專利名稱：心腦血管治療藥物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是提供心腦血管治療藥物一燈盞花乙素衍生物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
燈盞花乙素存在于中藥燈盞花中，從藥理上看，燈盞花乙素可改善微循環(huán)，增加腦血流量，提高血腦屏障通透性；改善血液流變學(xué)，降低全血粘度，抗血小板聚集作用顯著，促纖溶活性，降低血纖維蛋白原，防栓溶栓；防治神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣超載和胞外興奮性氨基酸堆積，抑制蛋白激酶C位移激活或過(guò)度激活，減輕腦水腫，延緩缺血性腦細(xì)胞死亡，增加營(yíng)養(yǎng)性心肌血流量，改善心肌微循環(huán)，并有一定的降血脂作用。目前臨床上用于治療腦血栓、腦出血及其后遺癥；冠心病、心絞痛、心律失常；高粘血癥；頑固性頸周綜合征、椎基底動(dòng)脈供血不足及其他缺血及伴有微循環(huán)障礙的疾病，在心腦血管疾病的治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前，公開(kāi)的文獻(xiàn)僅報(bào)道了燈盞花乙素(C21H18O12. CAS No. :27740-01-8, 分子量462. 37)，到目前為止，國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有公開(kāi)的文獻(xiàn)報(bào)道燈盞花乙素結(jié)晶水合物 C21H18O12 · nH20，η = 1. 7 2. 2]及其制備方法和用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所涉及的是燈盞花乙素衍生物及其制備方法和用途，進(jìn)一步說(shuō)，是涉及燈盞花乙素結(jié)晶水合物K1H18O12 · ηΗ20，η = 1. 7 2. 2，η可以是1. 75、1. 8、2、2. 1、2. 2或其之間的數(shù)字]及其制備方法和用途。本發(fā)明獲得的含有結(jié)晶水的燈盞花乙素，令人驚奇的是，含結(jié)晶水的燈盞花乙素引濕性遠(yuǎn)低于不含有結(jié)晶水的燈盞花乙素，含有結(jié)晶水的燈盞花乙素水合物比不含結(jié)晶水的更能穩(wěn)定的存在，便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，并在室溫下具有良好的水溶性，易于制成水溶性的制劑。此外，無(wú)水物的潮解使得在處理時(shí)要隔絕空氣防止粘連等，而水合物具有良好的滑動(dòng)性，從而改善制劑的可操作性。令人驚奇的是，特征性的，本發(fā)明的水合物的熱分析(TG-DTA)圖譜的失重平臺(tái)下具有對(duì)應(yīng)的吸熱峰，熱分析圖譜顯示出燈盞花乙素的結(jié)晶水合物，如其1.75、2.0水合物寸。本發(fā)明的燈盞花乙素水合物，為黃色或淡黃色粉末，能穩(wěn)定存儲(chǔ)。參考中國(guó)藥典要求進(jìn)行引濕性試驗(yàn)取燈盞花乙素?zé)o水物和本發(fā)明的水合物約lg，置于干燥恒重的表面皿中，精密稱重，25°c、相對(duì)濕度為75%，分別于試驗(yàn)Oh和4 取樣，計(jì)算其引濕增重的百分率，結(jié)果顯示，無(wú)水物引濕性比本發(fā)明的水合物都高得多，本發(fā)明的燈盞花乙素的結(jié)晶水合物能更好地穩(wěn)定存儲(chǔ)，在RH75%、4(TC避光的條件下，將燈盞花乙素的結(jié)晶水合物和燈盞花乙素的無(wú)水物樣品分別密閉與西林瓶中進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，色譜條件色譜柱=Kromasil C18 ^KtoimX 4. 6讓，5 μ m)，流動(dòng)相甲醇-0. 磷酸(40 60)，檢測(cè)波長(zhǎng)335nm，流速Iml/ min，測(cè)定有關(guān)物質(zhì)增加的幅度。結(jié)果見(jiàn)表1 2。
表1.引濕試驗(yàn)結(jié)果取樣時(shí)間(48小時(shí))與0小時(shí)相比，增重％
燈盞花乙素2水合物燈盞花乙素1. 75水合物燈盞花乙素?zé)o水物0. 32% 0. 67% 6. 89%
表2.加速穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果取樣時(shí)間㈩月)與0月相比，有關(guān)物質(zhì)的倍數(shù)
燈盞花乙素2水合物燈盞花乙素L 75水合物燈盞花乙素?zé)o水物0. 35 0.38 1.61說(shuō)明本發(fā)明的燈盞花乙素結(jié)晶水合物具有更好的存儲(chǔ)穩(wěn)定性。燈盞花乙素結(jié)晶水合物的制備包括如下方法方法A在反應(yīng)容器中，將燈盞花全草用2 20倍量(體積比)的水、或C1-C6的低分子醇、C2-C6的低分子腈、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C8的低分子酯等中的一種或幾種為溶劑進(jìn)行提取(包括冷提、加熱提取、或超聲提取、或微波提取或回流提取等)一次至數(shù)次(1 6 次)，合并提取液，過(guò)濾、將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用堿調(diào)節(jié)pH為6. 5 9之間(所用的堿包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、精氨酸、賴氨酸、C1-C12的低分子胺等普通化學(xué)上定義的藥學(xué)上可接受的路易斯堿或其堿性溶液)，過(guò)濾，過(guò)硅膠層析柱、 或大孔吸附樹(shù)脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹(shù)脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種進(jìn)行洗脫，濾液用酸調(diào)節(jié)pH為1 5(所用的酸包括鹽酸、硫酸、磷酸、碳酸、磷酸二氫鈉、乳酸、C1-C8的低分子酸等化學(xué)上定義的路易斯酸或其酸性溶液)，攪拌、放置、使沉淀充分析出，將所得沉淀過(guò)濾，用水與C1-C6的低分子醇、C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級(jí)醚、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過(guò)濾，水洗或C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈的一種或幾種洗，將所得的固體干燥，得燈盞花乙素結(jié)晶水合物；或者方法B在反應(yīng)容器中，將燈盞花全草用2 20倍量(體積比)的水、堿性溶液或C1-C6的低分子醇等中的一種或幾種為溶劑進(jìn)行提取(包括冷提、加熱提取、滲鹿或超聲提取、或微波提取或回流提取等)一次至數(shù)次(1 6次)，過(guò)濾，合并濾液，將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用堿調(diào)節(jié)pH為6. 5 9之間(所用的堿包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、 磷酸鈉、碳酸鉀、枸櫞酸鈉、精氨酸、賴氨酸、C1-C12的低分子胺等普通化學(xué)上定義的藥學(xué)上可接受的路易斯堿或其堿性溶液等)，過(guò)濾，濾液過(guò)硅膠層析柱及大孔吸附樹(shù)脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹(shù)脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種進(jìn)行洗脫，濾液用酸調(diào)節(jié)PH為1 5 (所用的酸包括鹽酸、硫酸、磷酸、碳酸、磷酸二氫鈉、乳酸、C1-C8的低分子酸等化學(xué)上定義的路易斯酸或其酸性溶液)，放置， 使沉淀充分析出，將所得沉淀過(guò)濾，用水或C1-C6的低分子醇、C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級(jí)醚、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過(guò)濾，水洗，將所得的固體干燥，得燈盞花乙素結(jié)晶水合物；本發(fā)明所涉及的提取過(guò)程中按照常規(guī)可使用提取溶劑充分浸泡燈盞花藥材粉后再實(shí)施其它制備程序。本發(fā)明在制備過(guò)程中的過(guò)濾的方式可以是用濾布、漏斗、垂熔玻璃濾器、砂芯濾棒、板框式壓濾機(jī)、微孔濾膜、陶瓷膜或超濾等的一種或幾種過(guò)濾方式進(jìn)行一次或幾次過(guò)濾(1 6次).在制備燈盞花乙素結(jié)晶水合物所涉及的采用超濾除去雜質(zhì)的方法或過(guò)程中，超濾器可選用平板式、卷式、管式、中空纖維式或圓盒式等，優(yōu)選卷式和中空纖維式超濾器，采用截留相對(duì)分子質(zhì)量4000 60000的超濾膜除去雜質(zhì)，優(yōu)選相對(duì)分子質(zhì)量 6000 30000的超濾膜，更優(yōu)選相對(duì)分子質(zhì)量6000 20000的超濾膜。本發(fā)明的燈盞花乙素結(jié)晶水合物兩種制備方法的制備過(guò)程中，“提取液用堿調(diào)節(jié) pH為6. 8 9之間(所用的堿包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、碳酸鉀、枸櫞酸鈉、C1-C12的低分子胺等普通化學(xué)上定義的藥學(xué)上可接受的路易斯堿或其堿性溶液)，過(guò)濾，濾液過(guò)硅膠層析柱及大孔吸附樹(shù)脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹(shù)脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C8的低分子酯、C2-C6的低分子腈的一種或幾種進(jìn)行洗脫，濾液用酸調(diào)節(jié)PH為1 5 (所用的酸包括鹽酸、硫酸、磷酸、碳酸、磷酸二氫鈉、 乳酸、C1-C8的低分子酸等化學(xué)上定義的路易斯酸或其酸性溶液)，放置，使沉淀充分析出” 的過(guò)程，該過(guò)程在制備過(guò)程中可將酸沉淀后得到的沉淀再以水稀釋后重復(fù)上述過(guò)程，進(jìn)行 1 3次，以實(shí)現(xiàn)純化目的，之后再進(jìn)行重結(jié)晶過(guò)程。本發(fā)明涉及的大孔吸附樹(shù)脂可包括如下型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂D-101型、DA-201 型、MD-05271 型、GDX-105 型、CAD-40 型、XAD-4 型、SIP 系列、D-型、X-5 型、AB-8 型、LD-605 型、LD-601 型、DM-130 型、R-A 型、CHA-101 型、WLD 型(混合型)、H-107 型、NKA-9 型等。本發(fā)明中的水合物的制備方法A和方法B的不同步驟，包括在提取和精制過(guò)程的方法還可以交叉使用，用于制備本發(fā)明的化合物。本發(fā)明中的低分子醇的碳原子數(shù)定義為C1_C6(即1-6個(gè)碳原子的醇)，如甲醇、 乙醇、異丙醇等；低分子醚的碳原子數(shù)定義為C2-C8(即2-8個(gè)碳原子的醚)，如乙醚、異丙醚、丁醚、四氫呋喃等；低分子鹵代烴的碳原子數(shù)定義為Cl-C6(即1-6個(gè)碳原子的鹵代烴)，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等；低分子酯的碳原子數(shù)定義為C2-C8(即2-8個(gè)碳原子的酯)，包括醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯等；低分子直鏈或支鏈烷烴或環(huán)烷烴的碳原子數(shù)定義為C5-C10，包括戊烷、正己烷、環(huán)己烷、石油醚等；低分子芳香烴的碳原子數(shù)定義為C6-C12 (即6-12個(gè)碳原子的芳香烴)，包括苯，甲苯等；C1-C8的低分子酸的碳原子數(shù)定義為1-8個(gè)碳原子的有機(jī)酸，包括甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、馬來(lái)酸、酒石酸等；C3-C8 的低分子酮定義為3-8個(gè)碳原子的酮，包括丙酮，丁酮、異己酮等；C2-C6的低分子腈(即 2-6個(gè)碳原子的腈)，包括乙腈、丙腈等；C1-C12的低分子胺定義為1-12個(gè)碳原子的有機(jī)胺，包括二甲胺、二乙胺、三乙胺、環(huán)己胺、二環(huán)己胺、叔丁胺、N-甲基嗎啉、吡啶、甲基吡啶、 手性或消旋的堿性氨基酸，如L-精氨酸、DL-賴氨酸等；關(guān)于任何一類描述為“低分子”化合物的碳原子數(shù)量的標(biāo)記方法只要在本申請(qǐng)的文本中出現(xiàn)一次，其它任何未進(jìn)行標(biāo)記的描述為“低分子”的同類化合物的碳原子數(shù)與本文中已經(jīng)標(biāo)明的數(shù)量是一致的。燈盞花乙素水合物的結(jié)晶或重結(jié)晶溶劑，優(yōu)選水、甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮、丁酮、異己酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸、二氯甲烷、氯仿、乙醚、異丙醚、四氫呋喃、石油醚、苯中的一種或幾種。本發(fā)明的產(chǎn)物的干燥方式可以為在不同溫度(如20-100°C )、干燥時(shí)間(1小時(shí)到數(shù)日)、或附有其它干燥劑(包括硅膠，五氧化二磷、無(wú)水氯化鈣、無(wú)水硫酸鈉等)的環(huán)境條件下、或使用常壓或減壓的方式對(duì)最后的產(chǎn)物進(jìn)行干燥。其干燥溫度優(yōu)選在30 70°C。本發(fā)明的燈盞花乙素可具有不同的晶型，例如，從不同溶劑體系為結(jié)晶或重結(jié)晶體系而制備出來(lái)的燈盞花乙素1. 75、2水合物的X-射線粉末衍射圖譜可以有所不同。本發(fā)明中的結(jié)晶水合物或者實(shí)施例中的結(jié)晶水合物的溶液在同一 HPLC條件下的其主峰色譜保留時(shí)間具有一致性。本發(fā)明的燈盞花乙素水合物用途本發(fā)明的燈盞花乙素水合物用于制備注射用凍干粉針制劑、粉針制劑、大輸液制劑、小水針注射劑，固體制劑等。本發(fā)明的燈盞花乙素水合物用于制備固體制劑的片劑(包括普通片、控緩釋片和膠囊、口含片、分散片、口崩片等)、膠囊(包括普通膠囊、控緩釋膠囊等)、顆粒劑，混懸劑、 滴丸劑等，其中可含有藥學(xué)上可接受的填充劑，如淀粉、變性淀粉、乳糖、微晶纖維素、環(huán)糊精、山梨醇、甘露醇、木糖醇、磷酸鈣、磷酸氫鈣、氨基酸、聚乙二醇4000-20000、泊洛沙姆、明膠、硬脂酸、硬脂酸鈉等；藥學(xué)上可接受的崩解劑，如淀粉、變性淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素、表面活性劑、；藥學(xué)上可接受的潤(rùn)濕劑和粘合劑，如膠化淀粉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸及其鹽；藥學(xué)上可接受的潤(rùn)滑劑和助流劑，如硬脂酸、硬脂酸鎂、聚乙二醇4000-8000、滑石粉、微粉硅膠、十二烷基硫酸鎂等；藥學(xué)上可接受的甜味劑和香精，如蔗糖、阿斯巴甜、甜蜜素、糖精鈉、三氯蔗糖、食用香精等；藥學(xué)上可接受的助懸穩(wěn)定劑，如黃原膠、瓜爾膠、明膠、 阿拉伯膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、西黃蓍膠、海藻酸鈉等；其它藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑，如環(huán)糊精等。本發(fā)明的結(jié)晶水合物不同于無(wú)水物的潮解使得在處理時(shí)要隔絕空氣防止粘連等， 而結(jié)晶水合物具有良好的滑動(dòng)性，從而改善制劑的可操作性；并使制備的固體制劑具有良好的溶出性能，使得其容易被吸收進(jìn)入血液循環(huán)，改善生物利用度，并有利于快速發(fā)揮其作用。燈盞花乙素水合物針劑，其制備方法為凍干粉針制劑的制備方法為取燈盞花乙素水合物，可以加藥學(xué)上可接受的助溶劑、凍干支持劑或輔形劑、穩(wěn)定劑、注射用水，攪拌使溶解，若需要，可用藥學(xué)上可接受的酸堿調(diào)節(jié)ρΗ為4. 5 7. 5，加活性碳0. 005 1 % (W/V)攪拌15 45min,過(guò)濾，補(bǔ)水，無(wú)菌過(guò)濾，按5 400mg/瓶(以主藥計(jì))分裝，冷凍干燥，壓塞，得成品。燈盞花乙素水合物小容量注射液及其制備工藝燈盞花乙素水合物加注射用水和藥學(xué)上可接受的附加劑，例如藥學(xué)上可接受的助溶劑、PH調(diào)節(jié)劑、藥學(xué)上可接受的抗氧劑、惰性氣體，過(guò)濾、除菌制成滅菌小容量注射液，其PH值在4. 5 7. 5之間。藥學(xué)上可接受的凍干支持劑或輔形劑可以含有乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、右旋糖酐、氨基酸或其鹽(包括甘氨酸、?；撬?、精氨酸等)、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、去氧膽酸鈉等的一種或幾種。其藥學(xué)上可接受的PH調(diào)節(jié)劑可以是藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸、無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿，也可以是廣義的路易斯酸或堿，可以含有一種或者幾種，可以是鹽酸、磷酸、丙酸、醋酸及醋酸鹽、如醋酸鈉等，乳酸以及乳酸藥用鹽、枸櫞酸藥用鹽、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸鹽、酒石酸及其藥用鹽、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、 反丁烯二酸、順丁烯二酸、三羥基氨基甲烷、二乙醇胺、乙醇胺、異丙醇胺、二異丙醇胺、2-氨基-2-(羥甲基)1，3_丙二醇胺、1，2_己二胺、N-甲基葡萄胺、二異丙胺以及它們的鹽，多羥基羧酸及藥用鹽，如葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖酸、蘋果酸、蘇糖酸、葡庚糖酸、氨基酸及氨基酸鹽等中的一種或者幾種。其藥學(xué)上可接受的抗氧劑和穩(wěn)定劑可以是亞硫酸、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、焦亞硫酸鹽、連二亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽，有機(jī)硫化合物硫脲、谷胱甘肽、二巰基丙醇、巰基乙酸及鹽、硫代乳酸及鹽、硫代二丙酸及鹽、苯酚類化合物，如沒(méi)食子酸及鹽、咖啡酸、咖啡酸鹽、阿魏酸、阿魏酸鹽、二叔丁基對(duì)苯酚、2，5-二羥基苯甲酸、2，5-二羥基苯甲酸鹽、苯酚或其衍生物、水楊酸或其鹽；氨基酸以及其鹽；抗壞血酸及抗壞血酸鹽、異抗壞血酸及異抗壞血酸鹽、煙酰胺、酒石酸、硝酸鹽、磷酸鹽、醋酸藥用鹽、檸檬酸鹽、EDTA及EDTA鹽、如EDTA 二鈉、 EDTA四鈉、N- 二(2-羥乙基)甘氨酸、α -環(huán)糊精、β -環(huán)糊精、γ -環(huán)糊精、葡糖基-環(huán)糊精 (G1-CYD)、麥芽糖基-β -環(huán)糊精、羥丙基β -環(huán)糊精、2-羥丙基β -環(huán)糊精Q-HP-β -CYD)、 3-羥丙基 β -環(huán)糊精(3-ΗΡ- β -CYD)、磺丁醚-β -環(huán)糊精(SBE- β -CD)，如(SBE7- β -CD)、 SBE4-β -⑶等中的一種或者幾種。其藥學(xué)上可接受的助溶劑可以是碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、 磷酸氫二鉀、乳酸鈉、枸櫞酸鈉、N-甲基葡萄胺、N-乙基葡萄胺、煙酰胺、乙二胺、二乙胺、乙醇胺(包括二乙醇胺、三乙醇胺等)、三羥基氨基甲烷、L或D或DL型氨基酸(包括L或D或 DL型精氨酸、賴氨酸、瓜氨酸、組氨酸等)等藥學(xué)上可接受的有機(jī)胺、吐溫20-80、泊洛沙姆 (包括泊洛沙姆124，188，237，338,407等)、聚乙二醇200-2000、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、葡糖基-環(huán)糊精(G1-CYD)、麥芽糖基-β-環(huán)糊精、羥丙基β-環(huán)糊精、2-羥丙基β-環(huán)糊精 Q-HP-β -CYD)、3_羥丙基 β -環(huán)糊精(3-ΗΡ-β -CYD)、磺丁醚-β -環(huán)糊精(SBE-β -CD)， 如(SBE7-β -⑶)、SBE4-β -⑶等、以及水等中的-種或者幾種。凍干支持劑或輔形劑可以是葡萄糖、果糖、木糖醇、山梨醇、甘露醇、轉(zhuǎn)化糖、麥芽糖、右旋糖酐、N-甲基葡萄胺、N-乙基葡萄胺、煙酰胺、乙二胺、二乙胺、乙醇胺(包括二乙醇胺、三乙醇胺等)、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、磷酸氫二鉀、乳酸鈉、、枸櫞酸鈉、L或D或DL型氨基酸(包括L或D或DL型精氨酸、賴氨酸、瓜氨酸、組氨酸等)、吐溫20-80、泊洛沙姆 (包括泊洛沙姆124，188，237，338，407等)、聚乙二醇200-2000、乙醇、乙二醇、丙三醇、葡糖基-環(huán)糊精(G1-CYD)、麥芽糖基-β-環(huán)糊精、羥丙基β-環(huán)糊精、2-羥丙基β-環(huán)糊精 (2-ΗΡ- β -CYD)、3-羥丙基 β -環(huán)糊精(3-ΗΡ- β -CYD)、磺丁醚-β -環(huán)糊精(SBE- β -CD)，如 (SBE7-β -⑶)、SBE4-β -⑶等、以及水等中的一種或者幾種。其藥學(xué)上可接受的等滲調(diào)節(jié)劑可以是葡萄糖、果糖、木糖醇、山梨醇、甘露醇、轉(zhuǎn)化糖、麥芽糖、右旋糖酐、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉等中的一種或幾種。去熱源和除菌方式可以是加入配液量0.005 3%的活性炭去熱源，微孔濾膜除菌和熱壓滅菌，也可以采用超濾除菌、去熱源。超濾方法中，超濾器可選用平板式、卷式、管式、中空纖維式或圓盒式等，優(yōu)選卷式和中空纖維式超濾器，采用截留相對(duì)分子質(zhì)量為5萬(wàn)至30萬(wàn)的濾膜除去大部分發(fā)熱性物質(zhì)和細(xì)菌后，再采用截留相對(duì)分子質(zhì)量4000 30000 的超濾膜除去剩余熱源，優(yōu)選相對(duì)分子質(zhì)量6000 30000的超濾膜。
本發(fā)明的燈盞花乙素結(jié)晶水合物，適用于制備人和哺乳動(dòng)物的冠心病、心絞痛、心肌梗死、心律失常、缺血性腦疾病、腦血栓、腦栓塞、腦出血及其后遺癥、血管性癡呆；末梢循環(huán)障礙疾病如各種動(dòng)脈閉塞癥、脈管炎、糖尿病引起的微循環(huán)障礙、頑固性頸周綜合征、椎基底動(dòng)脈供血不足及其他缺血及伴有微循環(huán)障礙的疾病、高粘血癥等疾病的治療或預(yù)防的藥物中的應(yīng)用。用量用法一般情況下，于成人，肌內(nèi)注射5-200mg/次，一日1_3次。靜脈注射 5-400mg/次，以25%葡萄糖注射液稀釋。靜脈滴注5-400mg，以5%葡萄糖注射液或0. 9% 氯化鈉注射液250 500ml稀釋，一日1-2次。兒童減半量以上使用。經(jīng)胃腸道給藥用量用法10 70kg體重的人或動(dòng)物，一般情況下10 400mg/天，分1_3次給藥；兒童減半量以上使用。


圖1為燈盞花乙素1. 75水合物的熱分析圖譜，圖2為燈盞花乙素2水合物的熱分析圖譜，測(cè)試條件Setaram公司ktsys 16，樣品量5mg左右，升溫速度10K/min，N2流速 50ml/min，溫度一般為室溫 400°C左右。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1燈盞花乙素1. 75結(jié)晶水合物的制備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草干粉2kg用甲醇200ml、乙醇12L、水2L為混合溶劑回流提取3次，經(jīng)濾布粗濾，合并提取液，再以0. 45-1 μ m微孔濾膜過(guò)濾，再采用截留相對(duì)分子質(zhì)量10000 30000的超濾膜過(guò)濾，將濾液濃縮致幾近無(wú)醇，再用碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)稀釋液的pH為7. 2左右，過(guò)濾，濾液過(guò)DlOl型大孔吸附樹(shù)脂、水洗，收集洗脫液，過(guò)濾，濾液用稀磷酸調(diào)節(jié)pH = 2 3，靜置，待沉淀充分析出，濾過(guò)，沉淀用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體用甲醇ani、 丙酮150ml、氯仿5ml、水IOml的溶劑進(jìn)行重結(jié)晶2次，過(guò)濾，水洗，固體45°C左右真空干燥 24 小時(shí)，得黃色粉末 1. lg，熔點(diǎn)193°C變灰(ELECTROTHERMAL MELTING POINT APPARATUS, 未校正)；紫外取其5yg/ml的甲醇溶液，照分光光度法測(cè)定，發(fā)現(xiàn)在波長(zhǎng)與335nm 處有最大吸收；HPLC 主色譜峰與市售燈盞花乙素注射液主峰保留時(shí)間相同；ESI-MS :m/z 461 ；紅外光譜:vKBrmax 01^3380(寬)、2920、1721、1661、1608、1557、1498、1467、1362、1249、 1215、1184、1084、1043,923,846,740,619,卡氏法測(cè)定水分為6. 61%,熱分析平臺(tái)失重約 6. 37%,這與樣品含有1. 75個(gè)結(jié)晶水的結(jié)果(理論值6. 39% )在誤差范圍內(nèi)(見(jiàn)附圖1)， 元素分析理論值C 51.07%,H4. 39% ；實(shí)測(cè)值C 51. 19%, H4. 46%0實(shí)施例2燈盞花乙素2水合物的制備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草干粉4kg用乙醇32L、水4L為混合溶劑回流提3次，過(guò)濾，合并提取液，將濾液濃縮致幾近無(wú)醇，加水稀釋，再用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)稀釋液的pH為7. 5左右，以0. 2-1 μ m陶瓷膜過(guò)濾，濾液用DlOl大孔樹(shù)脂吸附、水洗，收集洗脫液，過(guò)濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)pH = 2 3，靜置，待沉淀充分析出，濾過(guò)，沉淀用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體加水稀釋，攪拌下加碳酸鈉溶液使其溶解，并調(diào)節(jié)稀釋液的pH為7. 5左右，采用截留相對(duì)分子質(zhì)量8000 20000的超濾膜(聚砜中空纖維膜組件，纖維孔徑約0.011 μ m，內(nèi)徑約為1.1mm)過(guò)濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)PH = 2 3，靜置，待沉淀充分析出，濾過(guò)，沉淀用水洗致近中性、再用乙醇、 氯仿洗，抽濾，所得固體用甲醇anl、乙醚10ml、丙酮300ml、正丁醇5ml、水30ml的溶劑進(jìn)行重結(jié)晶2次，過(guò)濾，水洗，固體45°C左右真空干燥6小時(shí)，得黃色粉末2. 87g ；熔點(diǎn)192°C 變灰(未校正)，紫外光譜取其5 μ g/ml的甲醇溶液，照分光光度法測(cè)定，發(fā)現(xiàn)在波長(zhǎng) 284nm與335nm處有最大吸收，在310nm有最小吸收；紅外光譜/^.01^3513,3376 (寬)、 2920、1721、1661、1608、1574、1498、1467、1442、1361、1249、1225、1183、1150、1083、1043、 902，845、740、619、589，ESI-MS :m/z :461 ；卡氏法測(cè)定水分為7. 74%，熱分析平臺(tái)失重約 7.沈％，這與樣品含有2個(gè)結(jié)晶水的結(jié)果(理論值7. 23%)在誤差范圍內(nèi)(見(jiàn)附圖2)，元素分析理論值C 50. 61%,H4. 45% ；實(shí)測(cè)值C 50. 76%, H4. 57% 實(shí)施例3燈盞花乙素2水合物的制備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草干粉2kg用80%乙醇3L充分潤(rùn)濕后，用乙醇16L、水3L為混合溶劑超聲提取3次，合并提取液，經(jīng)濾布粗濾，再以0. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，采用截留相對(duì)分子質(zhì)量10000 30000的超濾膜(聚砜中空纖維膜組件，纖維孔徑約0.011 μ m，內(nèi)徑約為1.1mm)過(guò)濾，將濾液減壓濃縮致幾近無(wú)醇，加水稀釋，再用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)稀釋液的pH為7. 5左右，過(guò)濾，DlOl大孔樹(shù)脂吸附、水洗，收集洗脫液，過(guò)濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)PH = 2 3，靜置，待沉淀充分析出，濾過(guò)，沉淀用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體加水稀釋，攪拌下加磷酸鈉溶液使其溶解，并調(diào)節(jié)稀釋液的pH為7. 5左右，采用截留相對(duì)分子質(zhì)量8000 20000的超濾膜過(guò)濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)PH = 2 3，靜置，待沉淀充分析出，濾過(guò)，沉淀用水洗致近中性、 再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體用甲醇1ml、異丙醇5ml、丙酮120ml、乙酸5ml、水IOml 為溶劑進(jìn)行重結(jié)晶2次，過(guò)濾，水洗，固體50°C左右真空干燥4小時(shí)，得黃色粉末1. 21g ；熔點(diǎn)189°C變灰(未校正)，紫外光譜10 μ g/ml的甲醇溶液，波長(zhǎng)與335nm處有最大吸收，在310nm有最小吸收；HPLC 主色譜峰與市售燈盞花乙素注射液主峰保留時(shí)間相同； 紅外光譜:vKBrmaxcm_13513,3376(寬)、2920、1721、1661、1608、1574、1498、1467、1442、1361、 1249、1225、1183、1150、1083、1043、902，845、740、619、589，ESI-MS :m/z :461 ；卡氏法測(cè)定水分為7. 68%，熱分析TG-DSC 平臺(tái)失重約7. 06%，這與樣品含有2個(gè)結(jié)晶水的結(jié)果(理論值7. 23%)在誤差范圍內(nèi)；元素分析理論值C50. 61%，H4. 45% ；實(shí)測(cè)值C 50. 55%, H4. 61%。實(shí)施例4燈盞花乙素1. 75水合物的制備在提取罐中，將40目左右的燈盞花全草干粉3kg用60%乙醇4L充分潤(rùn)濕后，用飽和碳酸氫鈉溶液180ml、乙醇ISLjK 4L為混合溶劑超聲提取3次，合并提取液，經(jīng)濾布粗濾，再以0. 45 μ m陶瓷膜過(guò)濾，采用截留相對(duì)分子質(zhì)量10000 30000的超濾膜過(guò)濾，再用碳酸鈉溶液或醋酸調(diào)節(jié)稀釋液的pH為7. 5左右， 濾液過(guò)硅膠層析柱，水洗，所得液體再過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂、水洗，收集洗脫液，過(guò)濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)pH = 2 3，靜置，待沉淀充分析出，濾過(guò)，沉淀用水洗致近中性、再用乙醇、氯仿洗，抽濾，所得固體加水稀釋，攪拌下加碳酸鈉溶液使其溶解，并調(diào)節(jié)稀釋液的pH為7. 5 左右，采用截留相對(duì)分子質(zhì)量8000 20000的超濾膜(聚砜中空纖維膜組件，纖維孔徑約 0. 011 μ m，內(nèi)徑約為1. Imm)過(guò)濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)pH = 2 3，靜置，待沉淀充分析出，濾過(guò)，沉淀用水洗致近中性、再用乙醇、異己酮洗，抽濾，所得固體用甲醇1ml、異丙醇5ml、丙酮160ml、乙酸乙酯5ml、乙腈:3ml、水IOml為溶劑進(jìn)行結(jié)晶，過(guò)濾，水洗，固體50°C左右真空干燥4小時(shí)，得黃色粉末1.56g;熔點(diǎn)194°C變灰(未校正)，紫外光譜10yg/ml的甲醇溶液，波長(zhǎng)與335nm處有最大吸收，在310nm有最小吸收；HPLC 主色譜峰與市售燈盞花乙素注射液主峰保留時(shí)間相同；ESI-MS :m/z 461 ；卡氏法測(cè)定水分為6. 79%，熱分析 TG-DSC 平臺(tái)失重約6. 32%，這與樣品含有1. 75個(gè)結(jié)晶水的結(jié)果(理論值6. 39% )在誤差范圍內(nèi)；元素分析理論值C 51.07%,H4. 39% ；實(shí)測(cè)值C 50. 95%，H4. 51 %。取少量樣品 140°C、五氧化二磷存在下干燥池得其無(wú)水物。實(shí)施例5取燈盞花乙素二水合物5g (按無(wú)水物計(jì))、碳酸鈉0. 6g、加甘露醇5g、磷酸二氫鈉0. 2g、抗壞血酸鈉0. 2g、EDTA 二鈉0. 02g，加20_5(TC注射用水250ml左右，攪拌使溶，用磷酸和磷酸氫二鈉溶液調(diào)節(jié)pH為5. 5 7. 1，加活性碳0. 01 0. 5% (W/V)攪拌 15-30min，過(guò)濾，補(bǔ)注射用水至300ml，用0. 22微米微孔濾膜過(guò)濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量6000 20000的超濾膜過(guò)濾，按25、50mg/瓶或IOOmg/瓶(按燈盞花乙素?zé)o水物計(jì))分裝，真空冷凍干燥，壓塞，得凍干品。實(shí)施例6取燈盞花乙素水合物5g、碳酸氫鈉lg、加甘露醇30g、抗壞血酸鈉lg、 EDTA 二鈉0. 02g，加20-50°C注射用水850ml左右，攪拌使溶，用檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH為7. 0左右，加活性碳0. 3% (W/V)攪拌20min，過(guò)濾，補(bǔ)注射用水至1000ml，加活性碳 0. 01 0. 5% (W/V)攪拌15-30min，過(guò)濾，用0. 22微米微孔濾膜過(guò)濾，按5、10、20或50mg/ 瓶(按燈盞花乙素?zé)o水物計(jì))分裝，真空冷凍干燥，壓塞，得凍干品。實(shí)施例7取燈盞花乙素水合物5g (按無(wú)水物計(jì))，L-精氨酸1. 8g，加山梨醇15g， 磷酸二氫鈉0. 5g，酒石酸鈉0. 2g、鹽酸半胱氨酸0. lg、EDTA 二鈉0. 02g，加30-50°C注射用水400ml左右，攪拌使溶，用酒石酸和酒石酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH為5. 6 6. 5，加活性碳0. 5% (W/V)攪拌30min，過(guò)濾，補(bǔ)注射用水至500ml，用0. 22微米微孔濾膜過(guò)濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量6000 20000的超濾膜過(guò)濾，按20、50mg/瓶或IOOmg/瓶(按無(wú)水物計(jì))分裝， 真空冷凍干燥，壓塞，得凍干品。實(shí)施例8取燈盞花乙素二水合物5g (按無(wú)水物計(jì))，賴氨酸1. 47g，加甘露醇10g， 磷酸二氫鈉0. 5g,鹽酸半胱氨酸鈉0. lg、EDTA 二鈉0. 05g,加30-50°C注射用水420ml左右， 攪拌使溶，用檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH為5.6 6.2，加溶液量0.5% (W/V)活性碳攪拌30min，過(guò)濾，補(bǔ)注射用水至500ml，用0. 22微米微孔濾膜過(guò)濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量6000 20000的超濾膜過(guò)濾，按5、10、20、50mg/瓶或IOOmg/瓶(按燈盞花乙素?zé)o水物計(jì))分裝，真空冷凍干燥，壓塞，得凍干品。實(shí)施例9燈盞花乙素水合物注射液的制備燈盞花乙素水合物(按干品計(jì))10g，磷酸氫二鈉4g，檸檬酸鈉2g，亞硫酸氫鈉lg、丙二醇10ml、EDTA 二鈉0. lg，避強(qiáng)光下加注射用水、通氮?dú)狻嚢枋谷芙?，檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH為5. 6 6. 3，加活性碳0. 1% (W/ V)攪拌15 45min，過(guò)濾，補(bǔ)水至2000ml左右，用0. 22微米微孔濾膜過(guò)濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量6000 20000的超濾膜過(guò)濾，溶液通氮?dú)怙柡?，按主?0、20、25、40mg、50mg或 IOOmg/支分裝，滅菌得成品。實(shí)施例10燈盞花乙素水合物注射液的制備燈盞花乙素水合物(按干品計(jì))5g，吐溫-80 20ml，鹽酸半胱氨酸lg、丙二醇20ml、EDTA 二鈉0. lg，避強(qiáng)光下加注射用水、通氮?dú)?、攪拌使溶解，檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH為5. 6 6. 3，加活性碳0.1% (W/V)攪拌 45min，過(guò)濾，補(bǔ)水至2000ml左右，用0. 22微米微孔濾膜過(guò)濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量 6000 20000的超濾膜過(guò)濾，溶液通氮?dú)怙柡?，按主?. 5,5UOmg/支分裝，滅菌得成品。
實(shí)施例11燈盞花乙素水合物注射液的制備燈盞花乙素水合物(按干品計(jì))10g， 精氨酸4g，檸檬酸鈉2g，鹽酸半胱氨酸lg、丙二醇20ml、EDTA 二鈉0. 2g，避強(qiáng)光下加注射用水、通氮?dú)狻嚢枋谷芙?，檸檬酸和檸檬酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH為5. 6 6. 3，加活性碳0. 1% (W/ V)攪拌35min，過(guò)濾，補(bǔ)水至5000ml左右，用0. 22微米微孔濾膜過(guò)濾，溶液通氮?dú)怙柡?，按主?0、20、25、40mg或50mg/支分裝，滅菌得成品。實(shí)施例12燈盞花乙素水合物注射液的制備稱取葡萄糖250g加入注射用水中，攪拌使溶解完全，加入配液量0. 5%的活性炭，加熱10-30分鐘左右，經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭；將燈盞花乙素二水合物(按干品計(jì))5g與上述濾液混合均勻，加磷酸二氫鈉3g，酒石酸鈉lg、 丙三醇20ml、磺丁醚- β -環(huán)糊精lg，EDTA 二鈉0. 05g，溶解完全后，加注射用水至5000ml， 用1-3M鹽酸或乳酸或檸檬酸以及檸檬酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值在4. 5-6. 0的范圍內(nèi)，加配液量 0. 05 %的活性炭，加熱攪拌10-30分鐘左右，過(guò)濾脫炭，再經(jīng)0. 22um微孔濾膜過(guò)濾一到兩次，溶液通高純氮?dú)怙柡?，檢驗(yàn)澄明度等后溶液按主藥25、50mg或IOOmg支灌封，滅菌，包裝即得。實(shí)施例13燈盞花乙素水合物氯化鈉輸液的制備將燈盞花乙素水合物(按無(wú)水物計(jì))25g、氯化鈉425g、枸櫞酸鈉5g、EDTA 二鈉lg，加入注射用水中，溶液通高純氮?dú)怙柡停瑪嚢枋谷芙馔耆?，用枸櫞酸溶液和枸櫞酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH值在5. 0-6. 5的范圍內(nèi)，加注射用水至50L，加配液量0. 05%的活性炭，攪拌10-30分鐘左右，過(guò)濾脫炭，再經(jīng)0. 22um的膜精濾或者采用截留相對(duì)分子質(zhì)量6000 20000的超濾膜過(guò)濾，經(jīng)半成品化驗(yàn)，待其含量、pH值和澄明度合格后，在高純氮?dú)庀?，灌裝于50ml、IOOml或250ml瓶或塑料袋中，滅菌，包裝即得。實(shí)施例14燈盞花乙素水合物氯化鈉輸液的制備將燈盞花乙素水合物(按無(wú)水物計(jì))20g、氯化鈉425g、酒石酸鈉5g、EDTA 二鈉0. 5g，加入注射用水中，溶液通高純氮?dú)怙柡停?攪拌使溶解完全，用酒石酸溶液和酒石酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH值在5. 0-6. 5的范圍內(nèi)，加注射用水至50L，加配液量0. 05%的活性炭，攪拌10-30分鐘左右，過(guò)濾脫炭，再經(jīng)0. 22um的微孔膜精濾2次，經(jīng)半成品化驗(yàn)，待其含量、pH值和澄明度合格后，在高純氮?dú)庀?，灌裝于50ml、 IOOml或250ml瓶或塑料袋中，滅菌，包裝即得。實(shí)施例15燈盞花乙素水合物片(50mg/片)處方燈盞花乙素2水合物50g微晶纖維素135g乳糖IOg羧甲基淀粉鈉5gβ -環(huán)糊精5g5% PVP30(50%的乙醇水溶液)適量硬脂酸鎂2g將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、乳糖、β-環(huán)糊精、羧甲基淀粉鈉過(guò)100目蹄， 用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過(guò)18-24目篩制粒，干燥，過(guò)14-20 目篩整粒后，加硬脂酸鎂混勻，壓片。實(shí)施例16燈盞花乙素水合物膠囊(50mg/粒)處方燈盞花乙素2水合物 50g
微晶纖維素乳糖
65g IOg 5g 5g 羧甲基淀粉鈉β-環(huán)糊精5% PVP30(
5 % PVP30 (50 %的乙醇水溶液)適量 硬脂酸鎂將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、乳糖、β-環(huán)糊精、羧甲基淀粉鈉過(guò)100目蹄， 用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過(guò)18-24目篩制粒，干燥，過(guò)14-20 目篩整粒后，加硬脂酸鎂混勻，灌裝膠囊。實(shí)施例17燈盞花乙素水合物分散片(50mg/片)處方燈盞花乙素水合物 50g微晶纖維素135g乳糖IOg聚乙二醇60003g低取代羥丙基纖維素IOg羧甲基淀粉鈉5gβ -環(huán)糊精5g阿司帕坦Ig5 % PVP30 (50 %的乙醇水溶液)適量硬脂酸鎂2g將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、乳糖、聚乙二醇6000、低取代羥丙基纖維素、 β -環(huán)糊精、羧甲基淀粉鈉、阿司帕坦過(guò)100目篩，用5 % PVP30的50 %的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過(guò)18-24目篩制粒，干燥，過(guò)14-20目篩整粒后，加已過(guò)100目篩的硬脂酸鎂混勻，壓片。實(shí)施例18燈盞花乙素水合物膠囊(50mg/粒)處方燈盞花乙素1. 75水合物50g微晶纖維素65g玉米淀粉IOg低取代羥丙基纖維素5gβ -環(huán)糊精5g5 % PVP30 (50 %的乙醇水溶液)適量微粉硅膠2g將燈盞花乙素水合物、微晶纖維素、玉米淀粉、β -環(huán)糊精、低取代羥丙基纖維素過(guò) 100目篩，用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過(guò)18-24目篩制粒，干燥，過(guò)14-20目篩整粒后，加微粉硅膠混合，灌裝膠囊。實(shí)施例19燈盞花乙素1. 75水合物片(50mg/片)處方燈盞花乙素1. 75水合物50g甘露醇120g乳糖25g
羧甲基淀粉鈉5gβ-環(huán)糊精5g5% PVP30(50%的乙醇水溶液)適量硬脂酸鎂2g將燈盞花乙素水合物、甘露醇、乳糖、β -環(huán)糊精、羧甲基淀粉鈉過(guò)100目篩，用5% PVP30的50%的乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過(guò)18-24目篩制粒，干燥，過(guò)14-20目篩整粒后，加硬脂酸鎂混勻，壓片。實(shí)施例20燈盞花乙素水合物顆粒(IOOmg/包)處方燈盞花乙素水合物IOOg(以無(wú)水物計(jì))甘露醇185g乳糖710g甲基纖維素3g黃原膠5g固體食用香精I(xiàn)g5%羥丙基甲基纖維素適量將燈盞花乙素水合物、甘露醇、乳糖、甲基纖維素、黃原膠、食用香精過(guò)100目蹄， 用5%的羥丙基甲基纖維素的50%乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過(guò)18-24目篩制粒， 60°C以下干燥，過(guò)14-20目篩整粒后，分包裝。實(shí)施例21燈盞花乙素水合物混懸劑05mg/包)處方燈盞花乙素水合物25g(以無(wú)水物計(jì))甘露醇165g乳糖780g黃原膠8g固體食用香精I(xiàn)g5%羥丙基甲基纖維素適量將燈盞花乙素水合物、甘露醇、乳糖、食用香精過(guò)100目蹄，用5%的羥丙基甲基纖維素的50%乙醇水溶液適量為粘合劑制軟材，過(guò)18-24目篩制粒，60°C以下干燥，過(guò)14-20 目篩整粒后，將已過(guò)100目篩的黃原膠與上述顆?；靹?，分包裝。實(shí)施例22燈盞花乙素水合物滴丸劑處方燈盞花乙素2水合物25g(以無(wú)水物計(jì))聚乙二醇6000325g聚乙二醇400030g硬脂酸20g將聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、硬脂酸加熱使之融化，將過(guò)100目篩的燈盞花乙素水合物加入其中，攪拌使混勻，保溫下滴入植物油或二甲基硅油中，待冷卻成丸，收集滴丸，干燥即得。實(shí)施例23藥理學(xué)試驗(yàn)如下Wistar雄性大鼠48只，體重250 300g，隨機(jī)分為4組假手術(shù)組、缺血再灌組和燈盞花乙素1. 75水合物組、燈盞花乙素2水合物組，每組12只。本發(fā)明藥物組；采用燈盞花乙素水合物的生理鹽水腹腔給藥，劑量為75mg/kg，每天兩次，連續(xù)7天，最后一次給藥 60min后實(shí)施腦缺血手術(shù)；假手術(shù)組和缺血再灌組分別給以等容積的生理鹽水。大鼠用10%水合氯醛(3.5ml/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，參照文獻(xiàn)用Zea Longa線拴改良法造模[上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)2007，27 (10) :1218-1222]；假手術(shù)組栓線只插入10mm，其余步驟同模型組，動(dòng)物蘇醒后出現(xiàn)手術(shù)側(cè)Homer征和對(duì)側(cè)體運(yùn)動(dòng)障礙即為模型制備成功。造模成功后本發(fā)明藥物組一天給藥2次，劑量同前，假手術(shù)組和缺血再灌組分別給以等容積的生理鹽水。造模后池抽出線，再灌注M小時(shí)后處死大鼠，迅速取腦稱重。低溫下用生理鹽水制成10%腦組織勻漿液，低溫離心，3000r/min離心lOmin，棄沉淀，取上清液，按市售測(cè)試超氧歧化酶SOD、丙二醛MDA、一氧化氮NO、一氧化氮合酶NOS相應(yīng)試劑盒的說(shuō)明書分別測(cè)定SOD、MDA、NO、NOS含量或活性，結(jié)果見(jiàn)表3。表3.本發(fā)明藥物對(duì)大鼠腦缺血再灌注腦組織中NO、N0S, MDA、SOD的影響
NO_ol/L)NOS(U/ml)MDA(nmoVml)SOD(U/ml)假手術(shù)組17±4.2616+4.64147±0. 53218+24. 07缺血再灌組26 土 6. 9226 土 6. 072，&1土0.66134 土 19.25燈盞花乙素20+6, 3220土 5. 52. 07 土0. 78181 ±23 . 611- 75水合物組燈盞花乙素2水21 + 7.5419±5. 742. 02 ±0. 71179 ±19. 36合物組結(jié)果表明，與假手術(shù)組相比，缺血再灌模型組大鼠腦組織中SOD活性明顯降低， MDA、NO含量及NOS活性明顯增加(P<0.01)；與缺血再灌模型組相比，本發(fā)明藥物大鼠腦組織中SOD活性明顯升高，NOS活性降低，MDA、NO含量明顯減少(P < 0. 01)。隨著對(duì)缺血性腦損傷的病理機(jī)制認(rèn)識(shí)不斷加深，人們發(fā)現(xiàn)氧自由基、興奮性氨基酸、一氧化氮(N0)、單胺類遞質(zhì)、Ca2+超載等多種因素參與了損傷過(guò)程。在缺血性腦損傷中， 缺血過(guò)程中可產(chǎn)生大量的氧自由基。SOD是細(xì)胞內(nèi)主要的對(duì)抗氧自由基的酶促防御系統(tǒng)，它通過(guò)歧化方式清除超氧陰離子自由基，保護(hù)生物體免受自由基的攻擊。目前已肯定SOD可顯著減輕腦缺血引起的損傷，不僅給予外源性SOD有抗腦缺血損傷的作用，而且利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物敲除或轉(zhuǎn)入SOD基因后均可分別拮抗或促進(jìn)腦缺血的損傷?？梢?jiàn)SOD值的高低直接反映機(jī)體清除氧自由基的能力。各種不同的氧自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，形成一系列的脂質(zhì)自由基及其降解產(chǎn)物MDA。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，其含量的變化可間接地反映組織中氧自由基含量變化。研究表明，NO是具有生物活性信使小分子，可自由穿過(guò)細(xì)胞膜，作用于胞內(nèi)的靶分子。在生物體內(nèi)，NO生成后很快被氧化滅活，以硝酸根和亞硝酸根的形式存在于細(xì)胞的內(nèi)外液中。低濃度的NO能使血管擴(kuò)張，抑制血小板集聚與粘附，使谷氨酸調(diào)控的離子通道下調(diào)，防止細(xì)胞內(nèi)鈣超載，因而對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用；但在高濃度下，NO可與超氧陰離子反應(yīng)生成超氧亞硝酸根離子，超氧亞硝酸根離子可以降解為0H—和NO2—自由基，使細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化作用，在細(xì)胞的膜水平造成強(qiáng)烈的神經(jīng)毒性，甚至導(dǎo)致神經(jīng)元死亡等。
研究表明，NO在腦缺血性損傷和心肌缺血損傷的發(fā)病中起重要作用，缺血后數(shù)分鐘NO含量明顯增高，之后緩慢下降，于再灌注期NO再次升高。其機(jī)制可能為腦缺血后神經(jīng)元受損，細(xì)胞膜去極化過(guò)程增強(qiáng)，突觸前谷氨酸等興奮性氨基酸生成大量增加，使胞外谷氨酸濃度升高，激活N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體，NMDA受體激活后使突觸后Ca2+ 內(nèi)流增加，激活一氧化氮合酶N0S，促進(jìn)NO的生成；其二，腦缺血后，ATP大量消耗，導(dǎo)致能量代謝障礙及cAMP依賴的蛋白激酶活性下降，由于NOS脫磷酸化使得NOS的活性增強(qiáng)，從而促進(jìn)NO的生成。一氧化氮合酶是一氧化氮合成的限速酶NOS。在腦缺血早期，NOS介導(dǎo)生成的NO通過(guò)擴(kuò)張血管改善缺血區(qū)的血液供應(yīng)，具有短時(shí)保護(hù)性作用，但隨著NO的大量產(chǎn)生，在缺血區(qū)NOS因介導(dǎo)神經(jīng)毒性效應(yīng)并很快占優(yōu)，使腦缺血損傷加??；到晚期，腦缺血腦組織損傷、 炎癥反應(yīng)刺激巨噬細(xì)胞、神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元等可大量產(chǎn)生誘導(dǎo)型N0S，誘導(dǎo)型NOS可緩慢而持久大量地產(chǎn)生N0，過(guò)量的NO產(chǎn)生和釋放，加重神經(jīng)元損害。因此，降低誘導(dǎo)型NOS 的產(chǎn)生可明顯減少NO的釋放，從而降低NO的細(xì)胞毒性作用，起到保護(hù)腦細(xì)胞的作用。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明，大鼠腦缺血再灌注損傷后，腦組織中NO和NOS含量顯著增加，說(shuō)明NO和NOS參與了腦缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制，給予本發(fā)明藥物治療后，NO和 NOS含量明顯下降。表明本發(fā)明藥物通過(guò)對(duì)NOS活性和NO含量進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而發(fā)揮對(duì)腦缺血再灌注損傷或腦梗塞的保護(hù)作用。腦缺血及再灌注損傷可導(dǎo)致腦細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，產(chǎn)生過(guò)多的氧自由基，損傷腦細(xì)胞膜。腦缺血時(shí)由于組織氧和能量代謝的物質(zhì)供應(yīng)不足，ATP生成減少，離子泵失效， Na+-K+-ATP酶活性降低，使大量Na+內(nèi)流、K+外流，Cl_和H2O被動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，引起神經(jīng)細(xì)胞急性滲透性腫脹死亡。Na+內(nèi)流和K+外流導(dǎo)致細(xì)胞膜電位下降產(chǎn)生去極化，電壓依賴性Ca2+ 通道開(kāi)放，Ca2+大量?jī)?nèi)流；同時(shí)由于K+、蛋白激酶C及遞質(zhì)的釋放等作用，受體依賴性Ca2+通道開(kāi)放，Ca2+大量?jī)?nèi)流。細(xì)胞內(nèi)鈣超載可導(dǎo)致氧自由基產(chǎn)生增加、花生四烯酸代謝增強(qiáng)、興奮性氨基酸遞質(zhì)釋放增加等，興奮性氨基酸又可引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載造成神經(jīng)細(xì)胞凋亡， 其中氧自由基增加是缺血再灌注損傷的一個(gè)重要因素。此外，腦缺血所致的自由基增加引起的神經(jīng)元損傷、鈣離子內(nèi)流增加、腦缺血所致的一氧化氮、誘導(dǎo)型NOS等增加也是血管性癡呆的一個(gè)重要因素，本發(fā)明藥物對(duì)腦缺血的抗氧化作用、抗自由基作用、減少缺血所致的一氧化氮的產(chǎn)生，為治療血管性癡呆提供了依據(jù)。因此，本發(fā)明藥物可顯著減少缺血區(qū)腦組織的過(guò)氧化脂質(zhì)MDA，NO含量，提高大鼠腦組織中SOD含量，增加清除自由基的能力，降低NOS活性，可減輕自由基反應(yīng)對(duì)腦組織的損害。由此可見(jiàn)，本發(fā)明藥物抑制自由基的生成等多種途徑，保護(hù)細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)，有助于降低腦血管通透性以及改善血液流變學(xué)指標(biāo).改善腦部微循環(huán)，對(duì)抗腦缺血再灌注后氧自由基對(duì)腦組織的損害作用而發(fā)揮其對(duì)腦的保護(hù)作用。可用于治療或預(yù)防缺血性腦病、腦梗塞、 腦血栓及其后遺癥、血管性癡呆、改善腦部微循環(huán)的作用，并可用于制備治療和預(yù)防相應(yīng)疾病的藥物?？梢岳斫猓瑥谋緦I(yè)角度，很多細(xì)節(jié)的變化是可能的，這并不因此限制本發(fā)明范圍和精神，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施例。
權(quán)利要求
1.一種心腦血管治療藥物，其特征在于心腦血管治療藥物為燈盞花乙素衍生物，即燈盞花乙素水合物，其分子式為C21H18O12 · ηΗ20，η = 1. 7 2. 2之間的數(shù)字。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的心腦血管治療藥物，其特征在于燈盞花乙素水合物為燈盞花乙素2水合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的心腦血管治療藥物，其特征在于燈盞花乙素水合物為燈盞花乙素1.75水合物。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的心腦血管治療藥物制備方法，其特征在于其步驟如下方法A在反應(yīng)容器中，將燈盞花全草用體積比為2 20倍量的水、或C1-C6的低分子醇、C2-C6的低分子腈、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C8的低分子酯等中的一種或幾種為溶劑進(jìn)行提取一次至數(shù)次，過(guò)濾、合并提取液，將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用堿調(diào)節(jié)ρΗ為6. 5 9之間，過(guò)濾，過(guò)硅膠層析柱、或大孔吸附樹(shù)脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹(shù)脂，用水或 C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈的一種或幾種進(jìn)行洗脫，濾液用酸調(diào)節(jié)PH為1 5，攪拌、放置、使沉淀充分析出，將所得沉淀過(guò)濾，用水與C1-C6的低分子醇、 C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級(jí)醚、C1-C6的低級(jí)鹵代烴或C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過(guò)濾，水洗或C1-C6的低分子醇、或C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種洗，將所得的固體干燥，得燈盞花乙素結(jié)晶水合物；或者方法B在反應(yīng)容器中，將燈盞花全草用體積比為2 20倍量的水、堿性溶液或C1-C6的低分子醇等中的一種或幾種為溶劑進(jìn)行提取一次至數(shù)次，過(guò)濾，合并濾液，將濾液濃縮，濃縮物加水稀釋，用酸或堿調(diào)節(jié)ρΗ為6. 5 9之間，過(guò)濾，濾液過(guò)硅膠層析柱及大孔吸附樹(shù)脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹(shù)脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈等中的一種或幾種進(jìn)行洗脫，濾液用酸調(diào)節(jié)PH為1 5，放置，使沉淀充分析出，將所得沉淀過(guò)濾，用水或C1-C6的低分子醇、C2-C8的低分子酯、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C6的低分子腈、C2-C6的低級(jí)醚、C1-C6的低級(jí)鹵代烴、或C1-C8的低分子酸等中的一種或幾種為結(jié)晶溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶一次或數(shù)次，過(guò)濾，水洗，將所得的固體干燥，得燈盞花乙素結(jié)晶水合物。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的心腦血管治療藥物用途，其特征在于用于制備注射用凍干粉針制劑、或者無(wú)菌分裝粉針制劑、或者大輸液制劑、或者小水針注射劑及固體制劑， 固體制劑包括片劑、膠囊、顆粒劑、混懸劑、滴丸。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的心腦血管治療藥物用途，其特征在于適用于制備人和哺乳動(dòng)物的冠心病、心絞痛、心肌梗死，心律失常、缺血性腦疾病、腦血栓、腦出血及其后遺癥、血管性癡呆、末梢循環(huán)障礙疾病，包括各種動(dòng)脈閉塞癥、脈管炎、糖尿病引起的微循環(huán)障礙、高血壓、高脂血癥、高粘血癥；頑固性頸周綜合征、椎基底動(dòng)脈供血不足及其他缺血及伴有微循環(huán)障礙的疾病疾病的治療或預(yù)防的藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的心腦血管治療藥物的制備方法，其特征在于本權(quán)利要求中的制備過(guò)程中的過(guò)濾的方式包括用濾布、漏斗、垂熔玻璃濾器、砂芯濾棒、板框式壓濾機(jī)、微孔濾膜、陶瓷膜或超濾等的一種或幾種過(guò)濾方式進(jìn)行一次或幾次過(guò)濾。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的心腦血管治療藥物的制備方法，其特征在于本權(quán)利要求中的兩種方法的制備過(guò)程中，“提取液用堿調(diào)節(jié)pH為6. 8 9之間，過(guò)濾，濾液過(guò)硅膠層析柱及大孔吸附樹(shù)脂、或聚酰胺柱層析或葡萄糖凝膠樹(shù)脂，用水或C1-C6的低分子醇、C3-C8的低級(jí)酮、C2-C8的低分子酯、C2-C6的低分子腈的一種或幾種進(jìn)行洗脫，濾液用酸調(diào)節(jié)pH為 1 5，放置，使沉淀充分析出”的過(guò)程，該過(guò)程在制備過(guò)程中可將酸沉淀后得到的沉淀再水稀釋后重復(fù)上述過(guò)程，進(jìn)行1 3次，以實(shí)現(xiàn)純化目的，之后再進(jìn)行重結(jié)晶過(guò)程。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的心腦血管治療藥物的制備方法，其特征在于所述重結(jié)晶溶劑選自水，以及下列溶劑甲醇、乙醇、異丙醇，丙酮、丁酮、異己酮、乙腈、四氫呋喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸、二氯甲烷、氯仿、乙醚、石油醚、苯中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)人和哺乳動(dòng)物的冠心病、心絞痛、心肌梗死，心律失常、缺血性腦疾病、腦血栓、腦出血及其后遺癥、血管性癡呆、末梢循環(huán)障礙疾病，包括各種動(dòng)脈閉塞癥、脈管炎、糖尿病引起的微循環(huán)障礙、高血壓、高脂血癥、高粘血癥；頑固性頸周綜合征、椎基底動(dòng)脈供血不足及其他缺血及伴有微循環(huán)障礙的疾病疾病的治療或預(yù)防的藥物——燈盞花乙素衍生物物及其制備和用途，該衍生物具有較好的存儲(chǔ)穩(wěn)定性，適用于制備對(duì)制備心腦血管疾病的治療或預(yù)肪的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P9/12GK102379887SQ20101027739
公開(kāi)日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2010年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月2日
發(fā)明者劉力 申請(qǐng)人:胡梨芳