專利名稱：燈盞花乙素苷元在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及燈盞花乙素苷元(4′-羥基黃芩素)的用途，具體地說(shuō)是燈盞花乙素苷元在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
燈盞花乙素苷元是從燈盞花全株植物中分離提取出的化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 燈盞花又名燈盞細(xì)辛，屬菊科短亭飛蓬類植物。它具有活血化瘀、散寒解表、舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)除濕之功效，臨床上常用于治療心腦血管疾病。目前臨床中使用的燈盞花制劑，其有效成分一般都是利用乙醇和乙酸乙酯進(jìn)行提取的，如CN1091301公開的燈盞花注射液就是如此。其具體制備方法是，將燈盞花直接用水提取，乙醇沉降，低溫減壓濃縮得到粗制浸膏，調(diào)整pH值后，經(jīng)乙酸乙酯精提，再以得到的浸膏為原料，配制成注射液。由于利用乙醇和乙酸乙酯提取的燈盞花有效成份均以燈盞花乙素為主，同時(shí)含有少量的燈盞花甲素，所以目前臨床中所使用的燈盞花制劑也常常被稱為燈盞花素制劑。燈盞花素在心腦血管疾病治療方面已有很多的文獻(xiàn)報(bào)道。臨床應(yīng)用表明其具有增加腦、冠狀血管血流量，降低血管阻力，抗血小板、紅細(xì)胞凝聚，降低血液粘稠度等作用，療效確切。近年來(lái)人們?cè)趯?duì)燈盞花全株植物所含成份的分離研究中，又分離出除燈盞花乙素、甲素以外的四種黃酮類成份，其分別是EB-I(芹菜素)、EB-II(4′-羥基黃芩素)、EB-III(芹菜素-7-B-D-葡萄糖甙)、EBIV(4′-羥基黃芩素-7-B-D-葡萄糖甙)(張人偉等人，《中草藥》，1988年第19卷第5期，第7頁(yè))。這四種單體化合物，其藥理作用如何，能否在制藥領(lǐng)域中被應(yīng)用，目前人們對(duì)此研究甚少，也未見有關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供除燈盞花素以外的燈盞花單一成份在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供了燈盞花乙素苷元在制藥中的兩項(xiàng)應(yīng)用，即燈盞花乙素苷元在制備治療或預(yù)防腦卒中藥物中的應(yīng)用。
燈盞花乙素苷元在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明是經(jīng)過(guò)對(duì)除燈盞花素以外的四種單體化合物進(jìn)行分離，并用其進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究所得出的結(jié)論。
燈盞花乙素苷元用于制備治療或預(yù)防腦卒中藥物，或用于制備治療和預(yù)防腦血管疾病的藥物，其藥理活性強(qiáng)于燈盞花素，效果是人們意想不到的。
下面以燈盞花乙素苷元與燈盞花素的藥理試驗(yàn)比較及結(jié)果來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明燈盞花乙素苷元在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用及其有益效果。
受試藥物燈盞花乙素苷元注射液采用云南燈盞花全株植物2.5kg，加入95％乙醇回流提取、濃縮，浸膏加入80℃熱水溶解后，加入氯仿處理，再用乙醚及醋酸乙酯分別提取，回收溶劑，得黃色析出物，以吡啶和水的混合溶劑重結(jié)晶，再經(jīng)聚酰胺柱層析，得到EB-II(即燈盞花乙素苷元)2000mg。稱取燈盞花乙素苷元2000mg，溶于1000ml水中，制成水溶液，加熱溶解，分裝成4mg/2ml/支濃度的注射液，滅菌。
注射用燈盞花素昆明龍津藥業(yè)有限公司，批號(hào)20021023；溶劑對(duì)照滅菌生理鹽水，大同市惠達(dá)藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號(hào)0209011。
試劑伊文思藍(lán)，上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站分裝產(chǎn)品，批號(hào)94117；甲酰胺溶液，天津市博迪化工有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20010809；氨基甲酸乙酯(烏拉坦)，北京通縣育才精細(xì)化工廠產(chǎn)品，批號(hào)20001220。
動(dòng)物昆明種小鼠，wistar種大鼠，均由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
試驗(yàn)方法一、對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠急性腦缺血的影響伊文思藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將伊文思藍(lán)配成梯度濃度，用721型分光光度計(jì)，于620nm處測(cè)定OD值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y＝-0.0134+0.0985x(r＝0.9997)。
取健康雄性大鼠60只，體重230-290g，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為假手術(shù)組(生理鹽水組)，腦缺血模型組，注射用燈盞花素組(8mg/kg)及燈盞花乙素苷元小、中、大劑量組(2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg)。每日腹腔注射給藥一次，連續(xù)給藥6天，末次給藥后10min，以烏拉坦1g/kg劑量腹腔注射麻醉，背位固定，手術(shù)分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，于給藥后30min股靜脈注射伊文思藍(lán)50mg/kg，假手術(shù)組不結(jié)扎雙側(cè)頸動(dòng)脈，其它各組均于注射伊文思藍(lán)5min后立即結(jié)扎雙側(cè)頸動(dòng)脈，結(jié)扎3h后斷頭取腦稱重，計(jì)算腦指數(shù)(mg/g)，另取部分腦稱重后，置4ml甲酰胺溶液中，置于45℃恒溫箱中72h，離心，取上層液于620nm處測(cè)定OD值，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出腦內(nèi)伊文思藍(lán)含量(μg/g腦濕重)。將離心后腦組織置110℃烘箱中至恒重，計(jì)算腦含水量[腦含水量％＝(濕重-干重)/濕重×100％]。結(jié)果見表1。
表1 燈盞花乙素苷元對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠急性腦缺血的影響(x±s，n＝10)

與生理鹽水組比較▲▲P＜0.01，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01由表1可見，燈盞花乙素苷元，尤其大、中劑量組動(dòng)物的腦指數(shù)、腦含水量及伊文思藍(lán)腦含量與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05-0.01)，表明燈盞花乙素苷元對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠急性腦缺血具有明顯的保護(hù)作用。同劑量組中，燈盞花乙素苷元的作用優(yōu)于注射用燈盞花素。
二、對(duì)大鼠血液纖溶酶活性的影響取健康大鼠50只，體重200-270g，雌雄各半，按性別體重隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為注射用燈盞花素組(8mg/kg)及燈盞花乙素苷元小、中、大劑量組(2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg)及等容量生理鹽水組。每日腹腔注射給藥一次，連續(xù)給藥6天，末次給藥后10min，以烏拉坦1g/kg劑量腹腔注射麻醉，背位固定，分別于給藥后30min和90min由腹主動(dòng)脈取抗凝血15ml混勻，冰浴下離心。取0.3ml血漿加至預(yù)先冷卻的54ml乙酸溶液中，混勻，置4℃冰箱中靜置30min，離心，傾去上清液，保留沉淀部分，吸盡余酸，加硼酸溶液0.3ml，置超聲波上溶解，再加CaCl2溶液0.3ml，約1-2min形成凝塊，記錄從凝塊形成至完全溶解的時(shí)間，計(jì)算纖溶酶活性單位。結(jié)果見表2。
表2燈盞花乙素苷元對(duì)大鼠血液纖溶酶活性的影響(x±s，n＝10)

與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
表2顯示，與生理鹽水組比較，燈盞花乙素苷元在給藥后30min和90min均可使大鼠血液中纖維蛋白溶解酶活性明顯增加(P＜0.05-0.01)。同劑量組中，燈盞花乙素苷元的作用優(yōu)于注射用燈盞花素。
三、對(duì)小鼠血液凝血時(shí)間的影響取健康小鼠65只，體重18-22g，雌雄近半，按性別體重隨機(jī)分成5組，每組13只，分別為等容量生理鹽水組、注射用燈盞花素組(8mg/kg)及燈盞花乙素苷元小、中、大劑量組(2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg)。每日腹腔注射給藥一次，連續(xù)給藥6天，末次給藥后30min眶靜脈取血，采用毛細(xì)管法，觀察藥物對(duì)小鼠血液凝血時(shí)間的影響。
表3燈盞花乙素苷元對(duì)小鼠血液凝血時(shí)間的影響(x±s)

**P＜0.01，與生理鹽水組比較；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01與注射用燈盞花素比較由表3可見，與生理鹽水組比較，燈盞花乙素苷元可使小鼠血液凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P＜0.01)，且燈盞花乙素苷元注射液中、大劑量組動(dòng)物血液凝血時(shí)間明顯長(zhǎng)于注射用燈盞花素組(P＜0.05-0.01)。
四、對(duì)大鼠血液血栓形成的影響取健康大鼠50只，體重210-270g，雌雄各半，按性別體重隨機(jī)分5組，每組10只，分組設(shè)置及給藥方法同血液纖溶酶活性實(shí)驗(yàn)，于末次給藥后10min，以烏拉坦1g/kg劑量腹腔注射麻醉，固定，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈及左側(cè)頸外靜脈，按旁路法進(jìn)行血栓形成測(cè)定，使右側(cè)動(dòng)脈插管血液流經(jīng)置有棉線(6cm)的聚乙烯管進(jìn)入左側(cè)頸外靜脈，循環(huán)15min后，立即取出棉線稱重，計(jì)算血栓濕重及抑制率。
表4燈盞花乙素苷元對(duì)大鼠血液血栓形成的影響(x±s)

與生理鹽水組比較**P＜0.01；與注射用燈盞花素組比較▲P＜0.05表4顯示，與生理鹽水組比較，燈盞花乙素苷元及注射用燈盞花素組均可使大鼠血栓濕重明顯減輕(P＜0.01)，且燈盞花乙素苷元大劑量的作用要優(yōu)于注射用燈盞花素(P＜0.05)，表明燈盞花乙素苷元對(duì)大鼠血栓形成具有顯著的抑制作用。
實(shí)驗(yàn)表明，燈盞花乙素苷元對(duì)急性腦缺血具有明顯的保護(hù)作用，并可明顯增加纖維蛋白溶解酶的活性、延長(zhǎng)血液凝血時(shí)間、抑制血栓形成。而所有這些作用都非常有利于治療和預(yù)防腦卒中和心腦血管疾病。
實(shí)驗(yàn)同時(shí)表明，燈盞花乙素苷元的上述作用均明顯優(yōu)于燈盞花素，說(shuō)明本發(fā)明對(duì)治療和預(yù)防腦卒中及心腦血管疾病具有更為顯著的功效。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例
采用云南燈盞花全株植物2.5kg，加入95％乙醇提取，提取物加入70-80℃熱水溶解，用氯仿萃取后，再用乙醚及醋酸乙酯分別提取，回收溶劑，得黃色析出物，將析出物經(jīng)吡啶和水的混合溶劑重結(jié)晶，再經(jīng)聚酰胺柱層析，得到2000mg燈盞花乙素苷元，其為淡黃色粉末。
質(zhì)譜EI-MS(M+)286；核磁共振碳譜13CNMR163.59(C-2)，103.9(C-3)，182.0(C-4)，149.6(C-5)，129.1(C-6)，161.0(C-7)，93.8(C-8)，147.0(C-9)，102.4(C-10)，128.4(C-1’)，121.5(C-2’)，115.9(C-3’)，153.3(C-4’)，115.9(C-5’)，121.5(C-6’).
核磁共振氫譜1H-NMR6.73(s，H-3)，6.57(s，H-8)，12.77(s，OH-5)，8.77(s，OH-6)，10.53(s，OH-7)，10.37(s，OH-4’)，7.89(d，2H，H-2’，-6’)，6.90(d，2H，H-3’，5’)。
燈盞花乙素苷元口服液將2500mg燈盞花乙素苷元，溶于1000ml水中，制成0.25％濃度的水溶液，加熱溶解，混合均勻，裝入20ml藥瓶中，封口、消毒。
服用方法口服，每日服用燈盞花乙素苷元50-100mg。
燈盞花乙素苷元注射液取燈盞花乙素苷元2000mg，溶于1000ml水中，制成水溶液，加熱溶解，混合均勻，分裝成4mg/2ml/支濃度的注射液，蒸汽流通滅菌30分鐘。
用法用量肌注或靜脈注射，每日4-100mg。
燈盞花乙素苷元片劑取燈盞花乙素苷元2000mg，按公知片劑制備方法，加入淀粉，糊精、硬酯酸鎂等，混合制成濕粒，機(jī)器沖壓成片，每片含燈盞花乙素苷元25mg。
用法用量口服，每日2-3次，每次25mg-100mg。
本發(fā)明在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用，完全不局限于此，例如燈盞花乙素苷元還可引入藥學(xué)上可以接受的鹽類，如燈盞花乙素苷元磷酸鹽，燈盞花乙素苷元鹽酸鹽，燈盞花乙素苷元硫酸鹽等等。
本發(fā)明的藥物劑型也完全不限于此，它可以制備成更多的劑型，如滴丸、膠囊劑、軟膠囊劑、緩控釋制劑等等。
權(quán)利要求
1.燈盞花乙素苷元在制備治療或預(yù)防腦卒中藥物中的應(yīng)用。
2.燈盞花乙素苷元在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了燈盞花乙素苷元在制備治療或預(yù)防腦卒中以及心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。燈盞花乙素苷元對(duì)急性腦缺血具有明顯的保護(hù)作用，并可明顯增強(qiáng)纖維蛋白溶解酶的活性、延長(zhǎng)血液凝血時(shí)間、抑制血栓形成。而所有這些作用都非常有利于治療和預(yù)防腦卒中和心腦血管疾病。燈盞花乙素苷元在治療和預(yù)防腦卒中及心腦血管疾病方面比燈盞花素具有更為顯著的功效。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1657042SQ20041003916
公開日2005年8月24日 申請(qǐng)日期2004年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月18日
發(fā)明者車慶明 申請(qǐng)人:車慶明