專(zhuān)利名稱(chēng)：：不可消化的糖用于在出生后給予嬰兒最佳開(kāi)始的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種組合物，其通過(guò)向孕婦施用而促進(jìn)嬰兒健康。
背景技術(shù)：
：對(duì)母親而言，嬰兒在妊娠期間發(fā)育良好以及在出生時(shí)獲得最佳開(kāi)始是尤其重要的。因此，孕婦通常攝取旨在改善未出生兒童的生長(zhǎng)和發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)組合物。長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)已被描述為能夠促進(jìn)未出生兒童的大腦發(fā)育。據(jù)此，孕婦(以及哺乳期婦女)可攝取具有LC-PUFA的營(yíng)養(yǎng)組合物。EP705539描述了這樣的組合物。EP1296694涉及對(duì)變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行預(yù)防，并特別涉及通過(guò)在出生前和出生后，給處于患特應(yīng)性疾病高風(fēng)險(xiǎn)的兒童施用益生菌、存在于健康腸道菌群中的有益微生物對(duì)特應(yīng)性疾病進(jìn)行一級(jí)預(yù)防。發(fā)明概述本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，給孕婦施用水溶性、不可消化的糖能夠改善未出生嬰兒的免疫系統(tǒng)。發(fā)現(xiàn)未出生嬰兒存在于腸細(xì)胞和單核細(xì)胞的細(xì)胞膜中的受體CD14和TLR2表達(dá)增強(qiáng)。此外，還發(fā)現(xiàn)，與沒(méi)有攝取本發(fā)明的糖的母親所分娩的嬰兒的腸道菌群發(fā)育情況相比，攝取了本發(fā)明的糖的母親所分娩的嬰兒的腸道菌群發(fā)育狀況得以改善。本發(fā)明人己發(fā)現(xiàn)，嬰兒的腸道菌群發(fā)育之所以得到改善是源于攝取了本發(fā)明的糖的母親的腸道和/或陰道菌群得到改善。攝取本發(fā)明的糖后，母親胃腸道中的雙歧桿菌和乳桿菌的生長(zhǎng)受到促進(jìn)。隨后，通過(guò)交叉定植，母親的陰道菌群也有益地朝向高含量和多樣化的雙歧桿菌和乳桿菌變化。出生期間，新生兒的腸道首先受到母體陰道和腸道微生物菌群的接種。因此，母親有益的陰道和腸道菌群可導(dǎo)致嬰兒在生命的第一階段獲得改善的菌群。作為免疫系統(tǒng)被促進(jìn)以及由雙歧桿菌屬(^Z^o6fl"eWwm)和乳桿菌屬(i^cto&"7/w)控制的最佳腸道菌群的結(jié)果，嬰兒不僅發(fā)生免疫相關(guān)疾病(例如特應(yīng)性疾病)的機(jī)會(huì)降低，而且發(fā)生胃腸道疾病(例如感染、腸道炎癥、腹瀉或便秘)的機(jī)會(huì)也降低。另一方面，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)施用這一不可消化的糖有益地影響了孕婦和/或嬰兒的免疫系統(tǒng)。發(fā)現(xiàn)分娩前的兒童免疫系統(tǒng)在出生后經(jīng)激發(fā)出現(xiàn)更快的Thl應(yīng)答。結(jié)果，發(fā)生免疫相關(guān)疾病(例如特應(yīng)性疾病)的機(jī)會(huì)被進(jìn)一步降低。優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了水溶性、不可消化的糖用于制備用于i)改善出生后嬰兒的腸道菌群發(fā)育；ii)加強(qiáng)出生前嬰兒的免疫系統(tǒng)；和/或iii)加強(qiáng)出生后嬰兒的免疫系統(tǒng)和/或預(yù)防出生后嬰兒的免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病的組合物的用途，其中將所述組合物施用給懷有所述嬰兒的孕婦。本發(fā)明還提供了水溶性、不可消化的糖用于制備用于i)加強(qiáng)孕婦的免疫系統(tǒng)；ii)改善孕婦的腸道菌群；和/或iii)改善孕婦的陰道菌群；的組合物的用途，其中將所述組合物施用給孕婦。水溶絲、不^澇化游瀞用于本發(fā)明的方法中的組合物包含水溶性、不可消化的糖。本發(fā)明中所用術(shù)語(yǔ)"不可消化的"指通過(guò)存在于人上消化道(小腸和胃)中的酸或消化酶的作用在腸中不會(huì)被消化，但卻可被人的腸道菌群發(fā)酵的糖。單糖和雙糖(例如葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖和乳糖)是可消化的。本申請(qǐng)中所用術(shù)語(yǔ)"可發(fā)酵的"指通過(guò)胃腸道下部(例如，結(jié)腸)中的微生物能夠被轉(zhuǎn)化成較小分子(尤其是短鏈脂肪酸和乳酸)的能力。本發(fā)明的糖是水溶性的，其可采用L.Proskyetal，J.Assoc.Anal.Chem71:1017-1023，1988所公開(kāi)的方法進(jìn)行確定。優(yōu)選地，本發(fā)明的糖具有至少2個(gè)且優(yōu)選低于100個(gè)單糖單位，優(yōu)選低于60，更優(yōu)選低于40，最優(yōu)選低于10的聚合度(DP)。優(yōu)選地，本發(fā)明的水溶性、不可消化的糖是包含半乳糖的糖。具有相對(duì)較低聚合度的糖具有改良的乳桿菌和/或雙歧桿菌發(fā)酵能力，且不表現(xiàn)出增加粘性的技術(shù)劣勢(shì)。包#//溶絲、不^)^眾游羊離^^^薪優(yōu)選地，本發(fā)明的糖為含有水溶性、不可消化的半乳糖的糖(下文中稱(chēng)作"GAL-oligo")，其優(yōu)選地包含占所述糖的單糖單位總數(shù)至少50%的半乳糖單位。與其他水溶性、不可消化的糖相比，GAL-oligo具有改善的雙歧桿菌產(chǎn)生效應(yīng)(bifidogeniceffect)。人母乳同樣包含高濃度的GAL-oligo，且喂食人母乳的嬰兒的腸道菌群在雙歧桿菌方面比喂食標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方奶的嬰兒更加豐富。優(yōu)選地，本發(fā)明的GAL-oligo含有占存在于所述糖中的單糖單位總數(shù)至少60%(更優(yōu)選至少65%)的半乳糖單位。優(yōu)選地，本發(fā)明的GAL-oligo包含至少兩個(gè)末端糖單位，其中至少一個(gè)末端糖單位選自葡萄糖和半乳糖；且至少一個(gè)末端糖單位選自半乳糖和巖藻糖。優(yōu)選地，GAL-oligo中至少75%(優(yōu)選100%)的糖是卩-連接的。術(shù)語(yǔ)"末端糖"指結(jié)合于另一糖單位的糖(例如，半乳糖、葡萄糖、果糖或巖藻糖)。本發(fā)明的GAL-oligo優(yōu)選地含有不超過(guò)4個(gè)末端糖，優(yōu)選不超過(guò)2個(gè)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述GAL-oligo包含至少一個(gè)末端半乳糖和選自至少末端葡萄糖和一個(gè)末端巖藻糖的糖。更優(yōu)選地，本發(fā)明的GAL-oligo包含至少一個(gè)末端半乳糖和至少一個(gè)末端葡萄糖。優(yōu)選地，本發(fā)明的Gal-oligo含有2個(gè)末端糖單位且具有2-60的聚合度(DP)。優(yōu)選地，所述GAL-oligo選自反式半乳糖寡糖、半乳糖寡糖、乳-N-四糖(lacto-N國(guó)tetraose(LNT))、乳畫(huà)N-新四糖(lacto畫(huà)N-neotetraose(neoLNT))、巖藻糖基乳糖、巖藻糖化LNT以及巖藻糖化neoLNT。優(yōu)選地，所述GAL-oligo是唾液酸化的。優(yōu)選地，所述GAL-oligo選自唾液酸乳糖、唾液酸巖藻糖基乳糖、唾液酸乳糖胺以及唾液酸化-LNT和唾液酸化-neo-LNT，更優(yōu)選唾液酸乳糖。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包括施用反式半乳糖寡糖([半乳糖]n-葡萄糖；其中n是介于i和60之間的整數(shù)，即2、3、4、5、6......59、60;優(yōu)選地，n選自2、3、4、5、6、7、8、9或10)。優(yōu)選地，所述反式半乳糖寡糖的糖是卩-連接的。反式半乳糖寡糖(TOS)例如存在于以商標(biāo)VivinalTM(BorculoDomoIngredients,荷蘭)進(jìn)行銷(xiāo)售的組合物中。其它適當(dāng)?shù)腡OC來(lái)源是Cup-oligo和Bi2muno。不娜雄絲、河激雄激為了獲得關(guān)于腸道菌群和/或嬰兒免疫系統(tǒng)或腸道菌群(的改善)，孕婦陰道菌群和/或免疫系統(tǒng)(的改善)的更佳效果，本發(fā)明的組合物優(yōu)選地包含兩種在結(jié)構(gòu)上互不相同的，不同的水溶性、不可消化的糖。每一種水溶性、不可消化的糖都可用腸道和/或陰道菌群和/或腸道不同位置中的不同種類(lèi)的微生物進(jìn)行發(fā)酵，從而導(dǎo)致菌群的改善和細(xì)菌更加多樣化。本發(fā)明提供了優(yōu)選地包含水溶性、不可消化的糖A和水溶性、不可消化的糖B的組合物。糖A和糖B具有不同的糖苷鍵、不同的聚合度和/或不同的單糖組成。優(yōu)選地，糖A是GAL-oligo。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，糖A中選自葡萄糖、果糖和半乳糖的至少一個(gè)單糖單位的百分比要比糖b中相同單糖單位的百分比高至少40%，優(yōu)選至少50%、更優(yōu)選至少75%，甚至更優(yōu)選至少90%。單糖單位多樣性的增加能夠刺激更為廣泛的腸道(有益)細(xì)菌群，從而使菌群得以改善。所述糖中單糖單位的百分比可簡(jiǎn)單地通過(guò)用存在于所述糖中的各單糖單位(例如，葡萄糖)的數(shù)量除以存在于所述糖中的單糖單位的總數(shù)計(jì)算。優(yōu)選地，水溶性、不可消化的糖A和B具有介于2和200之間的聚合度(DP)。優(yōu)選地，至少80wt。/。，更優(yōu)選至少95wtn/。，最優(yōu)選至少98wt。/。累積重量的水溶性、不可消化的糖A和B具有低于100，更優(yōu)選低于60，最優(yōu)選低于40的聚合度(DP)。較低的DP可有益地降低粘度并增加不可消化的糖的可發(fā)酵性。優(yōu)選地，至少50wt%，更優(yōu)選至少75wtn/。累積重量的水溶性、不可消化的糖A和B具有2-8的DP。通過(guò)使用具有高重量百分比的具有低DP的糖，將提高可發(fā)酵性和對(duì)乳酸細(xì)菌和雙歧桿菌的生長(zhǎng)的刺激效應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，水溶性、不可消化的糖A的DP比水溶性、不可消化的糖B的DP要低至少5個(gè)，優(yōu)選至少10個(gè)，甚至更優(yōu)選至少15個(gè)單糖單位。包括聚合度增加的糖能降低滲透負(fù)載，并導(dǎo)致沿結(jié)腸的發(fā)酵延長(zhǎng)，從而同樣在結(jié)腸的更末端部分改善對(duì)有益細(xì)菌的刺激。優(yōu)選地，水溶性、不可消化的糖A具有2-10(更優(yōu)選2-8)的DP。優(yōu)選地，水溶性、不可消化的糖B具有11-100的DP。具有不同DP的水溶性、不可消化的糖A和B可具有相同或略有不同的單糖組成，優(yōu)選為不同的單糖組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，水溶性、不可消化的糖A的至少一種糖苷鍵占存在于糖A中的總糖苷鍵的百分比，比在水溶性、不可消化的糖B中相同糖苷鍵的百分比高至少40%，優(yōu)選至少50%，甚至更優(yōu)選至少75%。本發(fā)明中所用術(shù)語(yǔ)"糖苷鍵"指通過(guò)脫水在兩個(gè)環(huán)狀單糖單位的環(huán)之間形成的C-O-C鍵。糖苷鍵多樣性的增加刺激更廣范圍的有益細(xì)菌。糖苷鍵之間的區(qū)別在于其在單糖單位的不同編號(hào)位置共價(jià)結(jié)合碳原子，和/或其形成a或(3鍵。出現(xiàn)在水溶性、不可消化的糖中的不同糖苷鍵的實(shí)例有P(l,3)、a(1,4)、(3(2,1)、(x(1,2)和卩(1，4)鍵。優(yōu)選地，水溶性、不可消化的糖A中的糖苷鍵包含至少40%(更優(yōu)選至少75%)的P(1,4)糖苷鍵。水溶性、不可消化的糖B中的糖苷鍵優(yōu)選包含至少40%(更優(yōu)選至少75%)的|3(2，1)糖苷鍵。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物含有Gal-oligo與選自由果聚糖(例如，菊粉)組成的組的水溶性、不可消化的糖的組合，更優(yōu)選具有介于2和10之間的平均DP的GAL-oligo與選自果聚糖和果寡糖的水溶性、不可消化的糖的組合，最優(yōu)選反式半乳糖寡糖和菊粉的組合。優(yōu)選地，糖A和糖B的重量比為3/97至97/3，更優(yōu)選5/95至95/5。以充分相對(duì)比例存在的糖A和B將對(duì)菌群具有更佳的效果。最優(yōu)選地，糖A與B的重量比為2/3至95/5。更優(yōu)選略微過(guò)量的糖A(優(yōu)選GAL-oligo和/或寡糖)，因?yàn)檫@將對(duì)菌群具有更佳的效果。長(zhǎng)鏈多不齒浙臘嚴(yán)麼^C-/^E4)優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物額外包含長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸和/或長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酰基鏈(LC-PUFA)。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)LC-PUFA涉及20或更多個(gè)碳原子長(zhǎng)以及至少兩個(gè)不飽和鍵的脂肪酸或脂肪?；?。優(yōu)選地，所述組合物包含選自二十碳五烯酸和/或酰基鏈(EPA)、二十二碳六烯酸和/或?；?DHA)和花生四烯酸和/或?；?AA)的LC-PUFA。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物包含DHA。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物包含AA。更優(yōu)選地，所述組合物包含DHA和AA。LC-PUFA有益地增強(qiáng)待出生嬰兒的免疫系統(tǒng)。因此，與單獨(dú)施用水溶性、不可消化的糖相比，給孕婦施用包含水溶性、不可消化的寡糖和LC-PUFA的組合物對(duì)嬰兒免疫系統(tǒng)具有改善的效果。EPA/DHA的重量比優(yōu)選為1或更低，更優(yōu)選低于0.5。LC-PUFA可以游離脂肪酸、以甘油三酯的形式、以磷脂的形式、或以一或多種上述形式的混合物提供。本發(fā)明的組合物優(yōu)選地包含以磷脂形式存在的AA和DHA中的至少一種。優(yōu)選地，DHA與AA的重量比介于0.1和20之間，更優(yōu)選介于0.5和5之間。優(yōu)選地，所述組合物包含每日劑量50至3000mg(更優(yōu)選100至1500mg，最優(yōu)選200至500mg)的LC-PUFA。微成分在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述組合物額外地包含益生菌。在本發(fā)明中，益生菌是指這樣的微生物，其在施用后能夠?qū)τ谒拗鳟a(chǎn)生有益效果。益生菌對(duì)孕婦的腸道菌群、陰道菌群和/或免疫系統(tǒng)以及她們待出生的嬰兒具有有益效果，因此水溶性、不可消化的糖和益生菌的組合將對(duì)二者的腸道菌群和/或免疫系統(tǒng)具有上佳的效果。優(yōu)選地，所述益生菌選自乳桿菌屬和雙歧桿菌屬。更優(yōu)選地，所述益生菌選自嗜酸乳桿菌(丄acoZ^c/〃t/sac/fito//n71^)類(lèi)群、鼠李糖乳桿菌(丄.W2ammww力、干酷乳桿菌(丄.cme/)、類(lèi)干酪乳桿菌(￡.;arac"w')、植物乳桿菌(丄.p/a"ton/m)、路氏乳桿菌(丄."w&W)、發(fā)酵乳桿菌(丄./em7e"mw)、嬰兒雙岐桿菌(^/^okicteWwmf"/a"fe)、動(dòng)物雙歧桿菌乳制品亞種(及a"/附a//51swZw/./acf/s)、失豆觀(guān)歧桿菌(丑.6reve)、長(zhǎng)雙歧桿菌/o"gw附)和雙歧雙歧桿菌(及6折^W7)。甚至更優(yōu)選地，所述益生菌是類(lèi)干酪乳桿菌和/或短雙歧桿菌，因?yàn)槭┯盟苄?、不可消化的糖能夠在相同程度上?duì)大多數(shù)種類(lèi)的乳桿菌和雙歧桿菌類(lèi)群進(jìn)行刺激，但對(duì)短雙歧桿菌和類(lèi)干酪乳桿菌的刺激程度較低。由于雙歧桿菌在嬰兒腸道菌群中比乳桿菌更具有統(tǒng)治地位，所以短雙歧桿菌是最優(yōu)選的。優(yōu)選地，益生菌在每日劑量中含每種不同的益生菌1x106菌落形成單位(cfu)至1x1013cfb，更優(yōu)選1x107至1x1011，最優(yōu)選1x108至1x101Q。所述組合物額外地包含對(duì)孕婦有益的維生素和礦物質(zhì)。通常，包含維生素和礦物質(zhì)的添加劑會(huì)被孕婦出于自身或胎兒的利益而攝取。在本發(fā)明中的組合物中包括這些維生素和礦物質(zhì)方便地降低了孕婦待攝取的組合物的量。優(yōu)選地，所述組合物包含選自葉酸、維生素Bl、維生素B2、維生素B6、維生素A、維生素D、鐵、鋅和碘的至少一種成分，更優(yōu)選至少三種成分，最優(yōu)選至少六種成分。優(yōu)選地，這些成分在每曰劑量中含推薦的每日供給量(RDA)的25-100%,更優(yōu)選介于45-100°/。。優(yōu)選地，維生素A以|3-胡蘿卜素進(jìn)行補(bǔ)充。邀合笏可以棒(bar)、膠囊、片劑、液體或粉末的形式給孕婦施用包含所述水溶性、不可消化的糖的組合物。優(yōu)選地，所述組合物是基于乳的液體，其包含脂肪、蛋白質(zhì)和可消化的碳水化合物。優(yōu)選地，所述基于乳的液體的脂肪含量低于2g/1以保持待消耗的卡路里數(shù)量較低。優(yōu)選地，這一基于乳的液體可被包裝成體積為50至1000mL(更優(yōu)選60至500mL，最優(yōu)選75至125mL)的容器或菱角包(tetrapack)中。優(yōu)選地，所述組合物是水活度低于0.8(優(yōu)選低于0.65)的棒，即可咀嚼的固體。優(yōu)選地，所述組合物為粉末，其被包裝在包含1至10g(更優(yōu)選1.5至7g，最優(yōu)選2至5g)的粉末的小藥效量在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選地將本發(fā)明的糖以介于0.5g/天和50g/天(優(yōu)選介于3g/天和25g/天，最優(yōu)選介于6g/天和12g/天)的量施用給孕婦。優(yōu)選地，按每日一份施用這一每日劑量。優(yōu)選地，將這一每日劑量分成2或3或4份，每天分別使用2、3或4次。優(yōu)選地，可在預(yù)產(chǎn)期(duedelivery)之前給孕婦施用所述組合物至少2周，更優(yōu)選至少6周，最優(yōu)選至少12周。鵬當(dāng)下文中涉及特定的治療方法時(shí)，所述方法包括給孕婦施用有效量的上面所描述的組合物或施用有效量的至少水溶性、不可消化的糖，這還涉及至少一種水溶性、不可消化的糖用于制備用于所述目的組合物的用途。兩種本發(fā)明的用詞方式同樣被諸如本發(fā)明的組合物可用于某種目的或本發(fā)明的組合物的施用可用于某種目的這樣的措辭所涵蓋。本發(fā)明提供了用于改善嬰兒腸道菌群和/或免疫系統(tǒng)的方法，所述方法包括向懷有所述嬰兒的孕婦施用本發(fā)明的組合物(即，包含水溶性、不可消化的糖的組合物)。在一個(gè)實(shí)施方式中，嬰兒的免疫系統(tǒng)得到加強(qiáng)。在本發(fā)明中加強(qiáng)免疫系統(tǒng)涉及免疫系統(tǒng)的改善、刺激和/或增強(qiáng)。優(yōu)選地，所述改善、刺激和/或增強(qiáng)是相對(duì)于對(duì)照組而言的，其在本發(fā)明的上下文中指相對(duì)于未攝取水溶性、不可消化的糖的孕婦。本發(fā)明人觀(guān)察到施用水溶性、不可消化的糖可將新生兒免疫系統(tǒng)引向Thl應(yīng)答和/或改善Thl/Th2平衡。發(fā)現(xiàn)在分娩前未出生兒童的免疫系統(tǒng)是通過(guò)增強(qiáng)受體CD14和TLR2所激發(fā)的。在一個(gè)實(shí)施方式中，給孕婦施用水溶性、不可消化的糖被用于預(yù)防嬰兒中特應(yīng)性疾病的發(fā)生。在一個(gè)實(shí)施方式中，給孕婦施用所述組合物以在嬰兒中預(yù)防變態(tài)反應(yīng)(即，食物變態(tài)反應(yīng))、濕疹(即，特應(yīng)性皮炎)、哮喘、鼻炎、枯草熱、鼻結(jié)膜炎和/或喘鳴(最優(yōu)選變態(tài)反應(yīng)和/或特應(yīng)性皮炎)的發(fā)病和/或降低其嚴(yán)重性。濕疹(即，特應(yīng)性皮炎)的特征為干燥和/或發(fā)紅和/或瘙癢的皮膚。在一個(gè)實(shí)施方式中，給孕婦施用水溶性、不可消化的糖被用于改善嬰兒的腸道菌群。施用本發(fā)明的組合物可被包括在用于在出生后增強(qiáng)結(jié)腸和/或糞便中的雙歧桿菌和/或乳桿菌占存在于嬰兒菌群和/或糞便中的總細(xì)菌的百分比的實(shí)施方式中。富含雙歧桿菌和/或乳桿菌的菌群可加強(qiáng)嬰兒的免疫系統(tǒng)并增進(jìn)胃腸健康。與其母親在妊娠期未攝取包含水溶性、不可消化的糖的本發(fā)明的組合物的嬰兒的胃腸健康相比，改善的胃腸健康涉及胃腸感染的發(fā)生率降低、腸道感染的持續(xù)時(shí)間更短、胃腸炎癥的發(fā)生率和嚴(yán)重性降低、腹瀉的發(fā)生率和/或嚴(yán)重性降低、便秘的減少、或痙攣的減少。在本發(fā)明的上下文中，"加強(qiáng)"或"加強(qiáng)的"以及"改善"和"改善的"是相對(duì)于其母親在妊娠期未攝取包含水溶性、不可消化的糖的本發(fā)明的組合物的嬰兒而言的或是相對(duì)于未攝取包含水溶性、不可消化的糖的本發(fā)明的組合物的孕婦而言的。加強(qiáng)的免疫系統(tǒng)將對(duì)特應(yīng)性疾病和/或呼吸道感染具有預(yù)防作用。在一個(gè)實(shí)施方式中，給孕婦施用本發(fā)明的組合物被用于在出生后的嬰兒中預(yù)防選自變態(tài)反應(yīng)(即，食物變態(tài)反應(yīng))、濕疹(B卩，特應(yīng)性皮炎)、哮喘、鼻炎、枯草熱、鼻結(jié)膜炎、喘鳴、腸道感染、陰道感染、呼吸道感染、腹瀉、便秘、痙攣和腸道炎癥的疾病和/或降低其嚴(yán)重性。在一個(gè)實(shí)施方式中，給孕婦施用本發(fā)明的組合物被用于預(yù)防出生后嬰兒的選自腸道感染、呼吸道感染、腹瀉、便秘、痙攣和/或腸道炎癥的疾病。本發(fā)明還包括具有指明在使用所述組合物之后孕婦能夠給予其嬰兒出生后的最佳開(kāi)始，例如，關(guān)于腸道定植、腸道菌群、菌群組合和/或免疫系統(tǒng)(例如免疫防御或加強(qiáng)的或改善的或增強(qiáng)的或被刺激的免疫性)的文字的、包含本發(fā)明的組合物的包裝。在一個(gè)實(shí)施方式中，施用本發(fā)明的組合物用于改善孕婦的免疫系統(tǒng)。在一個(gè)實(shí)施方式中，施用包含水溶性、不可消化的糖(優(yōu)選包含兩種不同的水溶性、不可消化的糖)的本發(fā)明的組合物被用于加強(qiáng)孕婦的免疫系統(tǒng)、腸道菌群和/或陰道菌群。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，施用優(yōu)選包含兩種不同的水溶性、不可消化的糖的本發(fā)明的組合物被用于增強(qiáng)孕婦腸道和/或陰道中乳桿菌和/或雙歧桿菌占總細(xì)菌的百分比。由于在妊娠期間陰道菌群紊亂經(jīng)常發(fā)生，因此這是至關(guān)重要的，且病原體的過(guò)度生長(zhǎng)和陰道微生物微環(huán)境的破壞可通過(guò)乳桿菌的穩(wěn)定定植而得以預(yù)防。實(shí)施例實(shí)厳O游棘驗(yàn)對(duì)總共33位妊娠的健康志愿者進(jìn)行具有平行組設(shè)計(jì)的CA預(yù)期性、雙盲、隨機(jī)化、安慰劑對(duì)照研究。她們從妊娠第25周開(kāi)始接受實(shí)驗(yàn)添加劑或安慰劑直至分娩。所述實(shí)驗(yàn)添加劑是基于不可消化的寡糖，并包含3gGOS(來(lái)自VivinalGOS,BorculoDomo，荷蘭)+菊粉(RaftilinHP，Orafti,比利時(shí))(9:1的wt/wt比)以及3g可消化的麥芽糊精。這一添加劑每天攝取3次。對(duì)照組添加劑由6g可消化的麥芽糊精組成。在進(jìn)行第一次添加劑施用前，在妊娠第25周采集糞便樣本。在最后一次分娩前的標(biāo)準(zhǔn)化常規(guī)醫(yī)院檢査之后采集第二次糞便樣本。在分娩時(shí)，從胎盤(pán)臍靜脈采集一份臍帶血樣本。在分娩后的第5天、20天和6個(gè)月采集新生兒的糞便樣本。通過(guò)FISH和實(shí)時(shí)PCR分析母體和新生兒糞便樣本的微生物菌群。可使用FACS分析和用有絲分裂原和變應(yīng)原進(jìn)行體外刺激檢測(cè)對(duì)臍帶血(CB)進(jìn)行表型表征?？墒褂帽绢I(lǐng)域公知的方法測(cè)定以下參數(shù)a)先天免疫應(yīng)答NKT細(xì)胞、單克隆T細(xì)胞受體的頻率(g卩，Va24JaQTCR的同源N-區(qū)域、Toll樣受體表達(dá)細(xì)胞的定量(TLR2、TLR4);粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。NK細(xì)胞活性。b)適應(yīng)性免疫應(yīng)答采用四色細(xì)胞計(jì)量術(shù)進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群分析。在非刺激細(xì)胞中與TH1/TH2相關(guān)的mRNA細(xì)胞因子和趨化因子受體模式(TNF-a、INF-g、IL-4、IL-8、IL-IO、IL-12、IL-13、TGF卩、CD25、CD45RA、CD45RO、CTLA-4、CCR3、CCR4、CCR5、CXCR3)的表征通過(guò)實(shí)時(shí)RTPCR和之后使用ConA/PHA和LPS離體進(jìn)行全血刺激進(jìn)行測(cè)定。對(duì)在CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群中產(chǎn)生THl/TH2-細(xì)胞因子的比例分析進(jìn)行了確定。從28位分娩者獲得胎盤(pán)臍帶(cortical)血樣本，并用伴刀豆球蛋白A(ConA)/(PHA)、脂多糖(LPS)、葡萄球菌腸毒素B(SEB)、P-乳球蛋白(BLG)、來(lái)自i^rwafcip/zago/ofespfera";^^"z^的主要屋塵螨變應(yīng)原(Derpl)、卵清蛋白(Ova)刺激24小時(shí)。用適當(dāng)稀釋的抗人CD4、CD8、CD45RA、CD45RO、CD25、CD69、CCR4、CCR5、CD14、CCR1、CCR2、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CRTH2的FITC畫(huà)、PE國(guó)、PC5-或APC-標(biāo)記的單克隆抗體和適當(dāng)?shù)耐N型對(duì)照對(duì)CBT淋巴細(xì)胞(5(^1全血樣本)進(jìn)行染色。染色后，污染的紅細(xì)胞被裂解。對(duì)CD4+T輔助細(xì)胞(Th)群中趨化因子受體(CKR+)和表達(dá)CKR+CD45RA+的淋巴細(xì)胞的百分比，以及CD4+CD45RA+群中表達(dá)CKR+的細(xì)胞的百分比進(jìn)行分析。在CD8+T細(xì)胞毒性(Tc)和CD8+CD45RA+淋巴細(xì)胞群中進(jìn)行相同的分析程序。對(duì)CXCR4，確定其平均熒光強(qiáng)度(MFI)。測(cè)定T調(diào)節(jié)細(xì)胞上CD4+CD25s表達(dá)。全CB刺激分析在RPMI-1640中將肝素化的CB稀釋1-5倍。在24-孔培養(yǎng)板中用伴刀豆球蛋白A(ConA5(Hig/mL)、P-乳球蛋白(100ng/mLBLG)、卵清蛋白(100pg/mLOVA)、月旨多糖(0.1(ig/mLLPS)、葡萄球菌腸毒素B(0.1|ig/mLSEB)、Z)mwa鄉(xiāng)/ago/cfes/fera"戸/""51(10|ig/mLDerpl)或單獨(dú)用培養(yǎng)基刺激lmL經(jīng)稀釋CB等分試樣。將細(xì)胞于37°C、在5%C02氣氛中溫育24小時(shí)或48小時(shí)，并將上清液儲(chǔ)存于-80。C用于細(xì)胞因子分析。多重分析用人多重化、基于顆粒的流式細(xì)胞分析對(duì)培養(yǎng)物上清液中的細(xì)胞因子進(jìn)行定量。無(wú)須進(jìn)一步稀釋即可對(duì)上清液中的TNF-a、INF-y、IL-1卩、IL-2、IL-4、IL-IO、GM-CSF、G-CSF濃度進(jìn)行直接測(cè)定。為測(cè)定IL-6、IL-8、MCP-1和MIP-ip，將上清液按l:10進(jìn)行稀釋于RPMI中。相對(duì)于陰性對(duì)照，對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)的差異進(jìn)行測(cè)定并將濃度標(biāo)準(zhǔn)化為從全血計(jì)數(shù)獲得的淋巴細(xì)胞(對(duì)于IL-2)和總白細(xì)胞(對(duì)于所有其他細(xì)胞因子)的數(shù)目(pg/mL/10E3個(gè)細(xì)胞)。盡管在補(bǔ)充開(kāi)始之前，在母體微生物菌群組合中存在大的個(gè)體內(nèi)變異，總細(xì)菌負(fù)載以及每毫升雙歧桿菌和乳桿菌的細(xì)胞中值數(shù)在兩組之間沒(méi)有差異。但是，在使用包含GOS和菊粉的添加劑進(jìn)行補(bǔ)充后，在孕婦糞便菌群中觀(guān)察到總雙歧桿菌和乳桿菌所占百分比增加。參見(jiàn)表1。在母親糞便樣本中，在補(bǔ)充前和補(bǔ)充后，在兩組中最常見(jiàn)的種類(lèi)是鏈狀雙歧桿菌(5.c^e"w/a化m)、嬰兒雙岐桿菌和嗜酸乳桿菌。在分娩后第5天，來(lái)自實(shí)驗(yàn)組母親所生嬰兒的糞便中含有7.4%的乳桿菌(n=17，s.e.3.0);而在分娩后第5天，來(lái)自對(duì)照組母親所生嬰兒的糞便僅含有2.4%的乳桿菌(n=16，s.e.0.9)。嬰兒的組內(nèi)比較表明從第20天至第182天，安慰劑組中乳桿菌的數(shù)量明顯增加[p=0.038;pW]。這一結(jié)果可通過(guò)FISH分析[p=0.018;pW]進(jìn)行確認(rèn)。從第20天至第182天，安慰劑組中對(duì)嗜酸乳桿菌表現(xiàn)為陽(yáng)性的新生兒的百分比有所增加[p=0.016]。這一區(qū)別可通過(guò)qPCR分析進(jìn)行確認(rèn)(p二0.012)。在實(shí)驗(yàn)組中，對(duì)臍帶血的FACS分析揭示在CD14+單核細(xì)胞上TLR2+的平均熒光強(qiáng)度水平明顯降低(p<0.05)。改變的CD14+和TLR2+表達(dá)水平表明，分娩前新生兒免疫系統(tǒng)在分娩后指向了更快速的Thl應(yīng)答。表l使用GOS和菊粉的混合物(實(shí)驗(yàn)組)或麥芽糊精(對(duì)照組)的孕婦糞便中的雙歧桿菌和乳桿菌的百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>a采用FISH對(duì)雙歧桿菌進(jìn)行定量，通過(guò)實(shí)時(shí)PCR對(duì)乳桿菌進(jìn)行定bt=l:在妊娠第25周，進(jìn)行補(bǔ)充之前；t=2:在分娩前進(jìn)行最后一次醫(yī)院檢査時(shí)。c統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，p<0.05，在^1和1=2之間。d統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，p<0.05，在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間。為檢測(cè)母體益生菌補(bǔ)充是否影響胎兒的免疫性，進(jìn)行廣泛的表型淋巴細(xì)胞亞群分析。CBCD4+T輔助(Th)細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞毒性(Tc)細(xì)胞主要表達(dá)初始(CD45RA+)表型(>84%)，而表達(dá)CD45RO+少于13%。CD4+/CD8+的比例以及CD4+CD45RA+、CD8+CD45RA+、CD4+CD45RO+和CD4+CD45RO+的百分比在出生前組和安慰劑組之間不存在明顯的差異。與CCR7+(87.3%)細(xì)胞的高頻率不同，所有其它的CKR都以非常低的頻率在CD4+和CD8+細(xì)胞上表達(dá)。CXCR4的MFI在CD4+和CD8+亞群上均高，而CXCR3僅在CD8+細(xì)胞上以高的頻率進(jìn)行表達(dá)。對(duì)CD4+、CD8+、CD4+CD45RA+和CD8+CD45RA+CBT細(xì)胞亞群中的CKR+淋巴細(xì)胞的頻率，以及在不同CD4+和CD8+亞群中Thl/Th2比例(CXCR3/CCR4禾QCCRi/CCR4)的分析，在兩組之間未表現(xiàn)出明顯的差異。兩組中，早期活化標(biāo)記物CD69以及晚期活化標(biāo)記物CD25以類(lèi)似的水平在不同的CD4+亞群上表達(dá)(數(shù)據(jù)未顯示)。未觀(guān)察到表達(dá)CD25胃的CD4+T細(xì)胞亞群的頻率存在差異(中值1.5Vs1.4;p=0.683)。對(duì)由有絲分裂原和變應(yīng)原刺激了24小時(shí)的全CB培養(yǎng)物產(chǎn)生的衍生自白細(xì)胞的細(xì)胞因子譜進(jìn)行的比較分析揭示了細(xì)胞因子表達(dá)的典型模式。當(dāng)分析通過(guò)不同刺激(除G-CSF外(對(duì)Derpl、BLG和OVA而言p<0.03))誘導(dǎo)的細(xì)胞因子濃度時(shí)，在兩個(gè)補(bǔ)充組之間未觀(guān)察到明顯的區(qū)別。這些結(jié)果表明，采用水溶性、不可消化的糖進(jìn)行補(bǔ)充能夠?qū)е略袐D的腸道微生物菌群中雙歧桿菌和乳桿菌的百分比增加。這導(dǎo)致出生期間嬰兒腸道的乳桿菌和/或雙歧桿菌接種情況以及出生后定植情況的改善。尤其，出生后短時(shí)期內(nèi)乳桿菌的存在很重要，因?yàn)槿闂U菌具有使結(jié)腸酸化的高的能力，由此使得隨后的腸道環(huán)境更加適于雙歧桿菌而較不適合腸病原體。此外，這些結(jié)果表明這樣的補(bǔ)充能夠改善未出生嬰兒以及出生期間和出生后嬰兒的免疫系統(tǒng)。實(shí)施例2包裝于100mL容器中的lOOmL基于液體乳的組合物包含-8.1g反式半乳糖寡糖，(來(lái)自VivinalGOS)-0.9g果聚糖(來(lái)自RaftilineHP)-750mg魚(yú)油和月見(jiàn)草油，包含令300mgDHA今42mgEPA今8.4mgAA今8.4mg二十二碳五烯酸(DPA)今15mgY亞油酸(GLA)權(quán)利要求1.水溶性、不可消化的糖用于制備用于i)改善出生后嬰兒的腸道菌群發(fā)育；ii)加強(qiáng)出生前嬰兒的免疫系統(tǒng)；和/或iii)加強(qiáng)出生后嬰兒的免疫系統(tǒng)和/或預(yù)防出生后嬰兒的免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病的組合物的用途，其中將所述組合物施用給懷有所述嬰兒的孕婦。2.權(quán)利要求l的用途，其中所述糖以0.5g/天至50g/天的劑量，在預(yù)產(chǎn)期前給藥至少2周。3.前述權(quán)利要求的用途，用于促進(jìn)出生后嬰兒腸道細(xì)菌定植和/或提高出生后嬰兒結(jié)腸和/或糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌占總細(xì)菌的百分比。4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，用于預(yù)防選自變態(tài)反應(yīng)、濕疹、哮喘、鼻炎、枯草熱、鼻結(jié)膜炎、喘鳴、腸道感染、陰道感染、呼吸道感染、腹瀉、便秘、痙攣和腸道炎癥中至少一種病癥。5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述糖包含占存在于所述糖中的單糖單位總數(shù)至少50%的半乳糖單糖單位。6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述糖選自反式半乳糖寡糖、半乳糖寡糖、乳-N-四糖(LNT)、乳-N-新四糖(neoLNT)、巖藻糖基乳糖、巖藻糖化LNT和巖藻糖化neoLNT、以及cx-半乳糖寡糖，優(yōu)選反式半乳糖寡糖。7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述組合物包含水溶性、不可消化的糖A和水溶性、不可消化的糖B，其中糖A和糖B具有i)不同的糖苷鍵，ii)不同的聚合度，和/或iii)不同的單糖組成。8.權(quán)利要求7的用途，其中糖A包含占存在于糖A中單糖單位總數(shù)至少50%的半乳糖單位，且其中糖B選自果聚糖和果寡糖，優(yōu)選菊粉。9.水溶性、不可消化的糖用于制備用于i)加強(qiáng)孕婦的免疫系統(tǒng)；ii)改善孕婦的腸道菌群；和/或iii)改善孕婦的陰道菌群；的組合物的用途，其中將所述組合物施用給孕婦。10.權(quán)利要求9的用途，其中所述糖是包含半乳糖的糖，所述糖包含占存在于該糖中單糖單位總數(shù)至少50%的半乳糖單位，且所述糖選自果聚糖和果寡糖，優(yōu)選菊粉。全文摘要本發(fā)明涉及包含水溶性、不可消化的糖的用于孕婦的食品或添加劑。所述組合物用于改善孕婦的菌群和/或免疫系統(tǒng)，改善嬰兒的免疫系統(tǒng)，以及改善出生后嬰兒的腸道菌群。文檔編號(hào)A61P11/00GK101420966SQ200780012933公開(kāi)日2009年4月29日申請(qǐng)日期2007年3月9日優(yōu)先權(quán)日2006年3月10日發(fā)明者B·施塔爾,C·貝爾曼,G·伯姆,J·克諾爾,M·S·阿列斯申請(qǐng)人:紐崔西亞公司