專利名稱：甘草苷在制備防治腦缺血疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及甘草苷在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，特別涉及甘草苷在制備防治腦缺血疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著生活水平的提高和生活節(jié)奏的加快，心腦血管疾病已成為威脅中老年人健康和長壽的第一號(hào)殺手。其中，腦血管疾病是人類三大致死原因之一，其致使患者出現(xiàn)嚴(yán)重的肢體殘疾，造成患者言語障礙，更嚴(yán)重的是造成患者血管性癡呆，給個(gè)人、家庭和社會(huì)帶來了種種不變。因此，尋找腦血管疾病防治方法成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。甘草為豆科植物烏拉爾甘草、脹果甘草或光果甘草的根及根莖。甘草性平，味甘，歸十二經(jīng)。在中醫(yī)上，甘草補(bǔ)脾益氣，滋咳潤肺，緩急解毒，調(diào)和百藥。甘草苷(Liquiritin)是甘草根莖中的藥效成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示，為白色粒狀結(jié)晶，能溶于甲醇、乙醇和乙酸乙酯，紫外吸收特征峰波長為249nm，具有抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護(hù)、抗抑郁及抗腫瘤等廣·泛的作用。但有關(guān)甘草苷防治腦血管疾病的研究還未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道(芮春蘭.國內(nèi)對(duì)甘草化學(xué)成分的研究進(jìn)展[J].中國校醫(yī)，2006,20(1) :105-106;楊云，卞廣興，呂秋軍.甘草苷對(duì)原代海馬神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)和營養(yǎng)作用[J].中國中藥雜志，2008，33 (8) :931-935;趙志宇，王衛(wèi)星，郭洪祝，等.甘草苷對(duì)抑郁模型大鼠體重及行為學(xué)的影響[J].中國心理衛(wèi)生雜志，2006,20(12) =787-790 ;劉睿婷，卞廣興，鄒莉波，等.甘草苷的神經(jīng)保護(hù)及對(duì)膽堿酯酶的抑制作用[J].中國新藥雜志，2008，17 (7) :574-580 ;王建國，周忠，劉海峰，等.甘草的活性成分及其在化妝品中的應(yīng)用[J].日用化學(xué)工業(yè)，2004,34((4) :249-251)。
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了甘草苷的新用途，即甘草苷在制備防治心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，特別是甘草苷在制備防治腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，包括但不限于腦缺血、腦缺氧、腦血栓、記憶功能障礙等腦血管疾病。本發(fā)明提供了一種包含甘草苷及常規(guī)藥用載體的藥物組合物，其特征是所述藥物組合物是采用常規(guī)或特殊制劑工藝制備而成的口服或非口服途徑方式給藥的制劑。本發(fā)明提供了預(yù)防或治療心腦血管疾病的方法，包括向心腦血管疾病患者給予甘草苷或前面所述藥物組合物。本發(fā)明提供的甘草苷可以長期應(yīng)用，具有明顯的預(yù)防或改善心腦損傷的功效，無明顯不良反應(yīng),成本低廉。
具體實(shí)施例方式心腦血管疾病是心血管病和腦血管病的總稱。常見的心血管病包括但不限于高血壓、高血壓性心臟病、冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心肌缺血、心率失常、肺心病及高脂血癥等；常見的腦血管疾病包括但不限于腦血栓、腦栓塞、腦中風(fēng)及腦溢血等。本發(fā)明提供了甘草苷在制備防治心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，特別是甘草苷在制備防治腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，包括但不限于腦缺血、腦缺氧、腦血栓、記憶功能障礙等腦血管疾病。本發(fā)明所述的甘草苷可以根據(jù)臨床需要，加入相應(yīng)藥用載體，以片劑、丸劑、顆粒齊IJ、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑、霜?jiǎng)?、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、口嚼劑或貼劑等制劑形式存在。
本發(fā)明所述的甘草苷可根據(jù)臨床需要，采用口服或非口服方式用藥，優(yōu)選口服給藥方式。本發(fā)明所述的甘草苷制劑采用口服方式用藥時(shí)，人用劑量優(yōu)選I-IOOOmg/人/日，其中更優(yōu)選為10-500mg/人/日，最優(yōu)選為50-100mg/人/日。本發(fā)明所述的甘草苷是從中藥甘草中提取分離獲得，可采用任何已公開文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄌ崛≈苽?趙祎鐳，師清芝，唐星.甘草中甘草酸和甘草苷的提取純化工藝研究[J].中國藥房，2009，20 (6) =426-429)。采用各種不同方法制備的甘草苷對(duì)本發(fā)明的用途沒有影響。以下結(jié)合實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不受限于該實(shí)施例。實(shí)施例I甘草苷抗單純性腦缺血作用I.材料和方法I. I實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成年雄性ICR小鼠，清潔級(jí)，體重25 30g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)前在北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理保健食品功能檢測(cè)中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房適應(yīng)環(huán)境一周。I. 2 試劑甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品天津尖峰天然產(chǎn)物公司(純度> 98% );依達(dá)拉奉南京先聲東元制藥有限公司；紅四氮唑(2, 3, 5-triphenyltetrazolium, TTC) :Sigma 公司。I. 3 儀器AR-2140型萬分之一電子天平梅特勒-托利多儀器有限公司；電熱恒溫水浴鍋北京市長風(fēng)儀器儀表公司。I. 4采用線栓法制備小鼠永久性腦缺血模型ICR小鼠被隨機(jī)分為六組，假手術(shù)組、模型組、依達(dá)拉奉組、甘草苷高、中、低劑量組，每組動(dòng)物9只，給藥劑量見表I。術(shù)前給藥3d，每天一次。假手術(shù)組及模型組灌胃給予溶劑0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液作為對(duì)照。ICR小鼠術(shù)前24h禁食，自由飲水。用4%水合氯醛(400mg/kg，ip)麻醉。將麻醉后的小鼠仰臥固定，頸部備皮，消毒皮膚，沿頸部中線切開皮膚，分離皮下筋膜及肌肉組織。手術(shù)顯微鏡下分離左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)及其頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)和頸外動(dòng)脈(ECA)分枝。根部結(jié)扎ECA。夾閉CCA和ICA。在CCA上開一小口，將魚線沿著CCA，穿過ICA和ECA分叉處進(jìn)入ICA。松開ICA，繼續(xù)將魚線插入到ICA顱內(nèi)段。自ICA起始部的插入長度約為I. 3cm,表明線的頭端已穿過大腦中動(dòng)脈起始部。結(jié)扎CCA和ICA。術(shù)中自熾燈加溫，維持小鼠肛溫約37°C。術(shù)后縫合傷口，動(dòng)物回籠。假手術(shù)組小鼠僅施行手術(shù)而不插入魚線。I. 5神經(jīng)功能缺陷評(píng)分腦缺血24h后，參照Longa的五分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評(píng)分0分正常，無神經(jīng)損傷癥狀；1分不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分提尾后向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分行走時(shí)向?qū)?cè)傾倒；4分不能自發(fā)行走或意識(shí)喪失。I. 6腦梗死范圍測(cè)定采用TTC染色法測(cè)定腦梗死范圍。將動(dòng)物斷頭后迅速取出完整大腦，冠狀切成
I.5mm的腦片，于0.5% TTC溶液中(以磷酸緩沖鹽溶液配制)37°C水浴中孵育30min。梗死組織呈白色，而周圍正常組織呈玫瑰紅色。然后在10%的中性甲醛溶液中固定。對(duì)每腦·片正反兩面進(jìn)行掃描，用圖像分析軟件積分求出梗死區(qū)和非梗死區(qū)面積。I. 7腦含水量的測(cè)定缺血24h后，將小鼠迅速斷頭取腦，用干濕法測(cè)腦組織含水量，在冰塊上迅速取腦，將取出的腦組織放在一個(gè)內(nèi)有生理鹽水濕潤的定性濾紙的培養(yǎng)皿中，以防水分蒸發(fā)，同時(shí)快速去掉腦皮質(zhì)表面的軟腦膜和凝血塊。用千分之一天枰準(zhǔn)確稱取腦重量，然后置于100°C烘箱24h后，再次稱重，以(I-干重/濕重)X 100%即為相對(duì)含水量。I. 8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間顯著性比較，樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)。*表示P < 0. 05，表明給藥組與模型組比較有顯著性差異廣表示P
<0.01，表明給藥組與模型組比較有極顯著性差異。2 結(jié)果2. I甘草苷對(duì)小鼠神經(jīng)功能缺陷、腦梗死范圍、腦含水量的影響表I甘草苷對(duì)小鼠神經(jīng)功能缺陷、腦梗死范圍、腦含水量的影響(s，n=9)
,Q| m 腦梗死范圍腦含水量組別神經(jīng)功能缺陷評(píng)分 ，、 /n、_(%)_(%)
假手術(shù)(T(T75.60 ±0.49**
模型2.44±0.5333.92±5.4282.90±0.72
依達(dá)拉奉 3 mg/kg1.67±0.5(T25.77±5.24w80.21±0.8(T
甘草苷 0.2 mg/kg1.89±0.7830.86±4_2382.44±0.97
甘草苷 10 mg/kg1.78±0.67*28.11±4.17*82.14±0.73*
甘草苷 200 mg/kgI. 56士0_ 53#23. 35±3. 83**79. 44土0.93**與模型組相比較，*表示P < 0. 05 **表示P < 0. 01從小鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分可見，假手術(shù)組小鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分為0，說明其腦功能完全正常，腦片TTC染色也顯示兩側(cè)大腦半球大小均一，無水腫現(xiàn)象。當(dāng)小鼠經(jīng)受24h缺血后，缺血側(cè)大腦出現(xiàn)明顯的梗死，神經(jīng)功能缺陷評(píng)分為2. 44±0. 53 ;腦梗死范圍為達(dá)(33. 92±5. 42) % ;腦含水量達(dá)(82. 90±0. 72) % 依達(dá)拉奉和甘草苷均具有改善神經(jīng)功能缺陷、縮小腦梗死面積和減少腦含水量作用，與模型組比較，具有顯著性差異。甘草苷高劑量組與模型組比較具有極顯著差異。上述實(shí)驗(yàn)表明甘草苷對(duì)單純性腦缺血具有明顯保護(hù)作用。實(shí)施例2甘草苷抗腦缺血再灌注作用I.材料和方法 I. I實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成年雄性Wistar大鼠,清潔級(jí),體重200 250g,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)前在北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理保健食品功能檢測(cè)中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房適應(yīng)環(huán)境一周。I. 2 試劑甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品天津尖峰天然產(chǎn)物公司(純度> 98% );依達(dá)拉奉南京先聲東元制藥有限公司；MDA、MP0、S0D、考馬斯亮藍(lán)試劑盒南京建成生物工程研究所。I. 3 儀器AR-2140型萬分之一電子天平梅特勒-托利多儀器有限公司；電熱恒溫水浴鍋北京市長風(fēng)儀器儀表公司；TGL 16M離心機(jī)湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司；MH-2微量振蕩器江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司；DY89-II型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)寧波新芝生物科技股份有限公司；酶標(biāo)儀美國Thermo公司。I. 4采用線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型Wistar大鼠被隨機(jī)分為六組，假手術(shù)組、模型組、依達(dá)拉奉組、甘草苷高、中、低劑量組，每組動(dòng)物9只，給藥劑量見表2。術(shù)前給藥5d，每天I次。假手術(shù)組及模型組灌胃給予溶劑0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液作為對(duì)照。用10%水合氯醒(350mg/kg, ip)麻醉Wistar大鼠。將動(dòng)物體溫維持在37°C。讓動(dòng)物仰臥固定，沿頸部中線切開皮膚及皮下組織。手術(shù)顯微鏡下分離左側(cè)頸總動(dòng)脈及其頸內(nèi)和頸外動(dòng)脈分枝。結(jié)扎頸外動(dòng)脈的小分枝及終末枝。夾閉頸總和頸內(nèi)動(dòng)脈。將預(yù)先用硅橡膠包裹的、直徑為0. 238mm的魚線插入頸外動(dòng)脈，穿過頸內(nèi)和頸外動(dòng)脈分叉處進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈。松開頸內(nèi)動(dòng)脈，繼續(xù)將魚線插入到頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段。當(dāng)感到明顯的插入阻力時(shí)，此時(shí)自頸內(nèi)動(dòng)脈起始部的插入長度約為I. 8 2cm，表明線的頭端已穿過大腦中動(dòng)脈起始部。將頸外動(dòng)脈殘端用絲線結(jié)扎，以防插線脫落。2h后抽出魚線予以再灌注22h。假手術(shù)組進(jìn)線深度IOmm左右，不阻塞大腦中動(dòng)脈。1. 5腦組織MDA含量、MPO及SOD活性測(cè)定大鼠在腦缺血2h再灌注22h后斷頭處死，在冰盤上快速取腦。稱重，按I : 9(W/V)加入冰冷生理鹽水，制成10%的腦組織勻漿。將勻漿液以3000r/min離心lOmin，取上清夜，在_70°C超低溫冰箱保存待測(cè)。按試劑盒說明書測(cè)定MDA含量、MPO活性以及SOD活性。蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法。I. 6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以[±s表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間顯著性比較，樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)。*表示P < 0. 05，表明給藥組與模型組比較有顯著性差異廣表示P
<0.01，表明給藥組與模型組比較有極顯著性差異。2.結(jié)果2. I甘草苷對(duì)大鼠腦組織MPO、SOD活性及MDA含量的影響表2甘草苷對(duì)大鼠腦組織MPO、SOD活性及MDA含量的影響(^± s，n二9 )
權(quán)利要求
1.甘草苷在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征是甘草苷在制備防治腦缺血疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及甘草苷在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，特別涉及甘草苷在制備防治腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘草苷具有明顯的抗腦缺血、抗腦缺氧、抗腦血栓、改善記憶力作用，用藥劑量低，安全性高，有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P9/00GK102716139SQ20121010078
公開日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2010年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月14日
發(fā)明者劉婷, 姜招峰, 孫雅煊, 張靜, 戴雪伶, 王志斌, 王振華, 鄭秋生, 高兆蘭 申請(qǐng)人:北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院