專利名稱：：1,25-二羥基-16,22,23-三脫氫-膽鈣化醇衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及下式化合物，其中R是羥基，R1是H2或CH2，或者R是氫或氟，R1是CH2。本文所用的術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”是指一種含有1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，正丁基等。術(shù)語(yǔ)“芳基-低級(jí)烷基”是指對(duì)甲苯基，芐基，苯乙基，苯丙基等。術(shù)語(yǔ)“芳基”是指可以被一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基取代或不被取代的一種衍生于芳香烴的基團(tuán)，例如”芳基“可是苯基和對(duì)-甲苯基。如上通式I所描述的化合物可用作治療過(guò)度增生的皮膚病如牛皮癬的藥劑。式I的化合物也可用作治療腫瘤疾病如白血病的藥劑。式I的化合物也可用作治療皮質(zhì)腺疾病如粉刺和脂溢性皮炎的藥劑。式I的化合物也可用作治療需要調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的疾病如移植排斥、移植物對(duì)宿主的疾病等的藥劑。本發(fā)明涉及一種藥物組合物，尤其是用來(lái)抑制皮膚過(guò)度增生和腫瘤細(xì)胞，具體是治療過(guò)度增生的皮膚病如牛皮癬，腫瘤病如白血病，和皮質(zhì)腺疾病如粉刺和皮炎，該藥物組合物含有通式I的化合物或兩種或多種式I化合物的混合物。本發(fā)明也涉及式I化合物在制備具有抗過(guò)度增生活性和抑制腫瘤細(xì)胞活性，具體是治療上述疾病狀態(tài)的藥物組合物中的用途。本發(fā)明也涉及制備式I化合物和下列所述的通式為IX，X，VIa，VIb，II，III，XI和XII中間體的方法。在式I化合物的優(yōu)選技術(shù)方案，R是羥基和/或R1是CH2。在另一個(gè)技術(shù)方案中，R1是H2。最優(yōu)選的是，1，25-二羥基-16，22S，23-三烯-膽鈣化醇和1，25-二羥基-16，22R，23-三烯-膽鈣化醇。在制備式I化合物的方法最后步驟中包括從通式I中相應(yīng)的甲硅烷基化的二醇或三醇除去甲硅烷保護(hù)基，該甲硅烷保護(hù)基優(yōu)選是Si(R4，R5，R6)，其中R4和R6是低級(jí)烷基而R5是低級(jí)烷基、芳基或芳基-低級(jí)烷基，并且通過(guò)在一種極性溶劑中與一種氟鹽反應(yīng)的方法去除甲硅烷保護(hù)基是方便有效的。如下文所述制備式I化合物的22S表異構(gòu)體，具體參見結(jié)構(gòu)式的圖解和下列實(shí)施例。路線I路線II路線III在上述路線I中，在室溫下于對(duì)質(zhì)子惰性溶劑如無(wú)水四氫呋喃或更優(yōu)選無(wú)水二氯甲烷中用氧化劑如2，2’-雙吡啶鎓氯代鉻酸鹽或吡啶鎓二氯鉻酸鹽把式II的化合物氧化成式III的化合物。把所得到的式III化合物與相應(yīng)的下式化合物其中Ph是苯基；R1、R4、R5和R6如上所述；R7是氫、氟或OSi(R4，R5，R6)反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為通式為IVa、IVb或IVc的化合物。該反應(yīng)是在-60℃到-90℃，優(yōu)選-78℃，在極性、對(duì)質(zhì)子惰性有機(jī)溶劑如無(wú)水乙醚或更優(yōu)選無(wú)水四氫呋喃中，在用強(qiáng)堿如象丁基鋰的烷基鋰存在下進(jìn)行的。式V的化合物是公知的或能夠用已知方法制得。在有機(jī)溶劑如乙醚或更優(yōu)選四氫呋喃中通過(guò)與已知氟鹽如氟化四丁基-胺反應(yīng)除去式IVa，IVb或IVc化合物上的保護(hù)基得到相應(yīng)的式Ia，Ib或Ic的化合物。具體參考路線II和下列實(shí)施例所描述的制備如上所述的式II中間體在路線II中，式VIa化合物通過(guò)與苯磺酰氯和三乙胺反應(yīng)轉(zhuǎn)化為式VII化合物。式VII化合物通過(guò)與甲醇和叔丁基鋰反應(yīng)轉(zhuǎn)化為式II化合物。具體參考路線III和下列實(shí)施例所描述的制備如上所述的式VIa中間體在路線III中，在堿如咪唑存在下在對(duì)質(zhì)子惰性溶劑如無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺中把已知的式VIII與三烷基甲硅烷氯如叔丁基二甲基甲硅烷氯反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為式IX化合物。以無(wú)水四氫呋喃作溶劑優(yōu)選-78℃下把式IX化合物與堿如正丁基鋰和N，N-二甲基甲酰胺反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為式X化合物。在氯化的烴基溶劑如二氯甲烷優(yōu)選-78℃溫度下把式X化合物與作為路易酸的(3aR-Z，3aa，4b，7ab)-1-亞乙基-八氫-7a-甲基-1H-4-茚酚乙酸酯和氯化二甲基鋁進(jìn)行反應(yīng)。處理所得到的化合物，分離它的表異構(gòu)體，得到式VIa的化合物和式VIb的化合物。具體參考路線IV-V和下列實(shí)施例所述制備式I化合物的22R表異構(gòu)體。路線IV路線V在上述路線IV中，按將化合物II氧化成化合物III所述把式XI化合物氧化成式XII化合物。把所得到的式XII化合物按如上在把式III化合物轉(zhuǎn)化為式IVa，IVb或IVc化合物中所述與相應(yīng)的下式化合物反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化成式XIIIa，XIIIb或XIIIc化合物。按如上對(duì)式Ia，Ib或Ic如述，把式XIIIa，XIIIb或XIIIc化合物的保護(hù)基團(tuán)除去得到按式Id，Ie或If化合物。具體參考路線V和下列實(shí)施例所描述的制備式XI中間體在上述路線V中，把式VIb的化合物與苯磺酰氯和三乙胺反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為式XIV化合物。再把式XIV化合物與甲醇和叔丁基鋰反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為式XI化合物。具體參考路線III和下列實(shí)施例所描述制備式VIb中間體。給需治療的溫血?jiǎng)游锟诜缟纤龅氖絀化合物能夠治療a)過(guò)度增生的皮膚病如牛皮癬，基底細(xì)胞癌，角化細(xì)胞疾病和角化病，b)腫瘤疾病如白血病，c)皮質(zhì)腺疾病如粉刺或脂溢性皮炎，或d)需要調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的疾病如移植排斥，移植物對(duì)宿主的疾病等。更優(yōu)選，給成人以每天大約0.5到50mg的范圍口服上述式I化合物治療上述疾病。給需治療的溫血?jiǎng)游锞植渴褂萌缟纤龅氖絀化合物能夠治療a)過(guò)度增生的皮膚病如牛皮癬，或b)皮質(zhì)腺疾病如粉刺或脂溢性皮炎。更優(yōu)選，給成人以每天大約0.5到50mg的范圍局部使用上述式I化合物治療上述疾病。根據(jù)被治療的疾病、患者的年齡和個(gè)體差異以及給藥方式可以在較寬的限定范圍內(nèi)改變式I化合物的劑量，當(dāng)然，在每一具體情況中應(yīng)根據(jù)個(gè)體需要采用合適劑量。通過(guò)以下試驗(yàn)?zāi)軌蜃C實(shí)用作治療過(guò)度增生皮膚病藥劑的式I化合物的活性。角化細(xì)胞增生的抑制使用HaCaT細(xì)胞系-無(wú)限增殖化的人細(xì)胞系HaCaT(從N.E.Fusenig，GermanCancerResearchCenter，Heidelberg，Germany得到)。在指數(shù)生長(zhǎng)培養(yǎng)基中有試驗(yàn)化合物存在下培養(yǎng)6天后測(cè)定3H-胸苷混合物。在含有4.5g葡萄糖和營(yíng)養(yǎng)混合物Ham’sF12，3∶1(v/v)的Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基混合物中培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物-HaCaT細(xì)胞。該混合物是用10％胎牛血清(FCS)，2mML-谷氨酰胺，50UI/ml青霉素，50mg/ml鏈霉素，10ng/mlEGF，400ng/ml氫化可的松，8.5ng/ml霍亂毒素和5ng/ml胰島素填充。把細(xì)胞保持在含有5％CO2和95％空氣的潮濕環(huán)境下并每3-4天傳代。把攝入3H-胸苷-HaCaT細(xì)胞抑制物(每180ml填充混合物中250個(gè)細(xì)胞)接種到96孔的培養(yǎng)皿上并在37℃有5％CO2和95％空氣條件下溫育。接種后，馬上把20ml用含有1％乙醇的補(bǔ)加混合物稀釋的下表II中所列的試驗(yàn)化合物加入到孔中得到在10-9和10-6M之間的最終濃度(起始為在乙醇中的1mM的母液，在-20℃下存放并避光保護(hù))。6天后，以1mCi/孔的濃度向孔中加入3H-胸苷(5Ci/mmol)。在生長(zhǎng)期間最后6小時(shí)脈沖標(biāo)記該細(xì)胞。然后，在37℃強(qiáng)烈攪拌下把細(xì)胞胰蛋白酶化10分鐘并用一臺(tái)細(xì)胞收集器收集到96孔濾板上。在40℃真空干燥20-30分鐘后，加入20ml的閃爍體并計(jì)算結(jié)合到濾板上的放射活性。數(shù)值是用對(duì)照組(沒有使用試驗(yàn)化合物的樣品)的百分?jǐn)?shù)表示的。用圖解法測(cè)定達(dá)到50％對(duì)照值的濃度，在表I中給出了作為IC50(抑制濃度)的濃度。表I</tables></tables>從上述結(jié)果能夠看出式I化合物能夠抑制角化細(xì)胞的增生。所以，式I化合物可用于治療過(guò)度增生的皮膚病如牛皮癬。通過(guò)以下試驗(yàn)操作能夠證實(shí)用作治療腫瘤疾病藥劑的式I化合物的活性。HL-60細(xì)胞分化的誘發(fā)通過(guò)還原氮蘭四唑(NBT)測(cè)定它們的氧化釋放電位來(lái)分析HL-60細(xì)胞分化的誘發(fā)。把HL-60細(xì)胞保存在用10％FCS，2mML-葡萄糖，1mM丙酮酸鈉，1％非必需氨基酸，50U/ml青霉素和50mg/ml鏈霉素補(bǔ)充的RPMI1640培養(yǎng)液中。把HL-60細(xì)胞(在90ml補(bǔ)充的RPIM培養(yǎng)基中有30,000個(gè)細(xì)胞)接種在平底微升孔中。接種后，馬上向孔中加入用補(bǔ)充的RPIM培養(yǎng)液稀釋的下列表II中所列的10ml試驗(yàn)化合物得到在10-11和10-6M之間的最終濃度(起始為在乙醇中的10-2M的母液，在-20℃下存放并避光保護(hù))。3天后，用一只多刻度吸管從孔中除去培養(yǎng)液并替換為100ml的NBT溶液(含有200nM豆蔻酸乙酸大戟二萜酯的1mg/ml磷酸鹽緩沖液)。在37℃又溫育一小時(shí)之后除去NBT溶液并加入100ml在0.01N的HCl的10％十二烷基磺酸鈉。用一臺(tái)平皿自動(dòng)讀數(shù)器在540nm處用光度精確測(cè)定還原的NBT的量。計(jì)算3個(gè)孔的平均值。S.E.M.是在5和10％之間。數(shù)值是用在相同試驗(yàn)中100-1000nM鈣三醇所得到的最大分化的百分?jǐn)?shù)表示的。用圖解法測(cè)定導(dǎo)致50％最大值的濃度(nM)，在表I中給出了作為ED50的濃度。表II</tables>從上述結(jié)果能夠看出式I化合物誘發(fā)了HL-60細(xì)胞的分化并由此終止了這些生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞。所以，式I的化合物可用于治療腫瘤疾病如白血病。通過(guò)以下試驗(yàn)操作能夠證實(shí)用作治療皮質(zhì)腺疾病如粉刺和脂溢性皮炎藥劑的式I化合物的應(yīng)用活性。對(duì)脂溢性細(xì)胞的抑制從成人皮質(zhì)腺分離脂溢性細(xì)胞，其中皮質(zhì)腺來(lái)自化妝手術(shù)中除去的面部皮膚。該方法在J.Inxest.Dermatol.96341-348(1991)中的Doran等的一片文章中進(jìn)行了描述。在含有10％胎牛血清Iscovep培養(yǎng)基和在生長(zhǎng)捕獲的的3T3鼠成纖維細(xì)胞層上的4mg/ml地塞米松中培養(yǎng)該細(xì)胞。把細(xì)胞植入沒有試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基中，然后在植入起24-48小時(shí)后在新鮮的培養(yǎng)基中加入該化合物。隔48小時(shí)把該培養(yǎng)物加入含有試驗(yàn)化合物的新鮮培養(yǎng)基中。在收集當(dāng)天，用0.03％乙二胺四乙酸(EDTA)的磷酸緩沖鹽水(PBS)沖洗該培養(yǎng)物只除去3T3成纖維細(xì)胞。在0.05％胰蛋白酶/0.03％EDTA中溫育所得到的皮質(zhì)細(xì)胞克隆來(lái)生成皮質(zhì)細(xì)胞的單一細(xì)胞懸浮液。懸浮該細(xì)胞并劇烈混合以制得單一細(xì)胞懸浮液并在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)。用下列方式處理所有的化合物。用除氣的100％乙醇配制10-2M母液并在-20℃黑暗處存放。存放一個(gè)月以上的溶液不再使用。在使用該溶液的試驗(yàn)期間，將其等分并融化一次，然后直接稀釋成適當(dāng)濃度的完全培養(yǎng)基。測(cè)試該化合物在試管內(nèi)以下列濃度10-8，10-7或10-6M對(duì)皮質(zhì)細(xì)胞的增生的抑制。與對(duì)照組、只用載體處理，培養(yǎng)基相比抑制50％(ED50)nM的皮質(zhì)細(xì)胞的增生所需的化合物的量的結(jié)果總結(jié)在下列表III中。</tables>從上述結(jié)果能夠看出，式I的化合物能夠抑制皮質(zhì)細(xì)胞的增生。因此，式I的化合物可用于治療皮質(zhì)腺疾病如粉刺和脂溢性皮炎。通過(guò)以下試驗(yàn)?zāi)軌蜃C實(shí)用作治療需要調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)疾病藥劑的式I化合物的應(yīng)用活性。對(duì)人T-細(xì)胞中γ-干擾素釋放的抑制通過(guò)離心Ficoll-Paque上淡黃色白細(xì)胞從健康自愿者的靜脈血中分離單核細(xì)胞。把淋巴細(xì)胞(70-80％T-細(xì)胞)懸浮于用10％FCS補(bǔ)加的RPMI1640培養(yǎng)基中并調(diào)節(jié)到106個(gè)細(xì)胞/ml。把100ul這種細(xì)胞懸浮液接種到平底微量滴定孔并用1mg/ml的T-細(xì)胞特異性促絲裂素植物凝集素(PHA)刺激。接種后馬上加入下列表IV所列的試驗(yàn)化合物得到在1×10-11M到1×10-6M之間的最終濃度。一式四份地操作所有的試驗(yàn)。在第3和4天，從孔中除去培養(yǎng)液并用ELISA測(cè)定IFN-g的含量。數(shù)值用對(duì)照組(沒用試驗(yàn)化合物的樣品)的百分?jǐn)?shù)表達(dá)。用圖形方法測(cè)定達(dá)到50％對(duì)照組數(shù)值的濃度并在表IV中給出IC50(抑制濃度)。表IV對(duì)人T-細(xì)胞增殖的抑制通過(guò)離心分離Ficoll-Paque上淡黃色白細(xì)胞從健康自愿者的動(dòng)脈血中分離單核細(xì)胞。把淋巴細(xì)胞(70-80％T-細(xì)胞)懸浮于用10％FCS補(bǔ)加的RPMI1640培養(yǎng)基中并調(diào)節(jié)到106個(gè)細(xì)胞/ml。把100ul這種細(xì)胞懸浮液接種到平底微量滴定孔并用1mg/ml的PHA刺激。接種后馬上加入下列表V所列的試驗(yàn)化合物得到在1×10-11M到1×10-6M之間的最終濃度。一式四份地操作所有的試驗(yàn)。在第3和4天后，以1mCi/孔的濃度向孔中加入3H-胸苷(5Ci/mmol)。在生長(zhǎng)期的最后6小時(shí)脈沖標(biāo)記該細(xì)胞。然后用一臺(tái)細(xì)胞收集器把該細(xì)胞收集在96孔的濾板上。在真空下40βC下干燥20-30分鐘后，加入20ul閃爍體并對(duì)結(jié)合在濾器上的放射活性進(jìn)行計(jì)數(shù)。數(shù)值用對(duì)照組(沒用試驗(yàn)化合物的樣品)的百分?jǐn)?shù)表達(dá)。用圖形方法測(cè)定達(dá)到50％對(duì)照組數(shù)值的濃度并在表V中給出IC50(抑制濃度)。表V化合物IC50(nM)1，25-二羥基-膽鈣化醇10.01，25-二羥基-16，22S，23-三烯-膽鈣化醇6.01，25-二羥基-16，22R，23-三烯-膽鈣化醇0.55</table></tables>從上述結(jié)果能夠看出，式I的化合物能夠抑制人T-細(xì)胞中g(shù)-干擾素的釋放和抑制人T-細(xì)胞的增殖。因此，式I的化合物可用于治療皮質(zhì)腺疾病如移植排斥，移植物對(duì)宿主的疾病等。小鼠中鈣耐受性試驗(yàn)鈣體內(nèi)平衡的顯著變化強(qiáng)烈影響小鼠體重的發(fā)展。連續(xù)四天小鼠(25-30g體重)都每天接受化合物的皮下注射。在5天治療期之前和之后記錄體重?！白罡吣褪軇┝俊?HTD)是在治療期間造成零重量的劑量。結(jié)果列在表VI中。表VI化合物HTD(μg/kg)1，25-二羥基-膽鈣化醇0.51，25-二羥基-16，22S，23-三烯-膽鈣化醇50.01，25-二羥基-16，22R，23-三烯-膽鈣化醇2.5</table></tables>從上述結(jié)果能夠看到式I化合物比1，25-二羥基膽鈣醇有更好的耐受性。含有本發(fā)明式I化合物的口服劑型可以是與藥學(xué)上可接受的載體物質(zhì)摻在一起的膠囊、片劑等?？蓳皆谀z囊等中的藥學(xué)上可接受的載體物質(zhì)的說(shuō)明如下粘合劑如黃耆膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑如磷酸鈣；崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂；甜味劑如蔗糖、乳糖或糖精；調(diào)味劑如薄荷油、冬青油或櫻桃油。其他各種物質(zhì)可以包衣劑存在用于改進(jìn)劑量單位的物理形態(tài)。例如，片劑可以用蟲膠、糖或二者包衣。糖漿或酏劑可以含有活性化合物、蔗糖作甜味劑、對(duì)羥基苯甲酸甲酯和丙酯作防腐劑，染料和調(diào)味劑如櫻桃或橘味調(diào)料。含有本發(fā)明式I化合物的局部給藥劑型包括含有具有油性的、吸收性的、水溶性的和乳狀液型的基質(zhì)如凡士林、羊毛脂、聚乙二醇等配方的膏劑和霜?jiǎng)?。洗液是液體制劑并且可由簡(jiǎn)單溶液到含油分散極細(xì)的物質(zhì)的含水或醇制劑之間變化。洗液能夠含有乳化劑或分散劑如纖維素的衍生物象乙基纖維素、甲基纖維素等；明膠或口膠，它們能夠與活性成分一起摻入由水、醇、甘油等組成的載體中。凝膠是通過(guò)把載體中的活性成分的溶液或乳狀液凝膠化制得的半固體制劑。用凝劑如羧多亞甲基將含水或無(wú)水的載體凝膠化并用堿如氫氧化鈉和氨類如聚亞乙基可可氨中和到適當(dāng)?shù)哪z稠度。本文所用的術(shù)語(yǔ)“局部”是指把活性成分摻和到適當(dāng)?shù)乃幬镙d體中并涂到疾病部位發(fā)揮局部作用。所以，局部用的組合物包括直接把該化合物與皮膚接觸外用的那些藥物制劑。這些局部用的劑型包括凝膠劑、霜?jiǎng)⑾匆?、膏劑、粉劑、氣霧劑和其他通過(guò)把式I化合物與已知的藥物局部用載體物質(zhì)混合得到的向皮膚涂藥的常規(guī)劑型。提供下列實(shí)施例用來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明但不是以任何方式限定本發(fā)明的。實(shí)施例13-甲基-3-叔丁基二甲基甲硅烷氧-丁炔(式IX)向25g(0.29mol)的3-甲基-3-羥基-丁炔的50ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺中加入44.5g(0.65mole)咪唑。在冰浴中把反應(yīng)混合物冷卻然后加入50g(0.33mole)叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物。在冰浴中把反應(yīng)混合物攪拌15分鐘并在室溫下過(guò)夜。然后加入250mg的二甲基氨基吡啶并在70℃加熱2小時(shí)。把反應(yīng)混合物倒入1升的冷水中并用5×150ml的乙醚提取。把該乙醚提取物用水和鹽水洗，在硫酸鎂上干燥并蒸發(fā)至干。在硅膠柱上用戊烷進(jìn)行閃式色譜層析來(lái)純化，并在真空下(b.p.120℃)蒸餾得到31.81g(54％)的題目化合物。1H-NMR(CDCl3)δ0.87(s，9H)，1.47(s，6H)，2.39(s，1H)。元素分析C11H22OSi計(jì)算值C66.60，H11.18；實(shí)測(cè)值C66.13，H11.46。實(shí)施例24-甲基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧-戊炔醛(式X)向冷卻到-78℃的10g(50mmole)的3-甲基-3-叔丁基-二甲基-甲硅烷氧-丁炔的25ml無(wú)水四氫呋喃溶液中滴加40ml(63mmole)1.6M正丁基鋰己烷，用時(shí)40分鐘。在-78℃攪拌1小時(shí)后，滴加31ml(400mmole)的N，N-二甲基甲酰胺并持續(xù)攪拌1/2小時(shí)。然后把該反應(yīng)混合物倒入300ml的水和鹽水中并用4×75ml的戊烷提取。用氯化銨溶液、水和鹽水洗該提取物，在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)至于。通過(guò)蒸餾進(jìn)行純化得到8.88g(78％)的題目化合物，在8mmHg處b.p.為92-94℃。。1H-NMR(CDCl3)δ0.87(s，9H)，1.54(s，6H)，9.24(s，1H)。實(shí)施例3表異構(gòu)體混合物3aR-[1(R*)，3aα，4β，7αb]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-7a-甲基-1[2(R，S)-羥基-5-(叔丁基-二甲基甲硅烷氧基)-1，5-二甲基-3-己基]-4H-茚酚乙酸酯(式VI)在10分鐘內(nèi)向在-78℃冷卻的2g(9mmole)的[3aR-Z，3aα，4β，7αβ]-1-亞乙基-八氫-7a-甲基-1H-4-茚酚乙酸酯和2.25g(9mmole)的4-甲基-4-叔丁基-二甲基甲硅烷氧基-戊炔醛的5ml無(wú)水二氯甲烷中加入20ml(20mmole)1M二甲基鋁氯化物溶液。由于兩小時(shí)后TCL檢測(cè)的反應(yīng)只完成一半，又加入2.25g的甲醛和20ml的二甲基鋁氯化物。又?jǐn)嚢?小時(shí)后反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物倒入600ml的2N碳酸氫鉀中，用4×100ml的乙酸乙酯提??；用水和鹽水沖洗提取物，在硫酸鈉上干燥并蒸干。先用二氯甲烷然后用己烷-乙酸乙酯(3∶1)在硅膠柱上進(jìn)行閃式層析得到4.16g(100％)的題目表異構(gòu)體混合物。用己烷-乙酸乙酯10∶1的HPLC方法完成表異構(gòu)體的分離得到3.25g(78％)的2R-表異構(gòu)體，m.p.47-48℃；[α]25D+7.20℃(c0.555乙醇)；1H-NMR(CDCl3)δ0.15(s，3H，SiCH3)，0.16(s，3H，SiCH3)，0.86(s，9H，SitBu)，1.04(s，3H，CH3)，1.14(d，3H，j＝6.9Hz，CH3)，1.14(s，6H，2CH3)，2.05(s，3H，CH3CO)，2.40(p，1H，J＝6.4Hz，CH)，4.43(t，1H，j＝6.3Hz，CH)，5.21(brs，1H，CHOAc)，5.68(brs，1H＝CH-)；元素分析C26H44O4Si計(jì)算值C69.59，H9.88；實(shí)測(cè)值C69.85，H9.74。和0.754g(18％)的2S-表異構(gòu)體，m.p.77-79℃，[α]25D+18.12℃(c0.524，乙醇)；1H-NMR(CDCl3)δ0.17(2s，6H，2SiCH3)，0.87(s，9H，Sit.Bu)，1.03(s，3H，CH3)，1.14(d，3H，j＝6.9Hz，CH3)，1.47(s，6H，2CH3)，2.05(s，3H，CH3CO)，2.37(p，1H，CH)，4.40(dd，1H，j＝3.7和7.8Hz，CH)，5.21(brs，1H，CHOAc)，5.54(brs，1H＝CH-)；元素分析C26H44O4Si計(jì)算值C69.59，H9.88；實(shí)測(cè)值C69.42，H10.15。實(shí)施例4[3aS-[3(1S*，2S*)，3aα，7α，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基-甲硅烷基]氧-1，5-二甲基-4-(苯基亞磺?；?-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-酚乙酸酯(式VII)向802mg(1.8mmole)的[3aS-[3(1S*，2S*)，3aα，7α，7αβ]]-7-(乙酰氧基)-α-[3[[(1，1-二甲基乙基)二甲基-甲硅烷基]氧-3-甲基-1-丁炔基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-β，3a-二甲基-1H-茚-3-乙醇的20ml無(wú)水乙醚中加入0.5ml(3.6mmole)三乙胺。在冰浴中冷卻到-78℃后，在2小時(shí)內(nèi)加入8ml(4mmole)的新鮮制得的苯基磺酰氯。然后用水稀釋該反應(yīng)混合物并用乙醚提取。用2N碳酸氫鉀接著用水和鹽水沖洗該乙醚提取物直到中性。在硫酸鈉上干燥后，把乙醚溶液蒸干。用己烷-乙酸乙酯4∶1的閃式色譜層析法接著用己烷-乙酸乙酯3∶1的制備性HPLC純化粗產(chǎn)物得到878mg(88.2％)的題目化合物，其為兩種表異構(gòu)體亞砜的混合物。實(shí)施例5[3aS-[3(1S*，2R*)，3aα，7α，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-酚(式II)向1.68g(3.02mmole)的[3aS-[3(1S*，2S*)，3aα，7α，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基-甲硅烷基]氧-1，5-二甲基-4-(苯基亞磺?；?-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-酚乙酸酯的550ml無(wú)水乙醚中加入0.432ml(11.174mmole)的無(wú)水甲醇。在戊烷-液氮浴中把所得到的混合物冷卻到-100℃并在10分鐘內(nèi)滴加10.6ml(18.12mmole)的1.7M叔丁基鋰。TLC表示該反應(yīng)完成。用8.0ml甲醇熄滅該反應(yīng)并用水然后用鹽水沖洗乙醚部分，在硫酸鈉上干燥并蒸干。把殘余物溶于12ml的乙醇中并在加入7ml2N的氫氧化鈉后于70℃加熱三小時(shí)。用水-鹽水1∶1稀釋反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯萃取。用水和鹽水沖洗萃取物，在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯7∶1的制備性HPLC純化該粗產(chǎn)物。獲得593mg(50.25％)題目化合物，它在冷藏箱中結(jié)晶，mp64-65℃；[α]25D+99.62℃(c0.5，乙醇)；1H-NMR(CDCl3)δ0.07(s，6H，SiMe2)，0.85(s，9H，Si-叔丁基)，1.09(s，3H，CH3)，1.11(d，3H，J＝7Hz，CH3)，1.29(s，3H，CH3)，1.30(s，3H，CH3)，1.98，2.27(m，2H，CH2)，2.83(brm，1H，CH)，4.18(brs，1H，CH)，5.28(t，1H，J＝6.3Hz，＝CH-)，5.32(dd，1H，j＝2.8和6.3Hz，＝CH-)，5.43(brs，1H，＝CH-)。元素分析C24H42O2Si2計(jì)算值C73.78，H10.84；實(shí)測(cè)值C73.89，H11.08。實(shí)施例6[3aS-[3(1S*，2R*)，3aα，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-酚(式III)用1.694g(4.5mmole)的重鉻酸吡啶鎓和85mg的對(duì)甲苯磺酸吡啶鎓分批處理390mg(1mmole)[3aS-[3(1S*，2R*)，3aα，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-醇的8ml無(wú)水二氯甲烷溶液。在室溫下把反應(yīng)混合物攪拌4.5小時(shí)。加入20ml乙醚后，把混合物攪拌20分鐘然后在Celite上過(guò)濾，并用3×50ml的乙醚洗殘余物。用20ml冰冷的1NHCl、水、40ml2N碳酸氫鈉和水-鹽水的混合物洗滌濾液。用2×100ml的乙酸乙酯萃取含水層。把合并的有機(jī)相在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯15∶1的閃式色譜層析法純化粗產(chǎn)物得到350mg(90％)的題目化合物。實(shí)施例71，25-二羥基-16，22S，23-三烯-膽鈣化醇于-78℃下向820mg(0.141mmole)[3S-(1Z，3a，5b)]-2-[3，5-雙[[(1，1-二甲基)二甲基甲硅烷基]氧]-2-亞甲基-環(huán)-己二烯]-乙基-二苯基膦氧化物的8ml無(wú)水四氫呋喃溶液中滴加0.856ml(1.37mmole)1.6M正丁基鋰的己烷溶液。攪拌5分鐘后，在10分鐘內(nèi)向這樣形成的紅色溶液中滴加350ml(0.9mmole)[3aS-[3(1S*，2R*)，3aa，7ab]]-3-[5-[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-酮的5ml無(wú)水四氫呋喃。在氬氣下-78℃攪拌反應(yīng)90分鐘，然后加入10ml1∶1的2N含水酒石酸鉀鈉和2N含水KHCO3的混合物熄滅反應(yīng)，用3×125ml乙酸乙酯萃取。用鹽水洗有機(jī)層，在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯40∶1的閃式色譜層析法純化殘余物得到475mg三甲基甲硅烷化的題目化合物，將其溶于6ml的無(wú)水四氫呋喃并在氬氣下用6.4ml1M氟化叔丁基銨的四氫呋喃處理。在室溫下把反應(yīng)混合物攪拌45.5小時(shí)。用5ml水熄滅該反應(yīng)，并在真空下除去四氫呋喃后用3×120ml乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水的混合物洗，在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯1∶3的閃式色譜層析法純化粗產(chǎn)物得到172mg(46.5％)的題目化合物。[α]25D+67.52℃(c0.2，乙醇)。UV最大(乙醇)258-259nm(e11520)。1H-NMR(20∶1，CDCl3DMSO-d6)δ0.73(s，3H，CH3)，1.16(d，3H，J＝6.7Hz，CH3)，1.34(s，6H，2CH3)，4.22(brm，1H，CH)，4.43(brm，1H，CH)，4.98(s，1H，＝CH2的CH)，5.34-5.42(m，4H，＝CH2的CH，丙二烯，＝CH-)，6.14(d，1H，J＝11Hz，＝CH-)，6.35(d，1H，J＝11Hz，＝CH-)。實(shí)施例8[3aS-[3(1S*，2R*)，3aα，7α，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-4-(苯基亞磺?；?-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-醇乙酸酯(式XIV)向681mg(1.52mmole)的[3aS-[3(1S*，2R*)，3aα，7α，7αβ]]-7-乙酰氧基)-α-3-[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-3-甲基-1-丁炔基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-β，3a-二甲基-1H-茚-3-乙醇的40ml無(wú)水乙醚溶液中加入0.423ml(3.04mmole)的三乙胺。向在-78℃下攪拌過(guò)的混合物滴加剛制備的苯基磺酰氯直到出現(xiàn)黃色。再攪拌1小時(shí)后，把反應(yīng)混合物加熱到室溫，用水稀釋并用乙醚萃取。乙醚部分用2N碳酸氫鉀、水和鹽水洗，在硫酸鈉上干燥并蒸干。先用乙酸乙酯的閃式色譜層析法再用己烷-乙酸乙酯3∶1的HPLC純化粗產(chǎn)物得到655mg(51％)的題目表異構(gòu)體亞砜。實(shí)施例9[3aS-[3(1S*，2S*)，3aα，7α，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1H-茚-7-醇(式XI)向655mg(1.18mmole)的[3aS-[3(1S*，2R*)，3aα，7α，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基-乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-4-(苯基亞磺?；?-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1氫-茚-7-醇乙酸酯的200ml無(wú)水乙醚中加入0.176ml(4.35mmole)無(wú)水甲醇。在戊烷-液氮浴中把這樣得到的混合物冷卻到-100℃并當(dāng)顏色變成棕黃色時(shí)，滴加8ml(14.1mmole)的1.7M叔丁基鋰。TLC表示該反應(yīng)完成。用4ml甲醇熄滅反應(yīng)，用水洗到中性，然后用鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)。把該殘余物(730mg)溶于8ml乙醇中并在加入4ml的2N氫氧化鈉后，在70℃加熱1-1/2小時(shí)。用鹽水-水稀釋后，用乙酸乙酯萃取。用水把萃取物洗到中性，然后再鹽水洗滌，在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯7∶1的HPLC純化該粗產(chǎn)物(610mg)得到208mg(45.2％)的題目化合物；[α]25D+10.82℃(c0.5％，乙醇)；1H-NMR(CDCl3)δ0.08(s，CH，SiMe2)，0.86(s，9H，Si-叔丁基)，1.09(s，3H，CH3)，1.13(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.99，2.27(m，2H，CH2)，2.83(m，1H，CH)，4.18(brs，1H，CH)，5.21(t，1H，J＝6.4Hz，＝CH-)，5.34(dd，1H，J＝2.7和6.4Hz，＝CH-)，5.44(brs，1H，＝C-)。實(shí)施例10[3aS-[3(1S*，2S*)，3aa，7ab]]-3-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1H-二氫茚-7-酮(式XII)用1.2g(3.19mmole)的重鉻酸吡啶鎓和60mg對(duì)甲苯磺酸吡啶鎓處理415mg(1.06mmole)的[3aS-[3(1S*，2S*)，3aa，7a，7ab]]-3-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1H-茚-7-醇的9ml無(wú)水二氯甲烷溶液。在室溫下攪拌2小時(shí)后，再加入546mg(1.5mmole)的重鉻酸吡啶鎓和28mg的對(duì)甲苯磺酸吡啶鎓并在室溫下把反應(yīng)混合物攪拌2.5小時(shí)。然后加入25ml乙醚，攪拌20分鐘后，把混合物在硅藻土上過(guò)濾并用乙醚沖洗(3×50ml)。用冰浴的20ml1N的HCl、水、2NKHCO3(40ml)以及水和鹽水的混合物洗滌濾液。用乙酸乙酯萃取含水部分。把合并的有機(jī)部分在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯15∶1的閃式色譜層析法純化該粗產(chǎn)物得到310mg(75％)的題目化合物。實(shí)施例111，25-二羥基-16，22R，23-三烯-膽鈣化醇在氬氣下向-78℃下的755mg(1.3mmole)的[3S-(1Z，3α，5β]-2-[3，5-雙[[(1，1-二甲基)二甲基甲硅烷基]氧]-2-亞甲基-環(huán)-己二烯]-乙基]-二苯基膦氧化物的8ml無(wú)水四氫呋喃溶液滴加0.79ml(1.26mmole)的1.6M正丁基鋰己烷。攪拌5分鐘后，在10分鐘內(nèi)向這樣形成的紅色溶液中滴加310mg(0.8mmole)[3aS-[3(1S*，2S*)，3aα，7αβ]]-3-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧]-1，5-二甲基-2，3-己二烯基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3a-甲基-1H-茚-7-酮的4ml無(wú)水四氫呋喃溶液。在-78℃氬氣下再攪拌該混合物90分鐘，然后加入10ml1∶1的2N含水酒石酸鈉鉀和2N含水KHCO3中止反應(yīng)，用3×120ml乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機(jī)相，在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯40∶1的閃式色譜層析法純化三甲硅烷化的該粗產(chǎn)物。在氬氣室溫下攪拌71小時(shí)把434mg由此純化的中間體溶于5.5ml無(wú)水四氫呋喃并用9.96ml1M氟化叔丁胺的四氫呋喃溶液處理。用5ml水中止反應(yīng)后，真空除去四氫呋喃，用水稀釋殘余物并用3×120ml乙酸乙酯萃取。用水和鹽水的混合物洗滌該有機(jī)，在硫酸鈉上干燥并蒸干。用己烷-乙酸乙酯1∶3的閃式色譜層析法純化該粗產(chǎn)物得到215mg(65.5％)的題目化合物，它能夠從四氫呋喃和甲酸甲酯的(1∶7)混合物中結(jié)晶出來(lái)；m.p.174-176℃，[α]25D+0℃(c0.2，乙醇)。UV最大(乙醇)264nm(e17080)。1H-NMR(CD3OD)δ0.74(s，3H，CH3)，1.18(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)，1.30(s，3H，CH3)，1.31(s，3H，CH3)，1.52(m，1H，CH2的CH)，1.89(t，2H，J＝5.6Hz，CH2)，4.13(q，1H，J＝5.3Hz，CH)，4.36(t，1H，J＝5.8Hz，CH)，5.21(t，1H，J＝6.7Hz，＝CH-)；5.30(s，1H，＝CH2的CH)，5.33(dd，1H，J＝2.3和6.2Hz，＝CH-)，5.45(s，1H，＝CH-)，6.17(d，1H，J＝11.2Hz，＝CH-)，6.3(d，1H，J＝11.2Hz，＝CH-)。權(quán)利要求1.一種具有下列通式的化合物其中R是羥基，R1是H2或CH2，或者R是氫或氟，R1是CH2。2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R是羥基和/或其中R1是CH2。3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，它是1，25-二羥基-16，22S，23-膽鈣化醇或1，25-二羥基-16，22R，23-膽鈣化醇。4.一種化合物，通式為或其中R4和R6是低級(jí)烷基，R5是低級(jí)烷基、芳基或芳基-低級(jí)烷基。5.一種化合物，通式為或其中R4和R6是低級(jí)烷基，R5是低級(jí)烷基、芳基或芳基-低級(jí)烷基。6.一種化合物，通式為或其中R4和R6分別是低級(jí)烷基，R5分別是低級(jí)烷基、芳基或芳基-低級(jí)烷基。7.尤其是抑制皮膚過(guò)度增生和腫瘤細(xì)胞，具體用于治療過(guò)度增生的皮膚病如牛皮癬，腫瘤疾病如白血病，和皮質(zhì)腺疾病如粉刺和脂溢性皮炎的藥物組合物，它包括有效量的如權(quán)利要求1，2或3的式I化合物和惰性載體。8.制備如權(quán)利要求1的式I化合物的方法，它包括從通式I中相應(yīng)的甲硅烷基化的二醇或三醇除去甲硅烷保護(hù)基，該甲硅烷保護(hù)基優(yōu)選是Si(R4，R5，R6)，其中R4和R6是低級(jí)烷基而R5是低級(jí)烷基、芳基或芳基-低級(jí)烷基，一般通過(guò)在極性溶劑中與一種氟鹽反應(yīng)的方法去除甲硅烷保護(hù)基。9.權(quán)利要求1的化合物在制備具有抗過(guò)度增生活性和抑制腫瘤細(xì)胞活性，具體是治療過(guò)度增生的皮膚病如牛皮癬，腫瘤疾病如白血病，和皮質(zhì)腺疾病如粉刺和脂溢性皮炎的藥物組合物中用途。10.基本上如上所述的新化合物、中間體、制劑、方法和用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種具有右通式的化合物,其中R是羥基,R文檔編號(hào)A61P35/00GK1172793SQ97103358公開日1998年2月11日申請(qǐng)日期1997年3月20日優(yōu)先權(quán)日1996年3月21日發(fā)明者B·M·赫尼思,J·A·拉克比利,M·R·尤斯庫(kù)科維克申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司