專利名稱：皮膚康洗液在制備抑制ht-29細胞增殖藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及皮膚康洗液在制備抑制HT-29細胞增殖藥物中的應用。
背景技術：
結腸腺癌是結腸腺上皮來源的常見消化道惡性腫瘤，屬于結腸癌多種病理類型中的一種，其病因尚未明確，但本病的發(fā)生與多脂肪少纖維的飲食有關，腺瘤狀息肉、結腸血吸蟲、非特異性潰瘍性結腸炎、結腸腺癌細菌性痢疾、阿米巴腸病等亦與本病發(fā)生密切相關。約40%的結腸癌分布于直腸及直腸乙狀結腸曲，其余分布于乙狀結腸、盲腸、升結腸、降結腸、橫結腸及肝、脾曲等處。結腸腺癌是結腸癌中類型最常見的一種，其余分類有粘液腺癌及未分化癌，大體形態(tài)可呈息肉狀、潰瘍型等。臨床表現(xiàn)為結腸癌起病隱匿，早期僅見糞便隱血陽性，逐步為血便、痢疾樣膿血便，里急后重，有時呈頑固性便秘，大便形狀變細，或糊狀大便，或腹瀉與便秘交替，這些改變成為結腸癌的突出表現(xiàn)。病人常有不同程度的腹痛，常有糜爛、壞死和繼發(fā)性感染，如發(fā)生在右側則會產(chǎn)生右腹部鈍痛，有時出現(xiàn)餐后腹痛。左側結腸癌常并發(fā)腸梗阻，時有腹部絞痛，伴有腹脹、腸鳴音亢進等。腹部腫塊多見于右腹部，是右側結腸癌的表現(xiàn)之一，提示已到中晚期，腫塊表面可有結節(jié)感，一般可以推動，但到腫瘤晚期時則固定，合并感染時可有壓痛。結腸癌的患者可出現(xiàn)進行性貧血，低熱，進行性消瘦，惡液質(zhì)，肝腫大、浮腫、結腸腺癌黃疸和腹水等?；瘜W治療在結腸腺癌的治療中占有重要地位，一般可于術后進行。手術后的病人化療一般一年 一年半內(nèi)可使用2 3個療程，常用藥物主要是5-氟脲嘧啶(5-FU)，也可聯(lián)合應用絲裂霉素、環(huán)磷酰胺等，5-FU每個療程總量可用7 10克?？煽诜蜢o脈給藥，最好加入葡萄糖液中滴注.每次250毫克，每日或隔日一次。結腸腺癌如果反應較大如惡心、食欲減退、無力、白細胞和血小板計數(shù)下降等，可減少每次用量，或加大間隔期。骨髓抑制明顯時可及時停藥?？诜ㄎ改c道反應比靜脈給藥大，但骨髓抑制反應輕。用藥期間必須注意支持治療，并用減少副作用的藥物。癌腫未能切除的病人行化療，有一定減輕癥狀控制腫瘤生長的作用，但效果較差，維持時間短，如病人一般情況差時，副作用顯著，反而加重病情，不宜應用。皮膚康洗液是北京華洋奎龍藥業(yè)公司的獨家產(chǎn)品，目前還沒有其抑制結腸腺癌(HT-29)細胞增殖的文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供皮膚康洗液在制備抑制HT-29細胞增殖藥物中的應用。技術方案皮膚康洗液在制備抑制HT-29細胞增殖藥物中的應用。皮膚康洗液主要成分金銀花、蒲公英、馬齒莧、土茯苓、大黃、赤芍、蛇床子等藥，每瓶裝50ml，具有清熱解毒，涼血除濕，殺蟲止癢，主治濕熱阻于皮膚所致濕瘡，見有瘙癢、紅斑、丘疹、水泡、滲出、糜爛等或濕熱下注所致陰癢、白帶量多等癥，急性濕疹或陰道炎見有上述證候者，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制HT-29細胞增殖。有益效果皮膚康洗液抑制HT-29細胞增殖，效果良好。
具體實施例方式皮膚康洗液抑制HT-29細胞增殖的實驗研究資料I實驗材料
I. I實驗用細胞株結腸腺癌(HT-29)，來自本公司實驗室細胞庫，DMEM+10% FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實驗藥物研究藥物皮膚康洗液，北京華洋奎龍藥業(yè)公司，批號20110321藥液儲液稱取IOOmg皮膚康洗液,溶于5ml無水乙醇中，O. 2μηι濾器過濾，500μ Idoff管分裝，-20°C存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。I. 3實驗試劑DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387);Trypsin(AMRESC0 公司批號:2010/04);EDTA(AMRESC0 公司批號2009/10);Penicillin G Sodium Salt (AMRESC0 公司批號2010242) ；Streptomycin Sulfate(AMRESC0公司批號2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號080310182);MTT (Biosharp 批號0793) ;PBS (實驗室自配)；I. 4實驗器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ;IOcm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。2實驗方法 I) HT-29 細胞用 DMEM+10% FBS 于 37 °C、5% C02 進行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當細胞生長至對數(shù)期時，收集細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0. 25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應，吹打細胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5% C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入皮膚康洗液溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設置本底(不加細胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設定6個復孔。7)結果以藥物對細胞的抑制率表示細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。3統(tǒng)計處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關分析和Studentt檢驗，數(shù)據(jù)以mean+ S. D.表不。4實驗結果MTT法實驗后統(tǒng)計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對HT-29細胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I皮膚康洗液對ΗΤ-29細胞增殖抑制影響研疋(X土SD)
權利要求
1. 皮膚康洗液在制備抑制HT-29細胞增殖藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了皮膚康洗液在制備抑制HT-29細胞增殖藥物中的應用，皮膚康洗液主要成分金銀花、蒲公英、馬齒莧、土茯苓、大黃、赤芍、蛇床子等藥，具有清熱解毒，涼血除濕，殺蟲止癢，主治濕熱阻于皮膚所致濕瘡，見有瘙癢、紅斑、丘疹、水泡、滲出、糜爛等或濕熱下注所致陰癢、白帶量多等癥，急性濕疹或陰道炎見有上述證候者，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制HT-29細胞增殖。
文檔編號A61K36/90GK102836363SQ201210358128
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月24日 優(yōu)先權日2012年9月24日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:南京正亮醫(yī)藥科技有限公司