專利名稱：藥理活性β-氨基酸的可耐受性的改進(jìn)的制作方法
由EP-A-571870、DOS 4302155、JP 02174753 A2和J.Antibiot.(1991)，44(5)，546-9中得知環(huán)戊烷-β-氨基酸和環(huán)戊烯-β-氨基酸。這樣的β-氨基酸具有抗微生物、特別是抗霉菌作用。然而它們有副作用。
現(xiàn)已令人驚異地發(fā)現(xiàn)α-氨基酸和/或其衍生物與環(huán)戊烷-β-氨基酸和/或其衍生物的混合物、來(lái)自上述α-氨基酸和上述環(huán)戊烷-β-氨基酸的二肽和上述混合物與上述二肽的混合物沒(méi)有不合需要的副作用或者副作用較小，因此在溫血?jiǎng)游镏械目赡褪苄缘玫礁纳啤?br> 因此，本發(fā)明涉及包含一種或多種α-氨基酸和/或其衍生物和一種或多種環(huán)戊烷-β-氨基酸和/或其衍生物的混合物。術(shù)語(yǔ)“衍生物”包括衍生自相應(yīng)的氨基酸并具有類似的作用的那些化合物，特別是相應(yīng)的鹽。
適宜于本發(fā)明混合物的α-氨基酸優(yōu)選通式(Ia)α-氨基酸 式中R3代表具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或代表具有6-10個(gè)碳原子的芳基或氫或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其中所述烷基可任選地被氰基、甲硫基、羥基、巰基、胍基或者式-NR7R8或R9-OC-基團(tuán)取代，式中R7和R8相互獨(dú)立地代表氫、具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和R9代表羥基、芐氧基、具有至多6個(gè)碳原子的烷氧基或上述的基團(tuán)-NR7R8，或者所述烷基可任選地被具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基或具有6-10個(gè)碳原的芳基取代，所述環(huán)烷基或芳基又被羥基、鹵素、硝基、具有至多8個(gè)碳原子的烷氧基或基團(tuán)-NR7R8取代，式中R7和R8的定義同上，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表羥基、具有6-10個(gè)碳原子的芳氧基、具有至多6個(gè)碳原子的烷氧基或基團(tuán)-NR7R8，式中R7和R8的定義同上。
特別適宜的α-氨基酸是通式(Ia)α-氨基酸 式中R3代表具有至多6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可任選地被羥基或苯基取代，所述苯基又可被羥基取代，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表羥基。
更適宜的α-氨基酸是通式(Ia)α-氨基酸 式中R3代表甲基，或代表式-CH(CH3)CH2CH3基團(tuán)，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表羥基。
可提及的這樣的α-氨基酸的實(shí)例是(S)-異亮氨酸，(S)-丙氨酸和(S)-脯氨酸。
適宜于本發(fā)明混合物的環(huán)戊烷β-氨基酸優(yōu)選通式(Ib)環(huán)戊烷β-氨基酸 式中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和Y代表氫、具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或芳基。
特別適宜的環(huán)戊烷β-氨基酸是通式(Ib)環(huán)戊烷β-氨基酸 式中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，或代表具有至多6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和Y代表氫。
更適宜的環(huán)戊烷β-氨基酸是通式(Ib)環(huán)戊烷β-氨基酸 式中R3代表具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或代表具有6-10個(gè)碳原子的芳基或氫，或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其中所述烷基可任選地被氰基、甲硫基、羥基、巰基、胍基或者式-NR7R8或R9-OC-基團(tuán)取代，式中R7和R8相互獨(dú)立地代表氫、具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷式中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，和Y代表氫。
可提及的這樣的環(huán)戊烷-β-氨基酸的實(shí)例是2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸和1，2-順-氨基環(huán)戊烷-1-羧酸。
優(yōu)選的本發(fā)明混合物包含通式(Ia)α-氨基酸和通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸，所述通式(Ia)如下
基或苯基，和R9代表羥基、芐氧基、具有至多6個(gè)碳原子的烷氧基或上述的基團(tuán)-NR7R8，或者所述烷基可任選地被具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基或具有6-10個(gè)碳原子的芳基取代，所述環(huán)烷基或芳基又被羥基、鹵素、硝基、具有至多8個(gè)碳原子的烷氧基或基團(tuán)-NR7R8取代，式中R7和R8的定義同上，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X 代表羥基、具有6-10個(gè)碳原子的芳氧基、具有至多6個(gè)碳原子的烷氧基或基團(tuán)-NR7R8，式中R7和R8的定義同上；所述通式(Ib)如下 式中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和Y代表氫、具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或芳基。
特別優(yōu)選的本發(fā)明混合物包含通式(Ia)α-氨基酸和通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸，所述通式(Ia)如下 式中R3代表具有至多6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可任選地被羥基或苯基取代，所述苯基又可被羥基取代，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表羥基；所述通式(Ib)如下 式甲R(shí)1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，或代表具有至多6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和Y代表氫。
更優(yōu)選的混合物包含通式(Ia)α-氨基酸和通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸，所述通式(Ia)如下 式中R3代表甲基，或代表式-CH(CH3)CH2CH3基團(tuán)，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表羥基；所述通式(Ib)如下 式中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，和Y代表氫。
可提及的這樣的本發(fā)明混合物的實(shí)例是(S)-異亮氨酸與2-氨基4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸的混合物，(S)-丙氨酸與2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸的混合物或(S)-脯氨酸與1，2-順-氨基環(huán)戊烷-1-羧酸的混合物。
在混合物的情況下，α-氨基酸和/或其衍生物與環(huán)戊烷-β-氨基酸和/或其衍生物的摩爾混合比在1∶99至99∶1范圍內(nèi)，優(yōu)選在1∶10至10∶1范圍內(nèi)，特別優(yōu)選在1∶5至5∶1范圍內(nèi)，更優(yōu)選在1∶3至3∶1范圍內(nèi)。
本發(fā)明混合物通常通過(guò)將優(yōu)選的細(xì)粉狀各組分混合來(lái)獲得。
本發(fā)明還涉及含有α-氨基酸或其衍生物和環(huán)戊烷-β-氨基酸或其衍生物的二肽。
適宜于本發(fā)明二肽的α-氨基酸優(yōu)選在上面描述本發(fā)明混合物時(shí)所述的通式(Ia)α-氨基酸，其中在式(Ia)中的X代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分。
適宜于本發(fā)明二肽的環(huán)戊烷-β-氨基酸優(yōu)選在上面描述本發(fā)明混合物時(shí)所述的通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸，其中在式(Ib)中的Y代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分。
本發(fā)明涉及含有通式(Ia)α-氨基酸和通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸的優(yōu)選的二肽，所述通式(Ia)如下 式中R3代表具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或代表具有6-10個(gè)碳原子的芳基或氫，或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其中所述烷基可任選地被氰基、甲硫基、羥基、巰基、胍基或者式-NR7R8或R9-OC-基團(tuán)取代，式中R7和R8相互獨(dú)立地代表氫、具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和R9代表羥基、芐氧基、具有至多6個(gè)碳原子的烷氧基或上述的基團(tuán)-NR7R8，或者所述烷基可任選地被具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基或具有6-10個(gè)碳原子的芳基取代，所述環(huán)烷基或芳基又被羥基、鹵素、硝基、具有至多8個(gè)碳原子的烷氧基或基團(tuán)-NR7R8取代，式中R7和R8的定義同上，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分；所述通式(Ib)如下 式中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和Y代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分。
特別優(yōu)選的二肽含有取代基如下定義的通式(Ia)α-氨基酸和通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸；在所述通式(Ia)中R3代表具有至多6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可任選地被羥基或苯基取代，所述苯基又可被羥基取代，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分；在所述通式(Ib)中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，或代表具有至多6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和Y代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分。
更優(yōu)選的二肽含有取代基如下定義的通式(Ia)α-氨基酸和通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸；在所述通式(Ia)式中R3代表甲基，或代表式-CH(CH3)CH2CH3基團(tuán)，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分；在所述通式(Ib)中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，和Y代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分。
下列二肽是特別優(yōu)選的1，2-順-2-(S)-異亮氨?；被?4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸和1，2-順-2-(S)-丙氨?；被?4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸。
本發(fā)明混合物和二肽可以包含基本純的立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物。
上面所述的α-氨基酸、環(huán)戊烷-β-氨基酸和二肽還可以以其鹽的形式存在。這里一般可以提及與有機(jī)或無(wú)機(jī)堿或酸形成的鹽和內(nèi)鹽。
可使用的酸最好包括氫鹵酸例如氫氯酸和氫溴酸，特別優(yōu)選氫氯酸，此外還包括磷酸，硝酸，硫酸，單和雙官能羧酸和羥基羧酸，例如乙酸、馬來(lái)酸、丙二酸、草酸、葡糖酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、水楊酸、山梨酸和乳酸，和磺酸，例如對(duì)甲苯磺酸鹽、1，5-萘二磺酸或樟腦磺酸。
生理上可接受的鹽還可以是具有游離羧基的本發(fā)明化合物的金屬鹽或銨鹽。特別優(yōu)選的鹽是例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽，還有衍生自氨或有機(jī)胺的銨鹽，所述有機(jī)胺有例如乙胺、二或三乙胺、二或三乙醇胺、二環(huán)己胺、二甲氨基乙醇、精氨酸、賴氨酸、乙二胺或苯乙胺。
本發(fā)明混合物和二肽可以立體異構(gòu)形式例如以鏡像(對(duì)映體)或非鏡像(非對(duì)映體)形式存在，或者可以非對(duì)映體混合物或者純的順式或反式異構(gòu)體形式存在。本發(fā)明既涉及對(duì)映體、外消旋體和非對(duì)映體混合物，也涉及純的異構(gòu)體。外消旋體象非對(duì)映體一樣，可用已知方法分離成立體異構(gòu)單一的成分。分離成立體異構(gòu)單一的化合物這一操作可利用非對(duì)映的酯和酰胺來(lái)進(jìn)行，或在光活性相上進(jìn)行。還可以利用非對(duì)映鹽的結(jié)晶。
在本發(fā)明中，由基團(tuán)(R5R4-N-CHR3-CO-)定義的氨基酸基團(tuán)是L-氨基酸。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明二肽的制備方法。
這些二肽可用包括下述步驟的方法來(lái)制備首先使通式(II)化合物通過(guò)與通式(III)保護(hù)的氨基酸在溶劑中并在堿存在下反應(yīng)，而將其轉(zhuǎn)化成通式(IV)化合物，所述通式(II)、(III)和(IV)如下 式中R1和R2的定義同上， 式中R3和R4的定義同上，R10代表氨基保護(hù)基團(tuán)，和R11代表在肽化學(xué)中常規(guī)的活性保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選羥基琥珀酰亞胺酯基團(tuán)，或者R10和R11一起代表基團(tuán) 式中R1、R2、R3、R4和R10的定義同上；和，最后，將氨基保護(hù)基團(tuán)(R10)裂解，若合適，將立體異構(gòu)體分離，而且，在酯(在式(Ib)中R6≠H)的情況下，將該酸用常規(guī)方法與相應(yīng)的醇反應(yīng)。
若合適，將二肽用常規(guī)方法轉(zhuǎn)化成鹽。
按照本發(fā)明的方法可用下面的反應(yīng)式舉例說(shuō)明 在本發(fā)明中的氨基保護(hù)基團(tuán)(R10)是在肽化學(xué)中所用的常規(guī)的氨基保護(hù)基團(tuán)。
所述氨基保護(hù)基團(tuán)最好包括芐氧基羰基，3，4-二甲氧基芐氧基羰基，3，5-二甲氧基芐氧基羰基，2，4-二甲氧基芐氧基羰基，4-甲氧基芐氧基羰基，4-硝基芐氧基羰基，2-硝基芐氧基羰基，2-硝基-4，5-二甲氧基芐氧基羰基，甲氧基羰基，乙氧基羰基，叔丁氧基羰基，烯丙氧基羰基，乙烯氧基羰基，3，4，5-三甲氧基芐氧基羰基，鄰苯二甲?；?，2，2，2-三氯乙氧基羰基，2，2，2-三氯叔丁氧基羰基，蓋氧基羰基，4-硝基苯氧基羰基，芴基-9-甲氧基羰基(Fmoc)，甲?；?，乙?；?，丙酰基，新戊?；?，2-氯乙?；?，2-溴乙酰基，2，2，2-三氟乙?；?，2，2，2-三氯乙?；郊柞；S基，4-氯苯甲?；?，4-溴苯甲?；?，4-硝基苯甲?；?，苯二酰亞氨基，異戊酰基或芐氧基亞甲基，4-硝基芐基，2，4-二硝基芐基，4-硝基苯基或2-硝基苯基亞磺?；moc基團(tuán)是特別優(yōu)選的。適宜的活性羧基基團(tuán)(R11)一般是與下述物質(zhì)的加合物碳化二亞胺，例如N，N’-二乙基、N，N’-二異丙基或N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺，N-(3-二甲氨基異丙基)-N’-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽或N-環(huán)己基-N’-(2-嗎啉代乙基)碳化二亞胺metho-對(duì)甲苯磺酸鹽，或羰基化合物，例如碳酰二咪唑，或1，2-噁唑鎓化合物，例如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-磺酸鹽或2-叔丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或酰氨基化合物，例如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或六氟磷酸苯并三唑基氧基-三(二甲氨基)鏻，1-羥基苯并三唑或羥基琥珀酰亞胺酯。此外，α-氨基酸成分還可以以Leuch酐(式(III)中的R10和R11一起代表基團(tuán) 優(yōu)選羥基琥珀酰亞胺酯。
適宜的溶劑是在反應(yīng)條件下不變化的常規(guī)有機(jī)溶劑，最好包括醚類，例如乙醚、二氧六環(huán)、四氫呋喃、乙二醇二甲醚或二甲氧基乙烷，或烴類，例如苯、甲苯、二甲苯、己烷或環(huán)己烷，或石油餾份，或二甲基甲酰胺。也可以使用所述溶劑的混合物。四氫呋喃、乙醚和二甲氧基乙烷是優(yōu)選的。還可以使用水或上述溶劑與水的混合物。
此外，例如還可以使用堿金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉或碳酸鉀，或者碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，或有機(jī)堿，例如三烷基胺類例如三乙胺、乙基二異丙基胺、N-乙基嗎啉、N-甲基哌啶或N-甲基嗎啉。N-甲基嗎啉是優(yōu)選的。
助劑和堿的用量為每摩爾通式(III)化合物1.0-3.0mol，優(yōu)選1.0-1.2mol。
反應(yīng)一般在常壓下在0℃至100℃、最好是0℃至30℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
反應(yīng)可在常壓或者加壓或減壓(例如0.5-5巴)下進(jìn)行，最好是在常壓下進(jìn)行。
氨基保護(hù)基團(tuán)一般用本身已知的方法在酸性或堿性條件下將其裂解掉，或者通過(guò)催化氫化例如用Pd/C在有機(jī)溶劑例如醚類如四氫呋喃或二氧六環(huán)或醇類如甲醇、乙醇或丙醇中還原將其裂解掉。
所述氫化反應(yīng)一般在0℃至80℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，最好是在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
所述氫化反應(yīng)一般在2-8巴、最好是3-5巴的加壓下進(jìn)行。
堿例如哌啶、嗎啉、二環(huán)己胺、對(duì)二甲氨基吡啶、二異丙基乙基胺或哌嗪適宜于裂解氨基保護(hù)基團(tuán)(R10＝Fmoc)。哌啶是優(yōu)選的。
助劑和堿的用量為每摩爾通式(IV)化合物1.0-3.0mol，優(yōu)選1.0-1.2mol。
反應(yīng)一般在常壓下在0℃至100℃、最好是0℃至30℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
反應(yīng)可在常壓或者加壓或減壓(例如0.5-5巴)下進(jìn)行，最好是在常壓下進(jìn)行。
通式(II)化合物是已知的。
通式(III)化合物在某些情況下是已知的，或者可用常規(guī)方法來(lái)制備。
上述制備方法僅用于舉例說(shuō)明。X和Y一起代表共價(jià)鍵部分的本發(fā)明通式(Ia)和(Ib)化合物的制備不限于這些方法，該制備可以以相同的方式使用這些方法的任何的變更形式。
本發(fā)明的出發(fā)點(diǎn)是澄清下列機(jī)理所述通式(II)環(huán)戊烷-β-氨基酸由利用氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的各種各樣的酵母富集。β-氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)可被脂肪族氨基酸、特別是L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-丙氨酸、L-蛋氨酸和L-纈氨酸抑制。β-氨基酸抑制蛋白質(zhì)生物合成。該抑制作用可被脂肪族氨基酸、特別是L-異亮氨酸或L-丙氨酸之一所拮抗。同時(shí)給與以混合物形式和/或共價(jià)鍵部分結(jié)合的二肽形式的β-氨基酸和所述具有拮抗作用的天然存在的氨基酸，能降低對(duì)溫血?jiǎng)游锏母弊饔?，同時(shí)在體內(nèi)保持抗霉菌作用。
因此，本發(fā)明化合物或混合物顯示出意想不到的、有價(jià)值的藥理作用譜。
按照本發(fā)明的通式(Ia)和(Ib)化合物或混合物及其酸加成鹽在體內(nèi)具有抗微生物、特別是強(qiáng)力的抗霉菌作用。同時(shí)，由于其毒性較低，因此它們具有較好的可耐受性。它們具有廣譜抗霉菌作用，能抗皮真菌例如須發(fā)癬菌和犬小孢子菌，酵母菌例如白色念珠菌、Candidaglabrata和絮狀表皮癬菌以及霉菌例如黑曲霉和煙曲霉。所列的微生物僅用于舉例說(shuō)明，按照本發(fā)明的通式(Ia)和(Ib)化合物或混合物及其酸加成鹽所能殺滅的病菌不限于這些。因此，它們適于治療皮真菌和系統(tǒng)性霉菌病。體內(nèi)活性試驗(yàn)用系統(tǒng)性小鼠念珠菌病作為體內(nèi)抗霉菌作用的試驗(yàn)?zāi)Ｐ屯ㄟ^(guò)給每只動(dòng)物由尾靜脈注射3×105CFU的白色念珠菌使體重為20g的雄性CFW1小鼠感染。
所有未治療的對(duì)照動(dòng)物在感染(p.i.)后一星期內(nèi)均死于泛化念珠菌病，并伴隨腎臟中肉芽腫形成。為試驗(yàn)活性，將溶于濃度為0.2％的葡萄糖瓊脂水溶液中的制劑通過(guò)胃管經(jīng)口給與感染的動(dòng)物，每天兩次。
日劑量為2×25mg/kg體重(BW)和2×50mg/kg體重，治療持續(xù)時(shí)間為5天。
每天記錄治療動(dòng)物的存活率直至p.i.后第10天。在此時(shí)，未治療的動(dòng)物中無(wú)一存活。
就所述制劑而言，在每種情況下，每個(gè)劑量使用10只動(dòng)物和對(duì)照組。
結(jié)果見(jiàn)表A。
表A
或者，體內(nèi)活性還可以用Wistar大鼠進(jìn)行試驗(yàn)。這就需要較低的日劑量(基于mg/kg BW)，以達(dá)到相似的治療效果。在這種情況下，試驗(yàn)如下進(jìn)行將出生8星期且體重為200g的特種無(wú)抗原雄性Wistar大鼠通過(guò)側(cè)尾靜脈用在0.5ml PBS中的5×106CFU的白色念珠菌感染。這導(dǎo)致在8天之內(nèi)的死亡率為100％。注射后一天，動(dòng)物眼睛的近中角部位已經(jīng)出血；除腎臟外，其它組織器官例如腦、心、肝、脾、視網(wǎng)膜和肺均受到感染。自感染的當(dāng)天，在每種情況下按1ml葡萄糖(5％)-瓊脂(0.2％)溶液經(jīng)口給與所述物質(zhì)，每天兩次，持續(xù)5天。
本發(fā)明二肽或混合物較佳的可耐受性按下述方法進(jìn)行試驗(yàn)用相應(yīng)的物質(zhì)每天飼喂Wistar大鼠，并記錄重量曲線。給與β-氨基酸本身或等摩爾量的相應(yīng)的混合物或含有α-氨基酸的二肽。處理5天后，大鼠仍然保持原來(lái)的體重，或者在給與本發(fā)明二肽或混合物的情況下，體重略有增加，而用β-氨基酸處理的動(dòng)物體重減輕大約5-10％。
本發(fā)明還涉及用于治療疾病、特別是真菌病的含有本發(fā)明混合物和/或二肽的藥物和無(wú)毒、惰性的藥用賦形劑與助劑。
若合適，所述活性化合物(一種或多種)還可以是在一種或多種上述的賦形劑中的微囊化形式。
可提及的優(yōu)選的藥用制劑有片劑，包衣片劑，膠囊劑，丸劑，顆粒劑，栓劑，溶液劑，混懸劑和乳劑，糊劑，軟膏劑，凝膠劑，乳膏劑，洗劑，粉劑和噴霧劑。
治療活性化合物或混合物在上述藥用制劑中存在的濃度應(yīng)為該混合物總重量的大約0.1-99.5％(重量)，優(yōu)選大約0.5-95％(重量)。
除按照本發(fā)明的化合物外，上述藥用制劑還可以含有其它的藥用活性化合物。
所述活性化合物或藥物可經(jīng)口和胃腸外途徑使用。
業(yè)已證明，為獲得期望的效果，一般在人用和獸用藥方面，每24小時(shí)使用本發(fā)明的化合物(一種或多種)的總量大約為0.5-500mg/kg體重有利，優(yōu)選5-100mg/kg體重，若合適，以若干單劑量形式使用。單劑量最好含約1-80、特別是3-30mg/kg體重本發(fā)明的化合物(一種或多種)。
按照本發(fā)明的藥物通常為用于在治療疾病中同時(shí)、分開(kāi)或交錯(cuò)使用的組合物制劑。
用于同時(shí)使用的組合物制劑是本發(fā)明混合物的各組分以物理混合物形式存在的產(chǎn)品，尤其包括片劑、包衣片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑和安瓿劑。還可以設(shè)想用這樣的混合物作為溶液、混懸液或乳液。本發(fā)明混合物的單獨(dú)組分一方面包括α-氨基酸和/或其衍生物(以下稱α-氨基酸組分)，另一方面包括環(huán)戊烷-β-氨基酸和/或其衍生物(以下稱β-氨基酸組分)。
用于分開(kāi)使用的組合物制劑是本發(fā)明混合物的各組分以在空間上彼此分離的形式存在的產(chǎn)品。能滿足這種要求的的片劑、包衣片劑、膠囊劑、丸劑和栓劑特別適于此目的。
還可以設(shè)想用于交錯(cuò)使用的組合物制劑。這種制劑允許間隔一定的時(shí)間給與本發(fā)明混合物的各組分。在交錯(cuò)使用這樣的組合物制劑的情況下，設(shè)想相對(duì)于β-氨基組分的使用，以特殊的方式使用α-氨基酸組分。α-氨基酸組分可以與β-氨基酸組分相同的使用方式來(lái)使用，或者以另一種常規(guī)的使用方式來(lái)使用，例如β-氨基酸組分可靜脈給與，而α-氨基酸組分可經(jīng)口或靜脈給與。
在交錯(cuò)使用的情況下，還可以按上述的根據(jù)時(shí)間使用β-氨基酸組分的關(guān)系使用部分劑量的α-氨基酸組分，并將剩余劑量的α-氨基酸在給與該β-氨基酸組分后的一定的時(shí)間內(nèi)一次或分多次給與。起始化合物實(shí)施例I(-)-1，2-順-2-((N-(9-芴基甲氧基羰基)-(S)-異亮氨?；?氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸 將(N-(9-芴基甲氧基羰基)-(S)-異亮氨酸羥基琥珀酰亞胺酯(89.2g，0.198mol)在600ml二甲氧基乙烷中的溶液于室溫滴加至(-)-1，2-順-2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸(35.1g，0.198mol)和碳酸氫鈉(33.36g，0.397mol)在480ml水中的溶液中。將混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。然后將反應(yīng)混合物用稀鹽酸酸化至pH2，并用乙醚萃取幾次。將合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥并真空濃縮。產(chǎn)物在乙醚/石油醚中結(jié)晶析出。產(chǎn)量70g(收率74％)熔點(diǎn)207℃[α]D20＝-24.1(c＝1.15，在氯仿中)1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ＝0.88(cm，6H)；0.98-1.15，1.40-1.51，1.52-1.80(3m，3H)；2.40-2.84(m，4H)；3.12(cm，1H)；4.10-4.48(m，4H)；4.61(cm，1H)；4.90(cm，2H)；5.84(d，1H)；7.20-7.80(3m，9H).C28H32N2O5(476.6)實(shí)施例II1，2-順-2-((N-(9-芴基甲氧基羰基)-(S)-丙氨酰基)氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸 按類似于實(shí)施例I的方法，由(-)-1，2-順-2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸(2.27g，16.1mmol)、(N-(9-芴基甲氧基羰基)-(S)-丙氨酸羥基琥珀酰亞胺酯(7.0g，17.2mmol)和碳酸氫鈉(1.49g，17.7mmol)制得標(biāo)題化合物。將粗產(chǎn)物用柱層析純化(甲苯/乙醇，9∶1)。產(chǎn)量5.7g(收率81％)1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ＝1.30(d，3H)，2.43-2.79(m，4H)，3.10(cm，1H)，4.12，4.21，4.34，4.50(4cm，5H)，4.91(br.s.，2H)，7.30，7.39，7.66，7.79(4cm，8H).C25H26N2O5(434.5)制備實(shí)施例實(shí)施例1(+)-1，2-順-2-(S)-異亮氨?；被?4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸 將得自實(shí)施例1的化合物(24.0g，0.050mol)在哌啶(200ml)中的溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，真空蒸除哌啶。將殘余物溶于水中。用乙醚萃取幾次后，將水相真空濃縮，加入甲苯。產(chǎn)物由異丙醇/乙醚中結(jié)晶析出。產(chǎn)量8.5g(收率76％)熔點(diǎn)198℃[α]D20＝+23.9(c＝1.08，在水中)1H-NMR(250MHz，D2O)δ＝0.70-0.88(m，6H)；0.91-1.18，1.19-1.43，1.53-1.72(3m，3H)；2.23-2.67(m，4H)；2.88(cm，1H)；3.28(d，1H)；4.30(cm，1H)；4.85(cm，2H).C13H22N2O3(254.3)實(shí)施例2(+)-1，2-順-2-(S)-丙氨酰基氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸 按類似于實(shí)施例1的方法，由實(shí)施例II化合物(5.7g，13.1mmol)制得標(biāo)題化合物。將粗產(chǎn)物用硅膠柱層析純化(二氯甲烷/甲醇，1∶1)，并用甲醇/異丙醇/丙酮結(jié)晶。產(chǎn)量0.7g(收率25％)熔點(diǎn)218℃[α]D20＝+5.4(c＝0.64，在甲醇中)1H-NMR(500MHz，D2O)δ＝1.49(d，3H)，2.45(cm，1H)，2.55-2.75(m，3H)，3.04(cm，1H)，4.01(q，1H)，4.49(cm，1H)，5.00(br，d，2H)C10H16N2O3(212.3)實(shí)施例3(1R，2S)-2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸×(S)-異亮氨酸 將(-)-(1R，2S)-2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸(25.0g，177mmol)和(S)-異亮氨酸(23.2g，177mmol)溶于沸騰的水(250ml)和乙醇(100ml)中。將溶液放冷至室溫，并于60℃真空蒸除溶劑。產(chǎn)量48.2g(收率100％)熔點(diǎn)230℃(分解)1H-NMR(D2O)δ＝0.95(t，3H)，1.00(d，3H)，1.18-1.35，1.40-1.56(2m，2H)，1.99(cm，1H)，2.52-2.67，2.73-2.88(2m，4H)；3.09(cm，1H)，3.69(d，1H)，3.88(cm，1H)，5.09(cm，2H).
C13H24N2O4(272.3)實(shí)施例4將(-)-(1R，2S)-2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸(14.1g，100mmol)和(S)-異亮氨酸(26.2g，200mmol)研成細(xì)粉，然后以粉末形式混合。實(shí)施例5按類似于實(shí)施例4的方法制備(-)-(1R，2S)-2-氨基-4-亞甲基環(huán)戊烷-1-羧酸(14.1g，100mmol)和(S)-異亮氨酸(65.5g，500mmol)的混合物。
權(quán)利要求
1.包含一種或多種α-氨基酸和/或其衍生物和一種或多種環(huán)戊烷-β-氨基酸和/或其衍生物的混合物。
2.按照權(quán)利要求1的混合物，其特征在于它包含通式(Ia)α-氨基酸 式中R3代表具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或代表具有6-10個(gè)碳原子的芳基或氫，或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其中所述烷基可任選地被氰基、甲硫基、羥基、巰基、胍基或者式-NR7R8或R9-OC-基團(tuán)取代，式中R7和R8相互獨(dú)立地代表氫、具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和R9代表羥基、芐氧基、具有至多6個(gè)碳原子的烷氧基或上述的基團(tuán)-NR7R8，或者所述烷基可任選地被具有3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基或具有6-10個(gè)碳原子的芳基取代，所述環(huán)烷基或芳基又被羥基、鹵素、硝基、具有至多8個(gè)碳原子的烷氧基或基團(tuán)-NR7R8取代，式中R7和R8的定義同上，R4和R5代表氫，或者R3和R4一起形成式-(CH2)3-基團(tuán)，R5代表氫，和X代表羥基、具有6-10個(gè)碳原子的芳氧基、具有至多6個(gè)碳原子的烷氧基或基團(tuán)-NR7R8，式中R7和R8的定義同上。
3.按照權(quán)利要求1或2的混合物，其特征在于它含有通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸 式中R1和R2代表氫，或者R1和R2一起形成式＝CH2基團(tuán)，R6代表氫，或代表具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或苯基，和Y代表氫、具有至多8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或芳基。
4.按照權(quán)利要求1的混合物，含有按照權(quán)利要求2的α-氨基酸和按照權(quán)利要求3的環(huán)戊烷-β-氨基酸。
5.含有α-氨基酸或其衍生物和環(huán)戊烷-β-氨基酸或其衍生物的二肽。
6.按照權(quán)利要求5的二肽，含有按照權(quán)利要求2的通式(Ia)α-氨基酸，其中在式(Ia)中的X代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分。
7.按照權(quán)利要求5或6的二肽，含有按照權(quán)利要求3的通式(Ib)環(huán)戊烷-β-氨基酸，其中在式(Ib)中的Y代表所述α-氨基酸與所述環(huán)戊烷-β-氨基酸結(jié)合的共價(jià)鍵部分。
8.按照權(quán)利要求5至7之任一項(xiàng)的二肽的制備方法，其特征在于首先使通式(II)化合物通過(guò)與通式(III)保護(hù)的氨基酸在溶劑中并在堿存在下反應(yīng)，而將其轉(zhuǎn)化成通式(IV)化合物，所述通式(II)、(III)和(IV)如下 式中R1和R2的定義同上， 式中R3和R4的定義同上，R10代表氨基保護(hù)基團(tuán)，和R11代表在肽化學(xué)中常規(guī)的活性保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選羥基琥珀酰亞胺酯基團(tuán)，或者R10和R11一起代表基團(tuán) 式中R1、R2、R3、R4和R10的定義同上；和，最后，將氨基保護(hù)基團(tuán)(R10)裂解掉，若合適，將立體異構(gòu)體分離，在酯(在式(Ib)中R6≠H)的情況下，使該酸按常規(guī)方法與相應(yīng)的醇反應(yīng)，并且，其特征在于若合適，將二肽轉(zhuǎn)化成其鹽。
9.按照權(quán)利要求1至4之任一項(xiàng)的混合物和/或按照權(quán)利要求5至7之任一項(xiàng)的二肽在治療疾病、特別是真菌病方面的用途。
10.用于治療疾病、特別是真菌病的包含按照權(quán)利要求1至4之任一項(xiàng)的混合物和/或按照權(quán)利要求5至7之任一項(xiàng)的二肽的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及α-氨基酸和/或其衍生物和環(huán)戊烷-β-氨基酸和/或其衍生物的混合物，上述的α-氨基酸和環(huán)戊烷-β-氨基酸的二肽和上述的混合物和二肽的混合物；與純的環(huán)戊烷-β-氨基酸相比較，它們?cè)跍匮獎(jiǎng)游镏芯哂懈纳频目赡褪苄浴?br> 文檔編號(hào)A61P31/04GK1143496SQ96108880
公開(kāi)日1997年2月26日 申請(qǐng)日期1996年7月19日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月19日
發(fā)明者M·馬茨克, H·C·米利澤, J·米滕多夫, F·庫(kù)尼什, A·施米特, W·舍恩費(fèi)爾德, K·齊格包爾 申請(qǐng)人:拜爾公司