專利名稱：：山橙素類雙吲哚化合物,其藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地，涉及山橙素類雙吲哚生物堿化合物(bisindolealkaloid)、其衍生物、有機(jī)和無機(jī)酸鹽，以其為藥物有效成分的藥物組合物，其制備方法以及它們在制備治療或預(yù)防癌癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：腫瘤是世界難題。在中國每年新增160萬腫瘤病患者，每年有130萬腫瘤病患者死亡。目前臨床上使用的化療藥物雖然有一定療效，但因其毒性大而給病人帶來巨大的肉體痛苦和精神壓力，新的療效確切且毒副作用相對較小的抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)迫在眉睫。山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)及其衍生物是源于天然植物中的新化合物。此前沒有關(guān)于此類化合物的結(jié)構(gòu)以及藥用活性報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供通式I的雙吲哚生物堿類化合物，例如山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA-D)及其衍生物，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，氫溴酸，硝酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽；其制備方法；其作為有效成分與可藥用載體或賦形劑組成的藥物組合物；以及化合物山橙素類化合物及其藥用鹽在制備預(yù)防或治療肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌的藥物中的用途。本發(fā)明的上述目的是通過如下的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的式(I)所示的雙吲哚類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，I其中環(huán)A選自如下式II、III或IV的基團(tuán)、XR1R4R3各W獨(dú)立的是氫、羥基或氧代基，其中羥基可以被C卜w烷氧基、(Vw烯基氧基、(^1Q炔基氧基或鹵素原子取代；各R2獨(dú)立的是氫、羥基、(V1Q烷基、C卜1Q醛基或C卜1Q烷酰基，所述的羥基可以被C卜1Q烷氧基、(Vw烯基氧基、C2—^炔基氧基或鹵素原子F、Cl、Br、I取代；當(dāng)式(I)中的虛線是鍵時(shí)f不存在。各R3獨(dú)立的是氫、羥基、C卜1Q烷氧基、C2—1Q烯基氧基、C2—1Q炔基氧基或C6—1Q芳基氧6基；各R4獨(dú)立的是氫、羥基、C卜1Q烷氧基、C2—1Q烯基氧基、C2—1Q炔基氧基或C6—1Q芳基氧基；各R5獨(dú)立的是氫、羥基、(V1Q烷氧基、C2—1Q烯基氧基、C卜1Q酰氧基；R6、R7、R8獨(dú)立的是氫、羥基、C卜1Q烷氧基、(V1Q烯基氧基、(V1Q炔基氧基或C6—1Q芳基氧基，或者獨(dú)立地，R5和R6、R7和R8分別代表氧代基團(tuán)，或者R6和R7—起代表化學(xué)鍵；n是0-3的整數(shù)；且當(dāng)式(II)中的虛線是鍵時(shí)I^不存在。優(yōu)選具有式(I')所示結(jié)構(gòu)的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中W、R^I^和環(huán)A的定義同上。更優(yōu)選具有式(V)、(VI)或(VII)所示結(jié)構(gòu)的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8和n的定義同上。進(jìn)一步優(yōu)選具有式(VIII)、(IX)或(X)所示結(jié)構(gòu)的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8和n的定義同上。最優(yōu)選山橙素甲、山橙素乙、山橙素丙或山橙素丁。本發(fā)明的另一方面涉及一種藥物組合物，其中含有式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分，并含有至少一種藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的又一方面涉及式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療或預(yù)防增生性疾病或病癥的藥物中的應(yīng)用。所述的增生性疾病或病癥優(yōu)選為癌癥，更優(yōu)選肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌。所述的藥學(xué)上可接受的鹽是指其與有機(jī)酸或無機(jī)酸形成的鹽，其中有機(jī)酸包括但不限于酒石酸、檸檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸，無機(jī)酸包括但不限于鹽酸、硫酸、磷酸、氫溴酸鹽、硝酸鹽。本說明書中，術(shù)語"烷基"是指直鏈或支鏈烴基，優(yōu)選具有1-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有l(wèi)-6個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有1-4個(gè)碳。代表性的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基等。"烯基"是指具有至少一個(gè)碳碳雙鍵，直鏈或支鏈的脂族烴基，優(yōu)選具有2-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有2-6個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有2-4個(gè)碳。代表性的例子包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、戊二烯基等。"炔基"是指具有至少一個(gè)碳碳三鍵，直鏈或支鏈的脂族烴基，優(yōu)選具有2-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有2-6個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有2-4個(gè)碳。代表性的例子包括乙炔基、丙炔基、丁炔基等。"烷酰基"是指直鏈或支鏈的，環(huán)狀或無環(huán)的脂族羧酸去掉羧基上的羥基形成的基團(tuán)，優(yōu)選具有l(wèi)-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有1-6個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有1-4個(gè)碳，代表性的例子包括甲?；⒁阴；?、丙?；?、丁酰基。"芳基"是指具有單環(huán)或雙環(huán)的芳香性基團(tuán)，它具有6-10個(gè)碳原子，可以含有0-3個(gè)選自0、S、N的雜原子，并且可與其他環(huán)稠合。代表性的例子包括苯基、萘基、呋喃基、喹啉基等。本發(fā)明的雙吲哚類化合物的一般制備方法1、來源于植物及衍生化山橙素甲、乙、丙、丁可按如下步驟制備從植物思茅山橙植物原料中溶劑提取，分離純化而得。如果有必要，與適當(dāng)?shù)乃岢甥}，所述的適當(dāng)?shù)乃徇x自鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、酒石酸、檸檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸或其他適合的有機(jī)酸或無機(jī)酸。所述溶劑提取優(yōu)選有機(jī)溶劑回流提取或浸提，所述的有機(jī)溶劑選自C卜6醇丄3—6酮、C2—6醚、C3—6酯或(V6鹵代烴。其中所述的(V6醇包括例如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、正戊醇、異戊醇、環(huán)戊醇、正己醇、環(huán)己醇等。所述的C3—6酮包括例如丙酮、甲乙酮、甲基異丁酮等。所述的(Ve醚包括例如甲醚、乙醚等。所述的(Ve酯包括例如甲酸乙酯、乙酸乙酯丙酸乙酯等。所述的C卜6鹵代烴包括例如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷等。如果有必要的話，可對式(I)化合物進(jìn)一步分離純化，其中包括將提取物經(jīng)酸化，用有機(jī)溶劑分配，水層堿化，再用有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)溶劑層而得。如果有必要的話，還可包括用柱層析進(jìn)一步提高純度。所述的柱層析可以是硅膠柱層析、C18柱層析、離子交換樹脂柱層析、葡聚糖凝膠層析等。例如經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿/甲醇梯度洗脫，分配比例為氯仿/甲醇io:o，20:i，io:1，8:1，5:1，3:i，i:L具體地，取植物思茅山橙全株，經(jīng)干燥、粉碎后，用醇提取1-4次，每次1-4小時(shí)，得醇浸膏，然后通過酸堿處理，除去非生物堿類物質(zhì)，在堿性條件下用有機(jī)溶劑萃取，濃縮有機(jī)溶劑提取層，浸膏利用硅膠柱層析，用氯仿/甲醇做為洗脫系統(tǒng)分離得到式(I)所示的四個(gè)化合物山橙素甲、乙、丙、丁。更具體的方法為取風(fēng)干后的思茅山橙植物全株，用70%乙醇7(TC加熱，回流提取3次，回收溶劑，濃縮到小體積，加入1%HC1調(diào)節(jié)pH值至2，用乙酸乙酯萃取3次，水層用10X氨水調(diào)節(jié)pH值至9，再用乙酸乙酯萃取3次，濃縮乙酸乙酯層，乙酸乙酯部分用硅膠拌樣后，進(jìn)行700g，200-300目硅膠柱層析，劃分為6段Frs1_6，用氯仿/甲醇梯度洗脫分段，分配比例為氯仿/甲醇io:o，20:i，io:i，8:i，5:i，3:i，i:1，F(xiàn)r2用石油醚/丙酮二4/l為洗脫劑，硅膠200g柱層析分離得山橙素甲，F(xiàn)r3用氯仿/甲醇二15:1為洗脫劑，硅膠250g柱層析分離得山橙素丁，F(xiàn)r4用氯仿/甲醇=8:l為洗脫劑，硅膠300g柱層析分離得山橙素丙，F(xiàn)r6先用硅膠150g氯仿/甲醇二5:l柱洗脫，再用反相硅膠RP-18、100g甲醇/水=2/8柱層析分離得山橙素乙?？蛇x擇地，可對例如山橙素甲、乙、丙、丁等式(I)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和衍生化，例如在吲哚環(huán)上引入各種取代基團(tuán)，或?qū)ζ渌h(huán)上的取代基進(jìn)行變換和修飾。噴哚環(huán)上的取代基可通過例如中國專利CN101108859A的方法而引入。其中以式(V-la)例如山橙素丙為原料，在適當(dāng)?shù)臏囟?-20°C30°C)下，在無水二氯甲烷及三氟乙酸的混合溶劑中與鹵代試劑反應(yīng)，得到鹵素取代的通式(V-lb、c、d)化合物，其中(V-lb)和(V-ld)可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為(V-lc)，然后在過渡金屬催化下加熱4015(TC進(jìn)行反應(yīng)最終得到式(V)化合物?？谝岘h(huán)上的乙基可通過例如Jacquesy，J._C.(J.Fluor.Chem.2006，127，1484-1487.)的方法而引入氟。其中例如山橙素丙為原料，在適當(dāng)?shù)臏囟认?，在有機(jī)溶劑如無水二氯甲烷或三氯甲烷溶劑中與HF/SbF5試劑反應(yīng)，得到氟取代的通式。卩引哚環(huán)N上的取代基可通過例如Kuboyama等的方法(Proc.Nat.Acad.Sci.USA，2004，101(33)，11966-11970.)而引入。其中例如以山橙素丙為原料，溶于乙酸酐.甲酸(11:5)中，攪拌反應(yīng)1.5h后用氨水終止反應(yīng)，用二氯甲烷萃取，經(jīng)蒸除溶劑、粗品純化后得到N上H被?；难苌?。10<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>2、化學(xué)合成方法將構(gòu)成式(I)雙噴哚化合物的兩個(gè)噴哚單體分別通過前述方法在噴哚環(huán)或其他環(huán)上引入相應(yīng)的取代基進(jìn)行必要的修飾，然后在醇(例如甲醇、乙醇)溶液中經(jīng)酸催化，在適當(dāng)?shù)臏囟认?例如常溫到回流的溫度，具體地208(TC)進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到式I化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>本發(fā)明的式(I)化合物(山橙素類化合物，melonines)或其鹽可經(jīng)口或不經(jīng)過口給藥，給藥量因藥物不同而各有不同，對成人來說，每天l-1000mg比較合適。經(jīng)口服給藥時(shí)，首先使化合物與常規(guī)的藥用輔劑如賦形劑、崩解劑、黏合劑、潤滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香劑、表面活性劑等混合，將其制成顆粒劑、膠囊、片劑等形式給藥；非經(jīng)口給藥時(shí)可以注射液、輸液劑或栓劑等形式給藥。制備上述制劑時(shí)，可使用常規(guī)的制劑技術(shù)。具體實(shí)施例方式下面的試驗(yàn)實(shí)施例、實(shí)施例和制劑實(shí)施例可更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。試驗(yàn)實(shí)施例1:試驗(yàn)證明，本發(fā)明的通式(I)雙吲哚化合物對人乳腺癌細(xì)胞株(SK-BR-3)，人肝癌細(xì)胞株(S匪C7721)，人白血病細(xì)胞株(HL-60)，人胰腺癌細(xì)胞株(PANC-1)，人肺癌細(xì)胞株(A549)生長的半數(shù)抑制濃度(IC50)在O.1-1000iiM之間，具有預(yù)防或治療增生性疾病例如癌癥的作用。實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下—、材料與方法1.樣品及制備樣品呈無色，二甲基亞砜(DMSO)溶解配制為10mg/ml濃度的貯存液避光保存?zhèn)溆谩?.細(xì)胞株SK-BR-3，人乳腺癌細(xì)胞株S匪C7721，人肝癌細(xì)胞株HL-60，人白血病細(xì)胞株P(guān)ANC-1，人胰腺癌細(xì)胞株A549，人肺癌細(xì)胞株3.實(shí)驗(yàn)方法(1).接種細(xì)胞用含10%胎牛血清的培養(yǎng)液(DMEM或者RMPI1640)配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔10000-20000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積100ul，貼壁細(xì)胞提前12小時(shí)接種培養(yǎng)。(2).加入待測化合物溶液(化合物單體固定濃度40uM初篩，粗提物100ug/ml初篩，在該濃度對腫瘤細(xì)胞生長抑制在50%附近的化合物設(shè)5個(gè)濃度進(jìn)入梯度復(fù)篩)，每孔終體積200ul，每種處理均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。(3).顯色37攝氏度培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加MTT溶液20ul。繼續(xù)孵育4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液100ul以避免細(xì)胞丟失，每孔加20X的SDS100ul，過夜孵育(溫度37tO，使結(jié)晶物充分融解。(4).比色選擇595nm波長，酶聯(lián)免疫檢測儀(Bio-Rad680)讀取各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線，應(yīng)用兩點(diǎn)法(ReedandMuench法)計(jì)算化合物的IC50值。(5).陽性對照順鉬二、結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>山橙素甲(II)分子量590，分子式C38H46N402。旋光[a]255D=+66°。紅色粉末。易溶于氯仿，丙酮，甲醇，微溶于水。山橙素甲(melonineA)的結(jié)構(gòu)是基于它的紫外光譜、紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振譜特別是二維核磁共振譜而確定。紫外光譜數(shù)據(jù)UVA(max)(MeOH):500(3.62)，354(3.53)，270(4.38)，240(4.59)紅外光譜數(shù)據(jù)IRv(max)(KBr):3440，2925，1637，1602，1455質(zhì)譜數(shù)據(jù)HR-ESI-MS(m/z):591.3685([M+H]+)^NMR和13CNMR數(shù)據(jù)見表2。以上數(shù)據(jù)結(jié)合2DNMR分析證實(shí)了山橙素甲(melonineA)的化學(xué)結(jié)構(gòu)為式(II)所示。山橙素乙(melonineB)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為分子量606，分子式C39H5。N402。旋光[a]255D=-237°。無色油狀物。易溶于甲醇，微溶于水、丙酮。山橙素乙(melonineB)的結(jié)構(gòu)是基于它的紫外光譜、紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振譜特別是二維核磁共振譜而確定。紫外光譜數(shù)據(jù)UVA(max)(MeOH):293(3.60)，加7(4.49)紅外光譜數(shù)據(jù):IRv(max)(KBr):3418，2926，1624，1456，1384，1319，1180山橙素乙(in)14力NMR和13CNMR數(shù)據(jù)見表3。以上數(shù)據(jù)結(jié)合2DNMR分析證實(shí)了山橙素乙(melonineB)的化學(xué)結(jié)構(gòu)為式(III)所示。山橙素丙(melonineC)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為分子量576，分子式(:381148&0。旋光[a]255D=+19°。無色粉末，易溶于甲醇，微溶于水、丙酮。山橙素丙(melonineC)的結(jié)構(gòu)是基于它的紫外光譜、紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振譜特別是二維核磁共振譜而確定。紫外光譜數(shù)據(jù)UVA(max)(MeOH):375(2.88)，293(3.75)，286(3.74)，216(4.56)，205(4.58)紅外光譜數(shù)據(jù):IRv(max)(KBr):3416，3386，2941，1614，1454，1266質(zhì)譜數(shù)據(jù)HR-EI-MS(m/z):577.3898([M+H]+)力NMR和13CNMR數(shù)據(jù)見表4。以上數(shù)據(jù)結(jié)合2DNMR分析證實(shí)了山橙素丙(melonineC)的化學(xué)結(jié)構(gòu)為式(IV)所示。山橙素丁(melonineD)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為分子量574，分子式(:38114^0。旋光255。=+177°。無色油狀物。易溶于甲山橙素丁(V)醇，微溶于水、丙酮。山橙素丁(melonineD)的結(jié)構(gòu)是基于它的紫外光譜、紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振譜特別是二維核磁共振譜而確定。紫外光譜數(shù)據(jù)UVA(max)(MeOH):375(2.68)，292(3.57)，284(3.60)，204(4.40)紅外光譜數(shù)據(jù):IRv(max)(KBr):3421，2927，1585，1454質(zhì)譜數(shù)據(jù)HR-ESI-MS(m/z):575.3734([M+H]+)力NMR和13CNMR數(shù)據(jù)見表5。以上數(shù)據(jù)結(jié)合2DNMR分析證實(shí)了山橙素丁(melonineD)的化學(xué)結(jié)構(gòu)為式(V)所示。實(shí)施例2:按實(shí)施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA-D)，加入4^的硫酸乙醇溶液，pH=4，過濾，干燥，制成硫酸山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)。實(shí)施例3:按實(shí)施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，加入4%的鹽酸酸溶液，pH二4，過濾，干燥，制成鹽酸山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)。實(shí)施例4:按實(shí)施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，加入4%的磷酸酸溶液，pH二4，過濾，干燥，制成磷酸山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)。實(shí)施例5:按實(shí)施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，加入4%的酒石酸溶液，pH二4，過濾，干燥，制成酒石酸山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)。實(shí)施例6:按實(shí)施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，加入4%的檸檬酸溶液，pH二4，過濾，干燥，制成檸檬酸山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)。表1.山橙素甲(melonineA)的^NMR禾口13CNMR數(shù)據(jù)(CD30D)16AtomNo.&(inppm,JinHz)&(inppm)2133.7s32.28(m);2.52(m)44.2153.31(2H,m)50.6t62.55(m);2.98(m)17.0t7105.5s8128.6s97.48(d,7.4)118.1d107.10(t,7.4)119.5d117.04(t,7.4)120.6d127.00(d,7.4)111.5d13135.0s141.34(m);1.74(m)20.5t150.98(ddd,13.2,4.0,3.2);1.38(m)24.3t165.35(dd,11.0,4.6)48.6d171.50(m);2.40(m)42.01180.85(t,7.2)15q191.47(q,7.2);2.08(q，7.2)28.712034.6s213.91(s)59.1d2，2.25(m);2.62(m)55.2t3，2.43(2H,m)53.715,1.52(m);3.17(d,12.0)56.816，2.75(ddd,13.6,5.2,4.0);3.27(m)22.5t7,122.6s8，128.2s9,6.04(s)131.7d10，149.1s11，176.0s12，184.0s13，143.6s14，1.42(m);1.66(m)22.5t15，1.11(m);1.26(m)34.3t16，2.55(2&m)21.lt17'1.57(m);1.80(m)33.lt18'0.79(t,7.4)7.7q19，1.12(2H,q,7.4)31.8t20,37.2s21，123.1s表2.山橙素乙(melonineB)的^NMR禾口13CNMR數(shù)據(jù)(CD30D)AtomMo.&(inppm,JinHz)&(inppm)2131.8s32.58(t,10.0);2.80(m)45.5t53.46(2H,m)52.0t62.82(m);3.03(m)17.6t7105.2s8129.2s97.41(d,7.8)119.1d106.94(t,7.8)120.6d116.81(t,7.8)121.9d126.63(d,7.8)113.0d13137.6s141.46(m);1.82(overlap)20.61151.15(m);1.54(overlap)24.3t165.55(dd,11.0,4.5)49.8d171.67(m);2.37(m)42.6t180.93(t,7.2)7.6q191.54(overlap);2.09(m)29.2t2036.3s214.38(s)61.1d2,2.97(m);3.26(m)58.lt3，2.75(m);3.45(m)63.6t5，2.91(m);3.33(m)64.4t6，2.39(m);2.48(dd,13.5,6.5)34.0t7,94.2s8，117.4s9，6.78(s)124.9d10，122.6sir158.5s12，6.48(s)98.3d13'150.7s14，1.70(2H，m)26.3t15，1.91(m);2.41(m)26.8t16，1.46(m);1.82(overlap);19.9117'1.40(m);1.61(m)33.2t18'0.89(3H,t,7.4)"q19，1.34(2H,q,7.4)34.4120，32.7s21，103.6sOCH32.68(3H,s)52.9q表3.山橙素丙(melonineC)的^NMR禾口13CNMR數(shù)據(jù)(CD30D)18AtomNo.&(inppm,JinHz)&(inppm)2133.8s32.50(overlap);2.61(m)45.5t53.33(2H,m)52.0t62.60(m);3.01(m)17.8t7105.6s8129.7s97.35(d,7.8)118.6d106.89(t,7.8)120.1d116.74(t,7.8)121.3d126.59(d，7.8)112.9d13138.2s141.42(m);1.79(m)21.11151.22(overlap);1.44(m)25.5t165.09(dd,11.5,4.6)52.0d171.75(m);2.15(m)43.21180.89(3H,t,8.0)7.6q191.58(q,8.0);2.09(q,8.0)29.712036.7s214.09(s)60.7d2,3.45(m)65.6d3，2.50(overlap);3.17(m)53.8t5，2.23(m);3.13(m)55.0t6,1.79(m);2.19(m)36.8t7,54.4s8，I20.9s9，6.63(d,8.0)127.9d10，6.16(d,8.0)109.4dir149.6s12，117.6s13'154.7s14'1.57(m);1.81(m)22.3t15，1.22(over;ap);1.70(m)35.3t16，1.85(2H,m)29.3t17，1.21(m);1.90(m)23.5t18'0.76(t,7.5)6.9q19，1.24(m);1.62(m)29.4120，36.3s21'3.310)70.9d表4.山橙素丁(melonineD)的醒R禾P13C匿R數(shù)據(jù)(CD30D)19AtomNo.&(inppm,JinHz)&(inppm)2134.8s32.32(m);2.42(m)44.6t53.21(2H,m)51.3t62.53(m);2.98(m)17.5t"7104.7s8129.5s97.67(d,8.0)118.3d107.21(t,8.0)119.4d117.10(t,8.0)120.5d127.08(d,8.0)112.3d13137.2s141.14(m);1.62(m)2Ut150.99(m);1.24(m)24.4t166.38(m)50.1d171.94(m);2.33(m)44.4t180.67(3H,t,7.3)"q191.36(q,7.3);2.23(overlap)29.1t2035.2s214.02(s)59.8d2,193.0s3，2.18(m);3.07(m)52.3t5，3.15(2H,m)55.116，2.19(2&m)32.417，62.7s8，131.2s9,7.14(d,8.2)127.2d10，6.95(d,8.2)114.3d11,153.5s12，126.2s13，154.5s14'1.42(m);1.81(m)22.2115，1.09(m);2.23(overlap)33.3t16，1.53(m);2.50(m)29.6117，2.86(m);3.30(m)24.lt18'0.76(t,7.4)8.1q19'1.19(2H，m)30.8t20，36.6s21'3.25(s)75.2d實(shí)施例7:按實(shí)施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，加入4%的甲酸溶液，pH二4，過濾，干燥，制成甲酸山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA-D)。實(shí)施例8:按實(shí)施例1的方法制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，加入4%的乙二酸溶液，pH二4，過濾，干燥，制成乙二酸山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)。實(shí)施例9將山橙素丙在適當(dāng)?shù)臏囟?-20°C30°C)下溶于無水二氯甲烷及三氟乙酸的混合溶劑中，與NBS反應(yīng)得到10-溴代山橙素丙，然后將其溶于水，在過渡金屬催化下加熱至75t:進(jìn)行反應(yīng)得到10-羥基山橙素丙。類似地，根據(jù)前述圖解中吲哚衍生化方法，可以制備以下的化合物表5式I化合物的結(jié)構(gòu)實(shí)施例結(jié)構(gòu)名稱MS(m/z)10/、10-甲氧基山橙素甲621([M+H〗+)21<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>[OH8]制劑實(shí)施例1:按實(shí)施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。制劑實(shí)施例2:按實(shí)施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽，將其溶于無菌注射用水中，攪拌使溶，用無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于2安瓿中，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。制劑實(shí)施例3:將所分離得到山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽，與賦形劑重量比為9:1的比例加入賦形劑，制成粉劑。制劑實(shí)施例4:按實(shí)施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽，按其與賦形劑重量比為i:5-1:io的比例加入賦形劑，制粒壓片。制劑實(shí)施例5:按實(shí)施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽，按常規(guī)口服液制法制成口服液。制劑實(shí)施例6:按實(shí)施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽，按其與賦形劑重量比為5:1的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑或沖劑。制劑實(shí)施例7:按實(shí)施例1的方法先制得山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA_D)，以及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(鹽酸，硫酸，磷酸等)制成的鹽，按其與賦形劑重量比為3:1的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑或沖劑。2權(quán)利要求如式(I)所示的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中環(huán)A選自如下式II、III或IV的基團(tuán)各R1獨(dú)立的是氫、羥基或氧代基，其中羥基可以被C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基或雙鹵素原子取代；各R2獨(dú)立的是氫、羥基、C1-10烷基、C1-10醛基或C1-10烷?；?，所述的羥基可以被C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基或鹵素原子F、Cl、Br、I取代；當(dāng)式(I)中的虛線是鍵時(shí)R2不存在；各R3獨(dú)立的是氫、羥基、C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基或C6-10芳基氧基；各R4獨(dú)立的是氫、羥基、C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基或C6-10芳基氧基；各R5獨(dú)立的是氫、羥基、C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基、C1-10酰氧基；R6、R7、R8獨(dú)立的是氫、羥基、C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基或C6-10芳基氧基，或者獨(dú)立地，R5和R6、R7和R8分別代表氧代基團(tuán)，或者R6和R7一起代表化學(xué)鍵；n是0-3的整數(shù)；且當(dāng)式(II)中的虛線是鍵時(shí)R2不存在。F2009100951379C0000011.tif,F2009100951379C0000012.tif2.如權(quán)利要求1所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1是氫。3.如權(quán)利要求1所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中n是1。4.如權(quán)利要求1所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R2是氫或C卜6烷?；?.如權(quán)利要求1所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R3是羥基或C卜6烷氧基。6.如權(quán)利要求l-5任一項(xiàng)所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其具有式(I')所示的結(jié)構(gòu)其中Hi3和環(huán)A的定義同權(quán)利要求1。7.如權(quán)利要求6所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其具有式(V)、(VI)或(VII)所示的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中R、R2、R3、R5、R6、R7、R8和n的定義同權(quán)利要求1。8.如權(quán)利要求7所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其具有式(VIII)、(IX)或(X)所示的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>X其中W、R2、R3、R5、R6、R7、R8和n的定義同權(quán)利要求1。9.如權(quán)利要求7或8所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R6和R7—起代表化學(xué)鍵。10.如權(quán)利要求7或8所述的雙噴哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R5和R6代表氧代基，R7和R8代表氧代基。11.如權(quán)利要求10所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其選自山橙素甲、山橙素乙、山橙素丙或山橙素丁。12.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述的藥學(xué)上可接受的鹽選自鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、乙二酸鹽。13.制備如權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的雙吲哚化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，其特征在于從植物思茅山橙中提取分離而得，如果有必要，與適當(dāng)?shù)乃岢甥}。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的適當(dāng)?shù)乃徇x自鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、酒石酸、檸檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸。15.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于用有機(jī)溶劑回流提取或浸提。16.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于提取物經(jīng)酸化后，用有機(jī)溶劑分配，水層堿化，再用有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)溶劑層而得。17.如權(quán)利要求15或16所述的方法，所述的有機(jī)溶劑選自(V6醇、C3—6酮、C2—6醚、C3—6酯或C卜6鹵代烴。18.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于還包括用柱層析進(jìn)一步提高純度。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于取思茅山橙植物全株，用40-95%乙醇于40-8(TC加熱回流提取1-4次，濃縮，加入酸調(diào)節(jié)pH值至1.0-5.0，用有機(jī)溶劑萃取，水層堿化調(diào)節(jié)pH值至8.0-11.O，再用有機(jī)溶劑萃取，濃縮有機(jī)溶劑層，經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿/甲醇梯度洗脫，分配比例為氯仿/甲醇io:o，20:i，io:1，8:i，5:i，3:i，i:i。20.—種思茅山橙提取物，其特征在于其由權(quán)利要求13-19任一項(xiàng)的方法制備而得。21.如權(quán)利要求20所述的思茅山橙提取物，其特征在于其中含有至少10%的一種或多種如式(I)所示的雙吲哚化合物或其鹽，所述雙吲哚化合物選自山橙素甲、山橙素乙、山橙素丙或山橙素丁。22.藥物組合物，其含有權(quán)利要求l-12任一項(xiàng)所述的雙吲哚化合物或其藥用鹽作為有效成分，至少還包含一種藥學(xué)上可接受的載體。23.如權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的雙吲哚化合物或其藥用鹽或如權(quán)利要求20-21任一項(xiàng)所述的思茅山橙提取物在制備治療或預(yù)防人或動(dòng)物增生性疾病或病癥的藥物中的應(yīng)用。24.如權(quán)利要求23所述的應(yīng)用，其中所述的增生性疾病或病癥是癌癥。25.如權(quán)利要求24所述的應(yīng)用，其中所述的癌癥選自肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌和肺癌。全文摘要提供由式(I)所示的四種抗腫瘤活性成分山橙素甲、乙、丙、丁(meloninesA-D)，及利用有機(jī)酸(酒石酸，檸檬酸，甲酸，乙二酸等)或無機(jī)酸(硫酸，鹽酸，磷酸等)制成的鹽，以其為有效成分與藥用常規(guī)載體組成的藥物組合物，其制備方法取思茅山橙(MelodinushenryiCraib)全株為原料，通過干燥粉碎，酒精提取，酸堿處理，硅膠柱層析以及氯仿/甲醇混合溶劑洗脫及反相硅膠(RP-18)洗脫。文檔編號(hào)A61K31/4375GK101704828SQ20091009513公開日2010年5月12日申請日期2009年11月4日優(yōu)先權(quán)日2009年11月4日發(fā)明者馮濤,劉亞平,李艷,王媛媛,羅曉東,蔡祥海申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所