專利名稱：注射用銀杏內(nèi)酯針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由中藥銀杏葉提取所得到的藥物組合銀杏總內(nèi)酯，同時(shí)涉及到由該藥物組合制成的注射用銀杏內(nèi)酯針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
血小板活化因子(PAF)是一種重要的炎癥介質(zhì)，也是多種疾病發(fā)病的介質(zhì)之一。病理研究表明PAF在過敏、潰瘍、哮喘、血栓形成、炎癥、器官移植排斥、內(nèi)毒素導(dǎo)致的休克等過程中起著重要作用。銀杏總內(nèi)酯是從銀杏葉內(nèi)提取的有效成分銀杏內(nèi)酯A、B、C及白果內(nèi)酯的組合物，是一類較強(qiáng)的植物提取物血小板活化因子拮抗劑。
目前國(guó)內(nèi)外對(duì)銀杏葉類產(chǎn)品進(jìn)行了許多研究并有臨床使用，如德國(guó)的Ginaton、法國(guó)的Tanakan，中國(guó)藥典2005版中藥部亦收載了銀杏葉、銀杏提取物及銀杏葉片等品種，均要求對(duì)其中銀杏內(nèi)酯A、B、C及白果內(nèi)酯進(jìn)行定量。但是目前尚未有純的銀杏內(nèi)酯產(chǎn)品上市，國(guó)內(nèi)也沒有銀杏內(nèi)酯產(chǎn)品進(jìn)入臨床研究階段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種含有銀杏內(nèi)酯藥物組合的注射用凍干粉針劑及其制備方法。
本發(fā)明提供的注射用銀杏內(nèi)酯針劑中所含有效成分為銀杏總內(nèi)酯組合物，該組合物含有銀杏內(nèi)酯A35～45％，銀杏內(nèi)酯B26～36％，銀杏內(nèi)酯C5～15％，白果內(nèi)酯2～12％。
銀杏內(nèi)酯主要成分的化學(xué)結(jié)構(gòu) 白果內(nèi)酯 銀杏內(nèi)酯A 銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯c銀杏內(nèi)酯較難溶于水，因此將其制成注射劑比較困難，需要加入增溶劑，例如成鹽增溶、膠團(tuán)增溶等方法。在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯開環(huán)成鹽后溶解性確實(shí)增加，但是穩(wěn)定性下降，例如銀杏內(nèi)酯與葡甲胺(1∶0.8～1.2)開環(huán)成鹽的樣品對(duì)熱敏感，較難在常溫下保存，需要低溫保存才能夠維持藥品的穩(wěn)定性。
本發(fā)明所提供的注射用銀杏內(nèi)酯制備方法是將銀杏總內(nèi)酯原料與葡甲胺、聚乙二醇(1000-6000)、丙二醇按重量含量比為1∶(0.2-0.4)∶(0.05-3)∶(0.05-1)的比例混合均勻，加注射用水溶解，利用少量的葡甲胺成鹽和聚乙二醇(1000-6000)、丙二醇增溶，解決了銀杏內(nèi)酯難溶問題。往該溶液中加入占總重量比為(4-8)的右旋糖酐40、乳糖、甘氨酸中的一中或幾種，使之溶解，用截流分子量為3000-10萬(wàn)Dolton的膜超濾，除去熱原，最后用0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用銀杏內(nèi)酯成品。
本發(fā)明所提供的注射用銀杏內(nèi)酯針劑具有較好水溶性，穩(wěn)定性，藥品有效成分可直接進(jìn)入血液，生物利用度高；具有抗過敏、抗炎、抗休克的特性，可抑制血小板聚集，減少血栓形成，對(duì)治療心腦血管系統(tǒng)疾病等提供一種較好的藥物制劑。本發(fā)明所提供的注射用銀杏內(nèi)酯針劑的制備方法工藝簡(jiǎn)單，不使用有毒有害的有機(jī)溶劑，使用超濾法過濾減少藥品被吸附的損失，工藝成本低。
具體實(shí)施例方式
用下列非限定性實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1銀杏內(nèi)酯 50.0g 葡甲胺 20.0g聚乙二醇1000 140.0g丙二醇 10.0g右旋糖酐40320.0g甘氨酸 40.0g按處方比例將銀杏內(nèi)酯、葡甲胺、聚乙二醇1000、丙二醇混合均勻，加注射用水3500ml溶解，再加入右旋糖酐40和甘氨酸，使溶解，用截流分子量為3000-10萬(wàn)Dolton的膜超濾，除去熱原，最后用0.22μm濾膜過濾除菌，加注射用水定容至4000ml，分裝1000支，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用銀杏內(nèi)酯成品。
實(shí)施例2銀杏內(nèi)酯 50.0g 葡甲胺15.0g聚乙二醇4000 130.0g丙二醇12.0g右旋糖酐40200.0g甘氨酸80.0g乳糖 120.0g按處方比例將銀杏內(nèi)酯、葡甲胺、聚乙二醇4000、丙二醇混合均勻，加注射用水3500ml溶解，再加入右旋糖酐40、乳糖和甘氨酸，使溶解，用截流分子量為3000-10萬(wàn)Dolton的膜超濾，除去熱原，最后用0.22μm濾膜過濾除菌，加注射用水定容至4000ml，分裝1000支，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用銀杏內(nèi)酯成品。
實(shí)施例3銀杏內(nèi)酯 50.0g 葡甲胺13.0g聚乙二醇6000 120.0g丙二醇25.0g右旋糖酐40 300.0g甘氨酸80.0g乳糖 60.0g按處方比例將銀杏內(nèi)酯、葡甲胺、聚乙二醇6000、丙二醇混合均勻，加注射用水3500ml溶解，再加入右旋糖酐40、乳糖和甘氨酸，使溶解，用截流分子量為3000-10萬(wàn)Dolton的膜超濾，除去熱原，最后用0.22μm濾膜過濾除菌，加注射用水定容至4000ml，分裝1000支，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用銀杏內(nèi)酯成品。
將所得樣品進(jìn)行溶液配伍試驗(yàn)，影響因素試驗(yàn)，40℃±2℃相對(duì)濕度75％±5％條件下加速試驗(yàn)，結(jié)果均顯示處方良好，外觀成形佳，產(chǎn)品穩(wěn)定，能夠?yàn)榭惯^敏、抗炎、抗休克，抑制血小板聚集，減少血栓形成，治療心腦血管系統(tǒng)疾病等提供一種較好的藥物制劑。
注射用銀杏內(nèi)酯藥效學(xué)試驗(yàn)(一)注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)大鼠局灶性腦缺血的影響取雄性大鼠70只，體重180-220g，隨機(jī)分為7組，分別為假手術(shù)對(duì)照組；；腦缺血模型組；注射用銀杏內(nèi)酯小劑量組；9mg/kg；注射用銀杏內(nèi)酯中劑量組18mg/kg；注射用銀杏內(nèi)酯大劑量組36mg/kg(以上3組均為靜脈給藥)；注射用銀杏內(nèi)酯灌胃給藥對(duì)照組灌胃給藥18mg/kg；金納多注射液陽(yáng)性對(duì)照組18mg/kg，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍量(成人用藥量為100mg/日，按體表面積比值折算，大鼠用藥的等效劑量為100×0.018×5＝9mg/kg)。灌胃組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)3天；其余各組靜脈注射給藥，假手術(shù)對(duì)照組及腦缺血模型組給予生理鹽水。末次給藥后30分鐘，參照Longa等人的方法采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型。大鼠用10％水合三氯乙醛(300mg/kg)ip麻醉，仰臥恒溫手術(shù)臺(tái)上頸部正中切口，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，向外牽引二腹肌及胸鎖乳突肌，由頸總動(dòng)脈分叉處向頭端依次游離，結(jié)扎并剪斷頸外動(dòng)脈的分支枕骨下動(dòng)脈和甲狀腺上動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)端結(jié)扎，切斷頸外動(dòng)脈使其主干游離備用，然后分離頸內(nèi)動(dòng)脈，用絲線在頸外動(dòng)脈根部打一松扣，夾閉頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈。將尼龍線經(jīng)頸外動(dòng)脈主干切口，緩慢向頸內(nèi)動(dòng)脈入顱方向推進(jìn)，以頸總動(dòng)脈分叉處為標(biāo)記，推進(jìn)20mm左右時(shí)感到阻力，即達(dá)到了較細(xì)的大腦前動(dòng)脈內(nèi)，阻斷了MCA的所有血供來(lái)源，扎緊頸外動(dòng)脈根部松扣。1小時(shí)后，拔出尼龍線，扎緊動(dòng)脈殘端。縫合皮膚，完成MCAO導(dǎo)致局灶性腦缺血-再灌模型。假手術(shù)組大鼠麻醉后，僅暴露頸內(nèi)外動(dòng)脈分叉，不閉塞MCA。術(shù)后24小時(shí)后按Bederson的方法對(duì)動(dòng)物的行為缺陷進(jìn)行分級(jí)評(píng)分，標(biāo)準(zhǔn)如下0級(jí)未觀察到神經(jīng)癥狀。1級(jí)提尾懸空時(shí)，動(dòng)物的手術(shù)對(duì)側(cè)前肢表現(xiàn)為腕肘屈曲，肩內(nèi)旋，肘外展，緊貼胸壁。2級(jí)將動(dòng)物置于光滑平面上，推手術(shù)側(cè)向?qū)?cè)移動(dòng)時(shí)，阻力降低。3級(jí)動(dòng)物自由行走時(shí)向手術(shù)對(duì)側(cè)環(huán)轉(zhuǎn)或轉(zhuǎn)圈。4級(jí)軟癱，肢體無(wú)自發(fā)活動(dòng)。動(dòng)物評(píng)分后，腹主動(dòng)脈取血，斷頭取出大腦，稱重，手術(shù)顯微鏡下確認(rèn)中動(dòng)脈已阻斷后，平均分成5個(gè)腦片，置TTC染液中37℃避光溫孵，10％甲醛固定24h后，根據(jù)重量法計(jì)算梗塞部重量占腦組織重量的百分比，作為腦梗塞范圍大小的指標(biāo)。測(cè)定血清SOD活性及MDA含量(比色法)，第二腦片組織常規(guī)脫水，石蠟包埋制片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病理組織學(xué)。
表1銀杏內(nèi)酯對(duì)局灶性腦缺血大鼠的影響(x±SD n＝10)

與假手術(shù)對(duì)照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。表2銀杏內(nèi)酯對(duì)局灶性腦缺血大鼠MDA含量及SOD活性的影響(x±SD n＝10)

與對(duì)照組比較##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論注射用銀杏內(nèi)酯能降低局灶性腦缺血模型大鼠梗塞范圍，改善大鼠由于腦缺血所致的神經(jīng)行為障礙。能升高血清SOD活性及降低MDA含量。能減輕腦缺血大鼠腦組織的病理?yè)p傷。提示對(duì)大鼠腦缺血缺氧有一定的保護(hù)作用。
(二)注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)犬腦血流量及腦血管阻力的影響取健康雜種犬，30條，♀、♂兼用，體重10-12kg，隨機(jī)分為五組，對(duì)照組靜脈注射生理鹽水(2ml/kg)。注射用銀杏內(nèi)酯小劑量組2.66mg/kg，中劑量組5.33mg/kg，大劑量組10.66mg/kg，均為靜脈注射，用藥量分別相當(dāng)于人臨床用藥的等效劑量，2倍劑量，4倍劑量(成人用藥量為100mg/日，按體表面積比值折算，犬用藥的等效劑量為100×0.32/12＝2.66mg/kg)。金納多注射液陽(yáng)性對(duì)照組靜脈注射5.33mg/kg，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍量。
動(dòng)物自小隱靜脈按30mg/kg靜脈注射3％戊巴比妥鈉麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上。分離一側(cè)股靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)側(cè)端，插輸液管備用。分離一側(cè)股動(dòng)脈，插入充滿肝素生理鹽水溶液的動(dòng)脈插管，經(jīng)壓力換能器記錄平均動(dòng)脈壓(MAP)。將針狀電極插入四肢皮下，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)心電圖(ECG)。沿頸正中線切開皮膚，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎進(jìn)入顱內(nèi)之前的頸外動(dòng)脈及椎動(dòng)脈，保留頸內(nèi)動(dòng)脈，頸總動(dòng)脈掛2.5mm電磁流量計(jì)探頭測(cè)量頸內(nèi)動(dòng)脈流量，以此代表腦血流量。腦血流量以100g腦組織每分鐘血流毫升數(shù)表示。腦血流量(ml/100g·min)＝頸內(nèi)動(dòng)脈流量×100/一側(cè)腦重。腦血管阻力(kPa.ml/100g·min)＝平均血壓(MAP)/腦血流量[1]。手術(shù)10min待動(dòng)物各項(xiàng)觀察指標(biāo)穩(wěn)定后，股靜脈緩慢注射給藥，給藥體積2ml/kg，對(duì)照組給予等體積生理鹽水，記錄藥前及藥后1、5、30、60、120min的血壓、頸內(nèi)動(dòng)脈流量、心電圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物，取腦組織稱重。
表3注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)犬腦血流量的影響(ml/100g.min)(x±SD n＝6)

與給藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01；與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
表4注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)犬SAP、DAP、MAP的影響(x±SD，n＝6)

與對(duì)照組及給藥前比較P＞0.05。
表5銀杏內(nèi)酯對(duì)犬HR的影響(x±SD，n＝6)

與對(duì)照組及給藥前比較P＞0.05。
表6注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)犬腦血管阻力的影響(kPa.ml/100g·min)(x±SD n＝6)

與給藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01；與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論銀杏內(nèi)酯能使犬腦血流量增加、腦血管阻力降低，具有增加腦血流量的作用。而對(duì)血壓及心率無(wú)明顯影響。
(三)注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)急性不完全性腦缺血大鼠的影響選擇SD雄性大鼠70只，體重250-280g，隨機(jī)分為7組假手術(shù)對(duì)照組；腦缺血模型組；注射用銀杏內(nèi)酯小劑量組9mg/kg；中劑量組18mg/kg；大劑量組36mg/kg；銀杏內(nèi)酯灌胃給藥對(duì)照組18mg/kg，；金納多注射液陽(yáng)性對(duì)照組18mg/kg。連續(xù)給藥3天，末次給藥后30分鐘，大鼠ip水合氯醛麻醉，仰臥固定，切開頸正中皮膚，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，靜脈注射伊文思藍(lán)50mg/kg，5分鐘后結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈，縫合皮膚，常規(guī)消毒，假手術(shù)組分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎，給伊文思藍(lán)3小時(shí)后，斷頭取腦，稱重，分別浸泡于甲酰胺溶液中，在45℃恒溫箱中溫育72小時(shí)，待腦組織中色素全部浸出，取色素液用721型分光光度計(jì)，波長(zhǎng)620nm進(jìn)行比色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出腦內(nèi)伊文思藍(lán)的含量，以μg/g腦濕重表示。
表7注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)腦缺血模型大鼠腦組織伊文思藍(lán)含量的影響(x±SD n＝10)

與對(duì)照組比較##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)論注射用銀杏內(nèi)酯能減少腦缺血模型大鼠腦組織中伊文思藍(lán)的含量，減輕因腦缺血缺氧導(dǎo)致的毛細(xì)血管通透性的增加，對(duì)大鼠腦缺血缺氧有一定的保護(hù)作用。
(四)注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠腦缺血缺氧的影響KM種小鼠，60只，雌、雄各半，隨機(jī)分為6組對(duì)照組(生理鹽水)；注射用銀杏內(nèi)酯小劑量組13mg/kg；中劑量組26mg/kg；大劑量組52mg/kg(以上3組均為靜脈注射給藥)；銀杏內(nèi)酯灌胃給藥組52mg/kg；金納多注射液陽(yáng)性對(duì)照組26mg/kg。每天給藥一次，給藥體積為20ml/kg。連續(xù)給藥3天，末次給藥后30min(iv)或60min(ig)，小鼠經(jīng)乙醚麻醉后，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈并穿線結(jié)扎，觀察并記錄結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈后動(dòng)物存活時(shí)間。以完全阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈血流開始計(jì)時(shí)至小鼠10秒內(nèi)呼吸少于2次時(shí)為止，為小鼠缺血后存活時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)果見表8。注射用銀杏內(nèi)酯可明顯延長(zhǎng)小鼠腦缺血后存活的時(shí)間，其中劑量為26，52mg/kg，差異具有顯著性意義。
表8注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠腦缺血后存活時(shí)間的影響(n＝10，x±SD)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠靜脈注射給予注射用銀杏內(nèi)酯(13，26，52mg/kg)及灌胃給予銀杏內(nèi)酯(52mg/kg)能不同程度的延長(zhǎng)小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎后的存活時(shí)間。提示注射用銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠腦缺血缺氧具有一定的保護(hù)作用。其中相同劑量的銀杏內(nèi)酯靜脈注射給藥優(yōu)于灌胃給藥。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該組合物含有銀杏內(nèi)酯A35～45％，銀杏內(nèi)酯B26～36％，銀杏內(nèi)酯C5～15％，白果內(nèi)酯2～12％。
2.一種注射用銀杏內(nèi)酯針劑，其特征在于主要成分為銀杏內(nèi)酯，助溶劑為葡甲胺、聚乙二醇、丙二醇，賦形劑為右旋糖酐40、乳糖、甘氨酸中的一種或幾種；該針劑所含主要成分按重量含量比為銀杏內(nèi)酯∶葡甲胺∶聚乙二醇(1000～6000)∶丙二醇∶賦形劑＝1∶(0.2～0.4)∶(0.05～3)∶(0.05～1)∶(4～8)。
3.一種注射用銀杏內(nèi)酯針劑的制備方法，其特征在于將銀杏總內(nèi)酯原料與葡甲胺、聚乙二醇(1000～6000)、丙二醇按重量含量比為1∶(0.2～0.4)∶(0.05～3)∶(0.05～1)的比例混合均勻，加注射用水溶解，往該溶液中加入占總重量比為(4～8)的右旋糖酐40、乳糖、甘氨酸中的一中或幾種，使之溶解，用截流分子量為3000-10萬(wàn)Dolton的膜超濾，除去熱原，最后用0.22μm濾膜過濾除菌，分裝，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用銀杏內(nèi)酯成品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用銀杏內(nèi)酯針劑及其制備方法，該注射劑含有由銀杏內(nèi)酯A、B、C及白果內(nèi)酯組成的銀杏內(nèi)酯組合物，將該銀杏內(nèi)酯組合物與適當(dāng)?shù)闹軇?、賦形劑混合溶解，過濾，分裝，預(yù)凍與干燥，得注射用銀杏內(nèi)酯針劑。本發(fā)明所提供的注射用銀杏內(nèi)酯針劑具有較好水溶性，穩(wěn)定性，藥品有效成分可直接進(jìn)入血液，生物利用度高；具有抗過敏、抗炎、抗休克的特性，可抑制血小板聚集，減少血栓形成，對(duì)治療心腦血管系統(tǒng)疾病等提供一種較好的藥物制劑。本發(fā)明所提供的注射用銀杏內(nèi)酯針劑的制備方法工藝簡(jiǎn)單，不使用有毒有害的有機(jī)溶劑，使用超濾法過濾減少藥品被吸附的損失，工藝成本低。
文檔編號(hào)A61K31/365GK1686111SQ20051006983
公開日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2005年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月27日
發(fā)明者劉全勝, 夏中寧, 舒軍, 鄺茂琳 申請(qǐng)人:劉全勝, 夏中寧, 舒軍, 鄺茂琳