專利名稱：一種環(huán)孢素a肺吸入大孔微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肺部緩控釋給藥制劑，具體地說是一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球及其制備方法，屬于肺部緩控釋給藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肺部緩控釋給藥是近年發(fā)展起來的新型給藥系統(tǒng)，微球沉積于肺部可以延緩藥物的釋放，增加藥物療效且可保護(hù)藥物不受酶的水解；將藥物包裹在制劑的內(nèi)部，增大了藥物的穩(wěn)定性；能有效減少藥物對呼吸道及肺部的刺激和毒性，已成為肺部控釋給藥載體研究的熱點(diǎn)。但是，肺吸入給藥要有良好的粉霧劑特性、有效的肺部沉積率、載體良好的安全性及降低肺部的清除率等，這些因素成為肺部緩控釋給藥的主要障礙，也是經(jīng)歷二十多年研究仍沒有產(chǎn)品問世的主要原因。環(huán)孢素A (CsA)為第三代選擇性免疫抑制劑，主要用于器官或組織移植后排異反應(yīng)的防治和自身免疫性疾病的治療。環(huán)孢素可以選擇性抑制T淋巴細(xì)胞，包括γ干擾素的產(chǎn)生、白介素2、6等細(xì)胞生長因子的釋放均受到抑制，同時環(huán)孢菌素A對T細(xì)胞的激活作用呈現(xiàn)劑量依賴性，而環(huán)孢菌素A的局部應(yīng)用已成為新的研究熱點(diǎn)。研究表明環(huán)孢素A能夠抑制同種異體肺移植的免疫排斥及閉塞性脈管炎，同時能提高肺功能。環(huán)孢素A還能明顯減少嗜酸性粒細(xì)胞在肺內(nèi)和氣道粘膜的浸潤，減輕組織水腫及上皮損傷等氣道炎癥，小劑量環(huán)孢素A可以使激素抵抗型哮喘患者癥狀明顯改善，同時可明顯減少激素依賴型哮喘患者的激素用量，從而大大減少了糖皮質(zhì)激素的副作用。然而，環(huán)孢素A 口服制劑生物利用度低、個體差異大，全身給藥后引起人體較嚴(yán)重的腎毒性及中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性、肝毒性、消化道反應(yīng)等嚴(yán)重的副作用而限制了應(yīng)用。霧化吸入CsA可解決全身用藥血中藥物分布少，對肝、腎毒副作用大的缺點(diǎn)，但氣道黏膜有刺激性而且因其脂溶性吸收不完全，開發(fā)長效肺吸入劑型成為克服這一問題的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明設(shè)計了一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球及其制備方法， 該肺吸入大孔微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，粒徑在1-10 μ m之間，能夠減輕氣道黏膜的刺激性，使藥物緩慢釋放，減少副作用，尤其適用于干粉吸入劑以達(dá)到肺部給藥的目的。微球吸入肺部后呼吸道的纖毛運(yùn)動可將吸入粒子在幾小時內(nèi)清除，未被纖毛運(yùn)動清除的粒子可被肺泡內(nèi)的巨噬細(xì)胞吞噬而有效轉(zhuǎn)移，影響藥物的肺部吸收。直徑5 μπι以上、密度小于0.4 g/cm3的大孔微球載體給藥系統(tǒng)應(yīng)用于肺部給藥，易在肺部沉積，不易被肺泡清除，且能使藥物在肺部緩慢釋放。制備載蛋白質(zhì)和肽類的肺部微球給藥系統(tǒng)，應(yīng)用于肺部起局部或全身治療的目的。本發(fā)明的技術(shù)方案為
一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，由以下重量份的成分組成 環(huán)孢素A :1-3份；殼聚糖衍生物1-10份； β -環(huán)糊精或其衍生物0. 5-5份； 致孔劑0. 5-5份；
所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的粒徑在1-10 μ m ； 所述的殼聚糖衍生物為殼聚糖季銨鹽；
所述的殼聚糖季銨鹽為高、中、低分子量殼聚糖季銨鹽中的一種；
所述的高分子量的殼聚糖季銨鹽為分子量1360kDa或1100 kDa的殼聚糖季銨鹽的一
種；
所述的中分子量的殼聚糖季銨鹽具為分子量450kDa或350kDa的殼聚糖季銨鹽的一
種；
所述的低分子量的殼聚糖季銨鹽為分子量170kDa或50kDa的殼聚糖季銨鹽的一種。進(jìn)一步地，所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為90%。進(jìn)一步地，所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為85%。進(jìn)一步地，所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為80%。進(jìn)一步地，所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為73%。所述的β -環(huán)糊精衍生物為2-羥丙基-β -環(huán)糊精；
所述的致孔劑為碳酸氫銨、丙二醇嵌段聚醚、聚乙二醇、氯仿、聚苯乙烯球中的一種。一種上述環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，包括以下步驟
(1)根據(jù)上述配比要求配制各組分的混合溶液，
其中環(huán)孢素A 1-3 g/ml、殼聚糖衍生物1-10 g/ml、β -環(huán)糊精或其衍生物0. 5_5 g/ ml、致孔劑 0. 5-5 g/ml ；
(2)將上述步驟(1)的混合溶液經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾，調(diào)節(jié)混合濾液質(zhì)量濃度為 0. 5-1. 5% ；
(3)將上述步驟(2)的濾液經(jīng)蠕動泵導(dǎo)入噴霧干燥器，進(jìn)行噴霧干燥，制成粉末微球；噴霧干燥條件為噴霧干燥進(jìn)口溫度為120-170°C，出口溫度為80-100°C，噴嘴流速 400-800L/H，進(jìn)樣速度 5-25ml/min，氣流量 400-600 L/h ；
(4)將上述步驟(3)得到的微球收集于干燥器，備用。制得的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球具有適宜的粒徑，粒徑在1-10 μ m之間，外觀較圓整，粒徑分布比較均勻，表面光滑，具有大孔結(jié)構(gòu)，生物相容性良好。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于該肺吸入微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，可用于肺部給藥，粒徑在 1-10 μ m之間，載藥量為5. 28-7. 28%,包封率為0. 85 1. 19%，具有良好的生物相容性，能夠減輕氣道黏膜的刺激性，使藥物緩慢釋放，可減少藥物用量和副作用，尤其適用于干粉吸入劑以達(dá)到肺部給藥的目的，制備方法操作簡便、工藝穩(wěn)定、易于工業(yè)化生產(chǎn)。下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。


圖1環(huán)孢素A肺吸入微球的形態(tài)圖； 圖2環(huán)孢素A肺部給藥的病理圖(HE)。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。實施例1
一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，由以下成分制備而成 環(huán)孢素A Ig ； 殼聚糖衍生物Ig ； β -環(huán)糊精0. 5g ； 致孔劑0. 5g ；
所述的殼聚糖季銨鹽為分子量為1360kDa的高分子量的殼聚糖季銨鹽，取代度為90%。所述的致孔劑為碳酸氫銨。上述環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，包括以下步驟
(1)根據(jù)上述配比要求配制各組分的混合溶液，稱取真空干燥的β-環(huán)糊精，溶于200 mL的HTCC (分子量130萬)蒸溜水，將碳酸氫銨溶于樣品液中；
(2)經(jīng)0.45 μ m的微孔濾膜過濾，調(diào)節(jié)混合濾液質(zhì)量濃度為0. 5-1. 5% ；
(3)將過濾后的溶液經(jīng)蠕動泵導(dǎo)入BUChiU90小型噴霧干燥器的雙流向螺旋式噴嘴 (直徑0.7 mm)，控制氣流量400 L/H，進(jìn)風(fēng)溫度(進(jìn)口溫度)為120°C，出風(fēng)溫度(出口溫度) 為80°C，進(jìn)樣速度5ml/min，噴嘴流速400L/H，，噴霧干燥“一步”制成粉末微球；
(4)收集微球于盛有氯化鈣的干燥器中放置72h，備用，結(jié)果見圖1。結(jié)果該肺吸入微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，可用于肺部給藥，粒徑在1-10 μ m之間，平均粒徑為9. 2 μ m，載藥量為5. 28-7. 28%,包封率為0. 85 1. 19%，具有良好的生物相容性。實施例2
一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，由以下成分制備而成 環(huán)孢素A 2g ； 殼聚糖衍生物5 g ； β -環(huán)糊精2. 5 g ； 致孔劑2. 5 g ；
所述的殼聚糖衍生物為殼聚糖季銨鹽；
所述的殼聚糖季銨鹽為分子量為IlOOkDa的高分子量的殼聚糖季銨鹽，取代度為90%。所述的致孔劑為丙二醇嵌段聚醚(F68)。上述環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，包括以下步驟
(1)根據(jù)上述配比要求配制各組分的混合溶液，稱取真空干燥的β-環(huán)糊精，溶于200 mL的HTCC (分子量130萬)蒸溜水，將F68溶于上述配制好的混合溶液中；
(2)經(jīng)0.45 μ m的微孔濾膜過濾，調(diào)節(jié)混合濾液質(zhì)量濃度為0. 5-1. 5% ；
(3)將過濾后的溶液經(jīng)蠕動泵導(dǎo)入BUchi290小型噴霧干燥器的雙流向螺旋式噴嘴(直徑0.7 mm)，控制氣流量450 L/H，進(jìn)風(fēng)溫度為130°C，出風(fēng)溫度為85°C，進(jìn)樣速度lOml/min， 噴嘴流速500L/H，噴霧干燥“一步”制成粉末微球；
(4)收集微球于盛有氯化鈣的干燥器中放置72h，備用，結(jié)果見圖1。
結(jié)果該肺吸入微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，可用于肺部給藥，粒徑在1-10 μ m之間，平均粒徑為7. 5 μ m，載藥量為5. 28-7. 28%,包封率為0. 85 1. 19%，具有良好的生物相容性。實施例3
一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，由以下成分制備而成 環(huán)孢素A 3g； 殼聚糖衍生物IOg ； β -環(huán)糊精衍生物5g ； 致孔劑5g ；
所述的殼聚糖衍生物為殼聚糖季銨鹽；
所述的殼聚糖季銨鹽為分子量為450kDa的中分子量的殼聚糖季銨鹽，取代度為85%。所述的β -環(huán)糊精衍生物為2-羥丙基-β -環(huán)糊精(Hp- β -⑶)； 所述的致孔劑為聚乙二醇。上述環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，包括以下步驟
(1)根據(jù)上述配比要求配制各組分的混合溶液，稱取真空干燥的Ηρ-β-⑶，溶于200 mL 的HTCC(分子量130萬)蒸溜水，將聚乙二醇溶于上述配制好的混合溶液中；
(2)經(jīng)0.45 μ m的微孔濾膜過濾，調(diào)節(jié)混合濾液質(zhì)量濃度為0. 5-1. 5% ；
(3)將過濾后的溶液經(jīng)蠕動泵導(dǎo)入BUchi290小型噴霧干燥器的雙流向螺旋式噴嘴(直徑0.7 mm)，控制氣流量500 L/H，進(jìn)風(fēng)溫度為140°C，出風(fēng)溫度為90°C，進(jìn)樣速度15ml/min， 噴嘴流速600L/H，噴霧干燥“一步”制成粉末微球；
(4)收集微球于盛有氯化鈣的干燥器中放置72h，備用。結(jié)果該肺吸入微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，可用于肺部給藥，粒徑在1-10 μ m之間，平均粒徑為5. 3 μ m，載藥量為5. 28-7. 28%,包封率為0. 85 1. 19%，具有良好的生物相容性。實施例4
一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，由以下成分制備而成 環(huán)孢素A 2g/ml ； 殼聚糖衍生物7 g/ml ； β -環(huán)糊精4 g/ml ； 致孔劑3 g/ml ；
所述的殼聚糖衍生物為殼聚糖季銨鹽；
所述的殼聚糖季銨鹽為分子量為170kDa的中分子量的殼聚糖季銨鹽，取代度為80%。所述的致孔劑為聚苯乙烯球。上述環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，包括以下步驟
(1)根據(jù)上述配比要求配制各組分的混合溶液，稱取真空干燥的β-環(huán)糊精，溶于200 mL的HTCC(分子量130萬)蒸溜水，將聚苯乙烯球溶于上述配制好的混合溶液中；
(2)經(jīng)0.45 μ m的微孔濾膜過濾，調(diào)節(jié)混合濾液質(zhì)量濃度為0. 5-1. 5% ；
(3)將過濾后的溶液經(jīng)蠕動泵導(dǎo)入BUchi290小型噴霧干燥器的雙流向螺旋式噴嘴(直徑0.7 mm)，控制氣流量550 L/H，進(jìn)風(fēng)溫度為160°C，出風(fēng)溫度為95°C，進(jìn)樣速度20ml/min， 噴嘴流速700L/H，噴霧干燥“一步”制成粉末微球；
(4)收集微球于盛有氯化鈣的干燥器中放置72h，備用。
二、結(jié)果分析
該肺吸入微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，可用于肺部給藥，粒徑在1-10 μ m之間，平均粒徑為 3. 4 μ m，載藥量為5. 28-7. 28%，包封率為0. 85 1. 19%，具有良好的生物相容性。實施例5
一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，由以下成分制備而成 環(huán)孢素A 2g/ml ； 殼聚糖衍生物4g/ml ； β -環(huán)糊精衍生物2g/ml ； 致孔劑2g/ml ；
所述的殼聚糖衍生物為殼聚糖季銨鹽；
所述的殼聚糖季銨鹽為分子量為170kDa的中分子量的殼聚糖季銨鹽，取代度為73%。所述的β -環(huán)糊精衍生物為2-羥丙基-β -環(huán)糊精； 所述的致孔劑為氯仿。上述環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，包括以下步驟
(1)根據(jù)上述配比要求配制各組分的混合溶液，稱取真空干燥的Ηρ-β-⑶，溶于200 mL 的HTCC(分子量130萬)蒸溜水，將氯仿溶于上述配制好的混合溶液中；
(2)經(jīng)0.45 μ m的微孔濾膜過濾，調(diào)節(jié)混合濾液質(zhì)量濃度為0. 5-1. 5% ；
(3)將過濾后的溶液經(jīng)蠕動泵導(dǎo)入BUchi290小型噴霧干燥器的雙流向螺旋式噴嘴(直徑0.7 mm)，控制氣流量600 L/H，進(jìn)風(fēng)溫度為170°C，出風(fēng)溫度為100°C，進(jìn)樣速度25ml/ min,噴嘴流速800L/H，噴霧干燥“一步”制成粉末微球；
(4)收集微球于盛有氯化鈣的干燥器中放置72h，備用。結(jié)果該肺吸入微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，可用于肺部給藥，粒徑在1-10 μ m之間，平均粒徑為1. 2 μ m，載藥量為5. 28-7. 28%,包封率為0. 85 1. 19%，具有良好的生物相容性。實施例6 紅細(xì)胞溶血試驗
一、材料與方法試驗儀器
臺式離心機(jī)上海安亭儀器制造廠；SHA-B恒溫振蕩器國華企業(yè)；電子天平 Mettler-Toledo instr. (Shanghai) Ltd.；
二、試驗方法
新鮮兔全血迅速與0.洲草酸鈉以4:1的比例混合制備抗凝血液，用10 ml生理鹽水稀釋8 ml抗凝血備用。取1 ml上述血液加入1.25 ml 0. 9%生理鹽水，稀釋備用。試驗組、 陰性對照、陽性對照各設(shè)三個平行樣，其中陽性對照用2. 5 ml蒸餾水，陰性對照用2. 5 ml 0. 9%生理鹽水。取CsA/HTCC/Hp-β -⑶大孔微球(MS B)的浸提液樣品25 mg置于離心管中，加入2. 5 ml 0. 9%生理鹽水(1%)，37°C水浴中放置60 min，加入預(yù)熱兔血50 μ ，輕輕混勻，在37°C水浴中振動60 min, 2000 r/min離心5 min，取上清移入比色杯中，用分光光度計在M5 nm波長處測吸光度。溶血率(HR)用如下公式計算 (4-1)
其中Dt代表樣品吸光值，Dnc代表陰性對照吸光值，Dpc代表陽性對照吸光值。
表1環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的溶血率
權(quán)利要求
1.一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，其特征在于，由以下重量份的成分組成 環(huán)孢素A :1-3份；殼聚糖衍生物1-10份； β -環(huán)糊精或其衍生物0. 5-5份； 致孔劑0. 5-5份；所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的粒徑在1-10 μ m ； 所述的殼聚糖衍生物為殼聚糖季銨鹽；所述的殼聚糖季銨鹽為高、中、低分子量殼聚糖季銨鹽中的一種；所述的高分子量的殼聚糖季銨鹽為分子量1360kDa或1100 kDa的殼聚糖季銨鹽的一種；所述的中分子量的殼聚糖季銨鹽為分子量450kDa或350kDa的殼聚糖季銨鹽的一種； 所述的低分子量的殼聚糖季銨鹽為分子量170kDa或50kDa的殼聚糖季銨鹽的一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，其特征在于所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為90%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，其特征在于所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為85%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，其特征在于所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為80%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，其特征在于所述的殼聚糖季銨鹽的取代度為73%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，其特征在于所述的β -環(huán)糊精衍生物為2-羥丙基-β -環(huán)糊精。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球，其特征在于所述的致孔劑為碳酸氫銨、丙二醇嵌段聚醚、聚乙二醇、氯仿、聚苯乙烯球中的一種。
8.—種如權(quán)利要求1-7中任意一項所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)根據(jù)上述配比要求配制各組分的混合溶液，其中環(huán)孢素A 1-3 g/ml、殼聚糖衍生物1-10 g/ml、β -環(huán)糊精或其衍生物0. 5_5 g/ ml、致孔劑 0. 5-5 g/ml ；(2)將上述步驟(1)的混合溶液經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾，調(diào)節(jié)混合濾液質(zhì)量濃度為 0. 5-1. 5% ；(3)將上述步驟(2)的濾液經(jīng)蠕動泵導(dǎo)入噴霧干燥器，進(jìn)行噴霧干燥，制成粉末微球；噴霧干燥條件為噴霧干燥進(jìn)口溫度為120-170°C，出口溫度為80-100°C，噴嘴流速 400-800L/H，進(jìn)樣速度 5-25ml/min，氣流量 400-600 L/h ；(4)將上述步驟(3)得到的微球收集。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的制備方法，其特征在于，所述的噴霧干燥條件為氣流量陽0 L/H，進(jìn)風(fēng)溫度為160°C，出風(fēng)溫度為95°C，進(jìn)樣速度20ml/min， 噴嘴流速700L/H。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種環(huán)孢素A肺吸入大孔微球及其制備方法，所述環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的組成重量份為環(huán)孢素A1-3份、殼聚糖衍生物1-10份、β-環(huán)糊精或其衍生物0.5-5份、致孔劑0.5-5份，所述的環(huán)孢素A肺吸入大孔微球的粒徑在1-10μm，制備方法主要是過濾和噴霧干燥；本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于該肺吸入微球具有大孔的結(jié)構(gòu)，可用于肺部給藥，粒徑在1-10μm之間，載藥量為5.28-7.28%，包封率為0.85～1.19%，具有良好的生物相容性，能夠減輕氣道黏膜的刺激性，使藥物緩慢釋放，可減少藥物用量和副作用，尤其適用于干粉吸入劑以達(dá)到肺部給藥的目的，制備方法操作簡便、工藝穩(wěn)定、易于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K38/13GK102429875SQ20111041457
公開日2012年5月2日 申請日期2011年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月13日
發(fā)明者崔娟娟, 張維芬, 李志堅, 鄭增娟 申請人:張維芬