專利名稱：一種二色補(bǔ)血草提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種二色補(bǔ)血草提取物，具體涉及一種具有a -葡萄糖苷酶抑制活性的二色補(bǔ)血草提取物。
背景技術(shù)：
二色補(bǔ)血草是白花丹科補(bǔ)血草屬的多年生草本植物，別名血見(jiàn)愁、蒼蠅花、蠅子草、燎眉蒿。分布于河北、河南、山西、甘肅、陜西等地。生于海拔500 2 000 m的海濱堿灘、草地沙丘。全草入藥，性味甘微澀苦，無(wú)毒。主要功能補(bǔ)血益氣，止血散瘀。主治功能性子宮出血、宮頸癌、月經(jīng)不調(diào)、腎盂腎炎、胃潰瘍等癥。二色補(bǔ)血草以其確切的藥用價(jià)值和極高的生態(tài)學(xué)價(jià)值而備受人們的關(guān)注，近幾年來(lái)對(duì)此藥材的開(kāi)發(fā)利用也逐漸深入。
a 一葡萄糖苷酶(EC 3. 2. I. 20)又稱a 一葡萄糖苷水解酶、麥芽糖酶，它能從低聚糖類底物的非還原端切開(kāi)〃一 1，4糖苷鍵，釋放出葡萄糖，在機(jī)體多種代謝功能中起關(guān)鍵作用。它與許多因代謝紊亂失調(diào)引起的疾病如糖尿病、癌癥、病毒感染等密切相關(guān)。長(zhǎng)期以來(lái)，人們?cè)噲D尋找合適的抑制劑，以期對(duì)有關(guān)疾病進(jìn)行防治。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種具有葡萄糖苷酶抑制活性的二色補(bǔ)血草提取物。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種二色補(bǔ)血草提取物，以二色補(bǔ)血草為原料， 以水或乙醇為溶劑提取，過(guò)濾，得到水提取液或乙醇提取液經(jīng)干燥制得；其中乙醇濃度為 70-95%。
當(dāng)提取溶劑為水時(shí)，二色補(bǔ)血草在用水提取前，先經(jīng)70-95%的乙醇提取，過(guò)濾，取過(guò)濾后的二色補(bǔ)血草再用上述提取溶劑水進(jìn)行提取。
優(yōu)選方案為水提取液在干燥前先經(jīng)大孔樹(shù)脂柱層析，依次采用水和乙醇洗脫，取乙醇洗脫液，干燥即得二色補(bǔ)血草提取物。其中乙醇作為洗脫劑，優(yōu)選濃度為30-50%。
最佳方案為上述乙醇洗脫液在干燥前先經(jīng)聚酰胺柱層析，依次采用水和乙醇洗脫，取乙醇部分干燥即得所述二色補(bǔ)血草提取物。其中聚酰胺柱的洗脫方式優(yōu)選為梯度洗脫，依次采用水、30%、50%、70%和95%乙醇洗脫，分別取各段乙醇洗脫液，干燥。
當(dāng)提取溶劑為乙醇時(shí)；得到的乙醇提取液在干燥前先經(jīng)過(guò)石油醚萃取，經(jīng)萃取后的提取液經(jīng)干燥制得二色補(bǔ)血草提取物。
優(yōu)選方案為乙醇提取液干燥后，用水混懸，經(jīng)石油醚萃取，萃取后的水相經(jīng)干燥制得所述二色補(bǔ)血草提取物。
最佳方案為上述經(jīng)石油醚萃取后的乙醇提取液或水相在干燥前還需經(jīng)過(guò)乙酸乙酯萃取，然后干燥制得上述二色補(bǔ)血草提取物。
其中原料采用二色補(bǔ)血草的地下部分或地上部分。
本發(fā)明還提供了上述二色補(bǔ)血草提取物在制備a _葡萄糖苷酶抑制劑方面的應(yīng)用。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明制備的二色補(bǔ)血草提取物相比陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖均具有較高的〃-葡萄糖苷酶抑制活性。同時(shí)利用不同極性的溶劑萃取不同的部位，以及通過(guò)大孔樹(shù)脂和聚酰胺柱層析，進(jìn)行篩選，去除無(wú)活性部分，得到更高葡萄糖苷酶抑制活性的提取物。本發(fā)明制備的二色補(bǔ)血草提取物能夠有效替代現(xiàn)有的〃-葡萄糖苷酶抑制劑，并可作為糖尿病的治療藥物對(duì)II型糖尿病治療進(jìn)行深入研究。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
二色補(bǔ)血草bicolor Kuntze)采于陜西眉縣太白山，葡萄糖苷酶(E. C. 232-604-7)購(gòu)于 Sigma 公司，(NO. G-5003, Lot. 081K4715)，PNPG 底物購(gòu)于 Amresco,酶標(biāo)儀型號(hào)為 Tecan Infinite F50.a -葡萄糖苷酶抑制活性在96孔板中測(cè)定，IQuLa-葡萄糖苷酶溶液(用O. 067mol/ L PH6. 8 的 PBS 配制成 lU/mL)+20// L0. 067mol/L PH6. 8 的 PBS+2// L 待測(cè)樣品溶液(IOmg/ ml), 37°C溫育 IOmin 后+30//L PNPG (用 0.067mol/L PH6. 8 的 PBS 配制成 10mmol/L)，37 °C溫育15 min后在405nm測(cè)定吸光度，以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照。抑制率=[(A酶-A酶空)-(A樣-A樣空)]/ ( A酶-A酶空)*100%產(chǎn)品實(shí)施例一取二色補(bǔ)血草地下部分洗干凈后干燥、粉碎后用95%的乙醇(10倍量)回流提取2小時(shí)，過(guò)濾得濾液和濾渣；取濾液減壓干燥得提取物Fr. I。
產(chǎn)品實(shí)施例二將產(chǎn)品實(shí)施例一中得到的濾渣揮干乙醇后，經(jīng)10倍水煮2小時(shí)，水提液干燥后得提取物 Fr. 2。
產(chǎn)品實(shí)施例三將產(chǎn)品實(shí)施例一中得到的提取物Fr. I用水混懸后用石油醚萃取，萃取得到水相和石油醚相；取石油醚相減壓干燥，得石油醚部位的提取物Fr. I. I。
產(chǎn)品實(shí)施例四將產(chǎn)品實(shí)施例三中萃取后得到的水相經(jīng)乙酸乙酯萃取，萃取后得到水相和乙酸乙酯相；取乙酸乙酯相減壓干燥，得乙酸乙酯部位的提取物Fr. I. 2。
產(chǎn)品實(shí)施例五將產(chǎn)品實(shí)施例四中經(jīng)乙酸乙酯萃取后得到的水相，再經(jīng)正丁醇萃取，得到水相和正丁醇相，減壓干燥，得正丁醇部位的提取物Fr. I. 3。
產(chǎn)品實(shí)施例六將產(chǎn)品實(shí)施例五中經(jīng)正丁醇萃取后得到的水相減壓干燥，得水部位的提取物Fr. I. 4。
產(chǎn)品實(shí)施例七取二色補(bǔ)血草地下部分洗干凈后干燥、粉碎后用70%的乙醇(10倍量)回流提取2小時(shí)，過(guò)濾得濾液和濾渣；取濾液減壓干燥得提取物Fr. 3。
產(chǎn)品實(shí)施例八將產(chǎn)品實(shí)施例七中得到的濾渣揮干乙醇后，經(jīng)10倍水煮2小時(shí)，水提液干燥后得提取4物 Fr. 4。
產(chǎn)品實(shí)施例九將產(chǎn)品實(shí)施例七中得到的提取物Fr. 3用水混懸后用石油醚萃取，萃取得到水相和石油醚相；取石油醚相減壓干燥，得石油醚部位的提取物Fr. 3. I。
產(chǎn)品實(shí)施例十將產(chǎn)品實(shí)施例九中萃取后得到的水相經(jīng)乙酸乙酯萃取，萃取后得到水相和乙酸乙酯相；取乙酸乙酯相減壓干燥，得乙酸乙酯部位的提取物Fr. 3. 2。
產(chǎn)品實(shí)施例i^一將產(chǎn)品實(shí)施例十中經(jīng)乙酸乙酯萃取后得到的水相，再經(jīng)正丁醇萃取，得到水相和正丁醇相，減壓干燥，得正丁醇部位的提取物Fr. 3. 3。
產(chǎn)品實(shí)施例十二將產(chǎn)品實(shí)施例十一中經(jīng)正丁醇萃取后得到的水相減壓干燥，得水部位的提取物 Fr. 3. 4。
產(chǎn)品實(shí)施例十三取二色補(bǔ)血草地下部分洗干凈后干燥、粉碎后用80%的乙醇(10倍量)回流提取2小時(shí)，過(guò)濾得濾液和濾渣；取濾液減壓干燥得提取物Fr. 5。
產(chǎn)品實(shí)施例十四將產(chǎn)品實(shí)施例十三中得到的濾渣揮干乙醇后，經(jīng)10倍水煮2小時(shí)，水提液干燥后得提取物Fr. 6。
產(chǎn)品實(shí)施例十五將產(chǎn)品實(shí)施例十三中得到的提取物Fr. 5用水混懸后用石油醚萃取，萃取得到水相和石油醚相；取石油醚相減壓干燥，得石油醚部位的提取物Fr. 5. I。
產(chǎn)品實(shí)施例十六將產(chǎn)品實(shí)施例十五中萃取后得到的水相經(jīng)乙酸乙酯萃取，萃取后得到水相和乙酸乙酯相；取乙酸乙酯相減壓干燥，得乙酸乙酯部位的提取物Fr. 5. 2。
產(chǎn)品實(shí)施例十七將產(chǎn)品實(shí)施例十六中經(jīng)乙酸乙酯萃取后得到的水相，再經(jīng)正丁醇萃取，得到水相和正丁醇相，減壓干燥，得正丁醇部位的提取物Fr. 5. 3。
產(chǎn)品實(shí)施例十八將產(chǎn)品實(shí)施例十七中經(jīng)正丁醇萃取后得到的水相減壓干燥，得水部位的提取物 Fr. 5. 4。
產(chǎn)品實(shí)施例十九取二色補(bǔ)血草的地上部分陰干后粉碎(21kg)，用75L80%的乙醇冷浸一個(gè)月，濾液濃縮，濾渣繼續(xù)用75L80%的乙醇冷浸一個(gè)月，濾液合并濃縮得提取物Fr. 7。
產(chǎn)品實(shí)施例二十取產(chǎn)品實(shí)施例十九中的提取物Fr. 7上DlOl大孔樹(shù)脂進(jìn)行柱層析，分別用水、30%、 50%、70%、95%乙醇洗脫，分段減壓干燥后，分別得水洗脫部位a、30%乙醇洗脫部位的提取物 Fr. 7. I、50%乙醇洗脫部位的提取物Fr. 7. 2、70%乙醇洗脫部位b、95%乙醇洗脫部位的提取物 Fr. 7. 3。
產(chǎn)品實(shí)施例二 i^一取產(chǎn)品實(shí)施例二十中大孔樹(shù)脂30%乙醇洗脫部位的提取物Fr. 7. I繼續(xù)上聚酰胺柱， 分別用水、30%、50%、70%、95%乙醇洗脫，分段減壓干燥后依次得C、Fr. 7. I. I、Fr. 7. I. 2、 Fr. 7. I. 3、Fr. 7. I. 4。
產(chǎn)品實(shí)施例二十二取產(chǎn)品實(shí)施例二十中大孔樹(shù)脂50%乙醇洗脫部位的提取物Fr. 7. 2繼續(xù)上聚酰胺柱， 分別用水、30%、50%、70%、95%乙醇洗脫，分段減壓干燥后依次得d、Fr. 7. 2. I、Fr. 7. 2. 2、 Fr. 7. 2. 3、Fr. 7. 2. 4。
應(yīng)用實(shí)施例取本發(fā)明產(chǎn)品實(shí)施例制備的提取物Fr. UFr. 2,Fr. I. UFr. I. 2,Fr. I. 3,Fr. I. 4,Fr. 3、 Fr. 4、Fr. 3. l>Fr. 3. 2、Fr. 3. 3、Fr. 3. 4>Fr. 5、Fr. 6、Fr. 5. l、Fr. 5. 2、Fr. 5. 3>Fr. 5. 4、Fr. 7、 Fr. 7. UFr. 7. 3,Fr. 7. 2、Fr. 7. I. UFr. 7. I. 2,Fr. 7. I. 3、Fr. 7. I. 4,Fr. 7. 2. I、Fr. 7. 2. 2 、Fr. 7. 2. 3和Fr. 7. 2. 4進(jìn)行a -葡萄糖苷酶抑制活性測(cè)定，結(jié)果如下表所示。
表I各提取物的a ~葡萄糖苷酶抑制活性測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述二色補(bǔ)血草提取物以二色補(bǔ)血草為原料，以水或乙醇為溶劑提取，過(guò)濾，得到水提取液或乙醇提取液經(jīng)干燥制得；所述乙醇濃度為 70-95%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述提取溶劑為水；所述二色補(bǔ)血草在用水提取前，先經(jīng)70-95%的乙醇提取，過(guò)濾，取過(guò)濾后的二色補(bǔ)血草用所述提取溶劑水進(jìn)行提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述水提取液在干燥前先經(jīng)大孔樹(shù)脂柱層析，依次經(jīng)水和乙醇洗脫，取乙醇洗脫液，干燥即得所述二色補(bǔ)血草提取物；所述洗脫液乙醇的濃度為30-50%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述乙醇洗脫液在干燥前先經(jīng)聚酰胺柱層析，依次采用水和乙醇洗脫，取乙醇部分干燥即得所述二色補(bǔ)血草提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述提取溶劑為乙醇；所述乙醇提取液在干燥前先經(jīng)過(guò)石油醚萃取，經(jīng)萃取后的提取液經(jīng)干燥制得所述二色補(bǔ)血草提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述乙醇提取液干燥后，用水混懸，經(jīng)石油醚萃取，萃取后的水相經(jīng)干燥制得所述二色補(bǔ)血草提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述經(jīng)石油醚萃取后的乙醇提取液在干燥前還需經(jīng)過(guò)乙酸乙酯萃取，然后干燥制得所述二色補(bǔ)血草提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述經(jīng)石油醚萃取后的水相在干燥前還需經(jīng)過(guò)乙酸乙酯萃取，然后干燥制得所述二色補(bǔ)血草提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的二色補(bǔ)血草提取物，其特征在于所述原料采用二色補(bǔ)血草的地下部分或地上部分。
10.權(quán)利要求I至9任一所述二色補(bǔ)血草提取物在制備葡萄糖苷酶抑制劑方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種二色補(bǔ)血草提取物及其應(yīng)用，該提取物以二色補(bǔ)血草為原料，以水或乙醇為溶劑提取，過(guò)濾，得到水提取液或乙醇提取液經(jīng)干燥制得；其中乙醇濃度為70-95%。本發(fā)明制備的二色補(bǔ)血草提取物具有較高的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
文檔編號(hào)A61P3/10GK102920753SQ20121043404
公開(kāi)日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月5日
發(fā)明者馬麗, 滕杰暉, 李維林 申請(qǐng)人:江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所