專利名稱：丹酚酸a組合物用于制備改善腦缺血后的神經(jīng)功能癥狀藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備改善腦缺血后的神經(jīng)功能癥狀藥物的用途。
背景技術(shù)：
腦血管病又稱腦卒中，是由各種病因使供應(yīng)腦部血液的血管發(fā)生病變所致的一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。其主要病因?yàn)槟X動(dòng)脈系統(tǒng)病損(如腦動(dòng)脈硬化)等原因?qū)е碌哪X動(dòng)脈管腔狹窄、血管痙攣、閉塞或破裂、血流減少或完全阻塞，腦部血液循環(huán)和功能障礙，腦組織受損而發(fā)生的一系列癥狀。主要包括缺血性和出血性腦血管病。其中(ICVD，又稱缺血性卒中)占80 左右。缺血性腦血管病是指局部腦組織包括神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及聯(lián)系纖維由于供血障礙發(fā)生的變性、壞死或一過性的功能喪失。血管內(nèi)血栓形成、栓塞、血管狹窄導(dǎo)致的腦動(dòng)脈阻塞是缺血性腦卒中的主要原因。缺血引起腦神經(jīng)細(xì)胞損傷和死亡的作用機(jī)制多樣、復(fù)雜，缺血性腦卒中(即腦缺血)后，由于腦部缺乏血液和氧氣的供應(yīng)，導(dǎo)致大腦能量代謝失衡，產(chǎn)生一系列病理性損傷，如氧化應(yīng)激、興奮性氨基酸毒性、鈣超載、炎癥反應(yīng)等，從而導(dǎo)致神經(jīng)元的大量死亡。它是臨床上的常見病、多發(fā)病，死亡率及致殘率很高，現(xiàn)已經(jīng)成為世界公認(rèn)的三大致死疾病之一。臨床上治療主要是溶栓、挽救缺血區(qū)域(半暗帶)的瀕臨死亡的神經(jīng)元和促進(jìn)損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)。防治缺血性腦血管疾病是目前人類迫切需要解決的醫(yī)學(xué)難題。目前美國FDA僅批準(zhǔn)了組織纖溶酶原活化因子(tPA)用于中風(fēng)后的溶栓治療，但其治療時(shí)間窗很窄，只有在中風(fēng)4.5小時(shí)內(nèi)使用才有效；而且還存在出血以及缺血再灌加重腦損傷的危險(xiǎn)性。而目前針對 缺血性中風(fēng)治療的神經(jīng)保護(hù)藥包括鈣通道阻斷劑如尼莫地平、谷氨酸受體拮抗劑如地佐環(huán)平(dizocilPine)、抗氧化劑或自由基清除劑如依達(dá)拉奉、NO信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)劑蘆貝魯哩(Lubeluzole)以及炎癥抑制劑恩莫單抗(enlimomab)等。但它們中有的治療作用不確切或特異性不強(qiáng)，有的毒副作用較大、耐受性小，有的還處于臨床前或臨床研究階段，很難在防治缺血性腦卒中發(fā)揮積極影響。因而，研發(fā)出快速有效、安全穩(wěn)定的防治腦缺血藥物迫在眉睫。在此領(lǐng)域中醫(yī)藥發(fā)揮了不可忽視的積極作用。丹參制劑是我國心腦血管疾病的基本治療藥物，因療效確切，丹參已成為我國用量最大、銷售額最高、制劑生產(chǎn)廠最多，臨床劑型最全的中藥之一。丹參有效化學(xué)成分主要有兩大類:脂溶性丹參酮類化合物和水溶性酚酸類化合物。研究表明:丹酚酸類在抗肝臟損傷、抗動(dòng)脈粥樣硬化及細(xì)胞凋亡以及改善記憶功能障礙等方面有著顯著的活性。其中又以丹酚酸A(Salvianolic acid A)抗氧化活性最強(qiáng)，丹酚
酸A結(jié)構(gòu)如下:
權(quán)利要求
1.酚酸A組合物用于制備改善腦缺血后的神經(jīng)功能癥狀藥物的用途，其中所述的組合物中丹酚酸A94% 97%，紫草酸0.1% 1.5%，迷迭香酸0.1% 1.5%，丹酚酸B0.1% 1.5%，丹酚酸C0.1% 2.0%，所述丹酚酸A組合物采用下制備方法獲得: 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量、45 95°C水溫浸提取，同時(shí)以10 50轉(zhuǎn)/分速度攪拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對密度1.0 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在50% 85%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液；或者 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小時(shí)，共提取I 3次；減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液； 上述丹參提取液加水稀釋至每Iml含丹酚酸BI 30mg，水溶液用堿調(diào)pH至3.5 6.5，加入與丹酚酸B摩爾百分比0.1 3%氯化鋅作為催化劑，在100 140°C溫度加熱轉(zhuǎn)化I 6小時(shí)； 轉(zhuǎn)化液調(diào)PH值至2.5 4.5，靜置、離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸Al 10mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 35 I: 70，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 30，分別用I 8倍柱體積水、I 10倍柱體積10% 40%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用2 10倍柱體積20% 60%乙醇洗脫，HPLC檢測，收集含有丹酚酸A的20% 60%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味； 水溶液濃縮至每Iml含1-1Omg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 5 1: 25，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 25，分別用I 10倍柱體積水、5 20倍柱體積20% 60%乙醇溶液洗脫除雜，再用4 15倍柱體積40% 90%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的40% 90%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味水溶液； 水溶液濃縮，調(diào)酸pH至2.0 4.0，用水溶液1-8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,加入I 3倍量硅膠，攪拌，揮干； 把攪拌樣硅膠加到已裝好的5 20倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 4 1: 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫6 30倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脫6 30倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得所述丹酚酸A組合物。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A95% 96%，紫草酸0.1% 1.2%，迷迭香酸0.1% 1.2%，丹酚酸B0.1% 1.2%，丹酚酸 C0.1% 1.5%。
3.據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中微波真空干燥溫度:20-100°C，回差溫度1_5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分鐘。
4.據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中微波真空干燥溫度:50-85°C，回差溫度2-4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分鐘。
5.據(jù)權(quán)利要求4所述的用途， 其中微波真空干燥溫度:55-80°C，回差溫度2-3°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分鐘。
6.據(jù)權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于采用高效液相色譜法測定丹酚酸A，紫草酸，迷迭香酸，丹酚酸B，丹酚酸C含量，測定條件如下: 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 檢測波長286nm ;流速1.0ml/min ;柱溫30°C ； 理論塔板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于10000 ； 對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C對照品適量至容量瓶中，加甲醇制成混合對照品溶液； 供試品溶液的制備:精密稱取樣品IOmg到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度，即得； 洗脫以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1 0.5%磷酸為流動(dòng)相B，按下述條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60分鐘； O 10分鐘時(shí)，甲醇的比例由30%升至40%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ； 10 30分鐘時(shí)，甲醇的比例由40%升至55%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ； 30 60分鐘時(shí)，甲醇的比例由55%升至80%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由45%降至20%。
測定法:分別精密吸取混合對照品溶液與供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算丹酚酸A 、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備改善腦缺血后的神經(jīng)功能癥狀藥物的用途，該組合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C組成，其中所述的組合物是由下列重量配比制成丹酚酸A90％～99％，紫草酸0.1％～3％，迷迭香酸0.1％～3％，丹酚酸B0.1％～3％，丹酚酸C0.1％～5％。
文檔編號A61K31/216GK103083303SQ201210490339
公開日2013年5月8日 申請日期2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者劉地發(fā), 曾發(fā)林, 鐘陽桂, 蔣春紅, 楊小玲, 李志勇 申請人:蔣春紅