專利名稱：中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位及其同步制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物的提取分離純化領(lǐng)域，特別是涉及一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位及其同步制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
當歸補血湯出自金元時代李東垣《內(nèi)外傷辨惑病論 暑傷胃氣論》，其是由黃芪I兩、當歸酒洗2錢，即芪歸5: I比例組成的。本方主治血虛發(fā)熱證，具有益氣生血功效，多用于治勞倦內(nèi)傷，氣血虛，陽浮于外之虛熱證，廣為應(yīng)用。隨著現(xiàn)代醫(yī)學科學技術(shù)的滲入，發(fā)現(xiàn)其具有免疫促進、保護心肌、改善造血功能、耐缺氧等作用，其中當歸所含阿魏酸、藁本內(nèi)酯、當歸多糖，黃芪中所含皂苷、黃酮、黃芪多糖為當歸補血湯補血的主要有效組分。但傳統(tǒng)劑型湯劑對于很多脂溶性成分難以溶出發(fā)揮作用，且煎煮和攜帶都不方便，不利于此方的臨床應(yīng)用和推廣。雖然現(xiàn)有技術(shù)中存在許多提取當歸黃芪的方法，但均是單一提取，這種單一提取方法造成了資源的浪費，增加了其深加工的成本。

發(fā)明內(nèi)容
基于此，有必要針對上述技術(shù)問題，提供一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位及其同步制備方法及應(yīng)用。解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位的同步制備方法，包括如下步驟:(I)粉碎:取當歸和黃芪 ，粉碎至10-120目，得當歸粉和黃芪粉；(2)超臨界CO2萃取:取步驟(I)所得的當歸粉，超臨界CO2萃取，得當歸揮發(fā)油和當歸藥渣；所述超臨界CO2萃取的技術(shù)參數(shù)為:分離釜I溫度為40_50°C，萃取釜溫度為3_5°C，加壓至25_35MPa，調(diào)節(jié)CO2流速為10-14L/h，保持萃取釜的壓力和溫度，萃取1.5-2.5h ；(3)醇提:將步驟(I)所得的黃芪粉和步驟(2)所得的當歸藥渣混合，得混合物，于混合物中按重量體積比為1:6-10添加體積分數(shù)為20%-95%的乙醇溶液，提取1-5次，過濾，合并濾液，并減壓濃縮至無乙醇味，得濃縮液；所述提取的方法為:將混合物浸泡于乙醇溶液中2-3h，再于75-100°C狀態(tài)下煎煮l_2h ；(4)柱分離:將步驟(3)所得的濃縮液經(jīng)300-400目濾網(wǎng)過濾，得濾液，將濾液依次通過由大孔吸附樹脂和陰離子交換樹脂組成的壓力為0.2-0.SMpa的高壓串聯(lián)樹脂，收集未吸附液；(5)洗脫:先用6-10BV的水洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得多糖溶液；后用6-10BV的體積分數(shù)為20-50%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總皂苷溶液；再用6-10BV的體積分數(shù)為70-95%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總黃酮溶液；最后用6-10BV的體積分數(shù)為50-70%的氨乙醇液洗脫陰離子交換樹脂，得阿魏酸及其極性相近的成分的溶液；(6)真空冷凍干燥:先將步驟(4)所得的未吸附液和步驟(5)所得的多糖溶液混合，得總多糖溶液；再分別將所述總多糖溶液、步驟(5)所得的總皂苷溶液、總黃酮溶液和總阿魏酸溶液，濃縮，冷凍干燥，即得總多糖粗品、總皂苷粗品、總黃酮粗品和阿魏酸粗品；在其中一些實施例中，步驟(2 )所述超臨界CO2萃取裝置的技術(shù)參數(shù)為:分離釜I溫度為45°C，萃取釜溫度為4°C，加壓至30MPa，調(diào)節(jié)CO2流速為12L/h，保持萃取釜的壓力和溫度，萃取2h。在其中一些實施例中，步驟(5)所述洗脫為:先用IOBV的水洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得多糖溶液；后用8BV的體積分數(shù)為40%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總皂苷溶液；再用8BV的體積分數(shù)為80%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總黃酮溶液；最后用8BV的體積分數(shù)為60%的氨乙醇液洗脫陰離子交換樹脂，得阿魏酸及其極性相近的成分的溶液。在其中一些實施例中，步驟(3)所述提取的方法為:將步驟(I)所得的黃芪粉和步驟(2)所得的當歸藥渣混合，得混合物，按混合物的重量體積比為1:6-10添加體積分數(shù)為60-95%的乙醇溶液，浸泡2-3h，于溫度為78-100°C下煎煮l_2h，取濾渣，再于所述濾渣中按重量份配比為1:6-10添加體積分數(shù)為20-60%的乙醇溶液，浸泡2-3h，于溫度為78-100°C下煎煮l_2h，過濾，合并2次濾液，并濃縮至無乙醇味，得濃縮液。在其中一些實施例中，步驟(3)所述提取的方法為:于混合物中按重量體積比為I:8添加體積分數(shù)為70%的乙醇溶液，浸泡2-3h，于溫度為80°C下煎煮2h，取濾渣，再于所述濾洛中按重量體積比為1:8添加體積分數(shù)為40%的乙醇溶液,浸泡2-3h,于溫度為80°C下煎煮2h，過濾，合并2次濾液，并濃縮至無乙醇味，得濃縮液。在其中一些實施例中，步驟(3)所述減壓濃縮中壓力為20_100kPa，溫度為20-80°C，時間為20-120min ;步驟(6)所述濃縮中真空度為0.06Mpa 0.lOMpa、溫度為700C -900C ;所述冷凍干燥中真空度小于20pa，冷凍溫度為_45°C _60°C。在其中一些實施例中，步驟(3)所述減壓濃縮中壓力為60kPa，溫度為50°C，時間為80min ;步驟(6)所述濃縮中真空度為0.8MPa，溫度為80°C，濃縮至初體積的20%為止。在其中一些實施例中，步驟(4)所述大孔吸附樹脂型號為D101、HPD-100、XDA_5或AB-8 ;所述陰離子交換樹脂型號為D280。根據(jù)上述的同步制備方法制得的中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位，總多糖粗品中總多糖的含量為50-60%、總皂苷粗品中總皂苷的含量為50-60%、總黃酮粗品中總黃酮的含量為50-68%、阿魏酸粗品中阿魏酸的含量為50-60%。所述總黃酮主要包括:毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊異黃酮、槲皮素等；所述總皂苷主要包括黃芪皂苷I 珊、異黃芪皂苷、大豆皂苷等；所述總多糖主要包括當歸多糖AAP、當歸多糖APS-1c 1、APS-1c I1、X-C-3-1II和X-C-3-1V、葡萄糖、木糖、甘露糖及鼠李糖等；所述阿魏酸粗品中包括阿魏酸、丁二酸等。上述制備方法制得的中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位在制備治療貧血、白細胞減少癥、原發(fā)性血小板減少性紫癜、痹證或水腫藥物中的應(yīng)用。一種中藥復(fù)方當歸補血 湯有效部位及其同步制備方法及應(yīng)用具有以下優(yōu)點和有益效果:
(I)本發(fā)明所述制備方法將大孔樹脂和陰離子交換樹脂高壓串聯(lián)，可同步分離總多糖、阿魏酸、總黃酮及總皂苷。(2)本發(fā)明所述制備方法簡便，實用，易于工業(yè)化生產(chǎn)，同時有效避免了單一提取所帶來的資源浪費，提高了綜合利用率，降低了深加工的成本。
具體實施例方式下述各實施例中超臨界CO2萃取裝置生產(chǎn)廠家:海安華安超臨界設(shè)備有限公司，型號為 HA221-40-200 ；本發(fā)明中總多糖、總皂苷、總黃酮、阿魏酸粗品的含量測定方法如下:1、總多糖的測定精密稱取120°C減壓干燥至恒重的葡萄糖對照品適量，置IOmL量瓶中，加適量蒸懼水溶解后，稀釋至刻度，搖勻，制得Img mL—1葡萄糖對照品溶液。精密取Img mL—1葡萄糖對照品溶液0.0mL,0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,分別置IOmL具塞試管中，用純水補足至lmL，精密加入lmL5%苯酚試液和5mL濃硫酸后立即置于沸水浴加熱15min，取出用冷水冷卻至室溫，室溫放置IOmin左右，于488nm處測定吸光度。以吸光度值(A)為縱坐標，濃度(X)為橫坐標作線性回歸。

精密稱取總多糖提取物樣品各3份，每份10mg，置于IOmL容量瓶中，加蒸餾水超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。取上述樣品1.0mL置IOmL容量瓶中，精密加入lmL5%苯酚試液和5mL濃硫酸后立即置于沸水浴加熱15min，取出用冷水冷卻至室溫，室溫放置IOmin左右，于488nm處測定吸光度。外標兩點法計算含量。2、總皂苷的測定精密稱取黃芪甲苷對照品IOmg置于IOml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，制得濃度為lmg/ml的對照品溶液，精密吸取對照品溶液0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml，置IOml具塞錐形瓶中，加無水乙醇補足體積至0.5ml，再分別加8%的香草醛無水乙醇試液
0.5ml和72%的冰乙酸5.0ml搖勻，立即放入62°C恒溫水浴中，保溫20min后，置冷水浴中冷卻至室溫，以隨行試劑作空白，于540nm波長處檢測吸光度。以吸光度(Y)為縱坐標，黃芪甲苷的濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線。精密稱取總皂苷提取物樣品各3份，每份IOmg置于IOmL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。取上述樣品1.0mL置IOmL具塞錐形瓶中，加8%的香草醛無水乙醇試液0.5ml和72%的硫酸5.0ml搖勻，立即放入62°C恒溫水浴中，保溫20min后，置冷水浴中冷卻至室溫，以隨行試劑作空白，于540nm波長處檢測吸光度，外標兩點法計算含量。3、總黃酮的測定精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品適量，加乙醇制成每ImL含毛蕊異黃酮苷
0.0lmg的對照品溶液。精密稱取總黃酮提取物樣品IOmg置于IOmL容量瓶中，加乙醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。取上述毛蕊異黃酮苷對照品溶液和供試品溶液，于200 400nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，結(jié)果其最大吸收波長均在250nm。最終確定在250nm波長處測定
黃芪總黃酮含量。精密量取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液0.25,0.50、1.0、1.25,2.0,4.0mL，分別置IOOmL量瓶中，各加水至刻度，搖勻，以同濃度的乙醇溶液為空白，在250nm波長處測吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。精密量取供試品溶液ImL于IOmL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，以同濃度的乙醇溶液為空白，在250nm波長處測吸光度，外標兩點法計算含量。4、阿魏酸的測定精密稱取阿魏酸標準品IOmg于IOOml的容量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度，分別吸取10、20、30、40、501^于具塞試管中，分別加入乙醇90、80、70、60、501^使成0.1mL乙醇溶液，各加蒸餾水至lmL，pHIO的氨-氯化銨緩沖液2mL，F(xiàn)olin試劑0.5m I,振搖5分鐘后加入5%無水碳酸鈉1ml，于70°C水浴上加熱10分鐘，冷卻后用分光光度計在690nm波長處側(cè)定吸收值，以吸收值為縱坐標，阿魏酸濃度為橫坐標繪制標準曲線。精密稱取阿 魏酸提取物樣品各3份，每份IOmg置于IOmL容量瓶中，加乙醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。取上述樣品1.0mL置IOmL具塞錐形瓶中，各加蒸餾水至lmL，pHIO的氨-氯化銨緩沖液2mL, Folin試劑0.5m I,振搖5分鐘后加入5%無水碳酸鈉Iml,于70°C水浴上加熱10分鐘，冷卻后用分光光度計在690nm波長處側(cè)定吸收值，外標兩點法計算含量。以下將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例1一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位的同步制備方法，包括如下步驟:(I)粉碎:按當歸補血湯中芪歸的重量份比為5:1稱取當歸和黃芪，總重100g，粉碎至10-120目，得當歸粉和黃芪粉；(2)超臨界CO2萃取:取步驟(I)所得的當歸粉，采用超臨界CO2萃取裝置進行萃取，當分離釜I溫度為40°C，萃取釜溫度為3°C時，打開CO2儲氣罐，對萃取釜進行加壓，至壓力為25MPa，調(diào)節(jié)CO2流速為10L/h，保持萃取釜的壓力25MPa和溫度3°C，萃取1.5h，即得當歸揮發(fā)油和當歸藥渣；(3)提取:將步驟(I)所得的黃芪粉和步驟(2)所得的當歸藥渣混合，得混合物，先將混合物于體積分數(shù)為60%的乙醇溶液中浸泡2h，再于80°C溫度下煎煮lh，重復(fù)提取3次，過濾；藥渣再用30%的乙醇溶液于80°C提取2次，每次lh，過濾，合并提取液，并于壓力為20kPa，溫度為20°C的條件下，減壓濃縮80min，至無乙醇味，得濃縮液；(4)柱分離:將步驟(3)所得的濃縮液趁熱經(jīng)300-400目濾網(wǎng)過濾，得澄清濾液，將濾液依次通過由AB-8大孔吸附樹脂和D280陰離子交換樹脂組成的兩節(jié)壓力為0.2Mpa的高壓串聯(lián)樹脂，完成上樣，并收集未吸附液，其中，上樣量為原料(重量g):樹脂(重量g)=1:1，流速為 l/10BV/min ；(5)洗脫:先用6BV的水洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得多糖溶液；再用6BV的體積分數(shù)為30%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得總皂苷溶液；再用6BV的體積分數(shù)為70%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得總黃酮溶液；再用6BV的體積分數(shù)為50%的氨乙醇液洗脫陰離子交換樹脂，得阿魏酸及其極性相近成分的溶液；(6)真空冷凍干燥:先將步驟(4)所得的未吸附液和步驟(5)所得的多糖溶液混合，得總多糖溶液；再將所述總多糖溶液、步驟(5)所得的總皂苷溶液、總黃酮溶液和阿魏酸及其極性相近的成分的溶液，于真空度為0.09Mpa，溫度80°C條件下濃縮至初體積的20%為止，得濃縮液；將所得濃縮液于真空度為18pa，溫度為_45°C冷凍干燥，即得總多糖粗品、總皂苷粗品、總黃酮粗品和阿魏酸粗品。經(jīng)檢測，本實施例中當歸揮發(fā)油58%、總多糖粗品中總多糖的含量為53%、總皂苷粗品中總皂苷的含量為54%、總黃酮粗品中總黃酮的含量為63%、阿魏酸粗品中阿魏酸的含量為54%。實施例2一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位的同步制備方法，包括如下步驟:(I)粉碎:按當歸補血湯中芪歸的重量份比為5:1稱取當歸和黃芪，總重lkg，粉碎至10-120目，得當歸粉和黃芪粉；(2)超臨界CO2萃取:取步驟(I)所得的當歸粉，采用超臨界CO2萃取裝置進行萃取，當分離釜I溫度為45°C，萃取釜溫度為4°C時，打開CO2儲氣罐，對萃取釜進行加壓，至壓力為30MPa，調(diào)節(jié)CO2流速為12L/h，保持萃取釜的壓力30MPa和溫度4°C，萃取2h，即得當歸揮發(fā)油和當歸藥渣；(3 )提取:將步驟(I)所得的黃芪粉和步驟(2 )所得的當歸藥渣混合，得混合物，于混合物中按重量體積比為1:8添加體積分數(shù)為70%的乙醇溶液中浸泡2h，再于80°C溫度下煎煮2h，過濾，再于濾渣中按重量體積比為1:8添加體積分數(shù)為40%的乙醇溶液中浸泡2h，于80°C溫度下煎煮2h，過濾，合并2次濾液，并于壓力為60kPa，溫度為50°C的條件下，減壓濃縮80min，至無乙醇味，得濃縮液；(4)柱分離:將步驟(3)所得的濃縮液趁熱經(jīng)300-400目濾網(wǎng)過濾，得澄清濾液，將濾液依次通過由AB-8大孔吸附樹脂和D280陰離子交換樹脂組成的兩節(jié)壓力為0.2Mpa的高壓串聯(lián)樹脂，完成上樣，并收集未吸附液，其中，上樣量為原料(重量g):樹脂(重量g)=1:1，流速為 l/10BV/min ；(5)洗脫:先用IOBV的 水洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得多糖溶液；再用8BV的體積分數(shù)為40%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得總皂苷溶液；再用8BV的體積分數(shù)為80%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得總黃酮溶液；再用8BV的體積分數(shù)為60%的氨乙醇液洗脫陰離子交換樹脂，得阿魏酸及其極性相近的成分的溶液；(6)真空冷凍干燥:先將步驟(4)所得的未吸附液和步驟(5)所得的多糖溶液混合，得總多糖溶液；再將所述總多糖溶液、步驟(5)所得的總皂苷溶液、總黃酮溶液和阿魏酸及其極性相近的成分的溶液，于真空度為0.09Mpa，溫度80°C條件下濃縮至初體積的20%為止，得濃縮液；將所得濃縮液于真空度為18pa，溫度為-50°C冷凍干燥，即得總多糖粗品、總皂苷粗品、總黃酮粗品和阿魏酸粗品。經(jīng)檢測，本實施例中當歸揮發(fā)油58%，總多糖粗品中總多糖的含量為56%、總皂苷粗品中總皂苷的含量為58%、總黃酮粗品中總黃酮的含量為67%、阿魏酸粗品中阿魏酸的含量為56%。實施例3一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位的同步制備方法，包括如下步驟:(I)粉碎:按當歸補血湯中芪歸的重量份比為5:1稱取當歸和黃芪，總重10kg，粉碎至10-120目，得當歸粉和黃芪粉；(2)超臨界CO2萃取:取步驟(I)所得的當歸粉，采用超臨界CO2萃取裝置進行萃取，當分離釜I溫度為50°C，萃取釜溫度為5°C時，打開CO2儲氣罐，對萃取釜進行加壓，至壓力為35MPa，調(diào)節(jié)CO2流速為15L/h，保持萃取釜的壓力35MPa和溫度5°C，萃取2h，即得當歸揮發(fā)油和當歸藥渣；( 3 )提取:將步驟(I)所得的黃芪粉和步驟(2 )所得的當歸藥渣混合，得混合物，于混合物中按重量體積比為1:10添加體積分數(shù)為80%的乙醇溶液中浸泡2h，再在85°C溫度下煎煮2h，過濾，再于濾渣中按重量體積比為1:9添加體積分數(shù)為60%的乙醇溶液中浸泡2h，再在85°C溫度下煎煮2h，過濾，再于濾渣中按重量體積比為1:9添加體積分數(shù)為40%的乙醇溶液中浸泡2h，再在85°C溫度下煎煮2h合并3次濾液，并于壓力為20kPa，溫度為20°C的條件下，減壓濃縮20min，至無乙醇味，得濃縮液；(4)柱分離:將步驟(3)所得的濃縮液趁熱經(jīng)400目濾網(wǎng)過濾，得澄清濾液，將濾液依次通過由AB-8大孔吸附樹脂和D280陰離子交換樹脂組成的兩節(jié)壓力為0.7Mpa的高壓串聯(lián)樹脂，完成上樣，并收集未吸附液，其中，上樣量為原料(重量g):樹脂(重量g) =1:1，流速為 l/10BV/min ；(5)洗脫:先用IOBV的水洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得多糖溶液；再用8BV的體積分數(shù)為50%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得總皂苷溶液；再用8BV的體積分數(shù)為80%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，即得總黃酮溶液；再用IOBV的體積分數(shù)為70%的氨乙醇液洗脫陰離子交換樹脂，得阿魏酸及其極性相近的成分的溶液；(6)真空冷凍干燥:先將步驟(4)所得的未吸附液和步驟(5)所得的多糖溶液混合，得總多糖溶液；再將所述總多糖溶液、步驟(5)所得的總皂苷溶液、總黃酮溶液和阿魏酸及其極性相近的成分的溶液，于真空度為0.09Mpa，溫度80°C條件下濃縮至初體積的20%為止，得濃縮液；將所得濃縮液于真空度為18pa，溫度為_50°C冷凍干燥，即得總多糖粗品、總皂苷粗品、總黃酮粗品和阿魏酸粗品。經(jīng)檢測，本實施例中當歸揮發(fā)油58%，總多糖粗品中總多糖的含量為53%、總皂苷粗品中總皂苷的含量為56%、總黃酮粗品中總黃酮的含量為62%、阿魏酸粗品中阿魏酸的含量為52%。實施例4當歸補血湯有效部位提取物對血虛動物模型的影響。I受試藥物與儀器下述當歸揮發(fā)油、阿魏酸、總黃酮、總皂苷和總多糖是由實施例2制得；環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號010312)。2實驗動物KM 小鼠，雄性，體重(20 ± 2 ) g，SPF 級。3實驗方法

取雄性小鼠70只，隨機均勻分成7組，分別是當歸揮發(fā)油組、阿魏酸組、總黃酮組、總皂苷組、總多糖組、模型對照組和正常對照組。各試藥均由0.5%CMC-Na配制而成。空白對照組外，其余7組造血虛模型。其中，受試用藥組以高劑量灌胃當歸補血湯5個有效部位，灌胃劑量見表I。正常對照組灌胃同體積生理鹽水，每天給藥I次，連續(xù)10d。造模方法為于給藥的第I日，每鼠尾部放血0.5ml/20g，于第2、4、6、8d先禁食不禁水12h，對造模的7組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺0.8,0.4,0.4,0.4mg/10g，正常對照組注射同體積生理鹽水。于第9天斷尾取血測血常規(guī)及凝血時間，第10天以0.4%戊巴比妥鈉溶液麻醉后腹主動脈取血，檢測各項指標。從第二天開始，每天稱量小鼠體質(zhì)量。觀察指標:動物一般體征，血常規(guī)。4實驗結(jié)果實驗結(jié)果顯示，動物從第三次注射環(huán)磷酰胺開始，模型對照組動物開始出現(xiàn)毛色暗淡、豎毛、懶動、少食、少飲、體質(zhì)量下降、唇爪蒼白、顫抖、閉目甚至瞎眼等現(xiàn)象。各給藥組狀態(tài)稍好。紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞比容(HCT)、血小板(PLT)值是貧血的主要診斷指標。與正常組比較，模型組RBC、HGB和HCT均顯著減少，處于貧血狀態(tài)。與模型組比較，試藥組能明顯提高貧血小鼠RBC、HGB和HCT，參見表I。給藥劑量:根據(jù)《內(nèi)外傷辯惑論》記載，當歸補血湯用量及現(xiàn)在臨床用量決定用量，黃芪30克，當歸6克。按臨床等效劑量計算方法:臨床用量/正常成人體重*10*提取物的提取率=(g/kg)表I當歸補血湯有效部位對環(huán)磷酰胺所致血虛小鼠血常規(guī)檢查結(jié)果()
權(quán)利要求
1.一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位的同步制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)粉碎:取當歸和黃芪，粉碎至10-120目，得當歸粉和黃芪粉； (2)超臨界CO2萃取:取步驟(I)所得的當歸粉，超臨界CO2萃取，得當歸揮發(fā)油和當歸藥渣； 所述超臨界CO2萃取的技術(shù)參數(shù)為: 分離釜I溫度為40-50°C，萃取釜溫度為3-5°C，加壓至25-35MPa，調(diào)節(jié)CCV流速為10-14L/h，保持萃取釜的壓力和溫度，萃取1.5-2.5h ； (3 )提取:將步驟(I)所得的黃芪粉和步驟(2 )所得的當歸藥渣混合，得混合物，于混合物中按重量體積比為1:6-10添加體積分數(shù)為20%-95%的乙醇溶液，提取1-5次，過濾，合并濾液，并減壓濃縮至無乙醇味，得濃縮液；所述提取的方法為:將混合物浸泡于乙醇溶液中2_3h，再于 75-100°C下煎煮 l_2h ； (4)柱分離:將步驟(3)所得的濃縮液經(jīng)300-400目濾網(wǎng)過濾，得濾液，將濾液依次通過由大孔吸附樹脂和陰離子交換樹脂組成的壓力為0.2-0.SMpa的高壓串聯(lián)樹脂，收集未吸附液； (5)洗脫:先用6-10BV的水洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得多糖溶液；后用6-10BV的體積分數(shù)為20-50%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總皂苷溶液；再用6-10BV的體積分數(shù)為70-95%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總黃酮溶液；最后用6-10BV的體積分數(shù)為50-70%的氨乙醇溶液洗脫陰離子交換樹脂，得阿魏酸及其極性相近的成分的溶液； (6)真空冷凍干燥:先將步驟(4)所得的未吸附液和步驟(5)所得的多糖溶液混合，得總多糖溶液；再分別將所得的總多糖溶液、步驟(5)所得的總皂苷溶液、總黃酮溶液和阿魏酸及其極性相近的成分 的溶液，濃縮，冷凍干燥，即得總多糖粗品、總皂苷粗品、總黃酮粗品和阿魏酸粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同步制備方法，其特征在于，步驟(2)所述超臨界CO2萃取的技術(shù)參數(shù)為:分離釜I溫度為45°C，萃取釜溫度為4°C，加壓至30MPa，調(diào)節(jié)CO2流速為12L/h，保持萃取釜的壓力和溫度，萃取2h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同步制備方法，其特征在于，步驟(5)所述洗脫為:先用IOBV的水洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得多糖溶液；后用8BV的體積分數(shù)為40%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總皂苷溶液；再用8BV的體積分數(shù)為80%的乙醇溶液洗脫大孔吸附樹脂，收集洗脫液，得總黃酮溶液；最后用8BV的體積分數(shù)為60%的氨乙醇溶液洗脫陰離子交換樹脂，得阿魏酸及其極性相近的成分的溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同步制備方法，其特征在于，步驟(3)所述提取的方法為:于混合物中按重量體積比為1:6-10添加體積分數(shù)為60-95%的乙醇溶液，浸泡2-3h，于溫度為78-100°C下煎煮l_2h，取濾渣，再于所述濾渣中按重量體積比為1:6-10添加體積分數(shù)為20-60%的乙醇溶液，浸泡2-3h，于溫度為78-100°C狀態(tài)下煎煮l_2h，過濾，合并2次濾液，并濃縮至無乙醇味，得濃縮液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的同步制備方法，其特征在于，步驟(3)所述提取的方法為:于混合物中按重量體積比為1:8添加體積分數(shù)為70%的乙醇溶液，浸泡2-3h，于溫度為80°C下煎煮2h，取濾渣，再于所述濾渣中按重量體積比為1:8添加體積分數(shù)為40%的乙醇溶液，浸泡2-3h，于溫度為80°C下煎煮2h，過濾，合并2次濾液，并濃縮至無乙醇味，得濃縮液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同步制備方法，其特征在于，步驟(3)所述減壓濃縮中壓力為20-100kPa，溫度為20-80°C，時間為20-120min ;步驟(6)所述濃縮中真空度為0.06-0.1Mpa，溫度為70-90°C，時間為40_180min，所述的冷凍干燥中真空度小于20pa，冷凍溫度為_45°C _60°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同步制備方法，其特征在于，步驟(4)所述大孔吸附樹脂型號為D101、HPD-100、XDA-5或AB-8 ;所述陰離子交換樹脂型號為D280。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的同步制備方法制得的中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位，其特征在于，總多糖粗品中總多糖的含量為50-60%、總皂苷粗品中總皂苷的含量為50-60%、總黃酮粗品 中總黃酮的含量為50-68%、阿魏酸粗品中阿魏酸的含量為50-60%。
9.權(quán)利要求8所述的中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位在制備治療貧血、白細胞減少癥、原發(fā)性血小板減少性紫癜、痹證或水腫藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥復(fù)方當歸補血湯有效部位及其同步制備方法和應(yīng)用，方法如下當歸和黃芪粉碎；當歸粉超臨界CO2萃取得揮發(fā)油和藥渣；將黃芪粉和藥渣混合并用乙醇溶液提取，過濾濃縮得濃縮液；將其過濾，所得濾液通過大孔樹脂和陰離子交換樹脂；用水洗脫大孔樹脂，得多糖溶液；再分別用20-50%和70-95%的乙醇溶液洗脫大孔樹脂，得總皂苷溶液和總黃酮溶液；再用50-70%的氨乙醇液洗脫陰離子交換樹脂，得總阿魏酸溶液；將所得總多糖溶液、總皂苷溶液、總黃酮溶液和總阿魏酸溶液，冷凍干燥，即可。該制備方法簡便，有效避免單一提取的資源浪費，且所得的有效部位均有改善血虛癥狀的作用。
文檔編號A61K36/481GK103169761SQ20131012382
公開日2013年6月26日 申請日期2013年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月10日
發(fā)明者李衛(wèi)民, 張靜, 張娟, 高英 申請人:廣州中醫(yī)藥大學