專利名稱：一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種銀杏內(nèi)酯藥物制劑的制備方法，更具體地說，涉及一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的制備方法。
銀杏葉提取物中主要含有生物活性物質(zhì)銀杏內(nèi)酯A和B，它是一類強血小板板活化因子PAF拮抗劑，而且這些成份目前僅發(fā)現(xiàn)存在于銀杏一種植物中，由于該成份結(jié)構(gòu)復雜，目前也沒有可能用有機合成方法生產(chǎn)。血小板活化因子是一種哺乳動物內(nèi)源性生理活性物質(zhì)，主要與過敏、潰瘍、哮喘、血栓形成、某些炎癥、臟器移植的異體排斥、冠心病人由于缺氧引起的心肌損傷等的發(fā)病密切相關(guān)，因此血小板活化因子拮抗劑有可能用于上述疾病的防治。
由于銀杏內(nèi)酯具有獨特的藥理作用，故國內(nèi)外科學家對其進行了許多研究，但國外目前尚無正式產(chǎn)品，臨床試驗曾經(jīng)使用的劑型主要是片劑，也有采用吸入劑型，銀杏內(nèi)酯B也有采用針劑進行臨床試驗。但對銀杏內(nèi)酯的劑型目前報導很少，由于銀杏內(nèi)酯本身很難溶于水，因此目前采用凍干粉針劑作為給藥形式尚未見報導。
本發(fā)明提供的制備銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的方法，包括以下步驟(1)將銀杏混合內(nèi)酯原料溶解于堿溶液，配制成含銀杏內(nèi)酯的堿溶液；(2)將上述堿溶液充分攪拌，使銀杏內(nèi)酯全部溶解；(3)在上述溶液中加入甘露醇使溶解，過濾；(4)濾液無菌分裝，冷凍干燥，即得。上述步驟(1)中所用的堿溶液為葡甲胺溶液。本發(fā)明所述的銀杏混合內(nèi)酯A、B結(jié)構(gòu)式如下 其中 由于銀杏內(nèi)酯難溶于水，對制備成水針劑帶來一定難度，又銀杏內(nèi)酯在水中不穩(wěn)定，本發(fā)明采用銀杏內(nèi)酯結(jié)構(gòu)中可利用的內(nèi)酯部分使其成鹽的形式而使銀杏內(nèi)酯溶解于水中，然后再制成凍干粉，使其穩(wěn)定保存。本發(fā)明方法工藝簡單，產(chǎn)品水溶性好，可不加任何其他助溶劑，用注射用水溶解即可使用。
下面結(jié)合實施例及主要藥效學試驗對本發(fā)明作進一步的說明。
術(shù)后24h按Bederson的方法對動物的行為缺陷進行分級評分，標準如下0級未觀察到神經(jīng)癥狀；1級提尾懸空時，動物的手術(shù)對側(cè)前肢表現(xiàn)為腕肘屈曲，肩內(nèi)旋，肘外展，緊貼胸壁；2級將動物置于光滑平面上，推手術(shù)側(cè)肩向?qū)?cè)移動時，阻力降低；3級動物自由行走時向手術(shù)對側(cè)環(huán)轉(zhuǎn)或轉(zhuǎn)圈；4級軟癱，肢體無自發(fā)活動。
MCAO 24h后，斷頭處死大鼠，取出全腦，左右腦分別切開，稱重。在右腦視交叉及其前后各2mm處，做冠狀切，腦切片于1％TTC溶液中避光37℃孵育25分鐘，用眼科鑷分離蒼白區(qū)(梗賽區(qū))和非倉白區(qū)(正常區(qū))，計算梗塞百分比.。
梗塞百分比(％)＝蒼白區(qū)重量/(蒼白區(qū)重量+非蒼白區(qū)重量)×100％將染色后的腦組織置于110℃烘箱烘干，對照大腦濕重求出腦含水量如下腦組織含水量(％)＝(1-腦組織干重/腦組織濕重)×100％表1注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉iv對局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)行為、腦梗塞率、腦含水量的影響(x±s，n＝10)組別劑量(mg/kg) 神經(jīng)行為評分 腦梗塞率(％) 腦含水量(％)假手術(shù)組- 0.3±0.5 077.0±0.9模型對照- 3.3±1.1 21.0±2.380.9±1.030.0 1.4±1.0**13.8±2.0**78.1±0.9**凍干粉 15.0 1.8±1.0**16.4±2.4**78.9±0.7**7.52.4±0.8*18.4±2.0*79.3±0.8*金鈉多組1ml/kg 1.8±1.1**15.6±3.0**78.7±1.0**尼膜同組0.21.9±0.7**16.9±1.9***78.3±1.3***P＜0.05**P＜0.01 υs模型對照結(jié)論注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉靜脈給藥7.5，15.0，30.0mg/kg iv能使MCAO大鼠的腦卒中評分降低，MCAO梗塞范圍縮小，腦組織含水量減少(P＜0.01)其作用強度與金鈉多注射液比較無明顯差異。二、注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉iv對大鼠實驗性彌散性完全性腦缺血的保護作用取雄性SD大鼠70只，體重300-400g，隨機分為7組，每組10只。分為注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉高劑量組30.0mg/kg，中劑量組15.0mg/kg，低劑量組7.5mg/kg，尼膜同注射液組0.2mg/kg，金納多組1.0ml/kg，模型對照組和假手術(shù)組(均給以等量生理鹽水0.6ml/100g)。于實驗前三天，每天尾靜脈注射一次。第三天給藥后30min，用10％水合氯醛麻醉(30.0mg/kg，ip)。將大鼠背位固定，分離雙側(cè)頸總動脈。于給藥后30min大鼠清醒狀態(tài)下用硅膠管的小動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈，可見大鼠意識和翻正反射消失，眼變白，豎毛，呼吸加快。30min后去除動脈夾，造成再灌注模型，再灌同時股靜脈注射60mg/kg伊文思藍。60min后大鼠斷頭取腦，然后用生理鹽水和丙酮混合液(3∶7v/v)制成10％勻漿(W/V)，密封放置過夜后，2500rpm離心15min，取上清液，以生理鹽水—丙酮混合液調(diào)零，在620nm處測吸光度表示腦組織中伊文思藍含量[以生理鹽水—丙酮混合液為溶劑建立伊文思藍吸光值與濃度的標準曲線]，以此反映給藥對腦血管通透性的影響。結(jié)果由表2所示，注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉7.5，15.0，30.0mg/kg連續(xù)靜脈注射4天可劑量相關(guān)性地縮短四動脈結(jié)扎—再灌所致全腦彌散性缺血大鼠的翻正反射恢復時間，降低腦勻漿伊文思藍含量(高劑量組p＜0.001)。說明注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉能夠保護缺血后的腦功能，降低毛細血管通透性。表2 銀杏內(nèi)酯凍干粉iv對大鼠實驗性彌散性完全性腦缺血的保護作用(n＝10，x±s)組別劑量 翻正反射恢復時間 伊文思藍含量(mg/kg) (min) (μg/g腦重)假手術(shù)組- 7.51±1.0模型對照- 30.1±4.317.5±1.6尼膜同組0.224.7±4.8**15.5±2.2**金鈉多組1.0ml/kg 24.1±5.5**15.2±1.9**30.0 23.9±5.1***15.0±1.5***凍干粉 15.0 26.4±3.3**15.3±2.0**7.526.5±3.2**15.9±1.6***P＞0.05，**P＜0.05***P＜0.01 υs模型對照組三、注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉iv對小鼠耐缺氧能力的影響取小鼠50只，體重為18-22g，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。分別為注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉48.0、24.0、12.0mg/kg；金鈉多注射液組(2.0ml/kg)；尼膜同注射液組(0.4mg/kg)；缺血對照組(給以等量的生理鹽水)。于實驗前三天，每天尾靜脈給藥一次，以不同濃度等容積給藥0.1ml/10g體重。第四天最后一次給藥后10分鐘，將小鼠置于裝有25g鈉石灰的60ml密閉廣口瓶中，記錄小鼠的死亡時間。表3結(jié)果表明銀杏內(nèi)酯凍干粉靜脈注射液可顯著延長小鼠在缺氧狀態(tài)下的存活時間(P＜0.01)。
表3 注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉對小鼠耐缺氧能力的影響(n＝10，x±s)組別 劑量(mg/kg) 存活時間(min)陰性對照14.4±1.7尼膜同組 0.417.0±1.5***金鈉多組 2.0ml/kg 18.4±1.6***48.0 19.6±1.6***內(nèi)酯凍干粉 24.0 16.3±1.6**12.0 14.6±1.9**P＞0.05，**P＜0.05***P＜0.01 υS模型對照組四、注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉iv對麻醉犬腦循環(huán)的影響雜種犬25只，雌雄兼用，隨機分為5組，每組5只。即注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉低、中、高劑量組(2.5，5.0，10.0mg/kg)，陽性對照尼膜同注射液組(0.1mg/kg)，生理鹽水對照組。將動物以戊巴比妥鈉30mg/kg iv.麻醉后背位固定，將充滿0.1％肝素生理鹽水的聚乙烯管經(jīng)麻醉犬一側(cè)股動脈插入腹主動脈，通過TP-200T型壓力換能器與RM6000型多道生理記錄儀相連，直接讀取股動脈收縮壓(SAP)，舒張壓(DAP)，平均動脈壓(MAP)和心率(HR)。分離頸總動脈和頸外動脈，并結(jié)扎頸外動脈，將直徑3mm的電磁流量計(MFV-1200)探頭放置在頸總動脈上，以測定頸內(nèi)動脈血流量(JCBF)。在第七頸椎水平分離出椎動脈，套上內(nèi)徑2mm的電磁流量計(MFV-3100)探頭，以測定椎動脈血流量(VCBF)。同時用針型電極由ECG6511型心電圖儀觀察并記錄II導聯(lián)心電圖。腦血流量(CBF)和腦血管阻力(CVR)按文獻[5]公式計算。股靜脈插管以追加麻醉維持量及給藥。待各項指標穩(wěn)定后記錄正常參數(shù)值，并給藥。每犬給藥一次，給藥容積4ml/kg。觀察并記錄給藥后120min內(nèi)各項指標的變化。
由表4可見注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉靜脈給藥2.5，5.0，10.0mg/kg對CBF和CVR，HR無明顯影響，與給藥前及對照組比較P＞0.05，而尼莫地平能使腦血流量增加，腦血管阻力減少，表明銀杏葉靜脈給藥不影響麻醉犬的腦血流量和腦血管阻力。
由表5可見注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉靜脈給藥2.5，5.0，10.0mg/kg對SPA，DAP，MAP無明顯影響，與給藥前及對照組比P＞0.05，而尼莫地平靜脈給藥后血壓立即開始下降，與給藥前和對照組比較P＜0.05，血壓下降持續(xù)2h以上。
表4注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉(GBI)iv對麻醉犬腦循環(huán)的影響(x±s，n＝5)

#P＜0.05 ##P＜0.01 υs給藥前*P＜0.05**P＜0.01 υs陰性對照表5注射用銀杏內(nèi)酯凍干粉(GBI)iv對麻醉犬血壓的影響(x±s，n＝5)

#P＜0.05 ##P＜0.01 υs給藥前*P＜0.05**P＜0.01 υs陰性對照
權(quán)利要求
1.一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的制備方法，包括以下步驟(1)將銀杏混合內(nèi)酯原料溶解于堿溶液，配制成含銀杏內(nèi)酯的堿溶液；(2)將上述堿溶液充分攪拌，使銀杏內(nèi)酯全部溶解；(3)在上述溶液中加入甘露醇使溶解，過濾；(4)濾液無菌分裝，冷凍干燥，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的堿溶液為葡甲胺溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種銀杏內(nèi)酯凍干粉針劑的制備方法，包括以下步驟(1)將銀杏混合內(nèi)酯原料溶解于堿溶液，配制成含銀杏內(nèi)酯的堿溶液；(2)將上述堿溶液充分攪拌，使銀杏內(nèi)酯全部溶解；(3)在上述溶液中加入甘露醇使溶解，過濾；(4)濾液無菌分裝，冷凍干燥，即得。由于銀杏內(nèi)酯難溶于水，對制備成水針劑帶來一定難度，又銀杏內(nèi)酯在水中不穩(wěn)定，本發(fā)明采用銀杏內(nèi)酯結(jié)構(gòu)中可利用的內(nèi)酯部分使其成鹽的形式而使銀杏內(nèi)酯溶解于水中，然后再制成凍干粉，使其穩(wěn)定保存。本發(fā)明方法工藝簡單，產(chǎn)品水溶性好，可不加任何其他助溶劑，用注射用水溶解即可使用。
文檔編號A61K31/365GK1390542SQ0213422
公開日2003年1月15日 申請日期2002年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月21日
發(fā)明者張平 申請人:張平