專利名稱：抗缺氧藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學領(lǐng)域，具體地說是制造一種可使能量代謝作用恢復，從而解除組織、心臟、腦、肝臟等缺氧狀態(tài)的藥物。
現(xiàn)在已知有一系列抗缺氧藥物，特別是抗缺氧劑細胞色素C，它被選來作為樣本藥物。
在對犬作6小時的冠狀動脈閉塞(OKA)試驗解除后，過15分鐘按2.5毫克/千克(動物體重)的劑量一次注射細胞色素C，可以改善組織的呼吸狀況，并在很大程度上防止局部出血區(qū)中壞死現(xiàn)象的發(fā)展，而對局部出血區(qū)范圍的大小并無影響(A.Lalewski etal.Am.Heart J.1987，v113，nol，PP124-129)。
對持續(xù)了2小時的OKA，將劑量增加至5毫克/千克特別是增至10毫克/千克，會使心肌的局部出血以外范圍中的三磷酸腺苷(ATΦ)與磷酸肌酸的含量增加到標準值，并也使局部出血區(qū)內(nèi)這兩種物質(zhì)的含量顯著增加，但不會增加到標準值。從而，這也改善了心肌的組織和功能(Н.В.Карсанов等，Материалы Республи-канской научной конференцпи поэнзимологии，Тбдписи，июнь，I98I)。
但在做冠狀動脈閉塞時，使用細胞色素C1—7天中(每晝夜劑量10毫克/千克)，第1～第3天腺嘌呤基核苷酸的含量增至標準值，之后出現(xiàn)下降，第7天降到對照值(Ш.Б.Иргашев，Н.М.Юддашев-φармакол.токсикол，I988，К5，c4I-44)。
在家兔患了腎上腺咖啡因心肌炎歷時7天的情況下，使用細胞色素可以使三磷酸腺苷(ATΦ)與肌酸磷酸鹽(KΦ)的含量恢復正常(Н.В.Карсанов，Н.К.Хайндрава，Материады II Всесоюзногосимпозиума по медицинской энзимодогии，Душанбе，I974)。
然而，二磷酸腺苷(AДΦ)與一磷酸腺苷(AMΦ)的含量相對于對照值并不增加。這導致比值A(chǔ)TΦ/AДΦ增加，因而使得三羧酸循環(huán)的激烈程度產(chǎn)生內(nèi)在的酸酐化，特別當ATΦ的含量超過正常值時更是如此。
在心肌的大病灶梗塞(并不并發(fā)有心臟收縮活動的不足和冠狀循環(huán)失調(diào)的臨床表現(xiàn))的情況下，對病人采用大劑量細胞色素C20毫克/千克，療程14天，會改善鄰近梗塞區(qū)域的心肌狀態(tài)，并縮小其壞死區(qū)域(Б.Н.Безбородъко，И.А.Шехунова-Врач.дeло，I990，К8，c8-IO)。
這樣，一次使用或長時間使用細胞色素會顯著改善心肌局部出血區(qū)域的能量狀態(tài)，但不會穩(wěn)定地消除細胞的能量不足，也不會完全恢復能量保障系統(tǒng)的體內(nèi)平衡。
本發(fā)明的目的就是要研制一種多組分的藥，它旨在消除細胞的能量不足(缺氧)狀態(tài)，通過對能量保障系統(tǒng)的協(xié)調(diào)作用恢復其體內(nèi)平衡，使得心肌炎、冠狀動脈閉塞的治療達到良好的藥理功效所需日數(shù)可以縮短。
實現(xiàn)所述目的的方法是在本發(fā)明的藥物中引入細胞復雜能量保障系統(tǒng)在缺氧狀態(tài)時受影響最深的三個環(huán)節(jié)的刺激素，這三個環(huán)節(jié)是酵解(酵解的氧化還原作用降低)、氧化性磷酸化(電子向氧轉(zhuǎn)移的能力降低)、腺嘌呤基核苷酸、eoo，細胞色素C(酶)、菸酰胺腺嘌呤二核苷酸(HAД)與次黃苷的合成，各組分的質(zhì)量比如下細胞色素C 10HAД 0.5次黃苷80
上述組成的本發(fā)明藥物獲得了商品名稱“ЭHEPГOCTИM”，它起的作用不是其組分的綜合作用。它是一種性質(zhì)新穎的藥物，其特性就是能穩(wěn)定地平衡地恢復能量保障系統(tǒng)中一切環(huán)節(jié)的正常功能——即穩(wěn)定、平衡地恢復受病態(tài)破壞和在不對稱的作用下負擔加重系統(tǒng)的體內(nèi)平衡。
細胞缺氧情況下能量保障系統(tǒng)中體內(nèi)平衡的失調(diào)以及由此引起的細胞能量不足狀態(tài)的發(fā)展是由于細胞損失了大量細胞色素C和HAД(Карсанов等，1981與表1)，以及由于腺嘌呤基核苷酸總含量減小(表2)的緣故。
線粒體中細胞色素C的減少導致電子向氧傳輸量的減少，因此也就使得在氧化性磷酸化反應過程(與電子傳輸有關(guān))中三磷酸腺苷的合成有所減少。
心肌凝蛋白中ATΦ合成量的減少也與細胞中(既在細胞溶膠中，又在線粒體中)的菸酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量減少有關(guān)。這種情況，一方面使酵解過程中生成三磷酸腺苷的速度下降，同時由于質(zhì)子從線粒體的細胞溶膠(通過蘋果酯—天門冬氨酸的分路)傳輸能力的降低也引起氧化性磷酸化作用隨之減弱(這由于依屬于酵解的菸酰胺腺嘌呤二核苷酸的脫氫酶的活性以及酵解的氧化還原作用降低之故)，另一方面這種情況還與依屬于菸酰胺腺嘌呤二核苷酸的三羧酸循環(huán)的減弱有關(guān)。
當細胞處于缺氧狀態(tài)時，所注射的細胞色素C就進入線粒體的膜，即進入電子通往氧的通道上(Карсанов等，1981)，并且由于電子流在通道上，因此使電子移動得以恢復。這就促進了通過氧化性磷酸化作用進行的ATΦ合成過程。結(jié)果ATΦ(這是容易取得能量供利用的源)的含量和它以KΦ形式貯存的量就增加到正常或幾乎正常的水平(表3)。然而，此時AДΦ與AMΦ的含量并無多大增加(在變應性心肌炎情況下)，而腺嘌呤基核苷酸的總含量仍保持在低水平(在中毒變應性心肌炎情況下，表2)或者略有增加(在心臟發(fā)生腎上腺素性損傷情況下，表4)或者甚至恢復正常(在變應性心肌炎情況下，表3)。
然而，注射細胞色素C對于〔HAД〕/〔HAДH〕并無影響，雖然吡啶核苷酸都增加(表1)。因此，可以認為，在細胞色素C作用下酵解的，依賴于HAД的脫氫酶與三羧酸循環(huán)的依屬于HAД的脫氫酶的活性實際上并無變化。
因此，在僅有細胞色素C的作用下，細胞能量保障系統(tǒng)的體內(nèi)平衡是不會完全復原的。
僅采用HAД可使心肌中ATΦ的含量恢復到正常水平(在變應性心肌炎與心臟的腎上腺素性損傷的情況下，表3與表4)或者增加到近于正常的水平(在中毒變應性心肌炎情況下，表2)。
因為注射HAД會使HAД與HAДH含量之比恢復正常，所以有理由可以認為，ATΦ含量之恢復正常是由于依屬于酵解化的菸酰胺腺嘌呤二核苷酸的脫氫酶的活化、酵解的氧化還原作用、在線粒體內(nèi)質(zhì)子從細胞溶膠的傳輸、以及依屬于HAД的三羧酸循環(huán)的脫氫酶的活化的緣故。但必須認為，在這種情況下ATΦ的合成反應活化的基本途徑是酵解的途徑，因為與采用細胞色素C不同，此時在心臟有腎上腺素性損傷的情況下，KΦ的含量并無顯著增加。而這是可以理解的，因為電子轉(zhuǎn)移通路的通過能力因缺乏細胞色素之故是很低的。
至于說到AДΦ，它的基質(zhì)有增高的趨勢。結(jié)果在只采用HAД的情況下，比例〔ATΦ〕/〔AДΦ〕下降(表2、3、4)。
因此，無論是僅使用HAД或僅使用細胞色素C都肯定不會使細胞的能量保障系統(tǒng)的體內(nèi)平衡恢復。在這兩種情況下也不會發(fā)生心肌凝蛋白超結(jié)構(gòu)的復原(表4)。與使用細胞色素和HAД不同，在變應性心肌炎情況下僅使用次黃苷基本上使AMΦ與AДΦ的含量而不是ATФ的含量恢復正常。AMФ與AДΦ特別是AДΦ的含量，在使用較高劑量160毫克/千克的次黃苷的情況下，甚至會超過正常水平。對犬患有OKA(表7)，使用最適宜劑量(80毫克/千克)的次黃苷時，AДΦ的含量也會有很大的增加(此時ATФ的含量也不增加)，并且不僅是在左心室的局部出血區(qū)中，而且也在其局部出血區(qū)以外的范圍中。結(jié)果，在僅使用次黃苷的情況下，比便〔ATΦ〕/〔AДΦ〕相對于標準值進一步降低(表6與表7)。AДΦ與AMФ含量的增長很顯著，以致腺嘌呤基核苷酸的含量會增加到正常水平，甚至超過正常水平。這是因為次黃苷對腺嘌呤基核苷酸的合成起了明顯的作用。
所列的數(shù)據(jù)表明，和僅使用細胞色素C或僅使用HAД的情況一樣，若僅使用次黃苷，在心肌有發(fā)炎性損傷和OKA的情況下，將含有最佳比例的HAД、細胞色素C與次黃苷，名為“ЭHEPГOCTИM”的本發(fā)明復合藥物使用于中毒變應性心肌炎與OKA，會使細胞的能量保障系統(tǒng)的所有指標恢復正常，細胞的復雜的能量保障系統(tǒng)的體內(nèi)平衡完全復原(表8和表9)并不是藥物所用組分各別引起的。若是ЭHEPГOCTИM藥的作用僅僅是各組分效應的簡單加和，則ATФ含量不會恢復正常，而是超過正常值的一倍，甚至大于一倍達到了正常水平的二倍多。能量保障狀態(tài)的其它指標也會發(fā)生這種相同的情況。
若使用ЭHEPГOCTИM藥，則在僅使用次黃苷情況下觀察到的AДΦ含量超過正常組的情況并不會出現(xiàn)。
如果考慮到ATФ、AДΦ、AMФ、KΦ的含量以及它們含量的比值〔ATФ〕/〔AДΦ〕、〔AДΦ〕〔KP〕〔ΦH〕/〔ATФ〕〔KΦ〕以及HAД/HAДH對復雜的能量保障系統(tǒng)中進行的種種過程的程度起著調(diào)節(jié)(活化或抑制)作用，則系統(tǒng)的體內(nèi)平衡復原的重要性就顯而易見了。此外，ATФ與AДΦ的正常含量對細胞的各種結(jié)構(gòu)起著穩(wěn)定化作用，并決定著收縮性蛋白質(zhì)系統(tǒng)的狀態(tài)。
例如，缺乏ATΦ會使心肌處于攣縮狀態(tài)，而在Ca不存在情況下若ATΦ含量高，則使心肌處于松弛狀態(tài)。
在直接使用前，是將細胞色素C(10毫克/千克)，HAД(0.5毫克/千克)與次黃苷(80毫克/千克)在仔細混和情況下溶入5毫升加熱至38～40℃的工廠制備的生理溶液中。
為了更好地理解本發(fā)明，進行了作專利申請的這種藥的下述藥理試驗實施例。
實施例1試驗了ЭHEPГOCTИM藥對于中毒變應性心肌炎(TAM)的藥理作用。各組分用量HAД0.5毫克/千克，細胞色素C10毫克/千克，次黃苷80毫克/千克。
試驗在兔子身上進行的。TAM與AM是用C.B.AHДPEEB與M.B.COKOλOB方法引起致病的(見書《得病的模型化》，莫斯科，1973)。為了按4天間隔再現(xiàn)TAM2次，向其體內(nèi)每次注射2毫升馬血清，并在后一次血清注射之后過7天再注射0.5毫升葡萄球菌毒素。
自發(fā)病的第五天起施行用此藥劑作靜脈注射5天的療程(每晝夜劑量為90.5毫克/千克)，將ЭHEPГOCTИM對于10天病程TAM的藥物效果記錄下來。為了將ЭHEPГOCTИM的作用與細胞色素的作用進行比較，也在相應的療程時間內(nèi)以10毫克/千克的劑量靜脈注射了細胞色素C。
根據(jù)ATΦ、AДΦ、AMΦ、KΦ的含量，ATΦ/AДΦ的值以及腺嘌呤基核苷酸系統(tǒng)的能量負荷對于所研究藥物對缺氧、缺能狀態(tài)作用的程度與特性進行了判斷。
對于10天病程的TAM，ЭHEPГOCTИM在注射5天療程時就顯示了明顯的藥物作用，腺嘌呤基核苷酸的含量、核苷酸的總量、系統(tǒng)的能量負荷與KΦ的含量都恢復了正常(表8)。
而以10毫克/千克的劑量僅注射細胞色素C，甚至經(jīng)7天的療程仍未使能量保障系統(tǒng)的能力以及其體內(nèi)平衡的狀態(tài)復原。
在能量保障系統(tǒng)的復雜反應鏈中高能物質(zhì)合成作用的恢復，伴隨著心肌血液循環(huán)的改善，使得心肌的超結(jié)構(gòu)有很大的改善，并使發(fā)炎性過程迅速并逆向地進行，心肌結(jié)構(gòu)獲得了修復。
上述情況表現(xiàn)為細胞內(nèi)浮腫的減輕。
肌原纖維間的空間為線粒體所充滿以及線粒體基質(zhì)密度的增大。線粒體具有了橢園形的形狀，嵴(KPИCT)的厚度增加，而它們的數(shù)量達到了標準，線粒體膜的雙重輪廓性復了原。糖原粒的含量增加，Z-片位置的有序性恢復，超短肌節(jié)的數(shù)量顯著減少，肌質(zhì)的網(wǎng)狀內(nèi)皮胞瘤的小管的膨脹程度降低。
根據(jù)心內(nèi)血液動力學的數(shù)據(jù)，在采用ЭHEPГOCTИM時心肌結(jié)構(gòu)的顯著改善使得心臟的收縮與舒張功能獲得了恢復，實際上恢復到完全正常，收縮壓與其增長的速度降低，后舒張壓則降至正常。
因此有理由得出結(jié)論在能量缺乏狀態(tài)即TAM病癥的情況下，ЭHEPГOCTИM能完全協(xié)調(diào)一致地使心臟肌肉的能量保障完全恢復，減輕炎癥過程的發(fā)展，因而增加心肌的功能活性，可以在中毒現(xiàn)象無發(fā)展危險的情況下大大縮短達到穩(wěn)定藥理效果所需的時間。
實施例2試驗了ЭHEPГOCTИM對于犬的心肌急性病灶局部出血癥的藥理作用。組分的用量HAД0.15毫克/千克，細胞色素C10毫克/千克，次黃苷80毫克/千克)。
非良種犬的急性病灶局部出血癥的再現(xiàn)方式是將其冠狀動脈的降支在其三分之一處進行結(jié)扎，用醚麻醉，用芬太尼-苯海拉明-達哌啶醇混合物作前驅(qū)給藥(用硫噴妥鈉進行注射麻醉)，通過面罩PO-5使其呼吸含有乙醚蒸氣的人工通風的空氣氣氛。
注射ЭHEPГOCTИM的劑量為90.5毫克/千克，細胞色素的劑量為10毫克/千克。
使用本發(fā)明的抗缺氧藥ЭHEPГOCTИM使腺嘌呤基核苷酸的含量和比例復了原，局部出血區(qū)外的KΦ含量恢復了正常，而在局部出血區(qū)域內(nèi)，其含量與對照值比較增加了29％(表9)。
由局部出血區(qū)心肌的甘油化纖維所發(fā)生的電壓在ЭHEPГOCTИM作用下達到對照值的1.74倍，但未達到正常水平，而處于局部出血區(qū)外則幾乎增至正常水平。心肌凝蛋白的超結(jié)構(gòu)有了很大改善，左心室的最大收縮壓與壓力的下降速度以及心肌松弛的指標均恢復正常(表10)。
與在心肌炎情況下一樣，僅注射細胞色素C可改善線粒體的結(jié)構(gòu)并增加ATΦ與KΦ的含量，但是不會完全消除能量缺乏狀態(tài)，也不會使心臟的收縮與舒張功能完全復原，即使在再現(xiàn)冠狀動脈閉塞-之前就注射細胞色素C。
表1患10天中毒變應性心肌炎病，經(jīng)HAЛ(0.5毫克/千克)與細胞色素(5毫克/千克)治療后，左心室心肌中HAД與HAДH的含量(微米/克濕組織) *-與標準比較，+-與對照比較，§-采用HAД與細胞色素C治療。無符號-無明顯的差異。-個符號-P＜0.05，兩個符號-P＜0.01，三個符號ρ＜0.001。
表2注射HAД與細胞色素C對于患有10天病程TAM的家兔右心室心肌中腺嘌呤基系統(tǒng)核苷酸含量的影響(微米/克濕組織)組 次組 統(tǒng)計指標 ATΦA(chǔ)ДΦ AMΦ ATΦ/AДΦ 核苷酸總量能量負荷標準 n＝25 1 X±m(xù)x-2，40I，84 0，99I，43 5，250，650，I30，I0 0，070，I3 0，220，0ITAM n＝20 2 X±m(xù)x-I，67I，5I 0，87I，27 3，770，600，I20，I0 0，080，I0 0，340，0I0，25毫克/千克3 X±m(xù)x-I，6II，53 0，90I，05 4，050，580，I00，07 0，I50，07 0，I80，024HAД n＝90，5毫克/千克 4 X±m(xù)x-2，00I，9I 0，5II，04 4，420，66n=12 0，I40，36 0，200，37 0，550，03細胞色素C 5 X±m(xù)x-2，I5I，63 0，6II，35 4，390，675毫克/千克n＝9 0，080，08 0，090，09 0，630，0IP1-2＜0，00I - -- 0，00I 0，0IP1-3＜0，00I 0，05 -0，05 0，00I 0，05P1-4＜-- 0，05- 0，05-F1-5＜-- 0，0I- 0，0I-P2-3＜-- -- --P2-4＜-- 0，05- -0，00IP2-5＜0，00I - 0，05- -0，00IP3-4＜0，05- -- --P4-5＜-- -- --
表3注射HAЛ、細胞色素C與次黃苷對于患變應性心肌炎10天病程的家兔左心室中KΦ與系統(tǒng)的核苷酸的含量的影響
表4注射HAЛ(0.5毫克/千克)與細胞色素C(10毫克/千克)對于患有三天病程的心臟腎上腺素性損傷的左心室心肌中的腺嘌呤基系統(tǒng)核苷酸與KΦ(毫摩爾/克濕組織)的影響 *—與標準比較，×—與對照比較，P不大于0.05。
表5正常家兔、10天病程TAM的家兔、與患有TAM但經(jīng)HAД(0.5毫克/千克)與細胞色素C(5毫克/千克)治療的家兔的左心室應用電子顯微鏡圖(ЭГ)進行的線粒體(MX)定量分析 *—與標準比較，+—與對照比較，P＜0.05—一個符號，P＜0.01—二個符號，P＜0.001—三個符號。
表6注射次黃苷對患有5天變應性心肌炎家兔心臟的腺嘌呤基系統(tǒng)核苷酸含量的影響
表6(續(xù))注射次黃苷對患有5天變應性心肌炎家兔心臟的腺嘌呤基系統(tǒng)核苷酸含量的影響
表7注射次黃苷(80毫克/千克)對于患有5小時病程的OKA2-2的犬的心臟肌肉能量保障的影響(X±m(xù)x-) *—與標準比較，+—與對照比較，P不大于0.05。
表8ЭHEPГOCTИM對于10天病程TAM的腺嘌呤基系統(tǒng)核苷酸含量與KΦ水平的作用(微米/克濕組織) 平均值差別的比較；*—與標準比數(shù)，×—與對照比較，P不大于0.05。
表9ЭHEPГOCTИM對于患急性局部出血的犬的腺嘌呤基核苷酸與磷酸肌酸的含量以及收縮性蛋白質(zhì)隔離系統(tǒng)的收縮能力的影響 *—與對照I比較，+—與對照II比較，×—與對照III比較。差別可信度P＜0.01與較小。
表10ЭHEPГOCTИM對于患急性局部出血的犬影響的心內(nèi)血液動力學試驗 *—與對照I比較，+—與對照II比較，*—與對照III比較。
表IIЭHEPГOCTИM與細胞色素的功效的比較分析 注腺嘌呤基核苷酸的含量取為100％。
標準中家兔心肌內(nèi)的KΦ與HAДH/HAД。
作為對照使用的是具有明顯能量不足的中毒變應性的心肌炎狀態(tài)。
權(quán)利要求
1.以細胞色素C為基的一種抗缺氧藥，其特征在于它還附加地含有菸酰胺腺嘌呤二核苷酸與次黃苷，其重量份數(shù)如下細胞色素C 5～15菸酰胺腺嘌呤二核苷酸 0.5～5次黃苷 20～250
全文摘要
本發(fā)明涉及心臟病學領(lǐng)域，提出了一種基于細胞色素C，菸酰胺腺嘌呤二核苷酸和次黃苷的抗缺氧藥“ЭНЕРΓОСТИМ”。ЭНЕРΓОСТИМ可使能量代謝作用完全恢復，并解除組織、心臟、腦、肝臟與其它器官的缺氧狀態(tài)。
文檔編號A61K38/43GK1119955SQ9410569
公開日1996年4月10日 申請日期1994年5月12日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月12日
發(fā)明者N·V·卡薩諾夫, E·V·塞利可娃, N·N·吉普希茲, E·I·古查 申請人:N·V·卡薩諾夫, E·V·塞利可娃, N·N·吉普希茲