專(zhuān)利名稱(chēng)：一種納米復(fù)方麝香注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種納米復(fù)方麝香注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米中藥主要是指運(yùn)用納米技術(shù)制造的，粒徑小于100納米的中藥有效成分、有效部位、原藥及復(fù)方制劑。納米中藥的制備是研究納米中藥最基礎(chǔ)的，也是最重要的問(wèn)題。將納米技術(shù)引入中藥的研究時(shí)，必須考慮中藥組方的多樣性、中藥成分的復(fù)雜性，例如中藥單味藥可分為礦物藥、植物藥、動(dòng)物藥和菌物藥等，中藥的有效部位和有效成分又包括無(wú)機(jī)化合物和有機(jī)化合物、水溶性成分和脂溶性成分等。因此，針對(duì)不同的藥物，在進(jìn)行納米化時(shí)必須采用不同的技術(shù)路線(xiàn)。納米中藥與中藥新制劑關(guān)系十分密切，如何在中藥理論的指導(dǎo)下進(jìn)行納米中藥新制劑的研究，將中藥制成高效、速效、長(zhǎng)效、計(jì)量小、低毒、服用方便的現(xiàn)代制劑，也是進(jìn)行中藥納米化時(shí)必須考慮的問(wèn)題。
目前，納米技術(shù)在中藥研究中存在的問(wèn)題也不能忽視的。第一，納米中藥的制備困難我國(guó)雖已制備一些納米級(jí)的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復(fù)雜，不同的成分由于其作用部位、作用機(jī)制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時(shí)納米中藥應(yīng)該有它自己的一套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其生產(chǎn)規(guī)范化。第二，中藥在納米級(jí)粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團(tuán)聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩(wěn)定性帶來(lái)很大的困難。
現(xiàn)代中藥的研究就是要在繼承中藥傳統(tǒng)的基礎(chǔ)上，充分利用現(xiàn)代科技手段，使中藥具有先進(jìn)的生產(chǎn)工藝和現(xiàn)代劑型，做到“有效、安全、可控”，將納米技術(shù)應(yīng)用于中藥領(lǐng)域是現(xiàn)代中藥發(fā)展的重要方向之一。納米中藥一般不是簡(jiǎn)單地將中藥材進(jìn)行粉碎至納米量級(jí)，而是針對(duì)組成中藥方劑的某味藥的有效部位甚至是有效成分進(jìn)行納米技術(shù)加工處理，賦予傳統(tǒng)中藥以新的功能，如提高生物利用度，增強(qiáng)靶向性；降低毒副作用；呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥的適應(yīng)證；豐富中藥的劑型選擇；減少用藥量，節(jié)省中藥資源等。
同傳統(tǒng)中藥相比，納米中藥具有以下特點(diǎn)①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適應(yīng)癥，中藥加工至納米尺寸時(shí)，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給藥途徑。
徐輝碧等檢索了1998年～2000年美國(guó)專(zhuān)利中涉及納米科技的專(zhuān)利，發(fā)現(xiàn)該類(lèi)專(zhuān)利與生物醫(yī)學(xué)相關(guān)的專(zhuān)利占總數(shù)的80％以上，楊孟君在2001年一年內(nèi)申請(qǐng)了940多件納米中藥的專(zhuān)利，但其申請(qǐng)的大部分都是中藥原料藥進(jìn)行納米粉碎，其專(zhuān)利實(shí)用性不強(qiáng)。
目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術(shù)對(duì)少數(shù)成分比較明確的單體有效成分進(jìn)行納米處理制成納米制劑，或?qū)⒃纤幹苯臃鬯槌杉{米級(jí)，對(duì)大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因?yàn)橹兴幱行С煞趾陀行Р课惶貏e是中藥復(fù)方中有效部位本身就是一個(gè)“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個(gè)難題，而且由于中藥成分比較復(fù)雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術(shù)是醫(yī)藥科研工作者的重要研究課題。
復(fù)方麝香注射液《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》(經(jīng)絡(luò)肢體腦系分冊(cè))是以麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲、冰片、薄荷腦為原料制成的注射液，具有豁痰開(kāi)竅、醒腦安神功效，用于痰熱內(nèi)閉所致的中風(fēng)昏迷；其主藥有效成分為藥材中的揮發(fā)性成分。自上市以來(lái)，在臨床上雖然取得了一定的治療效果，但是存在一個(gè)很大的問(wèn)題，即藥物透過(guò)血腦屏障的量很小，很難達(dá)到有效的血藥濃度，所以治療效果并不是很理想。制劑中的有效成分在水中的溶解性很差，因而加入了大量的聚山梨酯80作為增溶劑，但是聚山梨酯80的增溶效果很有限，所以有效期內(nèi)制劑很容易產(chǎn)生渾濁和沉淀而變質(zhì)；增溶劑的大量使用使得制劑在治療過(guò)程中伴有嚴(yán)重的不良反應(yīng)。所以，提高復(fù)方麝香注射液的療效的同時(shí)，增強(qiáng)其穩(wěn)定性，降低其不良反應(yīng)的發(fā)生，是急待解決的問(wèn)題。
在專(zhuān)利檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)納米復(fù)方麝香注射制劑的任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了提高現(xiàn)有復(fù)方麝香注射液的療效，本發(fā)明研究人員經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，研制出一種納米復(fù)方麝香注射制劑。藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑能很好的透過(guò)血腦屏障，具有緩釋作用，療效比現(xiàn)有復(fù)方麝香注射液有顯著提高(對(duì)比實(shí)驗(yàn)見(jiàn)藥理實(shí)施例1)；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明納米注射制劑分散性好、包封率高、載藥量大；安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明具有很好的注射給藥安全性。
本發(fā)明的一個(gè)目的是公開(kāi)一種納米復(fù)方麝香注射制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是公開(kāi)上述納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一、制備方法(一)主藥的制備按照《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》(經(jīng)絡(luò)肢體腦系分冊(cè))中復(fù)方麝香注射液項(xiàng)下制法中的方法收集的麝香、廣藿香、郁金、石菖蒲的重蒸餾液，用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯萃取液回收醋酸乙酯后與冰片、薄荷腦混合得主藥。
(二)主藥混懸液的制備將主藥1重量份、脂質(zhì)5-7重量份和乳化劑1-2重量份，在通氮?dú)鈼l件下加熱至60-90℃，得到組分A；將吐溫-80 0.5重量份和泊洛沙姆0.5重量份的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在60-90℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得。
(三)制劑的制備水針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每支2ml的水針制劑。
輸液制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑。
粉針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入水溶性注射用藥用輔料，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑。
上述制備方法中，脂質(zhì)、乳化劑、助乳化劑統(tǒng)稱(chēng)為載體。
上述制備方法中，脂質(zhì)為三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、棕櫚酸中的一種或幾種；優(yōu)選為三棕櫚酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯。
上述制備方法中，乳化劑為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿的一種；優(yōu)選為蛋黃卵磷脂。
上述制備方法中，泊洛沙姆、吐溫-80為助乳化劑。
上述制備方法中，溫度優(yōu)選為70-80℃。
上述制備方法中，所述的穩(wěn)定劑為聚乙烯吡咯烷酮。
上述制備方法中，所述的水溶性注射用藥用輔料選自甘露醇、右旋糖苷、果糖、葡聚糖、乳糖中的一種或幾種。
雖然將主藥制備成納米藥物均可以增加透過(guò)血腦屏障的藥物的量，但是透過(guò)血腦屏障的藥物量要達(dá)到具有治療作用的血藥濃度，并不是將主藥簡(jiǎn)單的制備成納米藥物就可以達(dá)到的，因?yàn)檩d體在其中起著至關(guān)重要的作用。為了使得本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑中的主藥通過(guò)血腦屏障后達(dá)到有效血藥濃度并具有緩釋的作用，同時(shí)分散性好、包封率高、載藥量大，本發(fā)明研究人員對(duì)制備納米藥物中常用的脂質(zhì)、乳化劑、助乳化劑進(jìn)行了優(yōu)選。上述每種制備方法中所用的脂質(zhì)、乳化劑、助乳化劑的用量和種類(lèi)就是本發(fā)明研究人員優(yōu)選得到的，最終使得本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑具有很好的治療作用。
二、載體的優(yōu)選本發(fā)明優(yōu)選實(shí)驗(yàn)以藥物在腦脊液中的濃度為指標(biāo)。具體實(shí)驗(yàn)方法為取新西蘭家兔，體重約2.5kg，雌雄不限。靜脈注射給藥，于給藥后20分鐘抽取0.5ml腦脊液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取腦脊液0.25ml加溶劑混懸15min后，靜置15min，以10000r/min離心1min，取上清液20μl進(jìn)樣，以麝香酮為指標(biāo)，用氣相色譜法測(cè)定。
1、不同脂質(zhì)對(duì)主藥透過(guò)血腦屏障的影響制備一系列藥物，其中主藥、乳化劑、助乳化劑的種類(lèi)和用量相同，脂質(zhì)按下表的設(shè)計(jì)進(jìn)行安排。測(cè)定腦脊液中的藥物濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
為了比較方便，將測(cè)定的兔腦脊液中的最大濃度計(jì)為100％。
表1不同脂質(zhì)對(duì)主藥透過(guò)血腦屏障的影響

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同脂質(zhì)對(duì)主藥通過(guò)血腦屏障有影響，均可以增加主藥對(duì)于血腦屏障的通透性，其中三棕櫚酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯的作用效果最好。
2、不同乳化劑對(duì)主藥透過(guò)血腦屏障的影響制備一系列藥物，其中主藥、脂質(zhì)、助乳化劑的種類(lèi)和用量相同，乳化劑按下表的設(shè)計(jì)進(jìn)行安排。測(cè)定腦脊液中的藥物濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
為了比較方便，將測(cè)定的兔腦脊液中的最大濃度計(jì)為100％。
表2不同乳化劑對(duì)主藥透過(guò)血腦屏障的影響

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同乳化劑對(duì)主藥通過(guò)血腦屏障有影響，均可以增加主藥對(duì)于血腦屏障的通透性，其中蛋黃卵磷脂的作用效果最好。
3、不同助乳化劑對(duì)主藥透過(guò)血腦屏障的影響制備一系列藥物，其中主藥、脂質(zhì)、乳化劑的種類(lèi)和用量相同，助乳化劑按下表的設(shè)計(jì)進(jìn)行安排。測(cè)定腦脊液中的藥物濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
為了比較方便，將測(cè)定的兔腦脊液中的最大濃度計(jì)為100％。
表3不同助乳化劑對(duì)主藥透過(guò)血腦屏障的影響

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同助乳化劑對(duì)主藥通過(guò)血腦屏障有影響，均可以增加主藥對(duì)于血腦屏障的通透性，其中泊洛沙姆和吐溫-80的作用效果較好，當(dāng)泊洛沙姆∶吐溫-80為1∶1.0時(shí)作用效果最好。
4、乳化劑和助乳化劑用量比例的選擇本發(fā)明研究人員發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)、乳化劑和助乳化劑的用量比例對(duì)于粒徑有很大影響，因而對(duì)其進(jìn)行了優(yōu)選。
4.1乳化劑和助乳化劑用量比例的選擇制備一系列藥物，其中主藥、脂質(zhì)的種類(lèi)和用量相同，乳化劑和助乳化劑按下表的設(shè)計(jì)進(jìn)行安排。測(cè)定了500個(gè)粒徑，計(jì)算平均粒徑。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4乳化劑和助乳化劑用量比例的選擇

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，當(dāng)乳化劑和助乳化劑的用量比例為1∶0.5-1.0時(shí)，粒徑較小，當(dāng)乳化劑和助乳化劑的用量為1∶1.0時(shí)，粒徑最小。
4.2脂質(zhì)和乳化劑、助乳化劑用量比例的選擇制備一系列藥物，脂質(zhì)和乳化劑、助乳化劑的用量按下表的設(shè)計(jì)進(jìn)行安排。測(cè)定了500個(gè)粒徑，計(jì)算平均粒徑。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5脂質(zhì)和乳化劑、助乳化劑用量比例的選擇

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，當(dāng)脂質(zhì)和乳化劑、助乳化劑用量為5-7∶2時(shí)，粒徑較小。
5、溫度的選擇制備一系列藥物，主藥、脂質(zhì)、乳化劑、助乳化劑的種類(lèi)和用量相同，在不同溫度下制備藥物，以包封率為指標(biāo)。結(jié)果見(jiàn)表6。
表6溫度的選擇

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，當(dāng)溫度在60-90℃時(shí)，包封率較好；當(dāng)溫度為70-80℃時(shí)，包封率最好。
三、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國(guó)藥典》2005年版附錄XIX E“微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則”中的方法。H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關(guān)光譜儀(英國(guó)Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺(tái)式高速離心機(jī)；5批本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑由廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司提供。
1、形態(tài)觀(guān)察及粒徑將5批本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑在透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察，可見(jiàn)呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無(wú)粘連。根據(jù)光學(xué)顯微照片測(cè)定了500個(gè)，平均粒徑為36±14nm，最大粒徑為90nm，最小粒徑為10nm，且粒徑分布符合正態(tài)分布規(guī)律。
2、包封率和載藥量測(cè)定采用氣相色譜法，以麝香酮為指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定。
用下述公式計(jì)算包封率和載藥量包封率(％)＝(投藥量-游離藥物量)/投藥量×100％；載藥量(％)＝(投藥量-游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。
結(jié)果5批本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑的包封率為89.5-96.0％，載藥量為7-12％。
3、穩(wěn)定性考察將本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑分別置于小瓶?jī)?nèi)，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環(huán)境中放置，于0、1、2和3月觀(guān)測(cè)納米藥物的外觀(guān)、大小、再分散性等。
結(jié)果平均粒徑和顏色均未見(jiàn)明顯變化，不同條件下的藥物再分散性保持良好，無(wú)聚合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果見(jiàn)表7。
表7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

四、藥理實(shí)施例為了證實(shí)本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑的治療效果，本發(fā)明研究人員對(duì)本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑進(jìn)行了如下的藥效學(xué)試驗(yàn)。
麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲、冰片、薄荷腦均為市售的同一批。陽(yáng)性對(duì)照藥復(fù)方麝香注射液按照《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》(經(jīng)絡(luò)肢體腦系分冊(cè))中復(fù)方麝香注射液項(xiàng)下的制法制備而成；本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑按上述方法制備而成；規(guī)格相同，樣品均由廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司提供。
1、腦脊液中藥物濃度的測(cè)定取新西蘭家兔6只，體重約2.5kg，雌雄不限，分為2組，即復(fù)方麝香注射液組和本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑組。靜脈注射給藥，于給藥后不同時(shí)間抽取0.5ml腦脊液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取樣時(shí)間分別為注射藥物后的5min、10min、20min、30min、60min，120min。取腦脊液0.25ml加適量溶劑混懸15min后，靜置15min，以10000r/min離心1min，取上清液20μl進(jìn)樣，以麝香酮為指標(biāo)，用氣相色譜法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表8。
表8腦脊液中藥物濃度的測(cè)定


注1為復(fù)方麝香注射液，2為本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑?！?”表示檢測(cè)不出。
由以上實(shí)驗(yàn)可以看出，本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑通過(guò)血腦屏障的藥物量比現(xiàn)有復(fù)方麝香注射液有顯著提高，說(shuō)明本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑透過(guò)血腦屏障的藥物量明顯增加，提高了腦組織中的血藥濃度，因而會(huì)提高治療效果；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)同時(shí)表明，本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑在組織中具有很好的緩釋作用，因而本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑可以減少給藥次數(shù)。
2、對(duì)小鼠自由活動(dòng)的影響取小鼠30只，體重18-22g，雌雄各半，隨機(jī)分成對(duì)照組、復(fù)方麝香注射液和本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑組。給藥劑量為5g生藥/kg，腹腔注射給藥。給藥前分別測(cè)定各鼠5min內(nèi)活動(dòng)次數(shù)。給藥30min后測(cè)定各鼠5min內(nèi)的自由活動(dòng)次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9對(duì)小鼠的自由活動(dòng)的影響(X±S)

注與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與復(fù)方麝香注射液組比較#P＜0.05。
由上表實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑比復(fù)方麝香注射液有更好的藥理作用。
2、對(duì)小鼠驚厥作用的影響取小鼠30只，體重18-22g，雌雄各半，隨機(jī)分成對(duì)照組、復(fù)方麝香注射液和本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑組。給藥劑量為5g生藥/kg，腹腔注射給藥。用小鼠發(fā)生驚厥的只數(shù)的百分率作為觀(guān)察指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表10。
表10對(duì)小鼠驚厥的影響

注與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與復(fù)方麝香注射液組比較#P＜0.05。
由上表實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑比復(fù)方麝香注射液有更好的藥理作用。
五、安全性評(píng)價(jià)1、血管刺激性考察取健康大耳家兔5只，將動(dòng)物固定于兔箱內(nèi)，用酒精將皮膚消毒后，于右側(cè)耳緣靜脈處注射本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑，于另一側(cè)對(duì)應(yīng)部位注射同一體積的等滲葡萄糖水作為對(duì)照。每日注射1次，連續(xù)3次，觀(guān)察兔耳緣靜脈反應(yīng)。于末次給藥24h后將兔放血處死，取下兩耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm處，解剖取出靜脈，做組織切片檢查，觀(guān)察注射部位的反應(yīng)。
結(jié)果試驗(yàn)過(guò)程中，肉眼觀(guān)察兩耳靜脈注射部位處，未見(jiàn)紅腫、熱等刺激表現(xiàn)。表明給藥組切片部位組織形態(tài)無(wú)明顯差異，未見(jiàn)本品毒性所致的病理形態(tài)學(xué)改變(血管結(jié)構(gòu)正常，無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞損傷，無(wú)血栓形成及其他病理性變化)。
2、溶血毒性考察2％紅細(xì)胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時(shí)為止。將所得的紅細(xì)胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗(yàn)方法取試管6支，按下表中的配比量依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對(duì)照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開(kāi)始每隔15分鐘觀(guān)察1次，1小時(shí)后，每隔1小時(shí)觀(guān)察1次，共觀(guān)察2小時(shí)。
表11溶血試驗(yàn)設(shè)計(jì)

結(jié)果以第3試管為準(zhǔn)，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀(guān)察未見(jiàn)有紅細(xì)胞破裂，說(shuō)明本品不溶血，安全性好。
3、急性毒性實(shí)驗(yàn)取健康小鼠40只，體重18-22g，，雌雄各半。分為復(fù)方麝香注射液組、本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑組，尾靜脈給藥，給藥劑量按照人給藥劑量的50倍，按照體表面積換算成小鼠給藥劑量，每天給藥1次，連續(xù)7天，觀(guān)察小鼠死亡情況，記錄數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表12。
表12小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)

通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑具有很好的安全性。
六、制備實(shí)施例實(shí)施例1將麝香75g、廣藿香1kg、郁金1kg、石菖蒲1kg水蒸氣蒸餾得初餾液，再進(jìn)行重蒸餾，收集重蒸餾液，用等體積醋酸乙酯萃取5次，醋酸乙酯萃取液減壓同收醋酸乙酯后與冰片10g、薄荷腦7.5g混合，得到主藥。
實(shí)施例2將上述主藥、5倍量三硬脂酸甘油酯和1倍量大豆卵磷脂，在通氮?dú)鈼l件下加熱至60℃，得到組分A；將0.5倍量甘油和0.5倍量poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在60℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液。
實(shí)施例3將上述主藥、7倍量硬脂酸和2倍量蛋黃卵磷脂，在通氮?dú)鈼l件下加熱至90℃，得到組分A；將倍量0.5倍量甘油和0.5倍量poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在90℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液。
實(shí)施例4將上述主藥、6倍量三肉豆蔻酸甘油酯和1.5倍量磷脂酰膽堿，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80℃，得到組分A；將0.5倍量甘油和0.5倍量poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在80℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液。
實(shí)施例5將上述主藥、5倍量三棕櫚酸甘油酯和1倍量蛋黃卵磷脂，在通氮?dú)鈼l件下加熱至70℃，得到組分A；將0.5倍量甘油和0.5倍量poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在70℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液。
實(shí)施例6將上述主藥、6倍量單硬脂酸甘油酯和1.5倍量蛋黃卵磷脂，在通氮?dú)鈼l件下加熱至75℃，得到組分A；將0.5倍量甘油和0.5倍量poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在75℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液。
實(shí)施例7將上述主藥、7倍量Witepsol H35和1倍量磷脂酰膽堿，在通氮?dú)鈼l件下加熱至70℃，得到組分A；將0.5倍量甘油和0.5倍量poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在70℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液。
實(shí)施例8將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑聚乙烯吡咯烷酮，調(diào)pH值為5.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每支5ml的水針制劑5000支。
實(shí)施例9將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑聚乙烯吡咯烷酮，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑5000瓶。
實(shí)施例10將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入甘露醇和右旋糖苷，調(diào)pH值為6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑5000支。
實(shí)施例11將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入果糖、葡聚糖，調(diào)pH值為6.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑5000支。
權(quán)利要求
1.一種納米復(fù)方麝香注射制劑，其特征在于它是將麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲提取的揮發(fā)油與冰片、薄荷腦作為主藥配以載體制成納米級(jí)的主藥混懸液得到的注射制劑，其中主藥1重量份，載體為7-10重量份；其特征還在于，所述的納米級(jí)為10nm-90nm。
2.一種納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)主藥的制備按照《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》(經(jīng)絡(luò)肢體腦系分冊(cè))中復(fù)方麝香注射液項(xiàng)下制法中的方法收集的麝香、廣藿香、郁金、石菖蒲的重蒸餾液，用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯萃取液回收醋酸乙酯后與冰片、薄荷腦混合得主藥。(2)主藥混懸液的制備將主藥、脂質(zhì)和乳化劑，在通氮?dú)鈼l件下加熱至60-90℃，得到組分A；將吐溫-80和泊洛沙姆的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在60-90℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得。(3)制劑的制備水針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每支2ml的水針制劑。輸液制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑。粉針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入水溶性注射用藥用輔料，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的一種納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法，其特征在于所述的脂質(zhì)為三棕櫚酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的一種納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法，其特征在于所述的乳化劑為蛋黃卵磷脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的一種納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法，其特征在于所述的脂質(zhì)和乳化劑、助乳化劑之和的用量為5-7∶2。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的一種納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法，其特征在于所述的乳化劑和助乳化劑的用量為1∶0.5-1.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求2的一種納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法，其特征在于所述的助乳化劑為泊洛沙姆∶吐溫-80為1∶1。
8.根據(jù)權(quán)利要求2的一種納米復(fù)方麝香注射制劑的制備方法，其特征在于所述的溫度為70-80℃。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種納米復(fù)方麝香注射制劑及其制備方法；藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明納米復(fù)方麝香注射制劑能很好地透過(guò)血腦屏障，具有緩釋作用，且療效比現(xiàn)有注射制劑有顯著提高；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明制劑分散性好、包封率高、載藥量大；安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明制劑具有很好的注射給藥安全性。
文檔編號(hào)A61K35/55GK1891287SQ20051008296
公開(kāi)日2007年1月10日 申請(qǐng)日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月8日
發(fā)明者張晴龍 申請(qǐng)人:張晴龍