專利名稱：使用抗egfr抗體和抗激素劑的聯(lián)合療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移，特別是乳腺和前列腺腫瘤治療的聯(lián)合療法，此療法包括施用抗EGFR(Her1)抗體和抗激素劑，以及任選地細(xì)胞毒性劑/化療劑。本方法和含有所述藥劑的藥物組合物可導(dǎo)致各單個(gè)治療劑對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制效果的協(xié)同增加，得到比單組份單獨(dú)使用時(shí)更有效的治療效果。
背景技術(shù)：
酪氨酸激酶是一類酶，它催化腺苷三磷酸的末端磷酸向蛋白質(zhì)底物中的酪氨酸殘基轉(zhuǎn)移。據(jù)信通過酪氨酸激酶的底物磷酸化，酪氨酸激酶在許多細(xì)胞功能的信號(hào)傳導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。雖然信號(hào)傳導(dǎo)的確切機(jī)理仍不清楚，但是酪氨酸激酶在細(xì)胞增殖，癌發(fā)生和細(xì)胞分化中顯示出是重要的起作用因子。
酪氨酸激酶可分為受體型和非受體型。受體型和非受體型兩種酪氨酸激酶都參與細(xì)胞信號(hào)途徑，這些途徑可導(dǎo)致許多病理狀況，包括癌癥，牛皮癬和超免疫反應(yīng)。許多酪氨酸激酶既參與細(xì)胞生長(zhǎng)也參與血管生成。
非受體型酪氨酸激酶也由許多亞族組成，包括Src，F(xiàn)rk，Btk，Csk，Abl，Zap70，F(xiàn)es/Fps，F(xiàn)ak，Jak，Ack和LIMK。這些亞族的每一個(gè)還可再分成不同的受體。利用，Src亞族是最大的亞族之一，它包括Src，Yes，F(xiàn)yn，Lyn，Lck，Blk，Hck，F(xiàn)gr和Yrk。Src亞族中的酶與腫瘤形成有關(guān)。對(duì)非受體型酪氨酸激酶的更詳細(xì)的討論，參見Bolen Oncogene，82025-2031(1993)。
受體型酪氨酸激酶包括細(xì)胞外，跨膜和細(xì)胞內(nèi)部分，而非受體型酪氨酸激酶完全是細(xì)胞內(nèi)的。受體連接的酪氨酸激酶是跨膜蛋白，它包含細(xì)胞外配體結(jié)合域，跨膜序列，以及胞質(zhì)酪氨酸激酶功能域。受體型酪氨酸激酶由大量具有不同生物活性的跨膜受體組成。事實(shí)上，已經(jīng)鑒定出了不同亞家族的受體型酪氨酸激酶。涉及的酪氨酸激酶包括成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)受體，ErbB主要類型家族中的表皮生長(zhǎng)因子(EGF)受體和血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)受體。還涉及神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)受體，腦衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)受體，以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-3(NT-3)受體和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-4(NT-4)受體。
一個(gè)受體型酪氨酸激酶亞家族，被命名為HER或ErbB亞家族，由EGFR(ErbB1)，HER2(ErbB2或p185neu)，HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4或tyro2)組成。此亞家族受體的配體包括表皮生長(zhǎng)因子(EGF)，TGF-a，雙調(diào)蛋白(amphiregulin)，HB-EGF，β-細(xì)胞調(diào)節(jié)素(betacellulin)和heregulin。PDGF亞家族包括由激酶插入域受體(KDR)組成的FLK家族。
EGFR，由erbB1基因編碼，它與人類惡性腫瘤因果相關(guān)。特別是，在乳腺，膀胱，肺，頭，頸和胃部癌癥以及成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中已經(jīng)觀察到EGFR的表達(dá)增強(qiáng)。EGFR受體表達(dá)的增強(qiáng)通常伴隨有同一腫瘤細(xì)胞中EGFR配體-即轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)的產(chǎn)生增加，從而經(jīng)自分泌刺激途徑引起受體激活(Baselga和Mendelsohn，Pharmac.Ther.64127-154(1994))。EGF是一種分子量為170,000的跨膜糖蛋白，并發(fā)現(xiàn)它存在于許多上皮細(xì)胞類型上。它可以被至少三種配體-EGF，TGF-α(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α)和雙調(diào)蛋白激活。經(jīng)證明表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)都能與EGF受體結(jié)合進(jìn)而引起細(xì)胞增殖和腫瘤生長(zhǎng)。這些生長(zhǎng)因子不能與HER2結(jié)合(Ulrich and Schlesinger，1990，Cell 61，203)。與借助自身二聚化性質(zhì)誘導(dǎo)受體二聚化的幾個(gè)生長(zhǎng)因子家族(如PDGF)不同，單體生長(zhǎng)因子如EGF具有2個(gè)受體結(jié)合位點(diǎn)，因此，它可以交聯(lián)兩個(gè)鄰近的EGF受體(Lemmon等，1997，EMBO J.16，281)。受體二聚化對(duì)激活生長(zhǎng)因子受體的內(nèi)在催化活性以及對(duì)生長(zhǎng)因子受體的自磷酸化是必需的。應(yīng)當(dāng)指出的是受體蛋白酪氨酸激酶(PTK)既能進(jìn)行同二聚化，也能進(jìn)行異二聚化。
已經(jīng)證明抗EGF受體的抗體在阻斷EGF和TGF-α與受體結(jié)合的時(shí)候，顯示出對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制?？紤]到這些發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)研制出很多小鼠和大鼠單克隆抗EGF受體抗體，并在體內(nèi)和體外檢測(cè)了它們對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)行抑制的能力(Modjtahedi和Dean，1994，J.Oncology 4，277)。人源化單克隆抗體425(hMAb 425，US 5,558,864；EP 0531 472)和嵌合型單克隆抗體225(cMAb 225，US 4,943,533和EP0359282)都是針對(duì)EGF受體的，而且在臨床試驗(yàn)中均顯示有效。已經(jīng)證明C225抗體可在體外抑制由EGF介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，以及在裸鼠體內(nèi)抑制人腫瘤的形成。而且，最重要的是，該抗體在異種移植小鼠模型中還顯示出可與某些化療劑(即阿霉素(doxorubicin，adriamycin)，紫杉醇和順氯氨鉑)協(xié)同作用根除人腫瘤。Ye等(1999，Oncogene 18，731)報(bào)道通過聯(lián)合應(yīng)用cMAb225和針對(duì)HER2受體的人源化MAb 4D5對(duì)人卵巢癌細(xì)胞進(jìn)行了成功地治療。
ErbB家族的第二個(gè)成員-HER2(ErbB2或p185neu)，它最初被鑒定為來自經(jīng)化學(xué)處理的大鼠的成神經(jīng)細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)化基因產(chǎn)物。neu原癌基因的激活形式是由編碼蛋白的跨膜區(qū)中的點(diǎn)突變(纈氨酸變成谷氨酸)產(chǎn)生的?？稍谌橄俸吐殉舶┌Y中觀察到neu人同系物的擴(kuò)增，其與預(yù)后不良有關(guān)(Slamon等，Science，235177-182(1987)；Slamon等，Science，244707-712(1989)；US 4,968,603)。ErbB2(HER2)的分子量為大約185,000，雖然至今對(duì)HER2的特異性配體尚未明確確定，但ErbB2(HER2)與EGF受體(HER1)有相當(dāng)高的同源性。
進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)針對(duì)HER2受體的抗體4D5使過表達(dá)ErbB2的乳腺腫瘤細(xì)胞系對(duì)TNFα的細(xì)胞毒性效應(yīng)敏感(US 5,677,171)。鼠抗-ErbB2抗體4D5的人源化重組體(huMAb4D5-8，rhuMAb HER2或HERCEPTIN；US 5,821,337)在已進(jìn)行過大量抗癌前期治療的患有ErbB2-過表達(dá)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者中具有臨床活性(Baselga等，J.Clin.Oncol.14737-744(1996))。HERCEPTIN在1988年被正式批準(zhǔn)上市用于治療患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌-即腫瘤過表達(dá)ErbB2蛋白-的患者。
前列腺和乳腺癌癥是在男性/女性中診斷出的頻率最高癌癥，每年全球有幾十萬以上的人死于這兩種癌癥。早期的器官局制性前列腺和乳腺癌癥通常實(shí)施手術(shù)或放射性療法，直到患者死于無關(guān)原因。癌如乳腺癌，結(jié)腸癌和腺癌的特征是快速細(xì)胞分裂。因此，這類癌癥適于用能抑制快速細(xì)胞分裂的化療劑進(jìn)行治療。相反，前列腺癌不具有快速細(xì)胞分裂的特點(diǎn)。因此，常規(guī)化療劑一般對(duì)前列腺癌的療效低。前列腺癌通常對(duì)激素的處理敏感。目前批準(zhǔn)的前列腺癌治療方法包括外科閹割，化學(xué)閹割，或外科的和化學(xué)閹割的組合方法。
睪丸是主要產(chǎn)生睪酮的器官，它的切除使循環(huán)雄激素的水平減少，達(dá)到正常水平的5％以下。雄激素水平的減少可抑制前列腺腫瘤的生長(zhǎng)。雖然外科閹割的抗腫瘤作用是直接的，但是這種抗腫瘤作用也是暫時(shí)性的。外科閹割經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致雄激素非依賴性的前列腺腫瘤細(xì)胞的克隆選擇。這樣就會(huì)導(dǎo)致前列腺腫瘤的重新生長(zhǎng)，且此前列腺腫瘤可以無需睪酮或DHT的刺激進(jìn)行增殖(Isaacs et al.(1981)Cancer Res.415070-5075；Crawfordet al.(1989)IV.Eng.J.Med.321419-424)。作為初期治療，化學(xué)閹割(亦稱內(nèi)科閹割)常替代外科閹割。
前列腺和乳腺癌共有一個(gè)獨(dú)特特征，這個(gè)特征是大多數(shù)前列腺和乳腺癌受類固醇性激素的刺激而生長(zhǎng)(雌激素和雄激素分別作用于乳腺癌和前列腺癌)。類固醇性激素通過與特異性受體結(jié)合發(fā)送其刺激信號(hào)。雌激素和雄激素受體可在大約75％的乳腺癌細(xì)胞和幾乎100％的前列腺癌細(xì)胞上找到，并且這兩種受體是核激素受體超家族的成員，該受體超家族包括類固醇激素、甲狀腺激素、親脂性維生素如維生素A和D的受體以及孤兒受體(即，結(jié)構(gòu)與其它超家族成員的結(jié)構(gòu)相符但尚未鑒定到配體的受體)(Evans(1988)Science 240889-895)。這些受體通過與靶基因啟動(dòng)子中的特異性DNA序列相互作用來調(diào)節(jié)基因表達(dá)(Glass(1994)Endocr.Rev.15391-407)。
核受體可分成兩個(gè)亞族甲狀腺/視黃酸/維生素D受體(TRV)家族和類固醇受體(Rs)家族。類固醇激素受體以配體依賴性的形式與它們各自的HRE結(jié)合，而一些受體如甲狀腺激素受體(T3R)和視黃酸受體(RAR/RXR)以配體非依賴性的形式與它們的效應(yīng)元件結(jié)合。類固醇受體在正常健康狀態(tài)和一系列疾病狀態(tài)——包括癌癥、炎癥、內(nèi)分泌失調(diào)和口服避孕中起作用。由內(nèi)分泌腺體產(chǎn)生的天然類固醇激素與靶器官中的類固醇激素受體結(jié)合。
天然類固醇激素包括雌激素，黃體酮，雄激素，糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素。這些激素被定義為激動(dòng)劑，激素-受體復(fù)合物能通過提高或降低轉(zhuǎn)錄速率來調(diào)節(jié)特異性基因轉(zhuǎn)錄。
類固醇激動(dòng)劑在許多組織中具有多效生理活性。例如，雌二醇和黃體酮可在腎臟，卵巢，子宮頸，子宮，骨骼，皮膚，乳腺，心臟，垂體和腦中調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。類固醇受體亞族的激素被用于治療許多失調(diào)病癥，并且在健康人群中用于口服避孕和激素替代療法等等。
從醫(yī)學(xué)的角度常?？赡芷谕钄囝惞檀技に丶?dòng)劑的活性。為此，研究人員已經(jīng)合成了類固醇受體拮抗劑，它們可作為阻止癌癥擴(kuò)展或阻斷異常生長(zhǎng)的試劑用于乳腺、子宮內(nèi)膜和前列腺癌的治療以及用作避孕藥。這些拮抗劑也是類固醇受體的配體，但是一般情況下，它們所具有的作用和激動(dòng)劑產(chǎn)生的作用相對(duì)立。
類固醇受體拮抗劑的活性很復(fù)雜。它們通常具有激動(dòng)劑/拮抗劑的雙重作用。例如，一個(gè)拮抗劑可能部分地具有激動(dòng)劑的生物活性；這樣，該拮抗劑可以阻斷激動(dòng)劑的活性，結(jié)果實(shí)質(zhì)上減小激動(dòng)劑的活性。拮抗劑還可能在一種組織(如，乳腺)中具有所需要的拮抗劑作用，而在另一種組織(如，子宮)中具有激動(dòng)劑的作用。拮抗劑的激動(dòng)劑作用可能是也可能不是不期望的副作用。同樣，在癌癥的治療中，拮抗劑配體最初可能具有所需要的對(duì)腫瘤的抑制作用，但是隨著時(shí)間變化，配體轉(zhuǎn)向類似激動(dòng)劑的作用，這將使癌癥重新繼續(xù)生長(zhǎng)。一個(gè)典型實(shí)例是LHRH(促黃體生成素釋放激素)。給個(gè)體一次施用較高劑量的LHRH活性化合物能刺激激素的產(chǎn)生(激動(dòng)劑作用)，而連續(xù)小劑量的此化合物卻充當(dāng)拮抗劑抑制激素的釋放作用。
血管生成也稱作新血管發(fā)生，它是涉及到新生血管向組織內(nèi)生長(zhǎng)的組織血管化過程。這個(gè)過程由內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的浸潤(rùn)介導(dǎo)。這個(gè)過程據(jù)信可以按照下面3個(gè)路徑中的任何一個(gè)進(jìn)行(1)從已經(jīng)存在的血管中分生出血管；(2)由前體細(xì)胞開始血管的從頭發(fā)育(血管發(fā)生)；或(3)已經(jīng)存在的小血管擴(kuò)增直徑(Blood等，1990，Bioch.Biophys.Acta 1032，89)。已知血管內(nèi)皮細(xì)胞至少含有5種RGD依賴性整合蛋白，其中包括玻連蛋白受體(αvβ3或αvβ5)、膠原蛋白I型和IV型受體、層粘連蛋白受體、纖連蛋白/層粘連蛋白/膠原蛋白受體和纖連蛋白受體(Davis等，1993，J.cell.Biochem.51，206)。已知平滑肌細(xì)胞含有至少6種RGD依賴性整合蛋白，其中包括有αvβ3和αvβ5。
雖然血管生成是新生期生長(zhǎng)中的一個(gè)重要過程，但它在傷口愈合和大量臨床重要疾病—包括組織炎癥，關(guān)節(jié)炎，牛皮癬，癌癥，糖尿病，視網(wǎng)膜病，黃斑變性和其它新血管眼病的病理中同樣重要。這些伴有血管生成的臨床病癥稱為生血管疾病(Folkman等，1987，Science 235，442)。
利用免疫特異性針對(duì)各種整合蛋白α或β亞基的單克隆抗體在體外抑制細(xì)胞粘連，提示玻連蛋白受體αvβ3參與了多種細(xì)胞類型(包括微血管上皮細(xì)胞)的細(xì)胞粘附(Davis等，1993，J.Cell.Biol.51，206)。
整合蛋白是一類細(xì)胞受體，已知這種細(xì)胞受體和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白結(jié)合，并介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)間的相互作用，一般這種相互作用被稱為細(xì)胞粘附事件。整合蛋白受體構(gòu)成一個(gè)蛋白質(zhì)家族，其共同結(jié)構(gòu)特征是由α亞基和β亞基構(gòu)成的非共價(jià)異二聚體糖蛋白復(fù)合物。玻連蛋白受體因其最初被發(fā)現(xiàn)的特征是它優(yōu)先和玻連蛋白結(jié)合而得名?，F(xiàn)已知玻連蛋白受體代表3種不同的整合蛋白，分別命名為αvβ1，αvβ3和αvβ5。αvβ1與纖連蛋白以及玻連蛋白結(jié)合。αvβ3與種類眾多的配體結(jié)合，其中包括纖維蛋白，纖維蛋白原，層粘連蛋白，血小板反應(yīng)蛋白，玻連蛋白和馮·維勒布蘭德因子。αvβ5和玻連蛋白結(jié)合。很明顯，有些不同的整合蛋白有不同的生物學(xué)功能，但是有些不同的整合蛋白和亞基卻有共同的生物學(xué)特異性。對(duì)于很多整合蛋白，配體中的一個(gè)重要的識(shí)別位點(diǎn)是精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽序列。RGD在上述所有鑒定到的玻連蛋白受體整合蛋白的配體中都存在。
此RGD識(shí)別位點(diǎn)可以用含有RGD序列的線性和環(huán)形(多)肽模擬。已知這些RGD肽分別是整合蛋白功能的抑制劑或拮抗劑。然而，很重要的是應(yīng)當(dāng)注意到隨RGD肽的序列和結(jié)構(gòu)的不同，抑制的特異性可發(fā)生改變而靶向特異的整合蛋白。已描述過許多有不同整合蛋白特異性的RGD多肽，見比如，Cheresh，等，1989，Cell 58，945，Aumailley等，1991，F(xiàn)EBS Letts.291，50，以及數(shù)目眾多的專利申請(qǐng)和專利(如美國(guó)專利4,517,686、4,578,079、4,589,881、4,614,517、4,661,111、4,792,525；EP 0770 622)。
新血管發(fā)生或血管生成在惡性疾病的發(fā)展中起關(guān)鍵作用，并已在血管生成抑制劑研發(fā)上引起了極大的興趣。(實(shí)例可參見Holmgren等，1995，Nature Medicine 1，149；Folkman，1995，Nature Medicine 1，27；O′Reilly等，1994，Cell 79，315)。已知用αvβ3整合蛋白拮抗劑抑制血管生成可以用于通過減少對(duì)實(shí)體腫瘤的血液供給而抑制實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)的方法中(實(shí)例可參見US 5,753,230以及US 5,766,591，其中描述了可與αvβ3受體結(jié)合并抑制血管生成的αvβ3拮抗劑-如αvβ3的合成多肽，單克隆抗體和模擬物-的使用)。在WO 97/45447中公開了用玻連蛋白受體αvβ5的拮抗劑抑制αvβ5介導(dǎo)的組織血管生成的方法和組合物。
血管生成的特征是內(nèi)皮細(xì)胞的浸潤(rùn)、遷移和增殖，這些過程依賴于細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)成分之間的相互作用。從這一點(diǎn)上講，整合蛋白細(xì)胞-基質(zhì)受體介導(dǎo)了細(xì)胞擴(kuò)散和遷移。整合蛋白αvβ3的內(nèi)皮粘附受體因?yàn)榻o抗血管生成治療策略提供了脈管系統(tǒng)特異性的靶子而成為重要角色(Brooks等，1994，Science 264，569；Friedlander et.al.，1995，Science 270)。已經(jīng)通過幾個(gè)體內(nèi)模型證明了在血管生成中需要血管整合蛋白αvβ3，所述模型中移植的人腫瘤的新血管發(fā)生完全被全身施用上面所述的整合蛋白αvβ3和αvβ5的肽拮抗劑或作為備選方案的抗αvβ3抗體LM609(Brooks等，1994，Cell79，1157；ATCC HB 9537)所抑制。此抗體可阻斷αvβ3整合蛋白受體被其天然配體激活(此激活作用可以抑制增生的生血管血管細(xì)胞的細(xì)胞凋亡)并由此破壞新生成血管的成熟(這是腫瘤增殖中的必要事件)。然而，據(jù)最近的報(bào)道，黑素瘤細(xì)胞即使在沒有內(nèi)皮細(xì)胞的情況下也能形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的血管(Barinaga，1999，Science 285，1475)，這暗示腫瘤可能能繞過一些只有在有內(nèi)皮組織存在的情況下才有效的抗血管生成藥物。
很多分子，包括VEGF，Ang1和bFGF，都能刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和組裝，它們是極其重要的存活因子。VEGF(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)經(jīng)鑒定是一種選擇性的生血管生長(zhǎng)因子，它可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂。特別是，VEGF被認(rèn)為是原發(fā)性腫瘤和眼睛局部缺血疾病中血管生成的一個(gè)主要的介質(zhì)。VEGF是同二聚體(分子量46,000)，它是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性生血管因子(Ferrara等，1992，Endocrin.Rev.，13，18)和血管滲透因子(Senger等，1986，Cancer Res.，465629)，它與有酪氨酸激酶活性的高親和性膜結(jié)合受體結(jié)合(Jakeman等，1992，J.Clin.Invest.，89，244)。人腫瘤的活體組織檢查顯示，惡性細(xì)胞中的VEGF mRNA和鄰近的內(nèi)皮細(xì)胞中的VEGF受體mRNA表達(dá)增強(qiáng)。VEGF的表達(dá)似乎在鄰近血管壞死區(qū)域的腫瘤部位最高。(綜述參見Thomas等，1996，J.Biol.Chem271(2)，603；Folkman，1995，Nature Medicine 1，27)。WO 97/45447中提示，αvβ5整合蛋參與了尤其是由VEGF、EGF和TGF-α誘導(dǎo)的新血管生成，并公開了αvβ5拮抗劑可抑制VEGF促進(jìn)的血管生成。有效的抗腫瘤療法也可通過單克隆抗體靶向VEGF受體來抑制血管生成(Witte等，1998，Cancer Metastasis Rev.17(2)，155)。已知單抗DC-101可用于抑制腫瘤細(xì)胞的血管生成。
本發(fā)明目前描述特異性針對(duì)EGF受體(ErbB1，Her1)的抗體當(dāng)與抗激素劑(尤其是核激素受體家族的抑制劑)一起施用時(shí)可以更有效地殺死或縮小尤其是前列腺和乳腺癌的腫瘤組織。此外，與抗血管生成劑和/或細(xì)胞毒性劑的共施用可提高所述聯(lián)合療法的正向協(xié)同效應(yīng)。
發(fā)明概要本發(fā)明首次描述這一腫瘤治療新概念，即給個(gè)人施用阻斷或抑制EGF受體的藥劑以及抗激素劑。本發(fā)明的組合物還可任選地包含其他有治療活性的化合物，這些化合物優(yōu)選選自細(xì)胞毒性劑、化療劑和ErbB受體酪氨酸激酶家族的抑制劑或拮抗劑或者血管生成的抑制劑或拮抗劑。
因此，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含作為優(yōu)選的抗EGFR劑的抗EGFR抗體和作為抗激素劑的核受體(優(yōu)選類固醇受體)抑制劑或拮抗劑。本發(fā)明所述的治療活性劑也可以以包含如下包裝的藥物試劑盒的形式提供，此包裝中包含獨(dú)立包裝的或在單獨(dú)容器內(nèi)的一種或多種抗EGFR抗體、一種或多種抗激素劑及任選地一種或多種細(xì)胞毒性劑/化療劑、抗ErbB劑、抗血管生成劑。利用本聯(lián)合的治療方法可以任選地包括放射性治療。
然而，本發(fā)明還涉及這樣的聯(lián)合療法，其包括施用僅一種既有抗EGFR活性又有抗激素活性的(融合)分子，及任選地還施用一種或多種細(xì)胞毒性劑/化療劑。一個(gè)例子是抗EGFR抗體，如上文和下文所述的h425或c225，它利用已知的重組或化學(xué)方法通過其自身Fc部分的C末端與抗激素劑融合。再一個(gè)例子是雙特異性抗體，此抗體中一個(gè)特異性針對(duì)核激素受體而另一個(gè)針對(duì)EGF受體。
大抵上，此藥物施用可與放射治療伴隨進(jìn)行，其中放射治療可與藥物施用基本上同時(shí)或在之前或在之后進(jìn)行。本發(fā)明聯(lián)合療法中的各種藥劑的施用也可以基本上同時(shí)進(jìn)行或相繼進(jìn)行。細(xì)胞表面上有參與腫瘤血管形成的受體的腫瘤可用本發(fā)明聯(lián)合療法成功地治療。
已知腫瘤的發(fā)育和生長(zhǎng)有多條可替換的路線。如果一條路線被阻斷，則它們常能通過表達(dá)和使用其他受體和信號(hào)途徑而轉(zhuǎn)換到另一條路線上。因此，由于本發(fā)明的藥物聯(lián)合可以阻斷幾種這樣的可能腫瘤發(fā)育策略，因而具有多個(gè)優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的組合可用于治療和預(yù)防那些通過激活存在于腫瘤細(xì)胞表面上的相關(guān)激素受體而發(fā)育和生長(zhǎng)的腫瘤、腫瘤樣疾病和瘤形成性疾病以及腫瘤轉(zhuǎn)移。本發(fā)明的不同組合藥劑優(yōu)選以低劑量聯(lián)合應(yīng)用，即，低于常規(guī)的臨床條件下使用的劑量。在給個(gè)體施用本發(fā)明的化合物、組合物、藥劑和治療的時(shí)候，降低劑量的優(yōu)點(diǎn)包括降低了高劑量相關(guān)負(fù)反應(yīng)的發(fā)生率。比如，通過降低如上文和下文所述藥劑的劑量，和高劑量條件下觀察到的效果相比，惡心和嘔吐的頻率和嚴(yán)重程度都得到降低。預(yù)期降低負(fù)反應(yīng)發(fā)生率將能改善癌癥患者的生活質(zhì)量。降低負(fù)反應(yīng)發(fā)生率的優(yōu)點(diǎn)還包括改善患者的依順性，降低因負(fù)反應(yīng)產(chǎn)生的需要住院治療的次數(shù)，減少在醫(yī)治負(fù)反應(yīng)帶來的疼痛時(shí)所需止痛劑的使用。另外，本發(fā)明的方法和聯(lián)合還能使高劑量時(shí)的治療效果最大化。
本發(fā)明的聯(lián)合治療顯示出令人驚異的協(xié)同效應(yīng)。臨床研究顯示使用此藥物聯(lián)合可使腫瘤出現(xiàn)真實(shí)的萎縮和解體，同時(shí)沒有可檢測(cè)的明顯的藥物副作用。
具體的，本發(fā)明涉及·藥物組合物，其包含治療有效量的至少(i)一種抗EGFR抗體或此抗體的免疫治療有效片斷以及(ii)一種抗激素劑，及任選地藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑；·相應(yīng)的藥物組合物，其中所述的抗EGFR抗體或所述的此抗體的免疫治療有效片斷是小鼠的、嵌合的或人源化的Mab425(h425)或嵌合的Mab225(c225)抑制劑/拮抗劑；·相應(yīng)的藥物組合物，其中所述的抗激素劑是核激素受體家族的抑制劑；·相應(yīng)的藥物組合物，其中所述的抗激素劑是類固醇受體抑制劑/拮抗劑；·相應(yīng)的藥物組合物，其還包含抗血管生成劑；·相應(yīng)的藥物組合物，其還包含細(xì)胞毒性劑和/或化療劑；·相應(yīng)的藥物組合物，其還包含其它的抗-HER2抗體或它的免疫治療活性片斷；·藥物組合物，其包含既具有抗EGFR活性又具有抗核激素受體活性的抗體，及任選地藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑；·相應(yīng)的藥物組合物，其中所述抗體是雙特異性抗體；
·藥物試劑盒，其包含這樣的包裝，該包裝含有至少(i)一種抗EGFR抗體或此抗體的免疫治療有效片斷，及(ii)一種抗激素劑，及任選地(iii)細(xì)胞毒性劑和/或化療劑；·相應(yīng)的藥物試劑盒，其包含(i)單克隆抗體h425，和(ii)類固醇受體拮抗劑；·相應(yīng)的藥物試劑盒，其包含(i)單克隆抗體h425，和(ii)LHRH拮抗劑；·相應(yīng)的藥物試劑盒，其中所述藥物活性劑在所述包裝中分別于單獨(dú)容器中提供；·上文及下文中定義的藥物組合物或藥物試劑盒在制備用于治療腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移(優(yōu)選用于治療乳腺癌和前列腺癌)的藥物或藥物組合物中的用途；·相應(yīng)的用途，用于治療類固醇非依賴性乳腺癌和前列腺癌；·治療個(gè)體的腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的方法，其包括同時(shí)或相繼給所述個(gè)體施用治療有效量的(i)抗EGFR抗體，或(ii)抗激素劑；·相應(yīng)的方法，其中所述的抗EGFR抗體是單克隆抗體h425或c225以及所述的抗激素劑是類固醇受體拮抗劑；及·相應(yīng)的方法，其包括還給所述個(gè)體施用治療有效量的細(xì)胞毒性劑和/或化療劑或抗血管生成劑或其它的抗ErbB受體抗體。
發(fā)明詳述本發(fā)明中使用的術(shù)語和短語，如果沒有另行指明，則具有下面給定的含義和定義。而且，這些定義和含義更詳細(xì)地描述了本發(fā)明，包括優(yōu)選實(shí)施方案。
“生物分子”包括天然或合成分子，通常其分子量大于約300，并且優(yōu)選是多聚-和寡聚糖類，寡肽和多肽，蛋白質(zhì)，肽，多聚-和寡聚核苷酸以及它們的糖基化脂類衍生物。最典型地是，生物分子包括免疫治療藥劑，最重要的是抗體或抗體片斷，或這些抗體或片斷的功能性衍生物，包括融合蛋白。
“受體”或“受體分子”是指可溶的或膜結(jié)合/連結(jié)的蛋白或糖蛋白，其含有一個(gè)或多個(gè)可與配體結(jié)合以形成受體-配體復(fù)合物的結(jié)構(gòu)域。通過與可能是激動(dòng)劑或拮抗劑的配體結(jié)合，受體可以被激活或者失活，由此可以啟動(dòng)或阻斷信號(hào)通路。
“配體”或“受體配體”是指這樣的天然的或者合成的化合物，它可以和受體分子結(jié)合形成受體-配體復(fù)合物。術(shù)語配體包括激動(dòng)劑、拮抗劑以及具有部分激動(dòng)劑/拮抗劑活性的化合物。
“激動(dòng)劑”或“受體激動(dòng)劑”是指這樣的天然的或者合成的化合物，它和受體結(jié)合形成受體-激動(dòng)劑復(fù)合物，通過分別激活所述受體和受體-激動(dòng)劑復(fù)合物而啟動(dòng)信號(hào)通路及進(jìn)一步的生物學(xué)過程。
“拮抗劑”或“受體拮抗劑”是指和激動(dòng)劑有相反的生物學(xué)效應(yīng)的天然的或者合成的化合物。拮抗劑和受體結(jié)合，通過和激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)受體而阻斷受體激動(dòng)劑的作用。拮抗劑是根據(jù)它阻斷激動(dòng)劑的作用的能力來定義的。受體拮抗劑也可以是抗體或是其具有免疫治療活性的片段。下面將舉出并論述本發(fā)明優(yōu)選的拮抗劑。
術(shù)語“治療有效的”或“治療有效量”指的是有效治療哺乳動(dòng)物的疾病或病癥的藥物量。對(duì)癌癥而言，藥物的治療有效量可減少癌細(xì)胞的數(shù)量；降低腫瘤的大??；抑制(即，一定程度地減緩且最好終止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)到周圍器官中；抑制(即，一定程度地減緩且最好終止)腫瘤的轉(zhuǎn)移；在一定程度上抑制腫瘤的生長(zhǎng)；和/或?qū)┌Y相關(guān)的一種或多種癥狀減輕到一定程度。如果藥物可以阻止已存在癌細(xì)胞的生長(zhǎng)而且/或殺死已存在的癌細(xì)胞，則該藥物可能具有細(xì)胞抑制性和/或細(xì)胞毒性。對(duì)于癌癥的治療，療效可以比如通過估計(jì)疾病進(jìn)展時(shí)間(TTP)和/或測(cè)定反應(yīng)率(RR)來確定。
術(shù)語“免疫治療活性”指的是引起哺乳動(dòng)物免疫反應(yīng)的生物分子。更具體地，此術(shù)語指的是可以識(shí)別和結(jié)合抗原的分子。典型地，抗體、含有其抗原結(jié)合位點(diǎn)(互補(bǔ)決定區(qū)，CDRs)的抗體片斷和抗體融合蛋白具有免疫治療活性。
“抗血管生成劑”指的是天然的或合成的化合物，它可在一定程度上阻斷或干擾血管的發(fā)育。抗血管生成分子可以是，例如，和生血管生長(zhǎng)因子或生長(zhǎng)因子受體結(jié)合并將其阻斷的生物分子。本處優(yōu)選的抗血管生成分子可以與受體結(jié)合，優(yōu)選與整合蛋白受體或與VEGF受體結(jié)合。本發(fā)明中此術(shù)語還包括所述抗血管生成劑的前體藥物。
有很多結(jié)構(gòu)和來源不同的分子都可以引起抗血管生成性質(zhì)。本發(fā)明中適宜的血管生成抑制劑或阻斷劑的大多數(shù)相關(guān)類型是，例如(i)抗有絲分裂劑，例如氟尿嘧啶，絲裂霉素C，紫杉醇；(ii)雌激素代謝物如2-甲氧基雌二醇；(iii)抑制鋅金屬蛋白酶的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑(例如，betimastat，BB16，TIMPs，二甲胺四環(huán)素，GM6001，或在“基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制治療應(yīng)用”中論及的那些(物質(zhì))(Golub，Annals of the New YorkAcademy of Science，Vol.878a；Greenwald，Zucker(Eds.)，1999)；(iv)抗血管生成的多功能藥劑和因子，如IFNα(US 4,530,901；US4,503,035；5,231,176)；制管張素和纖溶酶原片段(例如kringle1-4，kringle5，kringle 1-3(O′Reilly，M.S.等，Cell(Cambridge，Mass.)79(2)315-328，1994；Cao等，J.Biol.Chem.27129461-29467，1996；Cao等，J.BiolChem 27222924-22928，1997)；內(nèi)皮生長(zhǎng)抑素(endostatin)(O′Reilly，M.S.等，Cell 88(2)，277，1997和WO 97/15666)，血小板反應(yīng)蛋白(TSP-1；Frazier，1991，Curr Opin Cell Biol 3(5)792)；血小板因子4(PF4)；(v)纖溶酶原激活物/尿激酶抑制劑；(vi)尿激酶受體拮抗劑；(vii)肝素酶；(viii)煙曲霉素類似物如TNP-470；(ix)酪氨酸激酶抑制劑如SUI01(上面和下面提到的很多ErbB受體拮抗劑(EGFR/Her2拮抗劑)也是酪氨酸激酶抑制劑，因此它們分別可以顯示出抗EGF受體阻斷活性從而導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)受抑制，及顯示出抗血管生成的活性從而導(dǎo)致血管發(fā)育和內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)育受抑制)；
(x)蘇拉明和蘇拉明類似物；(xi)制管張性(angiostatic)類固醇；(xii)VEGF和bFGF拮抗劑；(xiii)VEGF受體拮抗劑如抗VEGF受體抗體(DC-101)；(xiv)flk-1和flt-1拮抗劑；(xv)環(huán)加氧酶-II抑制劑如COX-II；(xvi)整合蛋白拮抗劑和整合蛋白受體拮抗劑如αv拮抗劑和αv受體拮抗劑，例如，抗αv受體抗體和RGD肽。本發(fā)明優(yōu)選整合蛋白(受體)拮抗劑。
術(shù)語“整合蛋白拮抗劑/抑制劑”或“整合蛋白受體拮抗劑/抑制劑”指的是天然的或者合成的分子，它阻斷并抑制整合蛋白受體。有時(shí)，此術(shù)語包括針對(duì)所述整合蛋白受體的配體(例如對(duì)于αvβ3玻連蛋白，纖維蛋白，纖維蛋白原，馮·維勒布蘭德因子，血小板反應(yīng)蛋白，層粘連蛋白；對(duì)于αvβ5玻連蛋白；對(duì)于αvβ1纖連蛋白和玻連蛋白；對(duì)于αvβ6纖連蛋白)的拮抗劑。本發(fā)明優(yōu)選針對(duì)整合蛋白受體的拮抗劑。整合蛋白(受體)拮抗劑可以是天然的或合成的肽，非肽，肽模擬物(pepetidomimetica)，免疫球蛋白例如抗體或抗體的功能性片段，或免疫綴合物(融合蛋白)。
本發(fā)明優(yōu)選的整合蛋白抑制劑為針對(duì)αv整合蛋白受體(例如，αvβ3，αvβ5，αvβ6和亞類)的抑制劑。優(yōu)選的整合蛋白抑制劑為αv拮抗劑，尤其是αvβ3拮抗劑。本發(fā)明優(yōu)選的αv拮抗劑是RGD肽，肽模擬物(非肽)拮抗劑和抗整合蛋白受體抗體如阻斷αv受體的抗體。
典型的非免疫學(xué)的αvβ3拮抗劑在US 5,753,230和US 5,766,591中有教導(dǎo)。優(yōu)選的拮抗劑為含RGD的線性和環(huán)型肽。環(huán)肽通常更穩(wěn)定且在血清中的半衰期更長(zhǎng)。然而，本發(fā)明最優(yōu)選的整合蛋白拮抗劑是環(huán)(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal)(EMD 121974，Cilengitide，Merck KgaA，德國(guó)；EP 0770 622)，它可有效地阻斷整合蛋白受體αvβ3、αvβ1、αvβ6、αvβ8、αllbβ3。
科技文獻(xiàn)和專利文獻(xiàn)中均描述過αvβ3/αvβ5/αvβ6整合蛋白受體的適宜肽類拮抗劑及肽模擬(非肽)拮抗劑。例如，可參見Hoekstra和Poulter，1998，Curr.Med.Chem.5,195；WO 95/32710；WO 95/37655；WO97/01540；WO 97/37655；WO 97/45137；WO 97/41844；WO 98/08840；WO98/18460；WO 98/18461；WO 98/25892；WO 98/31359；WO 98/30542；WO99/15506；WO 99/15507；WO 99/31061；WO 00/06169；EP 0853 084；EP0854 140；EP 0854 145；US 5,780,426；和US 6,048,861。公開了也適用于本發(fā)明的苯并氮雜唑及相關(guān)的苯并二氮雜唑和苯并環(huán)庚烯αvβ3整合蛋白受體拮抗劑的專利包括WO 96/00574，WO 96/00730，WO 96/06087，WO 96/26190，WO 97/24119，WO 97/24122，WO 97/24124，WO98/15278，WO 99/05107，WO 99/06049，WO 99/15170，WO 99/15178，WO 97/34865，WO 97/01540，WO 98/30542，WO 99/11626和WO99/15508。在WO 98/08840；WO 99/30709；WO 99/30713；WO 99/31099；WO 00/09503；US 5,919,792；US 5,925,655；US 5,981,546；和US 6,017,926中描述了具有主鏈構(gòu)象環(huán)約束特征的其他整合蛋白受體拮抗劑。在US 6,048,861和WO 00/72801中公開了一系列的壬酸衍生物，它們是有效的αvβ3整合蛋白受體拮抗劑。WO 00/38665中公開了其他化學(xué)小分子整合蛋白拮抗劑(多數(shù)為玻連蛋白拮抗劑)。其它αvβ3受體拮抗劑已被證實(shí)可有效地抑制血管生成。例如，合成的受體拮抗劑如(S)-10，11-二氫-3-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]環(huán)庚烯-10-乙酸(命名為SB-265123)已經(jīng)在很多哺乳動(dòng)物模型系統(tǒng)中實(shí)驗(yàn)過。(Keenan等，1998，Bioorg.Med.Chem.Lett.8(22)，3171；Ward等，1999，DrugMetab.Dispos.27(11)，1232)。適用作拮抗劑的整合蛋白拮抗劑的甄選實(shí)驗(yàn)在如Smith等，1990，J.Biol.Chem.265，12267中以及參考專利文獻(xiàn)中有描述。
抗整合蛋白受體的抗體也廣為人知。可對(duì)適宜的抗整合蛋白(如αvβ3，αvβ5，αvβ6)的單克隆抗體進(jìn)行修飾，使它包括自身的抗原結(jié)合片段(包括F(ab)2，F(xiàn)ab和工程化的Fv或單鏈抗體)。針對(duì)整合蛋白受體αvβ3的一個(gè)合適的且優(yōu)選使用的單克隆抗體被定為L(zhǎng)M609(Brooks等，1994，Cell 79，1157；ATCC HB 9537)。在WO 97/45447中公開了一個(gè)強(qiáng)特異性抗αvβ5抗體-P1 F6，它也優(yōu)選用于本發(fā)明。另一合適的αvβ6選擇性抗體是選擇性針對(duì)整合蛋白受體的αv鏈的MAb 14D9.F8(WO 99/37683，DSMACC2331，Merck KGaA，德國(guó))以及MAb 17.E6(EP 0719 859，DSMACC2160，Merck KGaA)。另一個(gè)適宜的抗整合蛋白抗體為上市的Vitraxin。
“生血管生長(zhǎng)因子或生長(zhǎng)因子受體”是能夠通過自身的激活促進(jìn)血管生長(zhǎng)和發(fā)育的因子或受體。典型地，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及其受體屬于此類。
此處的術(shù)語“抗體”或“免疫球蛋白”有最廣義的含義，特別包括完整的單克隆抗體、多克隆抗體、由至少2個(gè)完整抗體構(gòu)成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)以及抗體片段，只要它們顯示有所需的生物學(xué)活性即可。此術(shù)語一般包括由2個(gè)或多個(gè)具有不同結(jié)合特異性的抗體或抗體片段連接在一起構(gòu)成的雜合抗體。
根據(jù)抗體恒定區(qū)的氨基酸序列，完整的抗體可被劃分成不同的“抗體(免疫球蛋白)類型”。完整抗體有5個(gè)主要類型IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，其中有些可以被進(jìn)一步劃分成“亞類”(同種型)，如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA和IgA2。相應(yīng)于不同抗體類型的重鏈恒定區(qū)分別稱為α，δ，ε，γ和μ。本發(fā)明優(yōu)選的抗體主要類型是IgG，更具體的說是IgG1和IgG2。
抗體常常是分子量約150,000的糖蛋白，由2條同樣的輕(L)鏈和2條同樣的重(H)鏈組成。每條輕鏈都通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵和重鏈相連，而在不同免疫球蛋白同種型的重鏈中二硫鍵數(shù)目不同。每條重鏈和輕鏈還有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫鍵。每條重鏈都在一端有一個(gè)可變區(qū)(VH)并隨后有多個(gè)恒定區(qū)。每條輕鏈都在一個(gè)末端上有一個(gè)可變區(qū)(VL)，在另一末端上有一個(gè)恒定區(qū)。輕鏈的恒定區(qū)和重鏈的第一個(gè)恒定區(qū)并列，輕鏈的可變區(qū)和重鏈的可變區(qū)并列。據(jù)信特定氨基酸殘基構(gòu)成輕鏈和重鏈可變區(qū)之間的介面?？蓪⒓棺祫?dòng)物物種的抗體“輕鏈”劃分成2個(gè)明確不同的類型，稱為卡帕(κ)和拉姆達(dá)(λ)，這取決于它們恒定區(qū)的氨基酸序列。
本處所用的術(shù)語“單克隆抗體”指從基本上均質(zhì)的抗體群中獲得的抗體，即，除了可能的天然發(fā)生的微量突變以外，抗體群內(nèi)的每一株抗體都是相同的。單克隆抗體具有高度的特異性，它針對(duì)單一的抗原位點(diǎn)。而且，和多克隆抗體制品不同，多克隆抗體含有針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體，而每個(gè)單克隆抗體都僅針對(duì)抗原上的一個(gè)決定簇。除了它們的特異性以外，單克隆抗體的優(yōu)越之處還在于可以合成無其他抗體污染的單克隆抗體。單克隆抗體的制備方法包括Kohler和Milstein(1975，Nature 256，495)和″單克隆抗體技術(shù)，嚙齒類和人類雜交瘤的制備和表征″(1985，Burdon等，Eds，Laboratory Techniques in Biochemistry and MolecularBiology，Volume 13，ElseVier Science Publishers，Amsterdam)中描述的雜交瘤法，或者可以用廣為人知的重組DNA方法進(jìn)行制備(實(shí)例可參見US 4,816,567)。也可用比如Clackson等，Nature，352624-628(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.，22258，1-597(1991)中描述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫(kù)中分離單克隆抗體。
術(shù)語“嵌合抗體”是指這樣的抗體，其重鏈和/或輕鏈的一部分和來自特定物種的抗體或?qū)儆谔囟贵w類型或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，然而鏈的其余部分則與來自另一物種的抗體或?qū)儆诹硪豢贵w類型或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，該術(shù)語還指此種抗體的片段，只要其具有所需的生物學(xué)活性即可(例如US 4,816,567；Morrison等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，816851-6855(1984))。生產(chǎn)嵌合型和人源化抗體的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。例如，制備嵌合抗體的方法包括Boss(Celltech)和Cabilly(Genentech)(US 4,816,397；US 4,816,567)的專利中描述的方法。
“人源化抗體”是非人(如嚙齒類)嵌合抗體形式的抗體，其含有最低量的源于非人免疫球蛋白的序列。就大部分而言，人源化抗體是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中受體的高變區(qū)(CDR)的殘基被替換成非人物種(如小鼠，大鼠，兔或非人靈長(zhǎng)類)(供體抗體)的具有所需的特異性、親和性和作用的高變區(qū)殘基。有時(shí)，人免疫球蛋白構(gòu)架區(qū)(FR)殘基被對(duì)應(yīng)的非人殘基替換。而且，人源化抗體還可以含有受體抗體和供體抗體上均沒有的殘基。這些修飾可以進(jìn)一步限定抗體的性能。通常，人源化抗體含有至少一個(gè)，一般兩個(gè)可變區(qū)的基本上全部?jī)?nèi)容，其中所有或基本上所有的高變環(huán)都對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的相應(yīng)部分，而所有或基本上所有的FR都是人免疫球蛋白序列中的FR。人源化抗體也可任選地含有至少一部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)，特別是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。人源化抗體的制備方法描述在例如Winter，US 5,225,539和Boss，Celltech，US 4,816,397中。
術(shù)語“可變”或“FR”指的是如下事實(shí)，即抗體與抗體之間在可變區(qū)的某些部分具有十分不同的序列，這些部分用于各特定抗體對(duì)其特定抗原的結(jié)合和特異性。然而，此可變性并不均勻分布在抗體的整個(gè)可變區(qū)。它集中在輕鏈和重鏈可變區(qū)的三個(gè)稱為高變區(qū)的區(qū)段中。可變區(qū)的較高保守部分稱為構(gòu)架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變區(qū)每一個(gè)都包含四個(gè)FR(FR1-FR4)，它們主要采用β-片層構(gòu)型，由三個(gè)高變區(qū)連接，而高變區(qū)形成環(huán)與β-片層連接且有時(shí)形成β-片層結(jié)構(gòu)的一部分。每條鏈的高變區(qū)通過FR緊密鄰近，并與另一條鏈的高度可變區(qū)一起促成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成(參見Kabat等，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))。雖然恒定區(qū)沒有直接參與抗體和抗原的結(jié)合，但是顯示出多種效應(yīng)子功能，如參與抗體的抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。
此處所用的術(shù)語“高變區(qū)”或“CDR”指負(fù)責(zé)與抗原結(jié)合的抗體的氨基酸殘基。高變區(qū)一般包含“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”的氨基酸殘基(例如，輕鏈可變區(qū)的24-34位(L1)，50-56位(L2)和89-97位(L3)殘基，重鏈可變區(qū)的31-35位(H1)，50-65位(H2)和95-102位(H3)殘基)；和/或“高變環(huán)”的氨基酸殘基(例如，輕鏈可變區(qū)的26-32位(L1)，50-52位(L2)和91-96位(L3)殘基，重鏈可變區(qū)的26-32位(H1)，53-55位(H2)和96-101位(H3)殘基；Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196901-917(1987))。
“構(gòu)架區(qū)”或“FR”殘基是指除本處定義的高變區(qū)殘基以外的那些可變區(qū)殘基。
“抗體片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選包含抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的實(shí)例包括Fab，F(xiàn)ab′，F(xiàn)(ab′)2，F(xiàn)v和Fc片段，diabodies，線性抗體，單鏈抗體分子；及由抗體片段構(gòu)成的多特異性抗體?！巴暾贵w”是指包含結(jié)合抗原的可變區(qū)以及輕鏈恒定區(qū)(CL)和重鏈恒定區(qū)(CH1，CH2和CH3)的抗體。完整抗體優(yōu)選具有一個(gè)或多個(gè)效應(yīng)子功能。
木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生2個(gè)相同抗原結(jié)合片段(稱之為″Fab″片段，每個(gè)片段含有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)和一個(gè)CL區(qū)和一個(gè)CH1區(qū))以及一個(gè)殘余的″Fc″片段(其名稱反映了其易于結(jié)晶的能力)。
抗體″Fc″區(qū)一般含有CH2，CH3和IgG1或IgG2抗體主要類型的鉸鏈區(qū)。鉸鏈區(qū)是具有約15個(gè)氨基酸殘基的基團(tuán)，它把CH1區(qū)和CH2-CH3區(qū)結(jié)合起來。
胃蛋白酶處理產(chǎn)生一個(gè)″F(ab′)2″片段，它有2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)且仍有交聯(lián)抗原的能力。″Fv″是最小的抗體片段，它含有一個(gè)完整的抗原識(shí)別和抗原結(jié)合位點(diǎn)。此區(qū)域由一個(gè)重鏈可變區(qū)和一個(gè)輕鏈可變區(qū)通過牢固的非共價(jià)連接形成的二聚體組成。在此構(gòu)型中每個(gè)可變區(qū)的3個(gè)高變區(qū)(CDR)相互作用在VH-VL二聚體表面上確定出一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)?？偟恼f來，6個(gè)高變區(qū)賦予了抗體的抗原結(jié)合特異性。但是，甚至僅一個(gè)可變區(qū)(或僅含有3個(gè)抗原特異性高變區(qū)的一半Fv)也有識(shí)別并結(jié)合抗原的能力，雖然它比完整的結(jié)合位點(diǎn)的親合力低。Fab片段還包括輕鏈的恒定區(qū)和重鏈的第一恒定區(qū)(CH1)?！錐ab片段和Fab片段的不同之處在于在重鏈CH1區(qū)的羧基端多了幾個(gè)殘基，包括一個(gè)或多個(gè)來自抗體鉸鏈區(qū)的半胱氨酸。F(ab′)2抗體片段最初以Fab′片段對(duì)形式產(chǎn)生，這兩個(gè)Fab′片段之間有半胱氨酸鉸鏈?？贵w片段的其它化學(xué)偶聯(lián)也是已知的(參見如Hermanson，Bioconjugate Techniques，Academic Press，1996；.US 4,342,566)。
“單鏈Fv″或″scFv″抗體片段包含抗體的VH和VL區(qū)，其中，這些結(jié)構(gòu)域存在于一條多肽鏈上。Fv多肽優(yōu)選在VH和VL結(jié)構(gòu)域之間還含有多肽接頭，它可使scFv形成抗原結(jié)合所需的結(jié)構(gòu)。單鏈FV抗體也可從例如Plckthun(The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，Vol.113，Rosenburg和Moore編，Springer-Verlag，New York，pp.269-315(1994))，WO93/16185；US 5,571,894；US 5,587,458；Huston等(1988，Proc.Natl.Acad.Sci.85，5879)或Skerra和Plueckthun(1988，Science 240，1038)獲知。
術(shù)語“diabodies”是指有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小抗體片斷，此片斷包含一個(gè)重鏈可變區(qū)(VH)，它與輕鏈可變區(qū)(VL)連接在同一多肽鏈(VH-VL)上。通過利用不能使位于同一鏈上的這兩個(gè)域配對(duì)的小接頭，使一條鏈上的這些結(jié)構(gòu)域被迫與另一條鏈的互補(bǔ)域配對(duì)從而產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。例如在EP 404,097；WO 93/11161中對(duì)diabodies有更充分的描述。
“雙特異性抗體”是一個(gè)雙價(jià)的抗體(或其有免疫治療活性的片段)，其有2個(gè)不同特異性的抗原結(jié)合位點(diǎn)。例如第一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)可針對(duì)血管生成受體(例如整合蛋白或VEGF受體)，而第二個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)可針對(duì)ErbB受體(例如EGFR或Her 2)。雙特異性抗體能用化學(xué)方法(實(shí)例參見Kranz等(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78，5807)或″polydoma″技術(shù)(參見US 4,474,893)或重組DNA技術(shù)制備，所有這些技術(shù)均為本身已知的技術(shù)。其他方法在WO 91/00360，WO 92/05793和WO 96/04305中有描述。雙特異性抗體還能用單鏈抗體來制備(實(shí)例參見Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85，5879；Skerra和Plueckthun(1988)Science 240，1038)。這些是以單條多肽鏈形式產(chǎn)生的抗體可變區(qū)類似物。為了構(gòu)成雙特異性結(jié)合劑，單鏈抗體可以通過本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員熟知的化學(xué)方法或遺傳工程方法偶聯(lián)在一起。本發(fā)明的雙特異性抗體也可以用亮氨酸拉鏈序列來制備。此序列可來自于轉(zhuǎn)錄因子Fos和Jun的亮氨酸拉鏈區(qū)(Landschulz等，1988，Science 240，1759；綜述見，Maniatis和Abel，1989，Nature 341，24)。亮氨酸拉鏈?zhǔn)羌s20-40個(gè)殘基長(zhǎng)的特殊氨基酸序列，典型地每7個(gè)殘基就有一個(gè)亮氨酸。此拉鏈序列形成兩親性α螺旋，亮氨酸殘基在疏水側(cè)面上排成一線以便形成二聚體。相應(yīng)于Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉鏈的肽優(yōu)選形成異二聚體(O′Shea等，1989，Science 245，646)。含有拉鏈的雙特異性抗體及其制備方法在WO 92/10209和WO 93/11162中有公開。本發(fā)明的雙特異性抗體可以是針對(duì)VEGF受體和αvβ3受體的抗體，其中這兩個(gè)受體是在上面論及單特異性抗體時(shí)討論過的受體。
術(shù)語“免疫綴合物”指和非免疫學(xué)效應(yīng)分子通過共價(jià)鍵融合在一起的抗體或免疫球蛋白或其有免疫學(xué)活性的片段。此融合伙伴(partner)優(yōu)選為可以糖基化的肽或蛋白質(zhì)。所述的非抗體分子能連接到抗體重鏈恒定區(qū)的C末端或連接到輕鏈和/或重鏈可變區(qū)的N末端。此融合伙伴可以通過接頭分子連接，一般這種接頭分子是含3-15個(gè)氨基酸殘基的肽。本發(fā)明的免疫綴合物優(yōu)選包含由針對(duì)血管生成受體(優(yōu)選整合蛋白或VEGF受體)的免疫球蛋白或其有免疫治療效果的片段和TNFα組成的融合蛋白或基本由TNFα和IFHγ或其他適合的細(xì)胞因子通過N末端和所述的免疫球蛋白(優(yōu)選Fc部分)的C末端相連組成的融合蛋白。
術(shù)語“融合蛋白”指的是由一個(gè)或多個(gè)非免疫治療活性(非抗體)蛋白或肽組成的天然或合成分子，其中這些蛋白或肽具有不同的特異性并任選地通過接頭分子融合在一起。例如，本發(fā)明的融合蛋白可以是由環(huán)(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMe-Val)和TNFα和/或IFNγ融合組成的分子。
“雜合抗體”是連接在一起的兩個(gè)或多個(gè)抗體或抗體結(jié)合片段，它們中每個(gè)都有一個(gè)不同的結(jié)合特異性。雜合抗體可以通過兩個(gè)或多個(gè)抗體或抗體片段的綴合而制備。優(yōu)選的雜合抗體由交聯(lián)的Fab/Fab′片段組成。很多偶聯(lián)或交聯(lián)試劑可用于抗體的綴合。比如蛋白A，碳二亞胺，N-琥珀酰亞胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)和N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基聯(lián)硫基)丙酸酯(SPDP)(實(shí)例參見Karpovsky等(1984)J.EXP.Med.160，1686；Liu等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82，8648)。其他的方法還有Paulus，Behring Inst.Mitt.，No.78，118(1985)；Brennan等(1985)Science30m81或Glennie等(1987)J.Immunol.139，2367描述的方法。另一個(gè)方法使用鄰苯二馬來酰亞胺(oPDM)將三個(gè)Fab′片段偶聯(lián)在一起(WO91/03493)。本發(fā)明中多特異性抗體也是適用的，并可按照如WO 94/13804和WO 98/50431的教導(dǎo)進(jìn)行制備。
抗體“效應(yīng)子功能”是指抗體Fc區(qū)(天然序列Fc區(qū)或氨基酸序列變體Fc區(qū))引起的那些生物活性?？贵w效應(yīng)子功能的實(shí)例包括補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性，F(xiàn)c受體結(jié)合，抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC)，吞噬作用；細(xì)胞表面受體(如B細(xì)胞受體)的下調(diào)等。
術(shù)語“ADCC”(抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用)指的是這樣一個(gè)細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中表達(dá)Fc受體(FcR)的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞(如天然殺傷(NK)細(xì)胞，嗜中性粒細(xì)胞，和巨噬細(xì)胞)識(shí)別靶細(xì)胞上的結(jié)合抗體并隨后引起靶細(xì)胞的裂解。介導(dǎo)ADCC的重要細(xì)胞-NK細(xì)胞只表達(dá)FcγRIII，而單核細(xì)胞可表達(dá)FcγRI，F(xiàn)cγRII和FcγRIII。為估計(jì)目的分子的ADCC活性，可利用例如現(xiàn)有技術(shù)(US 5,500,362；US 5,821,337)中描述的體外ADCC實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行。此實(shí)驗(yàn)中有用的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)和天然殺傷(NK)細(xì)胞。
“人效應(yīng)細(xì)胞”是能表達(dá)一個(gè)或多個(gè)FcR并執(zhí)行效應(yīng)子功能的白細(xì)胞。此細(xì)胞優(yōu)選表達(dá)至少FcγRIII并執(zhí)行ADCC效應(yīng)子功能。介導(dǎo)ADCC的人白細(xì)胞的實(shí)例包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)，天然殺傷(NK)細(xì)胞，單核細(xì)胞，細(xì)胞毒性T細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞。
術(shù)語“Fc受體”或“FcR”用于描述與抗體Fc區(qū)結(jié)合的受體。優(yōu)選的FcR是天然序列的人FcR。而且，優(yōu)選的FcR是結(jié)合IgG抗體的受體(γ受體)并包括FcγRI，F(xiàn)cγRII和FcγRIII亞類的受體-包括這些受體的等位基因變體和可變剪接形式。例如，對(duì)FcR的綜述可參見Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol 9457-92(1991)。
術(shù)語“細(xì)胞因子”是對(duì)由一個(gè)細(xì)胞群釋放的作為細(xì)胞間介質(zhì)作用于另一細(xì)胞的蛋白質(zhì)的通稱。這類細(xì)胞因子的實(shí)例有淋巴因子、單核因子以及傳統(tǒng)的多肽激素。細(xì)胞因子包括生長(zhǎng)激素如人生長(zhǎng)激素，N-甲硫氨?；松L(zhǎng)激素以及牛生長(zhǎng)激素；甲狀旁腺激素；甲狀腺素；胰島素；胰島素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素如促卵泡激素(FSH)，促甲狀腺激素(TSH)和黃體生成素(LH)；肝生長(zhǎng)因子；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子；催乳素；胎盤催乳素；小鼠促性腺激素相關(guān)肽；抑制素；活化素；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)；整合蛋白；血小板生成素(TPO)；神經(jīng)生長(zhǎng)因子如NGFβ；血小板生長(zhǎng)因子；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)如TGFα和TGFβ；紅細(xì)胞生成素(EPO)；干擾素如IFNα，IFNβ和IFNγ；集落刺激因子如M-CSF，GM-CSF和G-CSF；白細(xì)胞介素如IL-1，IL-1a，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-11，IL-12；和TNFα或TNFβ。本發(fā)明優(yōu)選的細(xì)胞因子為干擾素和TNFα。
本處使用的術(shù)語“細(xì)胞毒性劑”指的是可以抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞破壞的物質(zhì)。此術(shù)語旨在包括放射性同位素，化療劑，毒素如細(xì)菌，真菌，植物或動(dòng)物來源的酶活性毒素，或它們的片段。此術(shù)語還可以包括細(xì)胞因子家族的成員，優(yōu)選IFNγ。
術(shù)語“化療劑”或“抗腫瘤劑”包括具有抗腫瘤效果的化學(xué)藥劑，即直接地(作用在腫瘤細(xì)胞上，比如通過抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞毒性作用)和間接地(通過如修飾生物學(xué)反應(yīng)等機(jī)制)防止腫瘤細(xì)胞的發(fā)育，成熟或擴(kuò)散的化學(xué)藥劑。本發(fā)明適宜的化療劑優(yōu)選為天然的或合成的化學(xué)化合物，但是生物分子如蛋白質(zhì)，多肽等并不被明確地排除在外。大量的現(xiàn)有處于商業(yè)使用、臨床評(píng)價(jià)和臨床前研發(fā)階段的抗腫瘤劑都可包括在本發(fā)明內(nèi)，用于通過和TNFα及上面提到的抗血管生成劑及任選地其它藥劑比如EGF受體拮抗劑相聯(lián)合來治療腫瘤/贅生物。應(yīng)當(dāng)指出化療劑可以任選地與上述藥劑聯(lián)合一起施用。
化療劑的實(shí)例包括烷化劑，如氮芥，吖丙啶化合物，烷基磺酸酯以及其他有烷基化作用的化合物如亞硝基脲，順氯氨鉑和達(dá)卡巴嗪；抗代謝物如葉酸、嘌呤或嘧啶拮抗劑；有絲分裂抑制劑如長(zhǎng)春花生物堿和鬼臼毒素衍生物；細(xì)胞毒性抗生素和喜樹堿衍生物。優(yōu)選的化療劑或化療法包括氨磷汀(ethyol)，順氯氨鉑，達(dá)卡巴嗪(DTIC)，放線菌素D，氮芥，鏈脲霉素，環(huán)磷酰胺，carrnustine(BCNU)，環(huán)己亞硝脲(CCNU)，阿霉素(adriamycin)，阿霉素微脂體(doxil)，吉西他濱(gemzar)，柔紅霉素，柔紅霉素微脂體(daunoxome)，甲基芐肼，絲裂霉素，阿糖胞苷，足葉乙甙，氨甲蝶呤，5-氟尿嘧啶(5-FU)，長(zhǎng)春花堿，長(zhǎng)春新堿，博來霉素，紫杉醇(taxol)，泰索帝(多烯紫杉醇，docetaxel)，阿地白介素(aldesleukin)，天冬酰胺酶，白消安，卡鉑，克拉立平，喜樹堿，CPT-11，10-羥基-7-乙基-喜樹堿(SN38)，達(dá)卡巴嗪，氟尿苷，氟達(dá)拉濱，羥基脲，異環(huán)磷酰胺，伊達(dá)比星，巰乙磺酸鈉，干擾素α，干擾素β，伊立替康(irinotecan)，米托蒽醌，托泊替堪，亮丙瑞林，甲地孕酮，抗瘤氨酸，巰嘌呤，普卡霉素(plicamycin)，氯苯二氯乙烷，天冬酰胺酶(pegaspargase)，噴司他丁(pentostatin)，哌酰溴烷，普卡霉素，鏈脲霉素，他莫西芬，替尼泊甙，睪內(nèi)酯，硫鳥嘌呤，塞替派，尿嘧啶氮芥，維諾利賓，苯丁酸氮芥及其組合。本發(fā)明最優(yōu)選的化療劑是順氯氨鉑，吉西他濱，阿霉素，紫杉醇和博來霉素。
術(shù)語“癌”和“腫瘤”指的是或描述的是典型特征為無調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物生理疾病。通過施用本發(fā)明的藥物組合物，可對(duì)腫瘤進(jìn)行治療，如乳腺，心臟，肺，小腸，結(jié)腸，脾，腎，膀胱，頭部和頸，卵巢，前列腺，腦，胰腺，皮膚，骨，骨髓，血液，胸腺，子宮，睪丸，子宮頸和肝的腫瘤。更具體地，腫瘤選自腺瘤，血管肉瘤(angio-sarcoma)，星形細(xì)胞瘤，上皮癌，生殖細(xì)胞瘤，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，錯(cuò)構(gòu)瘤，血管內(nèi)皮瘤，血管肉瘤(hemangio sarcoma)，血腫，肝胚細(xì)胞瘤，白血病，淋巴瘤，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，黑素瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，骨肉瘤，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，肉瘤和畸胎瘤。
詳細(xì)地說，腫瘤選自肢端色斑樣黑素瘤，光化性角化病，腺癌，囊腺癌，腺瘤，腺肉瘤，腺鱗癌，星形細(xì)胞瘤，前庭大腺癌，基底細(xì)胞癌，支氣管腺癌，毛細(xì)血管瘤、癌、癌肉瘤，海綿狀膽管癌，軟骨肉瘤，脈絡(luò)絲乳頭狀瘤/癌，透明細(xì)胞癌，囊腺瘤，內(nèi)胚竇瘤，子宮內(nèi)膜增生，子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤，子宮內(nèi)膜腺癌，室管膜肉瘤，上皮樣肉瘤，尤因肉瘤，纖維板層樣癌，局灶性結(jié)節(jié)性增生，胃泌素瘤，生殖細(xì)胞瘤，成神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤，胰升糖素瘤，成血管細(xì)胞瘤，血管內(nèi)皮瘤，血管瘤，肝腺瘤，肝腺瘤病，肝細(xì)胞癌，胰島素瘤，上皮內(nèi)瘤形成，上皮間鱗狀細(xì)胞癌，侵襲性鱗狀細(xì)胞癌，大細(xì)胞癌，平滑肌肉瘤，惡性著色斑型黑素瘤，惡性黑素瘤，惡性間皮瘤，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，髓上皮瘤，黑素瘤，腦膜腫瘤，間皮腫瘤，轉(zhuǎn)移性腫瘤，粘液上皮癌，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，神經(jīng)上皮腺癌，結(jié)節(jié)性黑色素瘤，燕麥細(xì)胞癌，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，骨肉瘤，胰腺多肽，乳頭狀漿液性腺癌，松果體細(xì)胞瘤，垂體瘤，漿細(xì)胞瘤，假肉瘤，肺母細(xì)胞瘤，腎細(xì)胞瘤，成視網(wǎng)膜細(xì)胞癌，橫紋肌肉瘤，肉瘤，漿液性癌，小細(xì)胞肺癌，軟組織癌，抑生長(zhǎng)素分泌細(xì)胞腫瘤，鱗癌，鱗狀細(xì)胞癌，間皮下，表淺蔓延型黑素瘤，未分化的癌，眼色素層黑色素瘤，疣狀癌，血管活性腸多肽瘤，完全分化的癌，和腎母細(xì)胞瘤。
“ErbB受體”是指屬于ErbB受體家族的受體蛋白酪氨酸激酶，包括EGFR(ErbB1)，ErbB2，ErbB3和ErbB4受體以及此家族中有待于在將來進(jìn)行鑒別的其他成員。ErbB受體一般含有一個(gè)可與ErbB配體結(jié)合的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域；一個(gè)親脂性的跨膜結(jié)構(gòu)域；一個(gè)保守的細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域；以及一個(gè)含有若干可被磷酸化的酪氨酸殘基的羧基端信號(hào)結(jié)構(gòu)域。ErbB受體可以是“天然序列的”ErbB受體，或它的“氨基酸序列變異體”。優(yōu)選的ErbB受體是天然序列的人ErbB受體。ErbB1指的是編碼EGFR蛋白產(chǎn)物的基因。最優(yōu)選的是EGF受體(Her1)?！癊rbB1”和“HER1”在本處可互換使用且均指人HER1蛋白?！癊rbB2”和“HER2”在本處可互換使用且均指人HER2蛋白。本發(fā)明優(yōu)選ErbB1受體(EGFR)。
“ErbB配體”是結(jié)合并且/或者激活ErbB受體的多肽。與EGFR結(jié)合的ErbB配體包括有EGF，TGF-a，雙調(diào)蛋白，β-細(xì)胞調(diào)節(jié)素(betacellulin)，HB-EGF和表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin)。
術(shù)語“ErbB受體拮抗劑/抑制劑”指的是天然或合成的能結(jié)合并阻斷或抑制ErbB受體的分子。因此通過阻斷受體，拮抗劑阻止了ErbB配體(激動(dòng)劑)的結(jié)合以及激動(dòng)劑/配體受體復(fù)合物的活化。ErbB拮抗劑可能針對(duì)HER1(EGFR)或HER2。本發(fā)明優(yōu)選的拮抗劑針對(duì)EGF受體(EGFR，Her1)。ErbB受體拮抗劑可以是抗體或抗體的免疫治療活性片段或非免疫生物學(xué)分子一如肽、多肽蛋白。化學(xué)分子也包括在內(nèi)，但是本發(fā)明優(yōu)選的拮抗劑為抗EGFR抗體和抗HER2抗體。
本發(fā)明優(yōu)選的抗體為抗Her1和抗Her2抗體，更優(yōu)選抗Her1抗體。優(yōu)選的抗Her1抗體為MAb 425，優(yōu)選人源化的MAb 425(hMAb 425，US5,558,864；EP 0531 472)和嵌合MAb 225(cMAb 225，US 4,943,533和EP0359 282)。最優(yōu)選的是單克隆抗體h425，在單藥物治療中它已顯示出高療效和降低的負(fù)反應(yīng)和副作用。最優(yōu)選的抗Her2抗體是Genentech/Roche上市的HERCEPTIN。本發(fā)明的有效EGF受體拮抗劑還可以是天然的或合成的化學(xué)化合物。此類優(yōu)選分子的一些實(shí)例包括有機(jī)化合物、有機(jī)金屬化合物、有機(jī)化合物和有機(jī)金屬化合物的鹽。
HER2受體拮抗劑的實(shí)例有苯乙烯基取代的雜芳基化合物(US5,656,655)；雙單環(huán)和/或雙環(huán)芳基、雜芳基、碳環(huán)和雜碳環(huán)化合物(US5,646,153)；三環(huán)的嘧啶化合物(US 5,679,683)；有受體酪氨酸激酶抑制活性的喹唑啉衍生物(US 5,616,582)；雜芳基乙烯基或雜芳基乙烯基芳基化合物(US 5,196,446)；可以抑制EGFR、PDGFR和FGFR受體家族的名稱為6-(2，6-二氯代苯基)-2-(4-(2-二乙基-氨基乙氧基)苯基氨基)-8-甲基-8H-吡啶并(2，3)-5-嘧啶-7-酮的化合物(Panek，等，1997，J.Pharmacol.Exp.Therap.283，1433)。
術(shù)語“酪氨酸激酶拮抗劑/抑制劑”指的是天然的或者合成的能夠抑制或阻斷酪氨酸激酶(包括受體酪氨酸激酶)的試劑。除了上文和下文所提及的抗ErbB受體抗體以外，更優(yōu)選的酪氨酸激酶拮抗劑是在單藥物治療中表現(xiàn)出對(duì)乳腺癌和前列腺癌有效的化學(xué)化合物。適宜的吲哚并咔唑型酪氨酸激酶抑制劑可以利用如美國(guó)專利5,516,771；5,654,427；5,461,146；5,650,407等文獻(xiàn)的信息獲得。美國(guó)專利5,475,110；5,591,855；5,594,009和WO 96/11933公開了吡咯并咔唑型酪氨酸激酶抑制劑和前列腺癌。上面定義的化學(xué)屬性酪氨酸激酶抑制劑的優(yōu)選劑量為每天1pg/kg體重到1g/kg體重。更優(yōu)選的酪氨酸激酶抑制劑的劑量為每天0.01mg/kg體重到100mg/kg體重。
此處所用的術(shù)語“抗激素劑”包括天然的或合成的有機(jī)或肽化合物，它們起的作用是調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤的活性。更具體地來說，“抗激素劑”(1)抑制血清雄激素的產(chǎn)生，(2)阻斷血清雄激素與雄激素受體的結(jié)合，或者(3)抑制睪酮轉(zhuǎn)化為DHT或兩種或多種此類化合物的組合。
本發(fā)明的抗激素劑一般包括類固醇受體拮抗劑，更具體來說抗雌激素劑，如包括他莫昔芬，raloxifene，芳香酶抑制4(5)-咪唑，4-羥基他莫昔芬，氫萘吡苯酮，keoxifene，LY117018，onapristone和托瑞米芬(toremifene)(Fareston)；及抗雄激素劑，如氟他胺(flutamide)，尼魯他胺(nilutamide)，bicalutamide，亮丙瑞林(1euprolide)和性瑞林(goserelin)；以及上述任一種的藥學(xué)可接受的鹽、酸或衍生物。本術(shù)語還包括糖蛋白激素——如促卵泡成熟激素(FSH)，促甲狀腺素(TSH)和黃體生成素(LH)和LHRH(黃體生成激素釋放激素)的激動(dòng)劑和/或拮抗劑?？捎糜诒景l(fā)明的LHRH激動(dòng)劑是醋酸性瑞林，其商品名稱為ZOLADEX(Zeneca)。醋酸性瑞林的化學(xué)結(jié)構(gòu)是pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH，醋酸?？捎糜诒景l(fā)明的LHRH拮抗劑的一個(gè)實(shí)例是ANTIDE(Ares-Serono)，其化學(xué)名稱是D-丙氨酰胺N-乙酰-3-(2-萘基)-D-丙氨酰-4-氯-D-苯丙氨酰-3-(3-吡啶基)-D-丙氨酰-L-絲氨酰-NG-(3-吡啶基羰基)-L-賴氨酰-N6-(3-吡啶基羰基)-D-賴氨酰-L-亮氨酰-N6-(1-甲乙基)-L-賴氨酰-L-脯氨?；Ａ硪粋€(gè)有用的LHRH拮抗劑實(shí)例是GANI RELIX(Roche/Akzo Nobel)，其化學(xué)名稱是N-Ac-D-Nal，D-pCl-Phe，D-Pal，D-hArg(Et)2，hArg(Et)2，D-Ala。類固醇抗雄激素劑的實(shí)例是醋酸環(huán)丙孕酮(CPA)和醋酸甲地孕酮，其商品為MEGACE(Bristol-Myers，Oncology)。類固醇抗雄激素劑可阻斷前列腺雄激素受體。它們還可抑制LH的釋放。優(yōu)選給人類患者施用的CPA劑量為100mg/天到250mg/天。非類固醇抗雄激素阻斷雄激素受體。它們還可引起血清LH水平和血清睪酮水平的增加。優(yōu)選的非類固醇抗雄激素劑是氟他胺(2-甲基-N-[4-20硝基-3-(三氟甲基)苯基丙酰胺]，其商品名為EULEXIN(Schering Corp.)。氟他胺發(fā)揮的是抗雄激素作用，其抑制雄激素?cái)z取、抑制靶組織中雄激素的核結(jié)合或兩者兼而有之。另一個(gè)非類固醇抗雄激素劑是尼魯他胺，其化學(xué)名稱為5，5-二甲基-3-[4-硝基-3-(三氟甲基-4′-硝基苯基)-4，4-二甲基-咪唑烷-二酮。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，抗激素劑是LHRH激動(dòng)劑如醋酸亮丙瑞林和抗雄激素劑如氟他胺或尼魯他胺的組合。如，可通過皮下注射、肌肉注射和靜脈注射施用醋酸亮丙瑞林，并同時(shí)可以口服氟他胺。
如上文指出，本發(fā)明的抗激素劑包括類固醇/甲狀腺激素受體的拮抗劑，其中包括了其它非許可(non-permissive)受體——如RAR，TR，VDR等的拮抗劑。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員易于明了的，多種合成的和天然的視黃酸受體(RAR)拮抗劑可應(yīng)用于本發(fā)明。示例性RAR拮抗劑包括dicarba-closo-dodecaboranes(lijima等，Chem Pharm Bull(Tokyo)(1999)47(3)398-404)，氫蒽基、苯并色烯基和苯并硫代色烯基類視黃醇(retinoid)(Vuligonda等，Bioorg Med Chem Lett(1999)9(5)743-8)，二芳基乙炔、苯甲酸衍生物(參見如Kagechika，H.(1994)Yakugaku Zasshi114(11)847-862；Eckhardt等(1994)Toxicol Lett 70(3)299-308；Yoshimura等(1995)J Med Chem 38(16)3163-3173；30 Chen等(1995)EMBO 14(6)1187-1197；Teng等(1997)J Med Chem 40(16)2445-2451)；萘基類似物(參見如Johnson等(1995)J Med Chem 38(24)4764-4767；Agarwal等J Biol Chem 271(21)12209-12212；Umemiya等(1996)Yakugaku Zasshi 116(12)928-941)；芳基取代的以及芳基和(3-氧代-1-丙烯基)-取代的苯并吡喃、苯并硫代吡喃、1，2-二氫喹啉和5，6-二氫萘衍生物(Klein等U.S.Pat.Nos.5877,207和5,776,699)，金剛烷基-取代的二芳族化合物(Bernardon和Charpentier，U.S.Pat.No.5,877,342)，1-苯基-金剛烷衍生物(Bernardon和Bernardon EP776885)，多芳族雜環(huán)化合物(Charpentier等U.S.Pat.No.5,849,798)，二氫萘衍生物(Beard等，U.S.Pat.No.5,808,124和Johnson等US5,773,594)，4-苯基(苯并吡喃基或萘?；?胺基安息香酸衍生物(WO98/US/13065)，二氮雜唑苯甲酸衍生物(Umemiya等，J Med Chem(1997)40(26)4222-34)，四氫萘衍生物(US 5,763,635,5,741,896和5,723,666)，芳基-和雜芳基環(huán)己烯基取代的烯烴(US 5,760,276)，二苯并呋喃化合物——包括芳族二苯并呋喃化合物(US 5,702,710，US 5,747,530)，N-芳基取代的四氫喹啉(US 5,739,338)，苯并[1，2-g]-色-3-烯以及苯并[1，2g]-硫代色-3-烯衍生物(US 5,728,846)，等。預(yù)期可用于本發(fā)明的具體RAR拮抗劑的實(shí)例包括LE135(Umemiya等(1996)Yakugaku Zasshi 116(12)928-941)，LE511，LE540，LE550(Li等，J Biol Chem(1999)274(22)15360-6；Umemiya等(1996)Yakugaku Zasshi 116(12)928-941)，Ro41-5253(Keidel等(1994)Mol Gell Biol 14(1)287-298)，SR11330，SR11334，SR11335(Lee等(1996)J.Biol Chem 271(20)11897-11903)，BMS453，BMS411(Chen等(1995)EMBO 14(6)1187-1197)，CD2366和CD2665(Meister等，Anticancer Res.(1998)18(3A)1777-1786)，ER27191(Uemo等，Leu k.Res.(1998)22(6)517-525)，AGN 193 109(Johnson等，Bioorg Med Chem Lett(1999)9(4)573-6)，4-[4，5，7，8，9，10-六氫-7，7，10，10-四甲基-1-(3-吡啶基甲基)蒽并[1，2-b]吡咯-3-基]安息香酸，4-[4，5，7，8，9，10-六氫-7，7，10，10-四甲基-1-(3-吡啶基甲基)-5-硫代蒽并[1，2-b]吡咯-3-基]安息香酸，4-[4，5，7，8，9，10-六氫-7，7，10，10-四甲基-1-(3-吡啶基甲基)蒽并[2，1-d]吡唑-3-基]安息香酸(Yoshimura等(1995)JMed Chem 38(16)3163-3173)，AGN193109(Agarwal等J Biol Chem271(21)12209-12212)，等。
“類固醇受體”或“核類固醇受體”指的是—種蛋白質(zhì)，它是一種配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，屬于核受體的類固醇受體亞族。那些結(jié)構(gòu)類似并具有類固醇激素激活的轉(zhuǎn)錄因子的生物活性的蛋白質(zhì)都包含在類固醇受體的定義中。類固醇受體含有全部或部分的DNA結(jié)合域和激素(或配體)結(jié)合域，并且包括結(jié)構(gòu)類似于類固醇受體但配體未知的孤兒受體。
“類固醇受體配體”指的是一種能夠結(jié)合核類固醇受體以形成受體-配體復(fù)合物的天然或合成化合物。此術(shù)語“配體”包括激動(dòng)劑、拮抗劑以及具有部分激動(dòng)劑/拮抗劑活性的化合物。
“類固醇受體激動(dòng)劑”指的是一種能夠結(jié)合核類固醇受體以形成受體-激動(dòng)劑復(fù)合物的化合物。受體-激動(dòng)劑復(fù)合物能夠結(jié)合被稱為激素效應(yīng)元件的DNA特異性區(qū)域。激動(dòng)劑包括類固醇或類固醇樣激素，類視黃醇，甲狀腺激素，藥物活性化合物，等。一種激動(dòng)劑可能具有與多種受體結(jié)合的能力。天然的類固醇激素激動(dòng)劑包括雌二醇，黃體酮，雄激素，糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素。如上文所指出的，一些類固醇受體激動(dòng)劑隨劑量的不同可顯示出一些拮抗劑的功效。因此，這樣的“激動(dòng)劑”可能有效地作為本發(fā)明定義的抗激素劑。
“類固醇受體拮抗劑”指的是具有與激動(dòng)劑相對(duì)的生物學(xué)作用的化合物。拮抗劑結(jié)合核類固醇受體并且通過與類固醇激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)受體而阻斷類固醇受體激動(dòng)劑的活性。拮抗劑是根據(jù)其阻斷激動(dòng)劑活性的能力而定義的。類固醇受體拮抗劑包括“純”拮抗劑以及具有部分激動(dòng)劑/拮抗劑活性的化合物。純拮抗劑可有效地與激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)對(duì)受體的結(jié)合，而其本身不具有激動(dòng)劑活性。部分拮抗劑可能在與激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)對(duì)受體的結(jié)合的方面效力較差，或者可能在結(jié)合受體方面效力相等但是與其所競(jìng)爭(zhēng)的激動(dòng)劑的活性相比其僅具有5-10％的激動(dòng)劑活性。這樣，拮抗劑可能具有比其所競(jìng)爭(zhēng)的激動(dòng)劑的激動(dòng)活性效力較低的激動(dòng)劑活性。
“放射性療法”根據(jù)本發(fā)明腫瘤還可以利用放射線或放射藥物進(jìn)行治療。放射源既可以給患者外用也可以給患者內(nèi)用。如果給患者外用放射源，該治療方法稱作體外照射放療(EBRT)。如果給患者內(nèi)用放射源，此治療稱為近巨放射療法(BT)。已經(jīng)使用的一些典型的放射活性原子包括鐳，銫-137，和銥-192，镅-241和金-198，鈷-57；銅-67；锝-99；碘-123；碘-131；以及銦-111。也可以用放射活性同位素標(biāo)記本發(fā)明藥劑。當(dāng)前放射性療法是控制不能切除的和不宜手術(shù)的腫瘤和/或腫瘤轉(zhuǎn)移的標(biāo)準(zhǔn)治療方法。已經(jīng)看到放射性療法和化療組合可提高療效。放射性療法依據(jù)的原理是投射到靶區(qū)的高劑量輻射將導(dǎo)致腫瘤和正常組織中的增殖細(xì)胞的死亡。輻射劑量方案一般根據(jù)輻射吸收劑量(rad)，時(shí)間和分段進(jìn)行確定，并且必須由腫瘤專家進(jìn)行仔細(xì)確定。患者接受的輻射量將取決于各種因素，但兩個(gè)最重要的因素是腫瘤相對(duì)身體其它重要結(jié)構(gòu)或器官的位置，以及腫瘤擴(kuò)散的程度。對(duì)患者實(shí)施放射性療法的一個(gè)優(yōu)選治療方案是療程持續(xù)5-6個(gè)星期，將50-60Gy總劑量按照每星期5天每天1次1.8-2.0Gy的劑量給患者分段施用。Gy是戈瑞的縮寫，指100rad劑量。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，血管生成拮抗劑和TNFα/IFNγ以及放射物對(duì)人類患者腫瘤的治療具有協(xié)同作用。換句話說，所述化合物如果與放射物和/或化療劑組合，則對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用將增強(qiáng)。本發(fā)明可任選地使用放射性療法。在不能給患者施用足量的本發(fā)明藥劑的情況下建議和優(yōu)選使用放射性療法。
“藥物治療”就步驟而言，本發(fā)明的方法包括多種實(shí)施形式。比如，本發(fā)明的藥劑可以同時(shí)地，相繼地或獨(dú)立地使用。另外，藥劑可分開施用且兩次施用間隔在約3周以內(nèi)，即第二種藥劑在第一種活性劑施用后基本上立即開始施用到第一種藥劑施用后不超過約3周的時(shí)間開始施用。本方法可在手術(shù)之后進(jìn)行?；蛘?，手術(shù)可在施用第一種活性藥劑和施用第二種活性藥劑之間的間隔期內(nèi)進(jìn)行。此方法的實(shí)例是將本發(fā)明方法和外科腫瘤摘除手術(shù)聯(lián)合應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明方法的治療典型地包括在一個(gè)或多個(gè)施用周期內(nèi)施用本治療組合物。例如，當(dāng)進(jìn)行同時(shí)施用的時(shí)侯，含有2種藥劑的治療組合物在一個(gè)周期內(nèi)持繼施用大約2天到約3周。此后，治療周期可根據(jù)執(zhí)業(yè)醫(yī)生的判斷按需要進(jìn)行重復(fù)。類似地，如果進(jìn)行相繼施用，則每種治療劑施用的時(shí)間可調(diào)整到典型地覆蓋同樣的時(shí)間。兩周期之間的間隔可從約0到2個(gè)月不等。
本發(fā)明的藥劑可通過注射或隨時(shí)間逐漸輸注經(jīng)腸胃外施用。體內(nèi)待治療的組織用全身給藥的方法一般就可進(jìn)行治療，因此最經(jīng)常使用的方法是靜脈內(nèi)給予治療組合物，但是當(dāng)目標(biāo)組織可能含有靶分子的時(shí)候，其他組織和給藥方法也是可考慮的。因此，本發(fā)明的藥劑可眼內(nèi)，靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，肌內(nèi)，皮下，腔內(nèi)，經(jīng)皮，通過常位注射和輸注給藥，而且還可以通過蠕動(dòng)方式給藥。例如，包括本發(fā)明的整合蛋白拮抗劑的治療組合物通常通過靜脈方式，比如以單位劑量注射給藥。本發(fā)明的治療組合物包含生理學(xué)可耐受的載體和溶解或分散于其中作為活性成分的本處描述的相關(guān)藥劑。
如在本處使用的那樣，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”指這樣的組合物，載體，稀釋劑和試劑，這些物質(zhì)可用在哺乳動(dòng)物身上而不會(huì)產(chǎn)生不想要的生理效應(yīng)如惡心，眩暈，反胃等。其中溶解或分散有活性成分的藥物組合物的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，不必在制劑的基礎(chǔ)上進(jìn)行限定。典型地，這種組合物可制成注射劑如液體溶液或懸液，但是，也可制成適于在使用前在液體中形成溶液或混懸液的固體形式。制劑也可進(jìn)行乳化?？蓪⒒钚猿煞趾推淞窟m于本處描述的治療方法的藥學(xué)上可接受的并與活性成分兼容的賦形劑混合。適當(dāng)?shù)馁x形劑是，例如，水，鹽水，葡萄糖，甘油，乙醇等以及這些的組合。另外，如果需要的話，組合物還可以包括小量可增加活性成分效用的輔助物質(zhì)如潤(rùn)濕劑或乳化劑，pH緩沖劑等。本發(fā)明治療組合物可在其中包括這些成分在藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括酸加成鹽(和多肽的游離氨基基團(tuán)成鹽)，所述酸是無機(jī)酸，例如，鹽酸或磷酸，或像乙酸，酒石酸，苦杏仁酸等有機(jī)酸。也可從無機(jī)堿，例如，鈉，鉀，銨，鈣或鐵的氫氧化物，以及有機(jī)堿如異丙胺，三甲基胺，2-乙氨基乙醇，組氨酸，普魯卡因等，得到與游離羧基基團(tuán)形成的鹽。在環(huán)肽αv拮抗劑制劑中特別優(yōu)選使用HCl鹽。生理學(xué)上可耐受的載體是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的。液相載體的例子為無菌水溶液，它可以僅含有活性組分和水或可以還含有緩沖劑例如在生理pH值的磷酸鈉，生理鹽水或兩者，如磷酸緩沖鹽水。再者，含水載體可以含有一種以上的緩沖鹽以及諸如氯化鈉和氯化鉀等鹽，葡萄糖，聚乙二醇和其他溶質(zhì)。液體組合物也可含有有水或無水的液相。這類其他液相的例子有甘油，植物油如棉籽油和水油乳液。
典型地，對(duì)于形式為例如，整合蛋白受體阻斷抗體或抗體片段或抗體綴合物或者抗VEGF受體阻斷抗體、片斷或綴合物的免疫治療劑，治療有效量是在生理可耐受的組合物中給藥時(shí)，足以使血漿濃度達(dá)到約0.01微克(μg)每毫升(ml)至約100μg/ml，優(yōu)選約1μg/ml至5μg/ml，通常約5μg/ml的量。換言之，劑量可從約0.1mg/kg變化到約300mg/kg，優(yōu)選約0.2mg/kg至約200mg/kg，最優(yōu)選約0.5mg/kg至約20mg/kg，一日或多日持繼進(jìn)行一日一次或一日多次給藥。當(dāng)免疫治療劑是單克隆抗體的片段或綴合物的時(shí)侯，其用量可很容易地根據(jù)片段/綴合物的質(zhì)量相對(duì)于整個(gè)抗體的質(zhì)量的比例進(jìn)行調(diào)整。以摩爾濃度表示，優(yōu)選的血漿濃度為約2微摩爾(μM)至約5毫摩爾(mM)，優(yōu)選約100μM到1mM抗體拮抗劑。
對(duì)于屬于非免疫治療性肽或蛋白質(zhì)多肽或其他類似大小的生物分子的本發(fā)明藥劑，其治療有效的量典型地為這樣的多肽量，即在生理可耐受的組合物中給藥時(shí)足以使血漿濃度達(dá)到0.1微克(μg)每毫升(ml)至約200μg/ml，優(yōu)選約1μg/ml至約150μg/ml的量。根據(jù)每摩爾有約500克質(zhì)量的多肽來計(jì)算，優(yōu)選的血漿摩爾濃度為約2微摩爾(μM)到約5毫摩爾(mM)，優(yōu)選約100μM至1mM多肽拮抗劑。
對(duì)于優(yōu)選為本發(fā)明核激素受體拮抗劑或(化學(xué))化療劑(既不是免疫治療劑，也不是非免疫治療性肽/蛋白)的活性劑，其典型劑量為每公斤體重每天10mg至1000mg，優(yōu)選約20至200mg，更優(yōu)選的是50至100mg。
本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選適用于乳腺和前列腺癌的治療。
治療乳腺癌優(yōu)選下列抗激素劑及劑量他莫昔芬10.0mg-40.0mg口服給藥/天托瑞米芬20.0mg-100.0mg/天Anastrozole0.5mg-5.0mg口服給藥/天Letrozole1.0mg-10.0mg口服給藥/天福美司坦(Formestane)100.0mg-500.0mg肌內(nèi)給藥/2周性瑞林2.5mg-5.0mg皮下給藥/4周布舍瑞林(Buserelin)5.0mg-10.0mg皮下給藥/8周1.0mg-5.0mg鼻噴霧給藥/天亮丙瑞林5.0mg-15.0mg皮下給藥/3月醋酸甲地孕醇40.0mg-200.0mg/天治療乳腺癌優(yōu)選下列抗激素劑及劑量氟他胺250.0mg-1000.0mg/天Bicalutamide10.0mg-200.0mg/天性瑞林2.5mg-5.0mg皮下給藥/4周布舍瑞林5.0mg-10.0mg皮下給藥/8周1.0mg-5.0mg鼻噴霧給藥7天亮丙瑞林5.0mg-15.0mg皮下給藥/3月乙酸環(huán)丙孕酮25.0mg-200.0mg/天口服給藥150.0mg-500.0mg肌內(nèi)給藥/2周上文所述的抗激素治療主要成分的任何類似物或其發(fā)展物可根據(jù)指示劑量使用。
本發(fā)明的“藥物組合物”可以包含能降低或避免伴隨本發(fā)明聯(lián)合療法出現(xiàn)的副作用的藥劑(“輔助療法”)，這包括但不限于，如降低抗癌藥物毒性作用的藥劑，例如骨重吸收抑制劑，心臟保護(hù)藥物。所述的輔助藥劑可以防止或降低化療，放射治療或手術(shù)帶來的惡心和嘔吐的發(fā)生率，或降低施用骨髓抑制性抗癌藥物帶來的感染機(jī)率。輔助藥劑是本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員所熟知的。此外，本發(fā)明的免疫治療劑還可以和佐劑如BCG和免疫系統(tǒng)刺激劑一起使用。而且，組合物可包括含有具細(xì)胞毒性作用的放射性標(biāo)記同位素或其他細(xì)胞毒性劑如細(xì)胞毒性肽(例如細(xì)胞因子)或細(xì)胞毒性藥物等的免疫治療劑或化療劑。
術(shù)語用于治療腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的“藥物試劑盒”指的是一種包裝以及通常地藥劑在腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移治療方法中的使用說明書。本發(fā)明試劑盒中的藥劑一般被配制成本處所描述的治療組合物，因此可以采用任何適于試劑盒內(nèi)放置的形式。這些形式可以包括液體，粉末，片劑，混懸液等以便提供本發(fā)明的拮抗劑和/或融合蛋白。這些藥劑可以在適合于根據(jù)本發(fā)明方法單獨(dú)給藥的各單獨(dú)容器中提供，或可以在此包裝中的單一容器內(nèi)結(jié)合在組合物中提供。包裝中可含有足以按照此處描述的治療方法施用一次或多次的藥劑量。本發(fā)明試劑盒還包括包裝中所含材料的“使用說明”。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，其包含治療有效量的至少(i)一種抗EGFR抗體或此抗體的免疫治療有效片斷以及(ii)一種抗激素劑，及任選地藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的抗EGFR抗體或所述的此抗體的免疫治療有效片斷是小鼠的、嵌合的或人源化的Mab425(h425)或嵌合的Mab225(c225)抑制劑/拮抗劑。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的抗激素劑是核激素受體家族的抑制劑。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中所述的抗激素劑是類固醇受體抑制劑和/或拮抗劑。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其還包含抗血管生成劑。
6.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其還包含細(xì)胞毒性劑和/或化療劑。
7.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其還包含其它的抗-HER2抗體或它的免疫治療活性片斷。
8.藥物組合物，其包含既具有抗EGFR活性又具有抗核激素受體活性的抗體，及任選地藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述抗體是雙特異性抗體。
10.藥物試劑盒，其包含這樣的包裝，該包裝含有至少(i)一種抗EGFR抗體或此抗體的免疫治療有效片斷，及(ii)一種抗激素劑，及任選地(iii)細(xì)胞毒性劑和/或化療劑。
11.如權(quán)利要求10所述的藥物試劑盒，其包含(i)單克隆抗體h425，和(ii)類固醇受體拮抗劑。
12.如權(quán)利要求11所述的藥物試劑盒，其包含(i)單克隆抗體h425，和(ii)LHRH拮抗劑。
13.如權(quán)利要求10-12任一項(xiàng)所述的藥物試劑盒，其中所述藥物活性劑在所述包裝中分別于單獨(dú)容器中提供。
14.如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的藥物組合物或如權(quán)利要求10-13任一項(xiàng)所述的藥物試劑盒在制備用于治療腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物或藥物組合物中的用途。
15.權(quán)利要求14的用途，用于治療乳腺癌。
16.權(quán)利要求14的用途，用于治療前列腺癌。
17.權(quán)利要求15或16的用途，用于治療類固醇非依賴性的乳腺和前列腺癌。
18.治療個(gè)體的腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移的方法，其包括同時(shí)或相繼給所述個(gè)體施用治療有效量的(i)抗EGFR抗體，和(ii)抗激素劑。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述的抗EGFR抗體是單克隆抗體h425或c225且所述的抗激素劑是類固醇受體拮抗劑。
20.如權(quán)利要求18或19所述的方法，其包括還給所述個(gè)體施用治療有效量的細(xì)胞毒性劑和/或化療劑或抗血管生成劑或其它的抗ErbB受體抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移，優(yōu)選乳腺和前列腺腫瘤治療的聯(lián)合療法，此療法包括施用抗EGFR(Her1)抗體和抗激素劑，以及任選地細(xì)胞毒性劑/化療劑。本方法和含有所述藥劑的藥物組合物可導(dǎo)致各單個(gè)治療劑對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制效果的協(xié)同增加，得到比單組份單獨(dú)使用時(shí)更有效的治療效果。
文檔編號(hào)A61K31/565GK1507355SQ02809514
公開日2004年6月23日 申請(qǐng)日期2002年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月8日
發(fā)明者O·羅森, A·哈斯特瑞克, O 羅森, 固厝鸝 申請(qǐng)人:默克專利有限公司