專(zhuān)利名稱(chēng)：一種神香草總黃酮提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥材的提取，該方法尤其適用于神香草總黃酮提取及制備。
背景技術(shù)：
神香草是維吾爾醫(yī)常用藥材，維吾爾名為“祖發(fā)”，是唇形科植物硬尖神香草(Hyssopus cuspidatus Boriss.)或同屬植物歐神香草(Hyssopus officinalis L.)的干燥全草，收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)》(烏魯木齊新疆科技衛(wèi)生出版社，1999年)、《中華本草 維吾爾藥卷》(上海上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005年)、《維吾爾藥志》(上冊(cè))(烏魯木齊新疆科技衛(wèi)生出版社，1999年)。在《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)》中記載神香草成熟及清除異常粘液質(zhì)，促進(jìn)機(jī)體自然隨和，止咳化痰，平喘利肺，用于胸肺粘稠性頑疾，頭痛胸痛，氣喘氣短，胸肋痛疼，久咳痰多。 在《中華本草 維吾爾藥卷》中記載神香草生干生熱，溫肺平喘，祛寒止咳，燥濕祛痰，發(fā)汗解毒，消炎退腫，主治濕寒性和粘液質(zhì)性呼吸器官疾病，如寒性哮喘，咳嗽感冒，濕性痰多，乃孜來(lái)毒液流竄胸肺，胸膜炎，氣管炎，肺炎及水腫。作為一種重要的芳香植物，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，神香草全草含揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、多糖類(lèi)等化學(xué)成分,具有抑制血糖升高、止咳、祛痰、平喘、抑菌、解痙、抗氧化等作用，前期研究也發(fā)現(xiàn)，神香草乙酸乙酯萃取部位具有抗炎、平喘、止咳、祛痰作用，明顯抑制哮喘大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞(Ly)、嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)、中性粒細(xì)胞(Neu)的百分比、內(nèi)皮素-I (ET-I)水平及血清中的內(nèi)皮素-I(ET-1)、白介素-2 (IL-2)、白介素-6 (IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-a )水平(P < 0.05)，并以上作用呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)性趨勢(shì)(P < 0. 05)。由此研究認(rèn)為，神香草乙酸乙酯萃取部位能通過(guò)抑制IL-2、IL-6、ET-UTNF-a、Ly、Eos、Neu分泌，減輕哮喘炎癥反應(yīng)。至今，尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)神香草總黃酮的制備方法、藥理活性及其藥物用途方面的文獻(xiàn)。本發(fā)明采用乙醇提取、大孔吸附樹(shù)脂富集純化方法，制備的神香草總黃酮含量不低于65%，制備的神香草總黃酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘作用，該制備方法安全簡(jiǎn)便，可重復(fù)性好，無(wú)環(huán)境污染，適用于規(guī)?；a(chǎn)，具有良好的市場(chǎng)銷(xiāo)售前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供神香草總黃酮提取物具有抗炎、祛痰、止咳和平喘作用，可作為制備治療感冒、肺炎、支氣管炎、哮喘的藥物原始材料的用途。本發(fā)明目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種神香草總黃酮提取物及其制備方法和用途，分步驟實(shí)施步驟I取干燥、粉碎的神香草，置于IOL圓底燒瓶中，采用體積百分比濃度為50-95%乙醇/水進(jìn)行提取，乙醇/水是神香草的5-15倍重量，水浴加熱至40-80°C，回流提取1-5次，時(shí)間為l_3h，提取后的濾液經(jīng)減壓濃縮至0.25-1. Og生藥/mL，其壓力為-0. 08MPa，溫度30-50°C，得神香草提取液備用；步驟2將步驟I神香草提取液，加1-3倍量水稀釋、靜置12_24h，在-0. 08MPa真空抽慮壓力下抽濾，除去不溶性物質(zhì),濾液經(jīng)濃縮至0. 25-1. Og生藥/mL時(shí)備用；步驟3將步驟2神香草提取液與大孔吸附樹(shù)脂以1:1-1:5重量比實(shí)施吸附，樹(shù)脂柱徑高比為1:1-1:6，上樣液黃酮濃度為1.0-5. Omg/mL，上樣流速為2_6BV/h ;吸附后先用水洗脫大孔吸附樹(shù)脂2-8BV，洗脫流速2-6BV/h ;在將水洗脫液棄去后，用體積百分比濃度為30-95%乙醇/水洗脫2-10BV，流速為2-6BV/h ;收集乙醇洗脫液，經(jīng)RE52-AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，其壓力-0. 08MPa,溫度30-35°C，再經(jīng)DZF-6050B真空干燥箱干燥，經(jīng)DFY-500搖式高速萬(wàn)能粉粹機(jī)粉碎至粉末，即得神香草總黃酮；其中選用的神香草為唇形科植物硬尖神香草或同屬植物歐神香草的干燥全草，經(jīng)粉碎過(guò)20目篩后使用；其中使用的大孔吸附樹(shù)脂為AB-8或D-IOl或HPD-300或HPD-600樹(shù)脂。所述總黃酮制備方法，所得神香草總黃酮含量不低于65%。
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所述所得神香草總黃酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘作用。所述所得神香草總黃酮用于制備治療感冒、肺炎、支氣管炎、哮喘的藥物。本發(fā)明選用神香草為唇形科植物硬尖神香草(Hyssopus cuspidatus Boriss.)或同屬植物歐神香草(Hyssopus officinalis L.)的干燥全草,經(jīng)粉碎,采用濃度為50 80%乙醇/水進(jìn)行提取，采用50 80%乙醇/水洗脫2 10BV，采用非極性或弱極性大孔樹(shù)脂，獲取神香草總黃酮含量不低于65%,所述的神香草總黃酮可作為制備治療感冒、肺炎、支氣管炎、哮喘的藥物的原始材料，提取方法安全簡(jiǎn)便，可重復(fù)性好，無(wú)環(huán)境污染，適用于規(guī)?；a(chǎn)，彰顯技術(shù)進(jìn)步。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例I選用的神香草藥材為干燥全草，經(jīng)粉碎過(guò)20目篩后使用；將過(guò)篩的神香草置于IOL圓底燒瓶中，采用體積百分比濃度為60%乙醇/水進(jìn)行提取，乙醇/水是神香草藥材的6倍重量，水浴加熱至70°C，回流提取I次，提取時(shí)間為2h，提取液過(guò)濾，濾液減壓濃縮至
I.Og生藥/mL，得到神香草提取液；將上樣神香草提取液，加I倍量水稀釋、靜置12h，抽濾除去不溶性物質(zhì)，濾液濃縮至I. Og生藥/mL ;將中樣神香草提取液，經(jīng)HPD-300大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，神香草與大孔吸附樹(shù)脂重量比為1:1，上樣液黃酮濃度為1.28mg/mL，上樣流速為3BV/h，樹(shù)脂柱徑高比為1:4 ;吸附后先用水洗脫大孔吸附樹(shù)脂4BV，洗脫流速4BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積百分比濃度為60%乙醇/水洗脫6BV，流速為3BV/h，收集乙醇洗脫液，經(jīng)RE52-AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，其壓力-0.08MPa，溫度35° C，再經(jīng)DZF-6050B真空干燥箱干燥，經(jīng)DFY-500搖式高速萬(wàn)能粉粹機(jī)粉碎至粉末，即得神香草總黃酮，其總黃酮含量為65. 6%。實(shí)施例2選用的神香草藥材為干燥全草，經(jīng)粉碎過(guò)20目篩后使用；將過(guò)篩的神香草置于IOL圓底燒瓶中，采用體積百分比濃度為70%乙醇/水進(jìn)行提取，乙醇/水是神香草藥材的8倍重量，水浴加熱至80°C，回流提取3次，提取時(shí)間為I小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液減壓濃縮至0. 25g生藥/mL，得到神香草提取液；將上樣神香草提取液，加3倍量水稀釋、靜置18h，抽濾除去不溶性物質(zhì)，濾液濃縮至0. 25g生藥/mL ;將中樣神香草提取液，經(jīng)AB-8大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，神香草與大孔吸附樹(shù)脂重量比為1:4，上樣液黃酮濃度為2. 56mg/mL，上樣流速為4BV/h，樹(shù)脂柱徑高比為1:5 ;吸附后先用水洗脫大孔吸附樹(shù)脂5BV，洗脫流速5BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積百分比濃度為70%乙醇/水洗脫8BV，流速為4BV/h，收集乙醇洗脫液，經(jīng)RE52-AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，其壓力-0. 08MPa,溫度32° C，再經(jīng)DZF-6050B真空干燥箱干燥，，經(jīng)DFY-500搖式高速萬(wàn)能粉粹機(jī)粉碎至粉末，即得神香草總黃酮，其總黃酮含量為 66. 7%o實(shí)施例3選用的神香草藥材為干燥全草，經(jīng)粉碎過(guò)20目篩后使用；將過(guò)篩的神香草置于IOL圓底燒瓶中，采用體積百分比濃度為75%乙醇/水進(jìn)行提取，乙醇/水是神香草藥材的10倍重量，水浴加熱至60°C，回流提取2次，提取時(shí)間為3小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液減壓濃縮至0. 5g生藥/mL，得到神香草提取液；將上樣神香草提取液，加2倍量水稀釋、靜置24h，抽 濾除去不溶性物質(zhì)，濾液濃縮至0. 5g生藥/mL ;將中樣神香草提取液，經(jīng)HPD-600大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，神香草與大孔吸附樹(shù)脂重量比為1:6，上樣液黃酮濃度為3. 84mg/mL，上樣流速為5BV/h，樹(shù)脂柱徑高比為1:6 ;吸附后先用水洗脫大孔吸附樹(shù)脂6BV，洗脫流速6BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積百分比濃度為75%乙醇/水洗脫9BV，流速為5BV/h，收集乙醇洗脫液，經(jīng)RE52-AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，其壓力-0. 08MPa,溫度30° C，再經(jīng)DZF-6050B真空干燥箱干燥，，經(jīng)DFY-500搖式高速萬(wàn)能粉粹機(jī)粉碎至粉末，即得神香草總黃酮，所得的神香草總黃酮含量為65. 2%。本方法選用的AB-8、D-IOI大孔吸附樹(shù)脂由南開(kāi)大學(xué)化工廠生產(chǎn)；HDP_300、HDP-600由滄州寶恩化工有限公司提供；DTC-221真空抽慮裝置由日本VLVAC公司提供；RE52-AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀由上海本波儀器有限公司提供；DZF-6050B真空干燥箱由上海齊欣科學(xué)儀器有限公司提供；DFY-500搖式高速萬(wàn)能粉粹機(jī)由溫嶺市林大機(jī)械有限公司提供。本發(fā)明方法獲取神香草總黃酮的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，具有良好的抗炎、止咳、祛痰、平喘作用，能明顯降低哮喘模型大鼠肺泡灌洗液(BLAF)TFG-P I水平、細(xì)胞總數(shù)及Ly、Eos、Neu百分率，明顯改善肺組織病理學(xué)改變。I)神香草總黃酮對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(抗炎作用)取昆明種小鼠50只，體重(20 士 2)g，雌雄各半，隨機(jī)分成5組空白對(duì)照組(0. 9%生理鹽水)，陽(yáng)性對(duì)照組(急支糖漿,5. Og/kg)、神香草總黃酮高劑量組(0. 8g/kg)、神香草總黃酮中劑量組(0. 4g/kg)、神香草總黃酮低劑量組(0. 2g/kg);灌胃給藥I次/日，連續(xù)7d，灌胃體積均為0. 2mL/10g，末次給藥后30min，各組小鼠均在小鼠右耳前、后面均勻涂二甲苯20 y L致炎，Ih后頸椎脫白處死小鼠，沿耳廓基線(xiàn)剪下兩耳，用直徑9_打孔器分別在兩耳的同一部位打下圓耳片，精密稱(chēng)重，以左右耳重量差為腫脹度，以此判斷神香草總黃酮對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響；耳腫脹度(mg)=右耳片重一左耳片重；腫脹抑制率(％)=(空白對(duì)照組平均腫脹度一給藥組平均腫脹度)/空白對(duì)照組平均腫脹度X 100% ；實(shí)驗(yàn)結(jié)果，致炎后各組小鼠右耳立刻出現(xiàn)高度紅腫現(xiàn)象，陽(yáng)性對(duì)照組和三個(gè)不同劑量的神香草總黃酮給藥組對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用(P〈0. 05)，三個(gè)不同劑量的神香草總黃酮給藥組腫脹抑制率呈明顯的劑量依賴(lài)關(guān)系，抑制作用隨劑量的增加而增加(p〈0. 05)，見(jiàn)表I。表I神香草總黃酮對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響( + * )
權(quán)利要求
1.一種神香草總黃酮提取物及其制備方法和用途，其特征在于分步驟實(shí)施 步驟I取干燥、粉碎的神香草，置于IOL圓底燒瓶中，采用體積百分比濃度為50-95%乙醇/水進(jìn)行提取，乙醇/水是神香草的5-15倍重量，水浴加熱至40-80°C，回流提取1-5次，時(shí)間為l_3h，提取后的濾液經(jīng)減壓濃縮至0. 25-1. Og生藥/mL，其壓力為-0. 08MPa，溫度30-50°C，得神香草提取液備用； 步驟2將步驟I神香草提取液，加1-3倍量水稀釋、靜置12-24h，在-0. 08MPa真空抽慮壓力下抽濾，除去不溶性物質(zhì),濾液經(jīng)濃縮至0. 25-1. Og生藥/mL時(shí)備用； 步驟3將步驟2神香草提取液與大孔吸附樹(shù)脂以1:1-1:5重量比實(shí)施吸附，樹(shù)脂柱徑高比為1:1-1:6，上樣液黃酮濃度為I. 0-5. Omg/mL，上樣流速為2_6BV/h ;吸附后先用水洗脫大孔吸附樹(shù)脂2-8BV，洗脫流速2-6BV/h ;在將水洗脫液棄去后，用體積百分比濃度為30-95%乙醇/水洗脫2-10BV，流速為2-6BV/h ;收集乙醇洗脫液，經(jīng)RE52-AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃 縮，其壓力-0. 08MPa,溫度30-35°C，再經(jīng)DZF-6050B真空干燥箱干燥，經(jīng)DFY-500搖式高速萬(wàn)能粉粹機(jī)粉碎至粉末，即得神香草總黃酮； 其中選用的神香草為唇形科植物硬尖神香草或同屬植物歐神香草的干燥全草，經(jīng)粉碎過(guò)20目篩后使用； 其中使用的大孔吸附樹(shù)脂為AB-8或D-IOl或HPD-300或HPD-600樹(shù)脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述總黃酮制備方法，其特征在于所得神香草總黃酮含量不低于65%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述總黃酮用途，其特征在于所得神香草總黃酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述總黃酮用途，其特征在于所得神香草總黃酮用于制備治療感冒、肺炎、支氣管炎、哮喘的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種神香草總黃酮提取物及其制備方法和用途，它是將維吾爾藥神香草全草經(jīng)含水乙醇提取，再經(jīng)大孔樹(shù)脂富集得到神香草總黃酮，其神香草總黃酮提取物中總黃酮含量不低于65%。本方法提供的神香草總黃酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘等作用，以神香草總黃酮為原料，添加不同藥物賦形劑制備的制劑可以作為治療感冒、肺炎、支氣管炎、哮喘的藥物。本制備方法安全簡(jiǎn)便，可重復(fù)性好，無(wú)環(huán)境污染，適用于規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102961439SQ20121039911
公開(kāi)日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月18日
發(fā)明者阿不都熱依木·玉蘇甫, 哈木拉提·吾甫爾, 麥合蘇木·艾克木, 安尼瓦爾·托乎提 申請(qǐng)人:新疆醫(yī)科大學(xué)