專利名稱：一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以膠囊制劑為特征的醫(yī)藥配置品，尤其是ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊及其制備方法。
背景技術(shù)：
人體免疫系統(tǒng)是人體自身的防御機(jī)制，對(duì)人體起到保護(hù)作用。隨著人們生活和エ作節(jié)奏的加快，飲食不規(guī)律、食物過于精細(xì)造成特殊營(yíng)養(yǎng)成分的缺乏、與化學(xué)物品接觸的增多等原因，造成人體免疫系統(tǒng)受到越來(lái)越多的化學(xué)和物理因素影響。而人體免疫系統(tǒng)造成損傷會(huì)導(dǎo)致疲勞、衰老甚至疾病的產(chǎn)生，特別是近年來(lái)心腦血管發(fā)病率在逐年増加。因此，應(yīng)用各種具有提高人們自身的免疫功能的藥物和保健品來(lái)改善和治療人體免疫功能低下所引發(fā)的病癥，例如衰老、心血管疾病具有重要意義。我們知道，沙棘籽油是多種維生素和生物活性物質(zhì)的復(fù)合體。它能滋養(yǎng)皮膚、促進(jìn)新陳代謝、抗過敏，殺菌消炎，促進(jìn)上皮細(xì)胞再生，對(duì)皮膚有修復(fù)作用，能保持皮膚的酸性環(huán)境，具有較強(qiáng)的滲透性，是美容護(hù)膚的重要原料。在增強(qiáng)免疫力方面，沙棘籽油可以明顯增強(qiáng)E花環(huán)形成率、血清抗SRBC抗體效價(jià)，對(duì)輻射損傷的小鼠體液免疫細(xì)胞和細(xì)胞免疫功能恢復(fù)均有顯著的增進(jìn)作用。經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床驗(yàn)證，沙棘籽油具有抗衰老、美白肌膚、抗炎生肌、促進(jìn)組織再生、抗腫瘤、健腦益智、保護(hù)心、腦血管、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的作用。卵磷脂是細(xì)胞膜的主要組成部分，是細(xì)胞自我修復(fù)的主要成分。補(bǔ)充卵磷脂可以提高人體的代謝能力、自愈能力和抗體組織的再生能力，延緩人體衰老。另外，卵磷脂可以乳化分解油脂，軟化血管和清除過氧化物，達(dá)到通暢血管，降低血糖和血脂的作用。維生素E是ー種脂溶性的維生素，主要用做抗氧化劑，延緩衰老。另外，也可以用作血管擴(kuò)張劑和抗凝血?jiǎng)?，改善血液循環(huán)。利用沙棘籽油、卵磷脂、維生素E制備具有心血管保護(hù)作用的保健品，目前已有報(bào)道。例如，2006年7月5日公開的CN 1262284C中國(guó)發(fā)明專利說(shuō)明書就公開了具有抗氧化、心血管保護(hù)作用的“一種沙棘油保健品”，其由下列重量份配比的活性原料組成提純沙棘籽油80 99份，卵磷脂O. 5 3份，維生素E0. 5 3份。其優(yōu)選方案中，各活性原料重量份配比提純沙棘籽油96份，卵磷脂I份，維生素El份。上述公開的文件中，活性組成原料成份少，影響了抗氧化和心血管保護(hù)的效果，并且對(duì)人體免疫力的提高方面略顯不足。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)在抗衰老、保護(hù)心血管效果不理想的不足，本發(fā)明提供ー種劑量科學(xué)、應(yīng)用效果好、提高人體免疫力、具有益腎固精保健功能的抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊及其制備方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其是由軟膠囊體和封入該軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物組成，其特征在于所述的內(nèi)容物是由下列重量百分比的組分組成沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10% ;所述的軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成，所述軟膠囊體與所述內(nèi)容物的重量比為1 2 3。 作為優(yōu)化方案，所述的內(nèi)容物的組分的重量百分比分別為沙棘籽油50%、卵磷脂2%、維生素E2%、番茄紅素6%、蜂膠7%、南瓜籽油25%、膠原蛋白8%。ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，其特征在于經(jīng)過下列エ藝
a、配料按照重量百分比稱量沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10%，置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作將明膠、水、甘油按100 100 40比例稱料，投送到化膠罐中，攪拌升溫至60 75°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2 3的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度22 26°C，濕度為30 40%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為90%以上的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本發(fā)明的抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊是將具有抗氧化、血管保護(hù)作用的沙棘籽油、卵磷脂和維生素E進(jìn)行了合理搭配，増加了維生素E和卵磷脂的含量，并進(jìn)ー步選取了具有抗衰老、保護(hù)心血管作用的番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油和膠原蛋白。在本發(fā)明中，其所選用的番茄紅素在分子結(jié)構(gòu)上含有11個(gè)共軛雙鍵和2個(gè)非共軛雙鍵，在類胡蘿卜素中，它具有最強(qiáng)的抗氧化活性，其清除自由基的功效遠(yuǎn)勝于其它類胡蘿
卜素和維生素E，其淬滅單線態(tài)氧的速率常數(shù)是維生素E的100倍，其通過增強(qiáng)抗氧化酶的活性，提高機(jī)體的抗氧化能力，保持細(xì)胞正常代謝，并且可以增強(qiáng)正常細(xì)胞間隙連接通訊，促進(jìn)吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞間的相互作用，通過分泌的細(xì)胞活化因子活化細(xì)胞，最終表現(xiàn)對(duì)吞噬能力及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的促進(jìn)，增強(qiáng)免疫功能。番茄紅素具有以上優(yōu)越的生理功能，使它不僅具有抗癌、抑癌的功效，而且對(duì)預(yù)防心血管疾病、動(dòng)脈硬化等各種成人病、預(yù)防衰老和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等具有重要作用；其所選的蜂膠含有七十多種黃酮類化合物、有機(jī)酸、礦物質(zhì)、微量元素、維生素和氨基酸。近代研究證明，蜂膠所含有的豐富而獨(dú)特的生物活性物質(zhì)，使其具有抗菌、消炎、止癢、抗氧化、增強(qiáng)免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤等多種功能；其所選的南瓜籽油中鋅、鎂、鈣、磷含量極高，尤其是含有豐富的不飽和脂肪酸、植物留醇、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)等多種生物活性物質(zhì),可以降低血糖、膽固醇,對(duì)糖尿病和心、腦血管疾病有預(yù)防和保健作用。另外，南瓜籽油中含有ー種男性荷爾蒙的活性生物觸媒劑成分，能夠消除前列腺的初期腫脹，對(duì)泌尿系及前列腺增生具有良好的治療和預(yù)防作用；其所選的膠原蛋白是人體組織必需的蛋白質(zhì)，可以有效的補(bǔ)充人體所需，支撐皮膚的膠原肽鍵和彈カ網(wǎng)，防止螺旋網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞及皮膚組織氧化、萎縮、塌陷，延緩衰老。本發(fā)明的關(guān)鍵在于軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物組分的選取和各組分用量的配比。其所選用的番茄紅素、蜂膠、沙棘籽油、南瓜籽油、膠原蛋白、卵磷脂和維生素E共同作用能夠達(dá)到最佳的抗衰老、保護(hù)心血管效果。與現(xiàn)有技術(shù)相比，其劑量科學(xué)，抗衰老、保護(hù)心血管效果好，有效提高了人體免疫力，并具有益腎固精的功能。本發(fā)明所提供的制備方法，其エ藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)ー步說(shuō)明。實(shí)施例I
ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，經(jīng)過下列エ藝
a、配料稱量沙棘籽油50kg、卵磷脂2kg、維生素E2kg、番茄紅素6kg、蜂膠7kg、南瓜籽油25kg、膠原蛋白8kg,置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作稱量明膠16. 6kg、水16. 6kg、甘油6. 6kg投送到化膠罐中，攪拌升溫至75°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2.51的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度26°C，濕度為30%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為92%的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本實(shí)施例中，軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物的重量百分比分別為沙棘籽油50%、卵磷脂2%、維生素E2%、番茄紅素6%、蜂膠7%、南瓜籽油25%、膠原蛋白8% ;軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成。本發(fā)明所得的軟膠囊劑量科學(xué)，抗衰老、保護(hù)心血管效果好，并具有益腎固精功能；其制備方法エ藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)。
實(shí)施例2
ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，經(jīng)過下列エ藝
a、配料稱量沙棘籽油59kg、卵磷脂3kg、維生素E3kg、番茄紅素4kg、蜂膠5kg、南瓜籽油20kg、膠原蛋白6kg,置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作稱量明膠13. 87kg、水13. 87kg、甘油5. 55kg投送到化膠罐中，攪拌升溫至65°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，然后過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 3的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度24°C，濕度為40%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為95%的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟 月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本實(shí)施例中，軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物的重量百分比分別為沙棘籽油59%、卵磷脂3%、維生素E3%、番茄紅素4%、蜂膠5%、南瓜籽油20%、膠原蛋白6% ;軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成。實(shí)施例3
ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，經(jīng)過下列エ藝
a、配料稱量沙棘籽油41kg、卵磷脂1kg、維生素Elkg、番茄紅素8kg、蜂膠9kg、南瓜籽油30kg、膠原蛋白IOkg,置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作稱量明膠20. 8kg、水20. 8kg、甘油8. 3kg投送到化膠罐中，攪拌升溫至60°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，然后過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度22°C，濕度為35%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為96%的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本實(shí)施例中，軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物的重量百分比分別為沙棘籽油41%、卵磷脂1%、維生素El%、番茄紅素8%、蜂膠9%、南瓜籽油30%、膠原蛋白10% ;軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成。本發(fā)明所得的軟膠囊劑量科學(xué)，抗衰老、保護(hù)心血管效果好，能有效提高人體免疫力，并具有益腎固精功能；其制備方法エ藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。下面采用動(dòng)物試驗(yàn)來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的軟膠囊具有抗衰老，保護(hù)心血管，提高免疫力的功能。I、材料和方法
I.I、受試樣品按照本發(fā)明提供的軟膠囊制備方法，生產(chǎn)出500mg/粒軟膠囊樣品。按照人體推薦攝入量為每日2次，毎次2粒，即人體毎日推薦量為2. 0g/60kg · bw (33. 33mg/
kg · bwノ。I. 2、試驗(yàn)動(dòng)物與組分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的健康SPF昆明種小鼠。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4個(gè)免疫大組,每大組55只。I.3、實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件實(shí)驗(yàn)環(huán)境為屏障環(huán)境。環(huán)境溫度22°C ±2°C，相対濕度50% ±10%。 I. 4、劑量選擇與受試物給與方式根據(jù)人體推薦量(33. 33mg/日/kg *bw),按相當(dāng)于人體推薦量的5倍、10倍、30倍確定小鼠的低、中、高劑量分別為0. 17g/kg · bw、0. 33g/kg · bw、lg/kg · bw,經(jīng)ロ姆日一次灌胃給予小鼠受試物,灌胃體積按10mL/kg · bw。灌胃前用玉米油溶解并稀釋受試物，對(duì)照組分別以等體積的蒸餾水和玉米油代替受試物，連續(xù)給予30d后測(cè)各項(xiàng)免疫指標(biāo)。I. 5、主要儀器與試劑
儀器動(dòng)物天平、分析天平、潔凈工作臺(tái)、游標(biāo)卡尺(精密度O. 01mm)、微量注射器(25 μ L)、CO2培養(yǎng)箱、恒溫水浴、離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、光學(xué)顯微鏡、微量加樣器(20 200 μ L、100 1000 μ L)。無(wú)菌手術(shù)器械、200目篩網(wǎng)、玻璃平皿、紗布、試管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)器、平底細(xì)胞培養(yǎng)板、U型細(xì)胞培養(yǎng)板、計(jì)時(shí)器、血色素吸管、玻片架。試劑綿羊紅細(xì)胞(SRBC)、生理鹽水、刀豆蛋白A (ConA)、補(bǔ)體(豚鼠血清)、Hank’s液、青鏈霉素、SA緩沖液、瓊脂糖、MTT、小牛血清、PRMI1640培養(yǎng)液、PBS緩沖液、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪ニ甲酯磷酸鹽、氧化型輔酶1、1%冰醋酸、lmol/L HCl,O. 1% NP40 (v/v)、酸性異丙醇(96mL 異丙醇加 4mL lmol/L 的 HCl )、YAC-1 細(xì)胞、O. 2mol/L 的 Tris-HCl 緩沖液、印度墨汁、lg/L Na2CO3、雞紅細(xì)胞、甲醇、丙酮Giemsa染液等。I. 6、實(shí)驗(yàn)方法。1.6. I、臟器體重比值測(cè)定
小鼠稱重后脫白處死，取其胸腺、脾臟，去盡筋膜，用濾紙吸干臟器表面血污并稱重，計(jì)算胸腺體重比值與脾臟體重比值。所得數(shù)據(jù)，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。I. 6. 2、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增厚法)
取羊血，脫去纖維，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC O. 2mL，致敏后4天，測(cè)量左足后跖部厚度，同一部位測(cè)量三次，取平均值。然后在測(cè)量部位皮下注射20%壓積SRBC 20 μ L，于注射后24h測(cè)量左后足跖部厚度，以攻擊前后足跖厚度之差值來(lái)表示DTH的程度。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組攻擊前后足跖厚度的差值高于對(duì)照組，且差異有顯著性(p〈0. 05)，可判定該受試物有提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力的作用。I. 6. 3、ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)
無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hank’ s液的小平皿中，制成細(xì)胞懸液。用Hank’ s液洗滌2次，每次IOOOrpm離心lOmin。然后將細(xì)胞懸液浮于ImL RPMI1640的完全培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為3X IO6個(gè)/mL。將細(xì)胞懸液分兩孔加入培養(yǎng)板中，每孔lmL，在其中一孔加75 μ L ConA液，另一孔作為對(duì)照，置于5% C02、37°C孵箱培養(yǎng)68h，每孔加入50 μ L MTT,繼續(xù)培養(yǎng)4h。每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解，然后將液體移入比色杯中，用紫外分光光度計(jì)，在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光密度值(0D值)。計(jì)算試驗(yàn)孔OD值和對(duì)照孔OD值之差，以此表示淋巴細(xì)胞的増殖能力。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組淋巴細(xì)胞的增殖能力高于對(duì)照組，且差異有顯著性(p〈0. 05)，可判定該受試物有提高ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的作用。I. 6. 4、抗體生成細(xì)胞測(cè)定(Jerne改良玻片法)
取羊血，脫去纖維，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC O. 2mL，將SRBC免疫5天后的小鼠處死，取脾，制成細(xì)胞懸液。將10g/L瓊脂 加熱溶解后，與等量雙倍Hank’ s液混合，分裝小試管，每管O. 5mL，再向管內(nèi)加10% (v/v,用SA液配制)壓積SRBC 50yL、脾細(xì)胞懸液25yL，迅速混勻后，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入CO2培養(yǎng)箱孵育I. 5h，然后將補(bǔ)體加入玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育I. 5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組溶血空斑數(shù)高于對(duì)照組，且差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠抗體細(xì)胞數(shù)的作用。I. 6. 5、小鼠血清溶血素的測(cè)定
取羊血，脫去纖維，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC O. 2mL,免疫5天后摘除小鼠眼球,取血于離心管內(nèi)，放置Ih,將凝固血與管壁剝離，離心(2000rpm，10min)，收集血清。用生理鹽水置約lh，將凝固血與管壁剝離，離心(2000rpm，10min)，收集血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度血清分別置于微量血凝試驗(yàn)板內(nèi)，每孔100 μ L，再加入O. 5% SRBC懸液100 μ L，混勻，置于濕盒內(nèi)，于37°C溫箱孵育3h，記錄血球凝集程度。計(jì)算抗體積數(shù)。血清凝集度分為5級(jí)，按以下標(biāo)準(zhǔn)判定。O級(jí)SRBC全部下沉，集中在孔底部形成致敏的圓點(diǎn)狀，四周液體清晰級(jí)=SRBC大部分沉積在孔底部形成圓點(diǎn)狀，四周有少量凝集的SRBC ；11級(jí)凝集的SRBC在孔底部形成薄層，中心可以明顯見到ー個(gè)疏松的紅點(diǎn)；111級(jí)凝集的SRBC均勻地鋪散在孔底成一薄層，中心隱約可見ー個(gè)紅點(diǎn)；IV級(jí)凝集的SRBC在孔底成ー薄層，凝塊有時(shí)成卷折狀。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組血清溶血素抗體積數(shù)高于對(duì)照組，且差異有顯著性(p〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠血清溶血素水平的作用。I. 6. 6、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)
小鼠尾浄脈注射I : 5稀釋的印度星汁,待星汁注入，立即計(jì)時(shí)，注入星汁后2min、IOmin,分別從內(nèi)眥靜脈取血20 μ L，并將其加入2mL Na2CO3溶液中。用紫外分光光度計(jì)在600nm波長(zhǎng)處測(cè)光密度值，以Na2CO3溶液作空白対照。將小鼠處死，取其肝臟和脾臟稱重。按下式計(jì)算吞噬指數(shù)a:
K = (IgOD1 - IgOD2)/(t2 - ti), a =體重 + (肝重 + 脾重)Xk1,3
所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組的吞噬指數(shù)高于對(duì)照組，且差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠單核-巨噬細(xì)胞的碳廓清能力的作用。I. 6. 7、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)
小鼠腹腔注射20%壓積雞紅細(xì)胞懸液lmL，間隔30min，脫臼處死，取腹腔巨噬細(xì)胞洗液lmL，滴于載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，移入37°C孵箱溫育30min后，于生理鹽水中漂洗，晾干。以I : I丙酮甲醇固定，4%Giemsa-磷酸緩沖液染色，再用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下計(jì)數(shù)，每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)
吞噬率％=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100 吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)
所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，若受試物組的吞噬率或吞噬指數(shù)明顯高于O. 000g/kg -bw組，且 差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的作用。I. 6. 8、小鼠NK細(xì)胞活性測(cè)定(乳酸脫氫酶LDT測(cè)定法)
試驗(yàn)前24h將YAC-I細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，用前以Hank’ s液洗三次，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4X IO5個(gè)/mL。將小鼠脫白處死，無(wú)菌取脾，制備脾細(xì)胞懸液，用Hank’s液洗三次，每次IOOOrpm離心lOmin。再用2mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸，用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2X IO7個(gè)/mL，使效靶比為50 I。取靶細(xì)胞和脾細(xì)胞各100 μ L，加入U(xiǎn)型培養(yǎng)板，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 μ L，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%ΝΡ40各100 μ L，上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)平行孔，5% C02、37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h，將培養(yǎng)板以1500rpm離心5min，每孔取上清液100 μ L置于酶標(biāo)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100 μ L，反應(yīng)3min，然后每孔加入lmol/L的HCl 30 μ L終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在490nm處測(cè)定OD值。按下式計(jì)算NK細(xì)胞活性
NK細(xì)胞活性％=[(反應(yīng)孔OD-自然釋放孔0D) / (最大釋放孔OD-自然釋放孔0D)]X100
LDH基質(zhì)液的配制乳酸鋰5X 10_2mol/L 硝基氯化四氮唑6. 6 X ΙθΛιοΙ/L 吩嗪ニ甲酯硫酸鹽2. 8X 10_4mol/L 氧化型輔酶I I. 3Xl(T3mol/L 將上述試劑溶于0. 2mol/L的Tris-HCl緩沖液中
所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，NK細(xì)胞活性需按X=SirT1 (P)1/2進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，式中P為NK細(xì)胞活性，用小數(shù)表示，若受試物組的NK細(xì)胞活性高于對(duì)照組，且差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠NK細(xì)胞活性能力的作用。I. 7、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各個(gè)實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足“方差齊”要求的數(shù)據(jù)資料用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和ー個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對(duì)方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足“方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。I. 8、結(jié)果判定
在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力功能作用。其中細(xì)胞免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，或者任ー實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽(yáng)性，可判定細(xì)胞免疫功能測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。體液免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，或者任一實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽(yáng)性，可判定體液免疫功能測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。單核-巨噬細(xì)胞功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，或者任ー實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽(yáng)性，可判定單核-巨噬細(xì)胞功能測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。NK細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽(yáng)性，可判定NK細(xì)胞活性測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。2、結(jié)果
2. I、軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響見表I。表I 軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響
權(quán)利要求
1.一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其是由軟膠囊體和封入該軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物組成，其特征在于所述的內(nèi)容物是由下列重量百分比的組分組成沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10%;所述的軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成，所述軟膠囊體與所述內(nèi)容物的重量比為1 : 2 3。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其特征在于所述的內(nèi)容物的組分的重量百分比分別為沙棘籽油50%、卵磷脂2%、維生素E2%、番茄紅素6%、蜂膠7%、南瓜籽油25%、膠原蛋白8%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，其特征在于經(jīng)過下列工藝， a、配料按照重量百分比稱量沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10%，置于配料罐中，攪拌均勻； b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，得內(nèi)容物物料； C、軟膠囊體材料的制作將明膠、水、甘油按100 100 40比例稱料，投送到化膠罐中，攪拌升溫至60 75°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用； d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2 3的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊； e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度22 26°C，濕度為30 40%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸； f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為90%以上的酒精洗去囊體表面的油潰； g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊； h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封口，即成成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其是由軟膠囊體和內(nèi)容物組成，特點(diǎn)是按重量百分比稱量?jī)?nèi)容物沙棘籽油40%～60%、卵磷脂1%～3%、維生素E1%～3%、番茄紅素4%～8%、蜂膠5%～9%、南瓜籽油20%～30%、膠原蛋白6%～10%，混勻，研磨、脫氣；按100∶100∶40比例稱量明膠、水、甘油，升溫化料，脫氣，得軟膠囊體濾液；將濾液和內(nèi)容物按重量比1∶2～3的比例送入壓丸機(jī)中壓丸，再經(jīng)定型干燥、洗丸、選揀、包裝，得成品。本發(fā)明所選取的組分協(xié)同作用，有效提高人體免疫力。其劑量科學(xué)，具有美容、抗衰老、保護(hù)心血管、益腎固精功能；其制備方法工藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/355GK102727872SQ201210242609
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月13日
發(fā)明者王麗娜 申請(qǐng)人:榮成百合生物技術(shù)有限公司