專利名稱：心血管活性多肽以及它們的合成和在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一系列具有靶向作用的心血管活性多肽以及它們的化學(xué)合成和在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。
心血管疾病對(duì)人類健康有重要影響。在心血管疾病中有許多嚴(yán)重病癥與血管栓塞有關(guān)。例如，眾所周知的中風(fēng)，腦卒中，心肌梗死，半身不遂等都源于血管栓塞。八十年代治療血栓性疾病的手段都存在不同程度的不足，例如血管成型術(shù)、激光再通術(shù)，以及以尿激酶、tPA、鏈激酶為代表的藥物溶栓等手段除再栓塞傾向大和費(fèi)用高之外，外源性藥物(例如tPA)還可以引起免疫源性反應(yīng)。尋找新型的多肽抗血栓藥物具有重要價(jià)值。
P6A是纖維蛋白降解產(chǎn)物，在電刺激造成的狗冠脈血栓模型上可以恢復(fù)冠脈血流(Metha et al.，J.Cadiovasc，Pharmacol.，1991，18，231)，申請(qǐng)者采用化學(xué)方法合成的P6A(趙明，彭師奇等，化學(xué)通報(bào)，1990，12，31)的生物學(xué)檢測(cè)表明，P6A是一種有前途的抗血栓藥物(唐朝樞，趙明，彭師奇等，北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1990，22，416)。
血小板活化在血栓形成中有重要作用，當(dāng)纖維蛋白與血小板表面GPIIb/IIIa受體結(jié)合時(shí)，纖維蛋白中的RGD序列是GPIIb/IIIa受體識(shí)別的關(guān)鍵序列。含RGD多肽具有明顯的抗血小板聚集和抗血栓作用(Andrieax A et al.，J，Biol.Chem.，1988，264，9258；Parker R.I.，Blood.，1989，74，1226)。申請(qǐng)者采用化學(xué)方法合成的RGDS的生物學(xué)檢測(cè)表明，RGDS不僅具有明確的抗血小板聚集作用(趙明，彭師奇等，J.Chines Pharm.，1993，2，18)還具有明確的靶向作用(唐朝樞，趙明，彭師奇，北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，26，174)。
本發(fā)明的根本目標(biāo)是把P6A及類似物與含RGD四肽綴合，提供一系列具有靶向作用的心血管活性多肽，它們將顯示作用強(qiáng)，選擇性高，毒副作用小等特征。
申請(qǐng)者以P6A為先導(dǎo)化合物，對(duì)P6A的N端氨基酸進(jìn)行替換，實(shí)施結(jié)構(gòu)修飾，合成了一系列通式(1)的多肽AA-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(1)其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ala，Gln，Glu，Gly，Asp，Arg，Asn，Lys以及Tyr-Ala。本發(fā)明的這類多肽顯示很強(qiáng)的舒血管活性，其中有些化合物優(yōu)于P6A，例如Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的舒血管活性明顯比P6A強(qiáng)。
本發(fā)明這類多肽顯示很強(qiáng)的降血壓和抗血栓活性，其中有些化合物優(yōu)于P6A，例如Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的降壓作用和抗血栓作用明顯強(qiáng)于P6A。
本發(fā)明在RGDS的基礎(chǔ)上進(jìn)一步合成了RGDV和RGDF，比較了RGDS，RGDV和RGDF的抗血小板聚集，舒血管和抗血栓活性。
申請(qǐng)者根據(jù)脂質(zhì)體包裹尿激酶用RGDS修飾之后具有向血栓形成部位選擇性分布的特點(diǎn)，提出含RGD四肽具有靶向作用。
本發(fā)明根據(jù)P6A及類似物的抗血栓作用及含RGD四肽的靶向特點(diǎn)，設(shè)計(jì)并合成了一系列通式(2)的雜交肽AA-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-AA′(2)其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ala，Gln；AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ser，Val，Phe。
本發(fā)明的這類雜交肽顯示明確的抗血小板聚集活性，舒血管活性以及抗血栓活性。離體和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的化合物具有作用強(qiáng)，選擇性高，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，是優(yōu)秀的抗血栓劑。
通式(1)和通式(2)的多肽可以具體化為Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(3)Lys-Arg-Pre-Ala-Lys-OH(4)Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(5)Asp-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(6)Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(7)Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(8)Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(9)Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(10)Tyr-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(11)Arg-Gly-Asp-Ser-OH (12)
Arg-Gly-Asp-Val-OH(13)Arg-Gly-Asp-Phe-OH(14)Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH(15)Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH (16)Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH(17)Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH(18)Ala-Arg-Pro-Ala-Lya-Arg-Gly-Asp-Phe-OH(19)Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Phe-OH(20)上述多肽是以化合物3和12，13，14為先導(dǎo)化合物制備的一系列類似物。這類多肽的特點(diǎn)是具有靶向作用，因而作用強(qiáng)，選擇性高，毒副作用小，與臨床應(yīng)用的尿激酶或tPA相比，這類心血管活性多肽結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于化學(xué)合成，便于純化，價(jià)格低康，無(wú)免疫源性反應(yīng)，具有良好的應(yīng)用前景。
為了全面解釋本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例，這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。制備實(shí)施例1，Boc-Ala-Lys(ClZ)·OCH347mg(0.25mmol)Boc-Ala-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羥基丁二酰亞胺和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液在室溫下減壓濃縮，殘留物用石油醚析晶，得對(duì)應(yīng)的活潑酯。
91mg(0.25mmol)HCl·Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的活潑酯中間體，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。37℃下減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和氯化鈉水溶液，飽和檸檬酸水溶液，飽和氯化鈉水溶液洗滌，分出有機(jī)層，并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液37℃下減壓濃縮(上述操作在下文中統(tǒng)稱常規(guī)處理)，得標(biāo)題化合物120mg(96％)，mp78-79℃，[α]D20-6(c0.2，CHCl3)，F(xiàn)AB-MS(m/e)501[M＋H]+。制備實(shí)施例2，HCl·Ala-Lys(ClZ)·OCH3125mg(0.25mmol)Boc-Ala-Lya(ClZ)·OCH3與適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶解，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解并室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直至除凈游離的氯化氫(上述操作在下文中統(tǒng)稱常規(guī)處理)。殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例3，Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH322mg(0.25mmol)Boc-Pro-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羥基丁二酰亞胺和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物置在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液在室溫下減壓濃縮，殘留物用石油醚析晶，得對(duì)應(yīng)的活潑酯。
109mg(0.25mmol)HCl·Ala-Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的活潑酯中間體，室溫反應(yīng)26小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物135mg(90％)，mp89-91℃，[α]D20-8(c0.2，CHCl3)，F(xiàn)AB-MS(m/e)598 [M+H]+。制備實(shí)施例4，HCl·Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3150mg(0.25mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3與適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯混溶，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)方法處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例5，Boc-Arg(Tos)-Pre-Ala-Lys(ClZ)·OCH3107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羥基丁二酰亞胺和27mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物置冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液在室溫下減壓濃縮，殘留物用石油醚析晶，得對(duì)應(yīng)的活潑酯。
134mg(0.25mmol)HCl·Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的活潑酯中間體，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物198mg(87％)，mp96-99℃，[α]D20-7(c0.2，CHCl3)，F(xiàn)AB-MS (m/e)908[M+H]+。制備實(shí)施例6，HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3227mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3與適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯混合，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例7，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ).OCH3，Boc-Asp(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Asa-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Glu(Ochex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Tyr(Cl2Z)-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3的制備47mg(0.25mmol)Boc-Ala-OH，104mg(0.25mmol)Boc-Lys(ClZ)·OH，62mg(0.25mmol)Boc-Gln-OH，107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH，79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH，82mg(0.25mmol)Boc-Gln(OcHex)-OH，58mg(0.25mmol)Boc-Asn-OH及44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH按活潑酯制備通法，制成對(duì)應(yīng)的活潑酯。
210mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3分別與上述制備的活潑酯按常規(guī)接肽法反應(yīng)48小時(shí)，得對(duì)應(yīng)的產(chǎn)物，203mg(83％)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp70-72℃；[α]D20-0.25(c1，CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e)979[M+H]+；241mg(80％)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp90-92℃，[α]D20-0.18(c 1，CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1204[M+H]+；234mg(77％)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp99-102℃，[α]D20-0.09(c1，CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1218[M+H]+；224mg(81％)Boc-Asp(ocHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp67-69℃，[α]D20-0.17(c 1 CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1105[M+H]+；204mg(80％)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp85-88℃，[α]D20-0.21(c 1，CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1022[M+H]+；221mg(79％)Boc-Glu(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp62-65℃，[α]D20-0.19(c 1，CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1119[M＋H]+；194mg(75％)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp66-69℃，[α]D20-0.22(c1，CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e) 1036[M+H]+；及193mg(80％)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp78-81℃，[α]D20-0.18(c 1，CH3OH)，F(xiàn)AB-MS(m/e)965[M+H]+。制備實(shí)施例8，HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3245mg(0.25mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3與適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯混溶，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)方法處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例9，Boc-Tyr(Cl3Bzl)-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3106mg(0.25mmol) Boc-Tyr(Cl2Bzl)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羥基丁二酰亞胺和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物置冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液在室溫下減壓濃縮，殘留物用石油醚析晶，得對(duì)應(yīng)的活潑酯。
229mg(0.25mmol)HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的活潑酯中間體，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)進(jìn)行后處理，得標(biāo)題化合物284mg(87％)。電噴霧質(zhì)譜(m/e)1300[M]+。mp85-86℃，[α]D20-20(c 1，CH3OH)。制備實(shí)施例10，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Lys-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asp-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Tyr-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備147mg(0.15mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，181mg(0.15mmol)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，183mg(0.15mmol)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，166mg(0.15mmol)Boc-Asp(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OCH3，153mg(0.15mmol)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，168mg(0.15mmol)Boc-Glu(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，155mg(0.15mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OCH3，145mg(0.15mmol)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，195mg(0.15mmol)Boc-Tyr(Cl2Z)-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，分別溶于適量1N氫氧化鈉/甲酯溶液，冰浴下攪拌2小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。2N鹽酸中和，使pH為7，室溫下減壓濃縮蒸去甲醇，殘留表6化合物3-11的物理常數(shù)
物再用2N鹽酸酸化至pH2，殘留物減壓濃縮至干。皂化產(chǎn)物加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚以及5mlCF2SO3H-CF3COOH(1∶4)，0℃反應(yīng)2小時(shí)，停止反應(yīng)，減壓除去溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G10純化，得Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Lys-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asp-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gly-Arg-Pro-Ala-Lyn-OH，Tyr-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH。制備實(shí)施例11，Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
80mg(0.25mmol)HCl·Ser(Bzl)-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。室溫下減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和氯化鈉水溶液，飽和檸檬酸水溶液，飽和氯化鈉水溶液洗滌，分出有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液37℃下減壓濃縮，得標(biāo)題化合物131mg(90％)。mp112-113℃，[α]20D-25(c 0.2 CHCl3)。制備實(shí)施例12，HCl·Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl146mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶液溶解，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物再用乙酸乙酯溶解，并室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直至除凈游離的氯化氫。殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例13，Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
130mg(0.25mmol)HCl·Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物143mg(89％)。mp96-97℃，[α]20D-32(c 0.3，CHCl3)。制備實(shí)施例14，HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl144mg(0.25mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶液溶解，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例15，Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl115mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氯唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
144mg(0.25mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物197mg(83％)。FAB-MS(m/e)950[M+H]+。mp101-102℃，[α]20D-34(c 0.4，CHCl3)。制備實(shí)施例16，H-Arg-Gly-Asp-Ser-OH的制備142mg(0.15mmol)的Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5ml CF3COOH-CF3SO2H(4∶1)的混合溶液，0℃反應(yīng)1小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用SephadexG10純化，得到55mg(85％)的RGDS。PAB-MS(m/e)434[M+H]+。mp110-111℃，[α]20D-20(c0.2，6N HCl)。制備實(shí)施例17，Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol，N-羥基苯駢三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCD，濾液直接用于下步反應(yīng)。
61mg(0.25mmol)HCl·Val-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。室溫下減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和氯化鈉水溶液，飽和檸檬酸水溶液，飽和氯化鈉水溶液洗，分出有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液37℃下減壓濃縮，得標(biāo)置化合物121mg(96％)。mp107-108℃，[α]20D-26(c0.3，CHCl3)。制備實(shí)施例18，HCl·Asp(OcHex)-Val-OBzl126mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶液溶解，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)方法處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例19，Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
110mg(0.25mmol)HCl·Asp(OcHex)-Val-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物129mg(92％)。mp109-110℃，[α]20D-19(c0.2，CHCl3)。制備實(shí)施例20，HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl124mg(0.25mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶液溶解，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)方法處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例21，Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBxl107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于適量無(wú)水THF，在冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
124mg(0.25mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物187mg(86％)。FAB-MS(m/e)869[M-2H]+。mp97-98℃，[α]20D-24(c 0.4，CHCl3)。制備實(shí)施例22，H-Arg-Gly-Asp-Val-OH的制備131mg(0.15mmol)的Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3COOH-CF3SO2H(1∶4)混合溶液，0℃反應(yīng)1小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G10純化，得到58mg(87％)RGDV。電噴霧質(zhì)譜(m/e)446[M＋H]+。mp120-121℃，[α]20D-20 (c0.3，6NHCl)。制備實(shí)施例23，Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
73mg(0.25mmol)HCl·Phe-OBzl，27mg(0.27mmol) N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。室溫下減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和氯化鈉水溶液，飽和檸檬酸水溶液，飽和氯化鈉水溶液洗，分出有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液37℃下減壓濃縮得標(biāo)題化合物130mg(94％)。mp114-115℃，[α]20D-22(c0.3，CHCl3)。制備實(shí)施例24，HCl·Asp(OcHex)-Phe-OBzl138mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶液溶解，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)方法處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例25，Boc-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
122mg(0.25mmol)HCl·Asp(OcHex)-Phe-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)后處理，得標(biāo)題化合物139mg(91％)。mp108-111℃，[α]20D-22(c0.3，CHCl3)。制備實(shí)施例26，HCl·Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl152mg(0.25mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶液溶解，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例27，Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol) N-羥基苯駢三氯唑和56mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在0℃放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
136mg(0.25mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物200mg(87％)。電噴霧質(zhì)譜(m/e)942[M+Na]+。mp98-99℃，[α]20D-25(c0.4，CHCl3)。制備實(shí)施例28，H-Arg-Gly-Asp-Phe-OH的制備138mg(0.15mmol)的Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3COOH-CF3SO3H混合溶液(4∶1)，0℃反應(yīng)1小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G10純化得62mg(83％)RGDF。電噴霧質(zhì)譜(m/e)494[M+H]+。mp125-126℃，[α]20D-40(c0.2，6N HCl)。制備實(shí)施例29，Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl47.3mg(0.25mmol) Boc-Ala-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氯唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物置于冰箱中24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
101.3mg(0.25mmol)HCl·Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)24小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。37℃下減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和氯化鈉水溶液，飽和檸檬酸水溶液，飽和氯化鈉水溶液洗滌，分出有機(jī)層，并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液37℃下減壓濃縮(上述操作在下文中統(tǒng)稱常規(guī)處理)，得標(biāo)題化合物130mg(96％)。制備實(shí)施例30，HCl·Ala-Lys(Z)-OBzl135mg(0.25mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶解，室溫下攪拌4小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物在室溫下減壓濃縮，殘留物再用乙酸乙酯溶解并室溫下濃縮，如此反復(fù)數(shù)次，直至除凈游離的氯化氫(上述操作在下文中統(tǒng)稱常規(guī)處理)。殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例31，Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl54mg(0.25mmol)Boc-Pro-OH溶于適量無(wú)水THF，冰水浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物置冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
119mg(0.25mmol)HCl·Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的中間體，室溫反應(yīng)26小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物144mg(90％)。制備實(shí)施例32，HCl·Pro-Ala-Lys(Z )-OBzl160mg(0.25mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯混溶，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例33，Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol N-羥基苯駢三氮唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物置冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
144mg(0.25mmol)HCl·Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)進(jìn)行后處理，得標(biāo)題化合物207mg(87％)，F(xiàn)AB-MS(m/e)950[M＋H]+。制備實(shí)施例34，HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl237mg(0.25mmol) Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯混合，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例35，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl47.3mg(0.25mmol)Boc-Ala-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol) N-羥基苯駢三氯唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物置冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
212mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物217mg(85％)，mp86-89℃，[α]20D-13(c0.2，CHCl3)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1020[M＋H]+。制備實(shí)施例36，HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl237mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl與適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯混合，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例37，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl62mg(0.25mmol)Boc-Gln-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)212mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物235mg(87％)，mp83-85℃，[α]20D-9(c0.3，CHCl3)，F(xiàn)AB-MS(m/e)1077[M+H]+。制備實(shí)施例38，HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl238mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶解，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例38a，HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl218mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶解，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例39，HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl230mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl用適量6N無(wú)水氯化氫-乙酸乙酯溶解，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物按常規(guī)處理，殘留物用無(wú)水乙醚析晶，得標(biāo)題化合物，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例40，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH153mg(0.15mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，溶于適量1N氫氧化鈉/甲醇溶液，冰浴下攪拌2小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。2N鹽酸中和，使PH為7，室溫下減壓濃縮除去甲醇，殘留物再用2N鹽酸酸化至pH2，殘留物減壓濃縮至干，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例41，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH161mg(0.15mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，溶于適量1N氫氧化鈉/甲醇溶液，冰浴下攪拌2小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。2N鹽酸中和，使pH為7，室溫下減壓濃縮蒸去甲醇，殘留物再用2N鹽酸酸化至pH2，殘留物減壓濃縮至干，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例42，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl232mg(0.25mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol) N-羥基苯駢三氮唑和556mg(0.27mmol)mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
223mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理得標(biāo)題化合物443mg(95％)，[α]20D-60(c0.3，CHCl3)，mp98-101℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1783[M＋Na]+。制備實(shí)施例43，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl247mg(0.25mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
223mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物447mg(93％)，[α]20D-25(c0.2，CHCl3)，mp93-95℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1818[M+H]+。制備實(shí)施例44，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl232mg(0.25mmol) Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
203mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物416mg(93％)，[α]20D-29(c0.5，CHCl3)，mp106-108℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1706[M＋H＋Na]+。制備實(shí)施例45，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl247mg(0.25mmol) Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol) N-羥基苯駢三氯唑和556mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)
203mg(0.25mmol)HCl-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物434mg(94％)，[α]20D-30(c0.3，CHCl3)，mp118-120℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1763[M+H+Na]+。制備實(shí)施例46，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl232mg(0.25mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于適量無(wú)水THF，365mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
215mg (0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物436mg(95％)，[α]20D-32(c0.5，CHCl3)，mp108-110℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1754[M+H+Na]+。制備實(shí)施例47，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl247mg(0.25mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于適量無(wú)水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol)N-羥基苯駢三氯唑和556mg(0.27mmol)DCC，反應(yīng)混合物在冰箱中放置24小時(shí)，濾除DCU，濾液直接用于下步反應(yīng)。
215mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基嗎啉與適量無(wú)水THF混溶，加入上面所得到的濾液，室溫反應(yīng)30小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。按常規(guī)處理，得標(biāo)題化合物440mg(93％)，[α]20D-6.7(c0.3，CHCl3)，mp87-90℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1810[M＋Na]+。制備實(shí)施例48，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH264mg(0.15mmol)的Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚以及5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反應(yīng)4小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G15純化得目標(biāo)化合物125mg(87％)，mp140-141℃，[α]20D-50(c0.3，6NHCl)。電噴霧質(zhì)譜(m/e)956[M]+。制備實(shí)施例49，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH261mg(0.15mmol)的Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚以及5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反應(yīng)4小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G15純化，得目標(biāo)化合物131mg(86％)，mp137-139℃，[α]20D-38(c0.2，6N HCl)，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1015[M+2H]+。制備實(shí)施例50，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH273mg(0.15mmol)的Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反應(yīng)4小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G15純化，得目標(biāo)化合物124mg(85％)，[α]20D-40(c0.2，6N HCl)，mp147-149℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)969[M+H]+。制備實(shí)施例51，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH260mg(0.15mmol)的Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反應(yīng)4小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G15純化，得目標(biāo)化合物135mg(88％)，[α]20D-53.3(c0.3，6N HCl)，mp131-134℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1050[M+2H+Na]+。制備實(shí)施例52，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Phe-OH252mg(0.15mmol)的Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反應(yīng)4小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G15純化，得目標(biāo)化合物127mg(83％)，[α]20D-70(c0.2，6N HCl)，mp150-153℃，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1017[M+H]+。制備實(shí)施例53，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Phe-OH268mg(0.15mmol)的Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H--CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反應(yīng)4小時(shí)。減壓去除溶劑，殘留物用無(wú)水乙醚固化。固體物用Sephadex G15純化，得目標(biāo)化合物145mg(90％)，mp142-145℃，[α]20D-39(c0.2，6N HCl)，電噴霧質(zhì)譜(m/e)1074 [M+H]+。生物活性實(shí)施例1，P6A及類似物的舒血管活性取分離好的大鼠胸主動(dòng)脈肌條約3mm，掛于5ml灌流槽內(nèi)，連接換能器，用含95％O2-5％CO2混合氣平衡的KH液灌流。15分鐘后加入NE(終濃度1×10-9mol/L)，待主動(dòng)脈肌條收縮達(dá)到峰值后沖洗掉，再穩(wěn)定30分鐘。灌流槽內(nèi)換液后，加入NE(1×10-9mol/L)，待主動(dòng)脈肌條收縮達(dá)峰值時(shí)，注入待測(cè)藥物，觀察舒血管效應(yīng)。結(jié)果見(jiàn)于表2.生物活性實(shí)施例2，P6A及類似物的血壓及心率效應(yīng)在離體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇舒血管作用比較好的Gln-Arg-Pro-Ala-Lys與P6A分別使用0.020mmol/kg和0.022mmol/kg的劑量，觀察其對(duì)大鼠平均動(dòng)脈血壓(MAP)的影響。體重200～250g雄性Wistar大鼠，以20％烏拉坦腹腔麻醉(5ml/kg)，頸動(dòng)脈插管，連接四導(dǎo)生理記錄儀，描記MAP和心率(HR)。頸外靜脈插管給藥，注射肝素抗凝(1000U/kg)，術(shù)后穩(wěn)定30分鐘。隨機(jī)分組(n＝5)，分別靜脈注射待測(cè)藥物。結(jié)果見(jiàn)于表3，4。
表2.化合物3-11對(duì)NE收縮的鼠動(dòng)脈肌條的舒張效應(yīng)
n＝6，NE(10-9M)收縮的幅度為100％；負(fù)值為縮血管效應(yīng)與化合物3相比較，**P＜0.05，***P＜0.01；#n＝2表3化合物9和P6A對(duì)大鼠平均動(dòng)脈血壓的影響
n＝4劑量，P6A0.022mmol/kg；化合物90.020mmol/kg
表4化合物9和P6A對(duì)大鼠心率的影響
生物活性實(shí)施例3，P6A及類似物的抗血栓作用在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本文還觀察了P6A和Gla-Arg-Pro-Ala-Lys在整體動(dòng)物上的抗血栓作用。將200-250g雄性Wister大鼠在麻醉下分離出兩側(cè)頸總動(dòng)脈，于靜脈緩緩注射藥物或溶媒(生理鹽水)，然后，立即用經(jīng)25％FeCl3浸泡過(guò)的紗布條(寬0.5cm)包裹動(dòng)脈10min，取調(diào)紗布剪下0.5cm動(dòng)脈段，剝離出血栓，室溫放置24小時(shí)后稱重。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 P6A及化合物9的抗血栓作用
與生理鹽水組比較，**P＜0.01生物活性實(shí)施例4，RGDS，RGDV，RGDF的抗血小板聚集作用大鼠麻醉下腹主動(dòng)脈取血(用0.38％枸櫞酸鈉抗凝)，離心制備富血小板血漿，血小板數(shù)調(diào)至5×108個(gè)血小板/ml，血小板聚集在37℃下，在雙道血小板聚集儀中采用標(biāo)準(zhǔn)比濁技術(shù)進(jìn)行血小板聚集研究。使用的激動(dòng)劑為PAF(終濃度，5μl)進(jìn)行PAF誘導(dǎo)的抗血小板聚集研究。RGDV或RGDF溶于生理鹽水，并加入100μl富血小板的血漿中，37℃攪拌。用生理鹽水作對(duì)照。有關(guān)數(shù)據(jù)列入表6。
表6 RGDS，RGDV，RGDF對(duì)PAF誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用
生物活性實(shí)施例5，RGDS，RGDV，RGDF的舒血管作用將斷頭大鼠的主動(dòng)脈條立即放入裝有5ml用95％O2-5％CO2飽和的KH溶液(pH7.4)中。主動(dòng)脈條連接到張力轉(zhuǎn)換器上，記錄舒張-收縮曲線。主動(dòng)脈條使用1×10-9mol/L的NE收縮。收縮值達(dá)峰值后洗凈主動(dòng)脈條，并穩(wěn)定30分鐘。更換溶液后，加入NE(1×10-9mol/L)。當(dāng)主動(dòng)脈條的收縮達(dá)峰值時(shí)，施用RGDV，RGDF以便觀察血管舒張效應(yīng)。有關(guān)數(shù)據(jù)列入表7。生物活性實(shí)施例6，RGDS，RGDV，RGDF的抗血栓作用將200-250g Wister雄性大鼠麻醉，分離出兩側(cè)頸總動(dòng)脈，靜脈緩緩注射藥物或生理鹽水，然后立即用經(jīng)25％FeCl3浸泡過(guò)的紗條(寬0.5cm)包裹動(dòng)脈10min，取掉紗布，剪下0.5cm動(dòng)脈段，剝離出血栓室溫放置24h后稱重，有關(guān)數(shù)據(jù)列入表8。
表7 RGDS，RGDV，RGDF對(duì)NE收縮的血管的舒張效應(yīng)
表8 RGDS，RGDV，RGDF的抗血栓作用
與對(duì)照組比較，*P＜0.05生物活性實(shí)施例7，雜交肽的抗血栓作用將200-250g Wister雄性大鼠麻醉，分離出兩側(cè)頸總動(dòng)脈，靜脈緩緩注射藥物或生理鹽水，然后立即用經(jīng)25％FeCl3浸泡過(guò)的紗條(寬0.5cm)包裹動(dòng)脈10min，取掉紗布，剪下0.5cm動(dòng)脈段，剝離出血栓室溫放置24h后稱重，有關(guān)數(shù)據(jù)列入表9。
表9雜交肽的抗血栓作用
與生理鹽水組比較，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001與RGDS及RGDV組比較，#P＜0.05生物活性實(shí)施例8，雜交肽的舒血管活性的測(cè)定取分離好的大鼠胸主動(dòng)脈約3mm，懸掛于5ml灌流槽內(nèi)，連接換能器，用含95％O2-5％CO2混合氣平衡的KH液灌流。15分鐘后加入NE(終濃度為1×10-9/L)，待主動(dòng)脈收縮達(dá)到峰值后沖洗掉，再穩(wěn)定30分鐘。灌流槽內(nèi)換液后，加入NE (終濃度為1×10-9/L)，待主動(dòng)脈收縮達(dá)到峰值時(shí)，注入待側(cè)藥物，觀察舒血管效應(yīng)。結(jié)果見(jiàn)表10(重復(fù)觀察兩次)。
表10化合物15-20對(duì)NE收縮的血管的舒張效應(yīng)
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及對(duì)P6A進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成了一系列通式(1)的多肽，其特點(diǎn)在于這類多肽具有明確的舒血管，降血壓和抗血栓作用，其中有的化合物明顯地比P6A優(yōu)秀，在醫(yī)學(xué)方面有重要的應(yīng)用前景；本權(quán)利要求涉及通式(1)的多肽AA-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(1)其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，涉及它們的化學(xué)合成以及在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1的通式(1)多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，的化學(xué)合成用。
3.權(quán)利要求1的通式(1)多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala，Arg，Gly，Gln，Gln，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1的通式(1)多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，作為擴(kuò)血管藥物使用。
5.權(quán)利要求1的通式(1)多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala，Arg，Gly，Gln，Gla，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，作為降血壓藥物使用。
6.權(quán)利要求1的通式(1)多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，作為抗血栓藥物使用。
7.本發(fā)明涉及將P6A及類似物與含RGD四肽綴合，合成了一系列通式為(2)的雜交肽，其特點(diǎn)在于這類雜交肽具有明確的舒血管，降血壓和抗血栓作用，由于它們具有靶向作用，因而作用強(qiáng)，選擇性高，毒副作用小，在醫(yī)學(xué)方面有重要的應(yīng)用前景；本權(quán)利要求涉及通式(2)的多肽AA-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-AA′-OH(2)其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala或Gln；AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ser，Val，Phe，涉及它們的化學(xué)合成以及在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求7的通式(2)的多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala或Gln；AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ser，Val，Phe，的化學(xué)合成。
9.權(quán)利要求7的通式(2)的多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala或Gln；AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ser，Val，Phe，在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求7的通式(2)的多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala或Gln；AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ser，Val，Phe，作為擴(kuò)血管藥物使用。
11.權(quán)利要求7的通式(2)的多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala或Gln；AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ser，Val，Phe，作為降血壓藥物使用。
12.權(quán)利要求7的通式(2)的多肽，其中AA為L(zhǎng)構(gòu)型氨基酸，例如為Ala或Gln；AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，例如為Ser，Val，Phe，作為抗血栓藥物使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(1)和通式(2)的多肽，AA-Arg-Pro-Ala-Lys-OH (1)AA-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-AA，-OH (2)，其中AA和AA′為L(zhǎng)構(gòu)型的氨基酸，涉及它們的合成和在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用，例如作為擴(kuò)血管，降血壓和抗血栓藥物使用，涉及以這類多肽作為活性成分的藥物組合物。離體和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的這類多肽具有靶向作用，因而具有作用強(qiáng)，選擇性高，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，是優(yōu)秀的抗血栓劑。
文檔編號(hào)A61P9/08GK1146458SQ95106340
公開(kāi)日1997年4月2日 申請(qǐng)日期1995年6月13日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月13日
發(fā)明者彭師奇, 趙明, 王超, 唐朝樞, 王銀葉 申請(qǐng)人:北京醫(yī)科大學(xué)