專利名稱：取代苯并嗪-和苯并噻嗪化合物及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類新的、在苯并噁嗪-3-酮和苯并噻嗪-3-酮的2-位帶有一個被雜環(huán)取代的哌嗪基烷基的衍生物其及相應的3-硫酮衍生物，涉及它們的鹽和含有這些化合物的藥劑、以及制備這些化合物的方法。
在歐洲專利公布號No.0233728中載有在1，4-苯并噁嗪-3-酮的2-位有苯基哌嗪基烷基取代的衍生物。這些化合物具有突出的降壓和血管擴張作用。
本發(fā)明的內容是開發(fā)新的可用作抗過敏藥的藥用有效物質。本發(fā)明的內容還有制備有價值的藥理性質的新的苯并噁嗪類衍生物。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的雜環(huán)取代的新化合物具有有價值的藥理特性，表現(xiàn)為抗炎和抗過敏作用，并且有良好的作用特征，毒性低，耐受性好。本發(fā)明的物質由于具有其作用特征適于抗炎有效成分和抗過敏藥，治療炎癥和過敏性疾病。
本發(fā)明涉及通式Ⅰ的新化合物及其生理可耐受的酸加合鹽
式中X代表氧或硫，Y代表氧或硫，R1代表氫或低碳烷基，R2代表氫、低碳烷基，鹵素、低碳烷氧基、羥基、硝基或三氟甲基，R3代表氫、低碳烷基，鹵素或低碳烷氧基或R2和R3連結于相鄰的碳原子上，并共同表示帶有1-2個碳原子的烷撐二氧基，n為整數(shù)0-4，R4為6元不飽和的雜環(huán)，環(huán)上含有1或2個不直接與哌嗪環(huán)相連結的氮原子，該雜環(huán)必要時可被1-2個連結于碳原子的低碳烷基、低碳烷氧基和鹵素取代。
如果式Ⅰ化合物中R2和R3以及R4基中的取代基是或含有低碳烷基，則這些烷基可能是直鏈的或支鏈的，特別是含1-4個碳原子，最好是含1-2個碳的烷基，尤其以甲基或甲氧基為最好。若取代基為鹵素，可考慮為氟、氯和溴，最好是氯。環(huán)骨架中的苯環(huán)不宜于被取代。若該苯環(huán)被R2或被R2和R3兩個取代基取代，尤以低碳烷基取代基，例如甲基取代基為宜。
取代基R1宜于是氫。若R1代表低碳烷基，可以是含有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是含有1-2個碳原子的烷基。
式Ⅰ化合物中n為0-4，尤以含3-4個碳的亞烷基鏈為宜。
取代基R4可為含有1或2個氮原子的不飽和雜環(huán)，例如雜芳環(huán)基。適宜的R4基團例如有吡啶基，嘧啶基，吡嗪基或噠嗪基，尤以吡啶基為宜。若R4是吡啶基，最好考慮吡啶-2-基，必要時吡啶環(huán)上可被取代，例如適宜的是被低碳烷基、特別是被甲基取代的或者是未被取代的吡啶基。特別適宜的基團是4-甲基吡啶-2-基。
本發(fā)明的式Ⅰ的新化合物及其酸加合鹽可用如下已知的方法獲得。
a)為制備通式Ⅰa的化合物(式中X，R1，R2，R3，n和R4的含義同上)，使通式Ⅱ的化合物與通式Ⅲ的哌嗪衍生物反應
Ⅰa
式Ⅱ中X，R1，R3和n的含義同上，R2′的含義與R2相同，但若是羥基時，要用以后可解離的保護基加以保護，L為可氨解分離的基團，特別是鹵素。
式Ⅲ中的R4含義同上，或者b)使通式Ⅳ的化合物(式中X，R1，R2，R3和n的含義同上)與通式Ⅴ的化合物(式中R4含義同上，L′為鹵素)反應，然后解離可能存在的羥基保護基，或者
c)使通式Ⅰa的化合物轉變?yōu)橥ㄊ舰馼的化合物
式Ⅰb中X，R1，R2，R3，n和R4的含義同上。
得到的通式Ⅰ中R1為氫的化合物，根據(jù)需要可烷基化成通式Ⅰ中R1為低碳烷基的化合物和/或將通式Ⅰ中R2為甲氧基的化合物的甲氧基裂解為羥基，或根據(jù)需要將式Ⅰ的游離化合物轉變成酸加合鹽，或將酸加合鹽轉變成通式Ⅰ的游離化合物。
按照方法a)，式Ⅱ化合物與式Ⅲ化合物的反應可按常規(guī)的胺類烷基化的方法進行。
該反應適宜于在反應條件下是惰性的有機溶劑中和堿性條件下進行。
適于作式Ⅱ化合物中可胺解解離基團的L是鹵素如氯、溴或碘，最好是溴或氯，或者也可以是酰氧基O-Z，Z為低碳鏈烷?；蛴袡C磺酸基，如低碳烷基磺酸基，例如甲磺酸基，或者是芳香族磺酸基，如苯磺酸基，或者被低碳烷基或鹵素取代的苯磺酸基，例如甲基苯磺酸基或溴苯磺酸基。適宜的惰性有機溶劑優(yōu)選為非質子性溶劑，例如芳香烴，如甲苯、二甲苯或苯，環(huán)醚如二噁烷，二甲基甲酰胺或低碳醇如乙醇，或者是上述溶劑的混合物。反應宜于在提高的溫度下進行，例如在50-150℃，最好是在溶劑的沸騰溫度下進行。反應宜加入有機或無機堿，不過也可以使用過量的式Ⅲ化合物，這時它是被作為內堿應用的。適宜的有機堿的實例有有機叔胺，尤其是低碳烷基叔胺，如三乙胺，三丙胺，N-低碳烷基嗎啉或N-低碳烷基哌啶。適宜的無機堿特別是堿金屬的碳酸鹽或碳酸氫鹽，根據(jù)反應條件而定反應時間為2-8小時?？蛇x擇已知的醚保護基作為可能的羥基R2的保護基，該保護基以后可按已知方法進行溶劑離解或氫解，保護基例如是低碳烷基或芐基。
按照b)法，或Ⅳ的化合物與式Ⅴ的化合物反應可按常規(guī)的胺烷基化的方法進行。例如可以按對式Ⅱ化合物與式Ⅲ化合物的反應所述的方法進行。
按照c)法，將式Ⅰa化合物的3-酮基轉變成式Ⅰb化合物的3-硫羰基，可按常規(guī)方法把氧代化合物中的氧用硫交換。這樣可以用已知的方法制備式Ⅰb的化合物，例如通過用五硫化二磷(如P4S10)處理式Ⅰa的化合物或按Lawesson等敘述的方法(見Bull.Soc.Chim.Belg.87，525-534(1978))，用式Ⅵ的2，4-雙(甲氧苯基)-1，3-二硫代-2，4-二膦烷-2，4-二硫化物(已知的Lawesson試劑)和式Ⅰa的化合物反應
Ⅵ
該脫氧硫化反應宜于在反應條件下是惰性的有機溶劑中進行，例如在芳香烴類如甲苯或二甲苯中，在提高的溫度下，例如在50-150℃，最適宜的是在反應混合物的沸騰溫度下進行。反應結束后，可用過濾法使含硫化合物與膦衍生物分離。
得到的式Ⅰ中R1為氫的化合物，還可根據(jù)需要再用已知的方法烷基化成相應的N-烷基化合物。作為烷基化試劑可考慮鹵代烷。尤其是碘化物，硫酸烷基酯或磺酸烷基酯。式Ⅰ的含酰胺基和硫代酰胺基的化合物宜于首先在惰性的極性溶劑中與強堿反應，例如與堿金屬氫化物，堿金屬氨化物或醇化物反應，然后再與烷基化劑反應。反應可在0℃到溶劑的沸騰溫度間進行。根據(jù)使用的堿的不同，溶劑可用二甲基甲酰胺，或環(huán)醚，如四氫呋喃或二噁烷，或者若堿為金屬醇化物時，也可用其相應的醇作溶劑。因此該反應在使用氫化鈉的條件下例如宜于在二甲基甲酰胺中進行。
在R2是甲氧基的式Ⅰ化合物中，可用適于裂解甲氧芳醚的方法按已知的方式將甲氧基裂解生成羥基。例如醚裂解作用可以通過在反應條件下為惰性的一種溶劑中，例如乙酸酐中用碘化氫處理來實現(xiàn)，或用碘代三甲基硅烷或三溴化硼處理來實現(xiàn)。
式Ⅰ化合物可用已知的方法從反應混合物中分離出并加以純化。酸加合鹽可用常規(guī)方法轉變成游離堿，或根據(jù)需要用已知的方法將游離堿轉變?yōu)樗幱盟峒雍消}。
適宜于作式Ⅰ化合物的藥用酸加合鹽的，例如有它們和無機酸所成的鹽，如和氫鹵酸，特別是和鹽酸、硫酸或磷酸所成的鹽，或與有機酸所成的鹽，例如和低碳脂肪族的一元或二元羧酸，如馬來酸，富馬酸，乳酸，酒石酸或乙酸所成的鹽，或者和磺酸類所成的鹽，例如和低碳烷基磺酸，如甲(烷)磺酸所成的鹽，或者必要時和在苯環(huán)上用鹵素或低碳烷基取代的苯磺酸，如對-甲苯磺酸或環(huán)己氨基磺酸所成的鹽。
式Ⅰ化合物在苯并噁嗪或苯并噻嗪骨架的2-位含有手性中心，它可以有兩種旋光活性的對映體形式或以消旋體形式存在。
本發(fā)明既包括有式Ⅰ化合物的消旋混合物，也包括有完全旋光的異構體。
如果在合成時用式Ⅱ或Ⅳ化合物的消旋體，就得到式Ⅰ化合物的消旋體。用式Ⅱ或Ⅳ化合物的旋光性體作原料，就可得到旋光活性的式Ⅰ化合物。式Ⅰ的旋光活性化合物可用已知的方法由消旋混合物得到，例如通過色層分離法分離手性物質，或通過與適宜的旋光活性酸，如與酒石酸或10-樟腦磺酸反應，緊接著經(jīng)過所得到的鹽的分步結晶，分離成它們的旋光活性對映體。
式Ⅱ的原料可由式Ⅶ的2-氨基酚衍生物得到。
Ⅶ式中R1，R2，R3，和X的含義同上。
這樣，式Ⅶ的化合物可用已知的方法與式Ⅷ的β-溴代酰溴縮合，生成式Ⅱa的化合物。
式中n′為1-4，R1，R2，R3，X和L的含義同上。該縮合反應可在一種在反應條件下為惰性的溶劑例如鹵代烷烴，如氯仿中、在堿例如堿金屬碳酸氫鹽或碳酸鹽存在的條件下進行。最好在有相轉移催化劑如氯化芐基三甲基銨存在下進行。式Ⅶ化合物也可與式Ⅸ的β-溴代-鏈烷羧酸甲酯按已知的方法反應，生成式Ⅱa化合物。
式中n′和L的含義同上。該反應例如可于二甲基甲酰胺中在無機堿例如堿金屬碳酸鹽存在下進行。
通式Ⅶa的化合物是已知的，或可按已知的方法由通式ⅩⅢ化合物得到
Ⅶa
式中R1，R2′和R3的含義同上。可將式ⅩⅢ化合物按已知方法烷基化引入烷基R1，生成通式ⅩⅣ的化合物。
ⅩⅣ式中R2′和R3的含義同上，R1′為低碳烷基。
式ⅩⅢ和ⅩⅣ化合物可按已知的方法在堿性水介質中進行熱裂，例如于堿金屬氫氧化物的溶液中沸煮，轉變成式Ⅶa化合物。
通式Ⅶb化合物是已知的，或可按已知的方法，或按類似于已知的方法制取。
Ⅶb式中R1，R2′和R3的含義同上。2-烷胺基酚化合物(R1＝低碳烷基)可由相應的2-氨基酚化合物制取。為此首先將其?；?，在?；瘯r，不僅酚上羥基，而且氨基都給加上?；Ｗo基予以保護。得到的酰胺酯化合物按已知的方法進行烷基化，也就是使該化合物在強堿存在下，必要時在相轉移催化劑存在下，與烷基化劑反應。烷基化劑例如有低碳烷基鹵化物、低碳烷基硫酸酯或低碳烷基磺酸酯，強堿例如有堿金屬氫化物或堿金屬氫氧化物，相轉移催化劑例如有氯化芐基三甲基銨。該反應可按例如前述的式Ⅰ化合物的烷基化條件下進行。烷基化后可按已知的方法經(jīng)酸性或堿性水解將?；Ｗo基解離。
式Ⅱ化合物(n＝0)可由式Ⅹ化合物制得。
Ⅹ式中R1，R2′R3和X的含義同上。為了制備式Ⅱb化合物，可用已知的方法通過用鹵化劑例如用磺酰氯處理將一鹵素取代基L′(特別是氯)引入式Ⅹ化合物中。
Ⅱb
該氯化反應可在反應條件下為惰性的溶劑中，例如在鹵代烷烴類，如二氯甲烷中進行。
式Ⅹ化合物是已知的，或可用已知方法制取，例如將式Ⅶ化合物與氯代乙酰氯縮合。該縮合反應可按制備式Ⅶa化合物時所述的反應條件進行。
式Ⅳ化合物迄今未見文獻報導，它們是制備有藥理活性的物質例如式Ⅰ化合物的新的有價值的中間體。
式Ⅳ化合物可按已知的方法制備，例如使式Ⅱ化合物與過量的哌嗪反應。該反應可按胺的烷基化的常規(guī)方法進行，例如在前述的式Ⅱ化合物與式Ⅲ化合物的反應條件下進行。
式Ⅳ化合物也可由通式Ⅺ化合物制取
Ⅺ式中R1，R2′，R3，X和n的含義同上，Q代表胺保護基。反應后胺保護基按已知的方法解離。胺保護基可考慮已知的、常用來保護氨基功能的保護基，例如可水解解離的?；蚩蓺浣饨怆x的芐基。適宜的保護基例如已從E.McOmie著“有機化學中的保護基”，Plenum出版社，倫敦(1971)，44頁中得知，尤以甲?；虻吞纪檠豸驶Ｗo基為宜。這些保護基可按已知的方法經(jīng)酸性或堿性水解解離。
式Ⅺ化合物可用已知方法制取，例如通過式Ⅱ化合物與式Ⅻ化合物反應來制取。
Ⅻ式中Q的含義同上。反應可按胺的烷基化常用的方法進行，例如按式Ⅱ化合物與式Ⅲ化合物反應時所述的反應條件下進行。
式Ⅲ化合物是已知的，或可按已知的方法制取，例如使式Ⅴ化合物與過量哌嗪反應，或與式Ⅻ的一種化合物反應，然后再解離保護基團Q。
式Ⅰ化合物及其藥用加合鹽的特點是具有重要藥理性質，有抗炎和抗過敏作用，尤其是在治療哮喘疾患中這些化合物呈現(xiàn)良好的作用特征，毒性低，耐受性好。
哮喘是慢性炎癥肺疾患，其特征是發(fā)作出現(xiàn)的可逆的呼吸道障礙。通常認為，哮喘病及發(fā)作的原因是由于稱作肥大細胞的實體細胞和間隙細胞所致，這些肥大細胞含已預先生成的炎癥介質和致痙劑，特別是組胺。它們也可合成由脂質膜產(chǎn)生的一系列介質。肥大細胞也與能合成炎性介質或前炎性介質的許多種伴隨細胞一起發(fā)生作用。
只要沒有引起過敏的條件，肥大細胞就處于準未參與的等待狀態(tài)。啟動過敏反應的關鍵是在血循環(huán)中存在的高濃度的IgE抗體。當這些抗體與相應的抗原結合時，它們這兩者既活化了已形成的介質的脫粒和釋放，也活化了其它介質的新合成。
因為哮喘是炎性障礙的肺疾患，對其治療主要依靠兩種途徑給以支氣管擴張藥如β-擬交感神經(jīng)藥，黃嘌呤衍生物和抗膽堿能藥，以減輕癥狀;給以抗炎藥如色甘酸二鈉和甾類藥;以及對抗特定的介質，例如針對組胺的治療。解除癥狀的治療大約占抗哮喘藥的50%，但沒有一個屬于解除炎癥病因的藥?？寡姿幬锬軌蜃柚寡装Y，但常常有不希望的副作用，常常與支氣管擴張藥同時給藥。由于有許多介質，故只針對一種特定的介質進行治療是完全不夠的。
本發(fā)明物質的特征是它們有抗炎活性，而且是針對這三種介質-組胺、白三烯和血小板聚集因子-中的一種或多種而起作用，這三種介質不僅參與急性支氣管痙攣，而且維持慢性炎癥，本發(fā)明物質也可通過對介質的特異受體對抗有關的靶細胞。這些化合物的抗炎和抗過敏特性用離體和在體的藥理標準試驗方法加以證實。
試驗方法說明1.測定被動皮膚過敏性(P.C.A)抑制作用和組胺誘發(fā)的過敏性樣的皮膚反應的抑制作用P.C.A反應按Goose等(J.N.Immunology 16(1969)，749)和Martin等(Arch.Pharmacol.316(1981)，186)所述的方法進行。
本試驗使用的富IgE卵白蛋白-抗血清是由免疫過的Brown-Norway大鼠獲得的。為使大鼠免疫，腹腔注射100μg卵白蛋白和百日咳桿菌懸浮混合物(Vaxicoq，制造者Merieux研究所，含有5×109個桿菌和1.25mgAl(OH)3)。20天后動物再腹腔注射10μg卵白蛋白溶于0.5ml生理食鹽水的溶液以進行再免疫，再過4天后，動物放血，血液離心，得到的抗血清貯于-20℃?zhèn)溆谩?br> 被動皮膚過敏性和組胺誘發(fā)的過敏性樣的皮膚反應抑制作用的測定按下述進行為造成對卵白蛋白的被動致敏作用，體重150-180g Sprague-Dawley大鼠側腹皮下注射50μl 1∶75稀釋度的富IgE卵白蛋白-抗血清溶于生理食鹽水的溶液。
致敏24小時后，為使大鼠造成被動皮膚過敏，按Martin等方法靜脈注射7.25mg/kg卵白蛋白和26.4mg/kg藍染料(伊文斯鹽)的溶液。卵白蛋白刺激在該抗血清的注射部位發(fā)生了局部性過敏反應。
為了測定組胺誘發(fā)的過敏性樣的皮膚反應，在動物注射血清的另一腹側直接靜脈注射含有卵白蛋白和藍色染料溶液以前，皮下注射含50μl 0.8mg/ml組胺的生理食鹽溶液。
在檢驗的當天，把受試物質溶解于含有1(體積)%的二甲基甲酰胺和1(體積)%吐溫(TweenR)20(＝聚氧乙烯(20)脫水山梨醇單月桂酸酯)的蒸溜水。在給于卵白蛋白造成刺激前一小時，每個動物口服2×10-5摩爾/kg受試物質的0.5ml溶液。為經(jīng)比較對照組只給溶劑。
用靜脈注射卵蛋白注射液進行刺激造成水腫過敏性反應(P.C.A)和組胺誘發(fā)的過敏性樣反應，這些過敏反應表現(xiàn)為水腫，腫脹和藍色染料的滲出，是在靜脈注射卵白蛋白注射劑進行刺激后30分鐘評價的，觀察測定水腫形成部位藍色染料出現(xiàn)的程度。借助于比例標度將受試物質引起過敏性和過敏性樣反應同未用受試物質處理的對照動物的反應進行比較，來確定百分抑制率。
用式Ⅰ化合物按上述試驗方法得到的結果列于下表A中。式Ⅰ化合物的實施例號是后面制備實施例號。
表A受試物質 在大鼠中皮膚過敏性和過敏性樣的反應，在劑量實施例號為2×10-5摩爾/公斤P.O的情況下的抑制%被動皮膚過敏性 組胺誘發(fā)的過敏性樣的反應(P.C.A)22 69 457 70 409 60 301 88 558 73 6012 80 5013 55 3015 60 3016 50 4517 70 3511 55 2010 70 353 80 5518 80 5319 80 6021 78 5524 80 6025 50 1527 60 3528 65 40
2.最小毒性劑量的測定體重20-25g雄性小鼠口服受試物質最大劑量300mg/kg。仔細觀察動物的毒性癥狀3小時，并再記錄給藥后24小時內動物的全部癥狀和死亡數(shù)。也要觀察并記錄伴隨癥狀。若發(fā)現(xiàn)動物死亡或嚴重毒性，小鼠再逐漸減少給藥劑量。引起死亡或嚴重毒性的最低劑量作為最小毒性劑量列于表B中表B受試物質 P.O的最小毒性劑量毫克/公斤鼠實施例號1 30022 3008 1009 3002 ＞30011 ＞30012 30013 10016 300
3.離體測定組胺-(H1)-受體拮抗作用引起的抗組胺-(H1)活性。
為了測定本發(fā)明物質對組胺(H1)-受體拮抗作用，測定對組胺誘發(fā)離體器官平滑肌收縮的抑制作用。為此，宜于用回腸的器官條。在器官浴的生理食鹽水溶液中加入組胺，回腸條發(fā)生收縮。由于加入了本發(fā)明化合物，會降低因組胺的加入引起的回腸條平滑肌的收縮作用。收縮作用消失的程度是化合物抗組胺-(H1)活性的指標。該測定法是按類似于最初由Magnus(pflügers Arch.102，123(1904))所述的方法進行的。
測定對5×10-6摩爾濃度的組胺引起豚鼠回腸離體平滑肌收縮作用的抑制活性的試驗說明取體重300-500g Dunkin Hartley豚鼠的回腸段長1.5cm進行試驗。
每個平滑肌條固定在有10ml Krebs-Henseleit生理食鹽溶液的等張測定回腸肌條長度變化的常規(guī)儀器上(自動化的Celaster測定儀)，使該組織承受1g的拉力。浴漕中通入5%CO2和95%O2的混合氣體，調整PH為7.40，加入組胺，使終濃度為5×10-6mol/l，平衡后引起組織的等張收縮。加入組胺后30秒種再將組銨洗掉。只有在10分鐘內有三次可重復的收縮的組織，可用于下面的試驗。然后加入受試物質使終濃度為5×10-6mol/l。測定30秒后出現(xiàn)的收縮作用。最后在10分鐘后將該組織多次洗滌。然后再加入組胺引起收縮刺激。30秒后再測定出現(xiàn)的收縮，只加入組胺引起的收縮的幅度與有受試物質存在時發(fā)生收縮幅度的差值經(jīng)測定后計算百分抑制率。
下表C列出了用受試物質按上述方法得到的結果。表中列出了給受試物質30秒鐘后對組胺誘發(fā)收縮作用的抑制活性以及對10分鐘后給組胺引起的收縮作用的抑制活性。
表C受試物質離體(H1)受體拮抗作用，在組胺濃度為5×實施例號 10-6摩爾/升和受試物濃度為10-6摩爾/升時對組胺誘發(fā)的回腸收縮的抑制作用%30秒后 10分鐘以后7 85 748 42 513 42 1516 30 2711 32 352 51 6010 42 363 66 2818 78 8319 60 4221 50 8923 70 8324 70 8625 50 3227 16 7228 38 45
4.離體測定抗P.A.F活性P.A.F(＝血小板活化因子＝血小板聚集因子)是磷酸脂質介質，具有多種活性。血小板聚集作用的活化導致長時間持續(xù)的氣管收縮和呼吸道的過份活躍。本試驗按Mikashima等敘述的方法(Jap.J.Pharmacol.44(1987)387-391)測定受試物質對從家兔血中獲得的血小板懸液中因加入P.A.F而引起的血小板聚集作用的影響。
由家兔血來源的血小板懸液，濃度為4×109血小板/ml，用改良的Tyrode緩沖液(＝Tyrode溶液
加1.2mM/lCaCl2和2.5g/l明膠)調節(jié)PH為7.4。血小板是由3只家兔(新西蘭雜種兔，體重3-4kg)采集10ml血樣制得的。為此，將血樣用乙二胺四乙酸處理并按Artley等方法洗滌(Brit.J.Hematol.19(1970)，7-17)。然后先離心(20分鐘，400×g)，分離出富含血小板的血漿。再進行1400×g 15分鐘的離心，將血小板自血漿中分出。離心后沉降下的血小板懸浮于Tyrode緩沖溶液中(但無CaCl2)。然后加入0.4mMol賴氨酸乙酰水楊酸鹽，15分鐘后血小板又沉降下來，沉降物用上述改良的Tyrode緩沖溶液再懸浮，得到的懸浮液按所需的含量調整血小板數(shù)目。
＊Tyrode溶液＝每升水溶液中含136.9mmol NaCl，2.68mmol KCl，2.31mmolCaCl2，1.0mmol MgCl2，11.9mmol NaHCO3，1.45mmol NaH2PO4和5.55mmol葡萄糖加入作為試劑的40×10-9摩爾的P.A.F溶液，該溶液是由1.8×10-3摩爾濃度的氯仿貯液制成的。為此將10μl貯液蒸發(fā)至干，溶于180μl的改良Tyrode溶液，后者加入0.25%的無脂質的牛血清白蛋白。然后由此制成10-5摩爾濃度的操作溶液，冷凍貯存，為了測定將此溶液作相應的稀釋。
測定時在帶有小磁攪拌子的聚集管中，加入330μl改良Tyrode緩沖溶液，攪拌下加入50μl血小板懸浮液和10μl 4×10-5摩爾濃度的受試化合物溶液。這相當于受試物質的終濃度為10-5Mol/l。預溫孵90秒鐘后，加入10μl P.A.F制劑。4-5分鐘時，用計算機化的凝聚儀測定聚集管中出現(xiàn)的聚集作用。
只含有血小板懸浮液的試管中出現(xiàn)的聚集作用定為0%，而含血小板懸浮液和P.A.F制劑的試管中出現(xiàn)的聚集作用定為100%。加入受試物質引起由于P.A.F誘發(fā)的血小板聚集的增強作用受到了抑制，測定還會出現(xiàn)的聚集作用，由此計算出聚集作用的百分抑制率。
表D列出了按上述方法測定式Ⅰ化合物得到的結果表D受試物質 離體抗P.A.F.作用。在受試物質濃實施例號度為10-5摩爾/升時，P.A.F.
誘發(fā)的家兔血小板聚集作用的抑制%22 429 518 4811 962 6018 7621 3710 7427 3528 45
5.離體測定對環(huán)氧合酶和5-脂氧合酶的抑制作用在細胞膜中含有的花生四烯酸在細胞被活化后代謝方式有兩種在5-脂氧合酶(＝5-LO)作用下生成白三烯類，其中有白三烯C4，和在環(huán)氧合酶(＝CO)作用下生成前列腺素類，在離體系統(tǒng)中這些代謝產(chǎn)物自細胞中分泌出。
為了研究受試物質對環(huán)氧合酶和5-脂氧合酶的抑制活性，體外測定受試化合物對小鼠腹腔巨噬細胞上花生四烯酸衍生物白三烯C4(＝LTC4)和6-酮基-前列腺素F1α(6-酮-PGF1α)的生物合成的抑制作用。為此按照Scott等(J.Exp.Med.152(1980)，324-335)和(Prostaglandins，33(1987)，579-589)所述的酵母聚糖刺激法，測定培養(yǎng)基中小鼠腹腔巨噬細胞中LTC4和6-酮-PGF1α的含量。
8-10周令的雄性小鼠的腹腔巨噬細胞按已知方法制成細胞懸浮液。作為細胞培養(yǎng)基可用市售的商品名為RPMI1640的溶液(制造廠Gibco)，加入肝素(10國際單位/ml)和抗生素(根據(jù)Bonney等的受體，Biochem.J.176(1978)，422-433)。細胞在懸浮液中濃度調至每ml 106個細胞，并分置在含有24個1ml滴度池(凹眼)的滴度板中。將此置于濕潤的含有70%CO2的空氣的保溫箱中2小時。然后將未固著在滴度池壁的細胞經(jīng)洗滌除掉。剩下的固著于壁上的巨噬細胞在加有0.1%牛血清白蛋白(BSA＝牛血清白蛋白)的懸浮培養(yǎng)基中保溫12小時。然后將懸浮培養(yǎng)基用Hanks鹽溶液(＝Hank's平衡鹽溶液＝HBSS)與10mMHepes(＝羥乙基哌嗪基乙烷磺酸)置換，在10mMHepes中加入0.1%受試物質的1%二甲基甲酰胺水溶液或只加入溶劑。15分鐘后，花生四烯酸代謝作用由于加入了10份的酵母聚糖(＝糖蛋白混合物，由酵母菌細胞壁中分離出，Sigma化學公司廠家出品，慕尼黑)滴度細胞受到刺激。2小時后用酶學免疫測定法(＝EIA)測定每個試樣的上清液中6-酮-PGF1α和LTC4的含量。該EIA按Pradelles等方法(Analytical chem.57(1985)，1170-1173)進行。LTC4和6-酮-PGF1α的測定是對測定樣品的適宜稀釋作比較標示(LTC4測定1∶50-1∶250;6-酮-PGF2α測定1∶250-1∶1250)。為了測定化合物濃度為10-5摩爾濃度的抑制作用，要確定有關的二十碳化合物的含量，并由此計算出相對于酵母聚糖-對照組的抑制作用的百分率。表E列出了用這種方法得到的結果。
表E受試物質受酵母聚糖刺激的鼠腹腔巨噬細胞在濃度為10-5實施例號摩爾/升時對釋放出的6-酮-PGE1α和LTG4的離體抑制作用%6-酮-PGF1αLTC47 17 469 32 651 27 48
5 36 7215 46 911 0 42基于上述的作用，式Ⅰ化合物作為較大的哺乳動物，特別是人的抗炎和抗過敏藥物，適于治療炎癥和過敏性疾患。本發(fā)明口服有效的化合物可在許多方面起作用，因為它們對許多種參與炎癥地過程和哮喘病的主要介質有作用。基于這些作用特征可得出如下結論本發(fā)明化合物在治療過敏性或非過敏性哮喘病的范圍內，不僅能減輕與哮喘病相聯(lián)系的癥候群，而且也能減輕與此有關的炎癥。
給藥劑量因人而異，這當然根據(jù)疾病狀況、給藥的類型和用藥方式而變化。例如非經(jīng)胃腸道給藥劑型含有的有效成份少于口服劑型。適用于較大的哺乳動物特別是人的單個劑型中有效成分的含量通常是10-250mg。
式Ⅰ化合物的輔料包括有格林制劑的常規(guī)藥用輔料，例如有片劑，膠囊劑，栓劑或溶液。這些格林制劑可按已知的方法制備，用常規(guī)固體載體如乳糖，淀粉或滑石粉，或液體石蠟油，并且應用常規(guī)的制劑輔料，例如片劑崩解劑，助溶劑或防腐劑。
下面實施例對本發(fā)明作詳細說明，但并不限于此。
實施例12-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮A)將45.3g(0.23m)6-溴己酸在攪拌下與63.6g(0.235m)三溴化磷混合，然后加入75.1g(0.047m)溴，前一半溴滴加，后一半快速加入，將此混合物加熱至85-90℃，并在溫度下保持1.5小時。然后在此溫度下再加入18.4g溴，反應混合物于85-90℃保持18小時。為了分離，將反應混合物冷卻到20℃，并將它加入由700ml冷水與500ml冷己烷組成的混合物中，分出有機相，水相再用己烷洗滌2次，每次100ml，合并有機相，用硫酸鈉干燥。然后蒸除溶劑，油狀剩余物為2，6-二溴己酰溴，通過紅外(IR)光譜及核磁共振(NMR)光譜得到了證明，無需進一步精制即可用于下一步。
B)將9.25g(0.07m)2-氨基硫酚、27.9g氯化芐基三甲銨和25g碳酸氫鈉在攪拌下加到150ml氯仿中，使得到的懸浮液冷卻到-5℃，在攪拌下向此懸浮液中緩緩加入25.3g 2，6-二溴己酰溴的70ml氯仿溶液，需時30分鐘，溫度于-5℃-+5℃?；旌衔镉跍囟认略俦３?小時。然后加熱回流7小時。冷卻后過濾，從得到的濾液中蒸除氯仿。剩余物用水和甲苯混合。分出有機相，干燥后柱層析分離。分出2-(4-溴丁基)-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮組分。在乙醚中結晶后得到5.9g2-(4-溴丁基)-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，為淺米黃色結晶，mp100℃。
C)將3.6g(0.012m)2-(4-溴丁基)-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，2.12g(0.012m)N-(4-甲基吡啶-2-基)哌嗪和1.83g(0.018m)三乙胺于100ml甲苯的混合物，在攪拌下加熱回流9小時。在回流3小時后再加入0.46g三乙胺，于6小時后再加入0.9g三乙胺。
為了分離，使反應混合物冷卻到20℃，加入200ml水，分出有機相，蒸除甲苯。將剩余物溶解于50ml 20%鹽酸水溶液，用甲苯洗滌溶液。堿化水相至PH9，然后用二氯甲烷萃取，洗滌二氯甲烷液后用氯化鈣干燥。蒸除二氯甲烷。剩余物為本標題化合物的粗制品。經(jīng)柱層析精制后用甲苯∶異丙醇為50∶50(體積比)的混合物進行重結晶，得到2.4g2-｛4-[4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，為無色結晶，mp119℃。
實施例22-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-硫酮將5.95g(0.015m)2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮(制法見實施例1)于60℃溶解于60ml二甲苯中。向此溶液中加入6.9gP4S10，反應混合物在攪拌下加熱回流1小時。
為分離而使混合液冷卻，分離出析出的沉淀，將它加入由160ml 2N氫氧化鈉水溶液和200ml二氯甲烷組成的混合液中。再加入50ml水和50ml二氯甲烷得到有少量沉淀的反應溶液，過濾除去沉淀，然后分離出有機相，干燥后蒸除溶劑。得到5.2g剩余物，用柱色層法分離出剩余物。從含有本標題化合物的組份中用乙醚∶乙酸乙酯50∶50(V/V)重結晶得到本標題化合物3.1g 2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-硫酮，為灰黃色結晶mp119℃。
實施例34-甲基-2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-1-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮將2g(0.005m)2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮(制備見實施例1)在攪拌下溶解于20ml無水二甲基甲酰胺中。在氮氣保護下加入0.151g氫化鈉，使得到的懸浮液在室溫下保持10分鐘。然后一次加入0.86g碘甲烷，將反應混合物在室溫下攪拌2.5小時，為分離而蒸除溶劑，在剩余物中加100ml水，用100ml乙酸乙酯萃取，通過使溶劑蒸發(fā)來濃縮有機相，剩余物為本標題化合物的粗品，用柱層析法精制，把得到的堿溶解于2.3N異丙醇鹽酸中。濾去作為白色沉淀析出的本標題化合物的鹽酸化物得到0.7g4-甲基-2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮二鹽酸化物，總分子式為C23H30N4OS.2Hcl.2.5H2O，mp163℃。
實施例44-甲基-2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮A)將0.1M2-氨基苯并噻唑和0.1M碘甲烷于50ml無水乙醇中加熱回流12-15小時。分離出析出的2-亞氨基-3-甲基苯并噻唑氫碘化物，并溶于熱水中。在溶液中添加飽和碳酸鈉水溶液使呈堿性。分離析出的2-亞氨基-3-甲基苯并噻唑，用水洗后減壓干燥。
B)將上面得到的產(chǎn)物于50%氫氧化鉀溶液中加熱回流36小時。為了分離用水稀釋此溶液，加入5N乙酸水溶液調節(jié)到PH6。然后多次用乙酸乙酯萃取此水溶液。合并有機相。減壓蒸除溶劑。剩余物為2-(甲胺基)-硫酚，無需進一步純化，就可用于下步反應。
C)將4.5g(0.032m)，2-(甲胺基)硫酚，6g氯化三乙基芐銨和11.20g碳酸氫鈉加到120ml氯仿中。使生成的混懸液冷卻至5℃，然后緩緩滴加10.88g2，6-二溴己酰溴在20ml氯仿中所成的溶液。勿使溫度超過5℃，為此滴加所需時間為20分鐘。然后使反應混合物升溫至室溫，再加熱回流4小時。為了分離，將反應混合物冷卻和過濾，洗滌氯仿相后用硫酸鈉干燥，蒸除溶劑，用柱層析法由剩余物中得到生成的2-(4-溴丁基)-4-甲基-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，重2.78g，為白色結晶，mp116℃。
D)將上面得到的產(chǎn)物用類似于實施例1C)所述方法與N-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪的甲苯溶液在加入三乙胺的條件下進行反應。得到的4-甲基-2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，按實施例3所述的方法轉化成它的二鹽酸化物，其總式為C23H30N4OS.2Hcl.2.5H2O，mp163℃。
實施例52-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮A)在10mM2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮的10ml二氯甲烷混懸液中在攪拌和室溫下滴入0.8ml(＝1當量)磺酰氯。將反應混合物在室溫下再攪拌5小時。為了分離，在減壓下將反應混合物蒸發(fā)至干。剩余物為2-氯-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮(mp.189-210℃，分解)。無需進一步純化就可進入下步處理。
B)將7g(0.035m)2-氯-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，6.2gN-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪和7g三乙胺于100ml甲苯中攪拌加熱回流5小時。為了分離將混懸液用200ml甲苯稀釋，濾集沉淀，溶解于20%鹽酸水溶液中。在此溶液中加入氫氧化銨溶液使呈堿性，濾集生成的沉淀，水洗后干燥。得到2g灰黃色結晶的2-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，mp245℃。
實施例67-羥基-2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮將360mg 7-羥基-2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮(見實施例19，制法類似于實施例1)在隔絕濕氣條件下加到5ml二氯甲烷中。冷到-5℃時，在攪拌下將0.73g三溴化硼溶液，滴加到1ml二氯甲烷中。然后于室溫下再攪拌30分鐘。為了分離，將反應混合物在攪拌下加到冰和碳酸氫鈉水溶液的混合液中。然后加入200ml氯仿，用水洗滌有機層，用硫酸鈉將其干燥，過濾后在減壓下濃縮。用分級的柱層析法由剩余物獲得本標題化合物。濃縮含有本標題化合物的組分并與乙醚混合。得到30mg7-羥基-2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮，為白色結晶，mp.212℃。
按照上述實施例所述的方法也可得到下面表Ⅰ中所列的式Ⅰ化合物。
實施例Ⅰ含有2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮的片劑每個片劑按如下處方制成片劑2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮 20mg玉米淀粉 60mg乳糖 135mg明膠(為10%溶液) 6mg將有效成份、玉米淀粉和乳糖與10%明膠溶液制成藥團。膏狀物分散成顆粒，得到的顆粒置于適宜的金屬板上，在45℃下干燥。干燥后的顆粒進入粉碎機后，再于混合機中與如下輔料混合滑石粉 5mg硬脂酸鎂 5mg玉米淀粉 9mg然后壓成重240mg的片劑。
權利要求
1.通式Ⅰ的化合物及其生理可接受的酸加合鹽
式中X為氧或硫，Y為氧或硫，R1為氫或低碳烷烴，R2為氫、低碳烷基，鹵素，低碳烷氧基，羥基，硝基或三氟甲基，R3為氫，低碳烷基，鹵素或低碳烷氧基，或者R2和R3連結于相鄰的碳原子上，并與1-2個碳原子共同形成烷撐二氧基，n為整數(shù)0-4，R4為6元不飽和的雜環(huán)，環(huán)上含有1或2個不直接與哌嗪環(huán)相連結的氮原子，該雜環(huán)必要時可被1-2個連結在碳原子上的如下基團取代低碳烷基，低碳烷氧基和鹵素。
2.按照權利要求1的化合物，其特征是，Y為氧。
3.按照上述權利要求之一中的化合物，其特征是n為3或4。
4.按照上述權利要求之一中的化合物，其特征是，R4為在此情況下被取代了的吡啶基。
5.按照權利要求4的化合物，其特征是，R4為4-低碳烷基吡啶-2-基。
6.按照上述權利要求之一中的化合物，其特征是R1為氫。
7.按照上述權利要求之一中的化合物，其特征是，R2為氫或低碳烷烴，R3為氫。
8.按照權利要求1的化合物，其特征是，X為氧或硫，Y為氧，R1為氫，R2為氫或低碳烷基，R3為氫，n為3或4，R4為在此情況下被低碳烷基取代了的吡啶基。
9.按照權利要求8的2-｛4-〔4-(4-甲基吡啶-2-基)-哌嗪-1-基〕-丁基｝-2H-1，4-苯并噻嗪-3(4H)-酮及其生理可接受的酸加合鹽。
10.含有按照權利要求1的化合物的有效藥理量及常規(guī)制藥用輔料和/或載體的藥劑。
11.制備通式Ⅰ的化合物及其酸加合鹽的方法
式中X為氧或硫，Y為氧或硫，R1為氫或低碳烷烴基，R2為氫、低碳烷基，鹵素，低碳烷氧基，羥基，硝基或三氟甲基，R3為氫，低碳烷基，鹵素或低碳烷氧基，或者R2和R3連結于相鄰的碳原子上，并與1-2個碳原子共同形成烷撐二氧基，n為整數(shù)0-4，R4為6元不飽和的雜環(huán)，環(huán)上含有1或2個不直接與哌嗪環(huán)相連結的氮原子，該雜環(huán)必要時可被1-2個連結在碳原子上的如下基團取代，低碳烷基，低碳烷氧基和鹵素。其特征是a)為了制備通式Ⅰa化合物(式中X，R1，R2，R3，n和R4的含義同上)，使通式Ⅱ化合物與通式Ⅲ哌嗪衍生物反應
式Ⅱ中X，R1，R2，R3和n的含義同上，R2′的含義與R2相同，但若是羥基時，要用以后可裂解的保護基保護，L為可氨基分解裂解的基團，特別是鹵素。式Ⅲ中的R4的含義同上，或者b)使通式Ⅳ化合物(式中X，R1，R2′，R3和n的含義同上)與通式Ⅴ化合物(式中R4含義同上，L′為鹵素)反應，然后裂解掉可能存在的羥基保護基。
c)使通式Ⅰa化合物轉變?yōu)橥ㄊ舰馼化合物
式中X，R1，R2，R3，n和R4的含義同上。得到的通式Ⅰ中R1為氫的化合物，根據(jù)需要可烷基化成通式Ⅰ中R1為低碳烷基化合物和/或將獲得的通式Ⅰ中R2為甲氧基的化合物的甲氧基裂解成羥基，或根據(jù)需要將式Ⅰ的游離的化合物轉變成酸加合鹽，或將酸加合鹽轉變成通式Ⅰ的游離化合物。
全文摘要
本發(fā)明說明了新的藥理學上有效的通式I的化合物及其生理可接受的酸加合鹽X為氧或硫，Y為氧或硫，Rn為整數(shù)0-4，R
文檔編號A61P29/00GK1062140SQ9111054
公開日1992年6月24日 申請日期1991年11月9日 優(yōu)先權日1990年11月24日
發(fā)明者D·加森拉德, F·法羅齊, R·懷特 申請人:卡利藥物化學股份公司