專利名稱：甲魚肽在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甲魚肽的用途，尤其是涉及在對(duì)輻射危害有保護(hù)功能的藥物領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
申請(qǐng)?zhí)?01010103157. 9專利文獻(xiàn)中公開(kāi)了甲魚小分子多肽的制備方法；《中國(guó)食品學(xué)報(bào)》2008，02:徐懷德等“甲魚蛋白酶解產(chǎn)物體外ACE抑制和抗氧化活性研究”公開(kāi)了體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)甲魚蛋白酶解物ACE抑制和抗氧化活性的作用；現(xiàn)有技術(shù)和專利中均未述及甲魚低聚肽關(guān)于輔助抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移應(yīng)用的報(bào)導(dǎo)，也沒(méi)有關(guān)于分子量在1000以下的甲魚低聚肽在對(duì)輻射危害有保護(hù)功能方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供甲魚肽的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用；本發(fā)明的另一目的是提供一種能對(duì)輻射危害有保護(hù)功能，有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，吸收率高，不妨害人體身體健康的藥物或保健食品。本發(fā)明甲魚肽是以甲魚為主要原料，分子量分布在lOOOODalton以內(nèi)的小分子肽，其中140-1000分子量范圍占50%以上。本發(fā)明還涉及甲魚肽在作為制備對(duì)輻射危害有保護(hù)功能的藥中的應(yīng)用。涉及分子量分布在lOOOODalton以內(nèi)的甲魚肽在作為制備對(duì)輻射危害有保護(hù)功能的藥中的應(yīng)用。涉及分子量分布在2000DaltOn以內(nèi)的甲魚肽在作為制備對(duì)輻射危害有保護(hù)功能的藥中的應(yīng)用。涉及分子量分布在140 lOOODalton范圍以內(nèi)的甲魚肽在作為制備對(duì)輻射危害有保護(hù)功能的藥中的應(yīng)用。涉及分子量分布在300 700DaltOn范圍以內(nèi)的甲魚肽在作為制備對(duì)輻射危害有保護(hù)功能的藥中的應(yīng)用。本發(fā)明的甲魚肽是鱉科動(dòng)物鱉Trionyx sinensis Wiegmann的全體為原料制備的。為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用分子量在140 lOOOODalton的甲魚肽的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果來(lái)說(shuō)明其在制藥領(lǐng)域的新用途。分子量小于lOOOODalton的甲魚肽在對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)功能的功效研究。 1.材料與方法
1. 1樣品來(lái)源及處理受試藥為甲魚肽口服液干粉，Ig甲魚肽/干粉，由江中藥業(yè)股份有限公司提供，人臨床服用量為4g甲魚肽/d，100mL/d。1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及環(huán)境清潔級(jí)健康昆明種小鼠，雄性，體重18_22g，江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK(贛)2006 — 0001。動(dòng)物飼養(yǎng)于江西中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室，環(huán)境許可證SYXK (贛)2004-0001,飼養(yǎng)環(huán)境溫度21 23°C，相對(duì)濕度50 60%。1.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1動(dòng)物分組根據(jù)體重隨機(jī)分為5組，每組12只。設(shè)立空白對(duì)照組，模型對(duì)照組， 甲魚肽口服液低、中、高劑量組。1. 3. 2劑量設(shè)計(jì)甲魚肽口服液每人每日推薦攝入量為4. 0g/60kg體重。由此推算出小鼠每日攝入量為低劑量組，0. 333g生藥/kg體重；中劑量組，0. 667g生藥/kg體重； 高劑量組，1. 334g生藥/kg體重，分別相當(dāng)于人每日攝入量的5、10和20倍。將樣品以蒸餾水配制成相應(yīng)濃度(0. 333g干粉/20mL、0. 667g干粉/20mL、l. 334g干粉/20mL)的灌胃液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1. 3. 3甲魚肽口服液對(duì)輻射引起白細(xì)胞減少的影響取小鼠60只，按體重隨機(jī)分成5組，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，甲魚肽口服液低、中、高劑量組，每組12只。實(shí)驗(yàn)前各組小鼠眼眶取血20 μ L，血液分析儀計(jì)算每只小鼠白細(xì)胞數(shù)目?？瞻捉M和模型組灌胃蒸餾水， 甲魚肽口服液各組動(dòng)物灌胃給予相應(yīng)試液0.2mL/10g體重，每日1次，連續(xù)30天。除空白對(duì)照組外，所有動(dòng)物于第16天進(jìn)行6tlCo照射，輻照劑量為5Gy。各組小鼠于輻照后第3天、 第14天眼眶取血20 μ L，血液分析儀計(jì)算每只小鼠白細(xì)胞數(shù)目。1. 3. 4甲魚肽口服液對(duì)輻射引起骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少和骨髓細(xì)胞DNA含量降低的影響取小鼠60只，按體重隨機(jī)分成5組，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，甲魚肽口服液低、中、 高劑量組，每組12只?？瞻捉M和模型組灌胃蒸餾水，甲魚肽口服液各組動(dòng)物灌胃給予相應(yīng)試液0.2mL/10g體重，每日1次，連續(xù)30天。除空白對(duì)照組外，所有動(dòng)物均于第27天進(jìn)行 60Co照射，輻照劑量為5Gy。各組小鼠于輻照后第3天脫頸椎處死動(dòng)物，剝離出股骨，用ImL 注射器(6. 5號(hào)針頭)吸取一定體積的Hank’ s液，沖出股骨中的全部骨髓細(xì)胞，然后讓細(xì)胞懸液通過(guò)4號(hào)針頭的注射器，讓細(xì)胞在懸液中充分分散，鏡下計(jì)數(shù)每mL骨髓細(xì)胞懸液中的有核細(xì)胞數(shù)。另取骨髓細(xì)胞液用紫外分光光度計(jì)于260nm處測(cè)定，計(jì)算DNA含量。1. 3. 5 甲魚肽口服液對(duì)輻射引起血清和肝組織超氧化物歧化酶(SOD)活性下降的影響取小鼠60只，按體重隨機(jī)分成5組，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，甲魚肽口服液低、中、 高劑量組，每組12只。空白組和模型組灌胃蒸餾水，甲魚肽口服液各組動(dòng)物灌胃給予相應(yīng)試液0.2mL/10g體重，每日1次，連續(xù)30天。除空白對(duì)照組外，所有動(dòng)物均于第23天進(jìn)行 6tlCo照射，輻照劑量為7Gy。各組小鼠于輻照后第7天取血分離血清，爾后脫頸椎處死動(dòng)物， 取肝臟，SOD試劑盒檢測(cè)各組小鼠紅細(xì)胞及肝組織SOD活性。1. 3. 6 甲魚肽口服液對(duì)輻射小鼠免疫功能的影響取小鼠60只，按體重隨機(jī)分成5組，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，甲魚肽口服液低、中、高劑量組，每組12只?？瞻捉M和模型組灌胃蒸餾水，甲魚肽口服液各組動(dòng)物灌胃給予相應(yīng)試液0. 2mL/10g體重，每日1次，連續(xù)30天。除空白對(duì)照組外，所有動(dòng)物均于第15天進(jìn)行6tlCo照射，輻照劑量為2Gy。各組小鼠于輻照后第15天進(jìn)行血清溶血素的測(cè)定，血清溶血素的測(cè)定采用血凝法，計(jì)算抗體體積數(shù)。1.4統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以 -±s表示，采用單因素方差分析，比較空白組、模型對(duì)照組、甲魚肽組之間的差異，p<0. 05
判斷為差異具有顯著性。2 結(jié)果2.1甲魚肽口服液對(duì)輻射引起白細(xì)胞減少的影響
試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組在輻照后第3、14天WBC值明顯下降， 提示造模成功。甲魚肽口服液中、高劑量組小鼠在輻照后第3天WBC值較輻照前減少，但與模型對(duì)照組比較，其WBC值明顯升高，提示甲魚肽口服液預(yù)防給藥有抑制輻射引起的WBC減少的作用。與模型對(duì)照組相比，甲魚肽口服液中、高劑量組小鼠在輻照后第14天對(duì)小鼠WBC 值明顯升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低劑量組小鼠WBC值有升高的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示甲魚肽口服液給藥有對(duì)抗輻射引起的WBC減少的作用。 表1甲魚肽口服液對(duì)輻射引起白細(xì)胞減少的影響(^ts )
權(quán)利要求
1.甲魚肽在制備對(duì)輻射危害有保護(hù)功能的藥中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲魚肽，其特征在于甲魚肽分子量分布在lOOOODalton以內(nèi)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的甲魚肽，其特征在于甲魚肽分子量分布在2000DaltOn以內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的甲魚肽，其特征在于甲魚肽分子量分布在140 IOOODalton范圍以內(nèi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的甲魚肽，其特征在于甲魚肽分子量分布在300 700DaltOn 范圍以內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供一種甲魚肽的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用；本發(fā)明的另一目的是提供一種能對(duì)輻射危害有保護(hù)功能，有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，吸收率高，不妨害人體身體健康的藥物或保健食品，本發(fā)明甲魚低聚肽是以甲魚為主要原料，分子量分布在10000Dalton以內(nèi)的小分子肽，其中140-1000分子量范圍占50%以上。
文檔編號(hào)A61P39/00GK102319420SQ20111023629
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月18日
發(fā)明者劉根云, 盧建中, 易敏之, 鐘虹光, 馬莉 申請(qǐng)人:江中藥業(yè)股份有限公司