炎疫苗片的表面抗原可從酵母培養(yǎng)基中獲得，該培養(yǎng)基已通過插入其基因組、乙型肝炎病毒表面的基因編碼，使用重組DNA方法和標準分子生物學技術被變性。經(jīng)純制的表面抗原可以聚集體的形式得到，其形成為約22nm的顆粒，并最后吸附在氫氧化鋁硅膠(0.5mg A/3+/20g劑量)中，在其中加入乙基汞硫代水楊酸鈉作為防腐劑。最終產(chǎn)品的外觀為白/灰色，其沉降在容器的底部，分為兩個相透明的上清液，基本上沒有蛋白質，由磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)組成，而且其中溶解有防腐劑，以及沉淀的氫氧化鋁硅膠，其中吸附超過98％的抗原。在振搖時，形成不透明的灰色懸浮液，持續(xù)幾分鐘，這是用于穩(wěn)定的物質。發(fā)酵和純化步驟可適當?shù)剡M行，并放大和標準化，以保持每一批生產(chǎn)的一致性和可重復性。
為測試這些片劑的效力，用標準ELISA試驗鑒定出24只沒有乙型肝炎抗原的倉鼠。12只倉鼠的舌下環(huán)境用疫苗片的溶液涂覆，片劑的質量與倉鼠的體重相適應，在第一天、第七天和第三十天時，每天給藥兩次。在最后給藥后的七天時，使用標準ELISA試驗在經(jīng)乙型肝炎處理的倉鼠血清中檢測到乙型肝炎抗體。12只對照倉鼠仍為陰性。隨后，所有24只倉鼠都被感染乙型肝炎病毒。用疫苗片處理過的動物中沒有一只發(fā)現(xiàn)該疾病，而整個對照組都被感染乙型肝炎。
權利要求
1.一種穩(wěn)定抗原表面蛋白的方法，所述抗原表面蛋白可給藥至哺乳動物以對抗乙型肝炎感染，所述方法包括用穩(wěn)定劑混合乙型肝炎抗原表面蛋白，其中，所述穩(wěn)定劑是C5H10O5。
2.如權利要求1所述的方法，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例為約75-85重量％的乙型肝炎抗原蛋白約15-25重量％的C5H10O5。
3.如權利要求2所述的方法，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例為約80重量％的乙型肝炎抗原蛋白約20重量％的C5H10O5。
4.如權利要求1所述的方法，其中，所述哺乳動物是人。
5.如權利要求1所述的方法，其中，在所述混合后，所述乙型肝炎抗原表面蛋白和C5H10O5隨后成型為舌下片。
6.如權利要求5所述的方法，其中，在與所述乙型肝炎抗原表面蛋白混合前，所述C5H10O5存在于預制液中。
7.如權利要求6所述的方法，其中，20g所述乙型肝炎抗原表面蛋白與所述預制液混合，所述預制液包含1250g醫(yī)藥級的C5H10O5。
8.如權利要求7所述的方法，其中，凍干所述20g的乙型肝炎抗原表面蛋白，然后與水、乳糖和白蛋白混合，以在與所述預制液混合前產(chǎn)生初級混合物。
9.如權利要求8所述的方法，其中，在與所述預制液混合前，在所述初級混合物中加入磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉和乙基汞硫代水楊酸鈉。
10.如權利要求9所述的方法，其中，所述預制液還包含重蒸餾水、氯化鈉和Al2HO3。
11.如權利要求10所述的方法，其中，將所述初級混合物與所述預制液混合，該混合是在約4華氏度和約60％相對濕度的條件進行的。
12.如權利要求11所述的方法，其中，將所述初級混合物和所述預制液的混合物微細噴霧在賦形劑上以產(chǎn)生最終的混合物，所述賦形劑由約50％乳糖和約50％米淀粉組成。
13.如權利要求12所述的方法，其中，所述最終混合物壓制成舌下片，所述片劑在6-10℃之間的溫度下真空干燥。
14.一種穩(wěn)定的抗乙型肝炎疫苗片劑，該片劑在向未感染的哺乳動物給藥時，如果所述哺乳動物隨后感染乙型肝炎病毒，其能夠對抗乙型肝炎病毒，其中，所述片劑包括乙型肝炎抗原表面蛋白和穩(wěn)定劑C5H10O5。
15.如權利要求14所述的片劑，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例為約75-85重量％的乙型肝炎抗原蛋白約15-25重量％的C5H10O5。
16.如權利要求15所述的片劑，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例為約80重量％的乙型肝炎抗原表面蛋白約20重量％的C5H10O5。
17.如權利要求14所述的片劑，其中，所述未感染的哺乳動物是人。
18.如權利要求14所述的片劑，其中，所述片劑是舌下片。
19.如權利要求18所述的片劑，其中，所述片劑在所述哺乳動物的舌下時需要最多約10分鐘來溶解。
全文摘要
一種穩(wěn)定的抗乙型肝炎疫苗片和制備該片劑的方法,其中所述片劑包含穩(wěn)定的乙型肝炎病毒抗原表面蛋白,該片劑在給藥哺乳動物時可使該哺乳動物對乙型肝炎感染產(chǎn)生免疫作用。該穩(wěn)定作用的關鍵是C
文檔編號A61K9/00GK1216471SQ97194006
公開日1999年5月12日 申請日期1997年3月31日 優(yōu)先權日1996年4月22日
發(fā)明者彼得·R·羅斯席爾德 申請人:彼得·R·羅斯席爾德