專利名稱：整合素阻斷劑多肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制血管生成、具有整合素親和性和結(jié)合能力的整合素阻斷劑，此阻斷劑包括兩種多肽，該整合素阻斷劑多肽可用于實(shí)體腫瘤和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。
背景技術(shù)：
近年我國(guó)腫瘤的發(fā)病率和病死率不斷增長(zhǎng)。無(wú)限制生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤的惡性標(biāo)志和特征，也是導(dǎo)致治療失敗和死亡的主要原因。因此，控制腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移 是改善預(yù)后，提高生存率的主要措施。1971年Folkman首先提出腫瘤生長(zhǎng)依賴血管新生的理論，腫瘤血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)，它不僅向腫瘤提供營(yíng)養(yǎng)，也向宿主輸出大量的腫瘤細(xì)胞導(dǎo)致腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。絕大多數(shù)惡性實(shí)體腫瘤如卵巣癌、肝癌、宮頸癌和乳腺癌等都是血管依賴性腫瘤。新生血管一方面為腫瘤生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，另一方面還是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要途徑。因此，抑制腫瘤血管形成是重要的抗癌措施。整合素是ー類廣泛分布于細(xì)胞表面的受體，能介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的黏附，它們通過(guò)連接胞內(nèi)細(xì)胞骨架蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)分子的相互作用參與血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移。目前至少有8種的整合素(al@l、a2M、a3M、a6M、a6@4、a5M、a v旦3、a V ^ 5)參與腫瘤血管生成，其中a V P 3發(fā)揮著重要作用。a v P 3由a v亞基(⑶51，150kD)和￠3亞基(⑶61，105kD)形成的跨膜異ニ聚體糖蛋白，又名VN受體。a v ￠3能識(shí)別配體分子中的精-甘-天冬序列(arg-gly-asp, RGD)。a v ￠3可以表達(dá)于多種細(xì)胞類型，并與多細(xì)胞活動(dòng)過(guò)程中的多種配體結(jié)合，參與腫瘤的血管生成，侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。含有RGD序列的多肽具有整合素拮抗劑作用，能減少細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制腫瘤血管生成從而抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。因此，以整合素為靶點(diǎn)的整合素阻斷劑能夠阻斷整合素的下游的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，可有效地抑制腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，在腫瘤治療中具有廣闊的應(yīng)用前景。目前，國(guó)際上開(kāi)發(fā)出的整合素阻斷劑已進(jìn)入II期臨床，而我國(guó)尚未有相似或同類產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)，非常有必要開(kāi)發(fā)我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的此類藥物。先前的專利ZL200610039298. 2血管生成抑制多肽及其制備方法和應(yīng)用，主要是通過(guò)對(duì)整合素第6_49個(gè)氨基酸進(jìn)行改造和修飾，修飾改造后的多肽具有比內(nèi)皮抑素更好的體內(nèi)活性和腫瘤靶向性。其介紹了幾種整合素抑制劑，其中有兩個(gè)為Arg-Gly-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-CyS-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Phe (簡(jiǎn)稱EDSM-1，見(jiàn) Seq NO. 4)Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Phe-Gly-Gly-Gly-Gly-Ala-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys (簡(jiǎn)稱EDSM-2，見(jiàn)Seq NO. 5)。這兩個(gè)序列包含了整合素配體序列Arg-Gly-Asp和 Gly-Gly-Gly-Gly-Ala-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys (見(jiàn) Seq NO. 6)和新生血管抑IfjlJ 序歹I」 (Phe_Gln_Pro_Val_Leu_His_Leu_Val—Ala_Leu—Asn_Ser_Pro_Leu_Ser_Gly_Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Phe,見(jiàn) Seq NO. 7)。先前專利中只是對(duì)多肽 EDSM-1 和EDSM-2的克隆、原核表達(dá)載體的構(gòu)建和EDSM-I治療肝癌和胃癌進(jìn)行了初歩研究。本發(fā)明針對(duì)內(nèi)皮抑素序列做了進(jìn)ー步研究，發(fā)現(xiàn)整合素第6-48個(gè)氨基酸具有更好的抑制血管生成的作用，并對(duì)其進(jìn)行了修飾，修飾后的多肽是在血管生成抑制序列Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Aia-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Giy-Met—Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala(見(jiàn)Seq NO. I)的N端/C端加上了整合素配體序列(Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly)構(gòu)建了兩種整合素阻斷劑即多妝 II (Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-CyS-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala (見(jiàn) SeqNO. 2))和多妝 III (Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser- Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp(見(jiàn) Seq NO. 3)),其中整合素配體序列中含有RGD序列(Arg-Gly-Asp)，使該多肽序列可以有效地結(jié)合于腫瘤特異性表達(dá)的整合素亞型，并且該序列中含有新生血管抑制序列，能夠抑制腫瘤新生血管形成，進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的效果。新設(shè)計(jì)的多肽序列多肽II和多肽III是具有靶向結(jié)合作用和親和性的整合素阻斷劑，并發(fā)現(xiàn)其對(duì)多種腫瘤有治療作用，増加了適用癥，拓展了其社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是臨床最常見(jiàn)的炎性關(guān)節(jié)病和主要致殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%,RA的發(fā)病在我國(guó)約為0.4%。RA可發(fā)生于任何年齡，隨著年齡的增長(zhǎng)，發(fā)病率也隨之增高。女性高發(fā)年齡為45-55歲，性別與RA發(fā)病關(guān)系密切，男女之比約I : 3。RA是ー種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對(duì)稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病?；颊叱Ｒ允植炕蛲蟛刻弁醇澳[脹(特別是腕背部的腫脹)為首發(fā)癥狀，癥狀持續(xù)不緩解，普通的對(duì)癥治療雖可以緩解癥狀，但常常由于用藥不規(guī)則或不足量而導(dǎo)致癥狀反復(fù)。病情進(jìn)展時(shí)可以出現(xiàn)明顯的晨僵，通?？蛇_(dá)I小時(shí)以上，并不斷加重；同時(shí)出現(xiàn)一定的關(guān)節(jié)功能障礙。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，其基本病理特點(diǎn)是血管炎和滑膜炎。關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜血管增生，形成血管翳，導(dǎo)致滑膜增厚，滲出增多，分泌多種細(xì)胞因子，侵犯軟骨并引起骨質(zhì)損害。對(duì)其周圍的肌腔、韌帶、腱鞘以及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響關(guān)節(jié)的穩(wěn)定，容易發(fā)生關(guān)節(jié)畸形而出現(xiàn)功能障礙。血管炎亦可侵犯周身各臟器組織，形成系統(tǒng)性疾病。目前治療RA的藥物分為兩大類控制癥狀藥和控制疾病藥?？刂瓢Y狀的抗風(fēng)濕藥分為四類一、非留體類抗炎藥，通常稱為ー線藥，這類藥物種類繁多，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)已多達(dá)數(shù)十種。ニ、類固醇激素，激素是ー個(gè)非常好的止痛抗炎藥，但長(zhǎng)期単獨(dú)使用不能改善病情，反而帶來(lái)許多副作用，激素作為ニ線慢作用藥起效前的過(guò)渡性用是可以的，但用量要小，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。在病情較重，伴有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)的患者，短期治療沖擊，并聯(lián)合ニ線藥治療時(shí)必須的。三、慢作用抗風(fēng)濕藥，通常稱為ニ線藥，所謂慢作用藥包括抗瘧藥、金鹽、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它們治療RA起效慢，長(zhǎng)期作用對(duì)RA病情有一定緩解作用，故也稱病情改善藥。四、免疫抑制劑常用有甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、雷公藤、青風(fēng)藤等。RA的病理過(guò)程中，血管新生是ー種標(biāo)志性的組織學(xué)改變，新生血管形成伴隨滑膜增生和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，是RA中血管翳形成及關(guān)節(jié)破壞的基礎(chǔ)。原來(lái)應(yīng)該沒(méi)有血管存在的關(guān)節(jié)軟骨因某種異常變化，而形成新的血管，使得軟骨受到侵蝕，造成關(guān)節(jié)變形或疼痛。新生血管引起類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜組織發(fā)生異常變化，正常人的關(guān)節(jié)滑膜內(nèi)層僅1-2層細(xì)胞組成，而RA患者的滑膜 內(nèi)層通常有4-10層細(xì)胞(有時(shí)甚至超過(guò)20層)。這些細(xì)胞不僅在數(shù)量上異常增多，而且在功能上處于異常活躍的狀態(tài)，它們可以分泌大量的細(xì)胞因子、信號(hào)分子和蛋白酶，加速關(guān)節(jié)破壞的進(jìn)程。另外，RA滑膜中還有大量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，如T細(xì)胞、B細(xì)胞和單核細(xì)胞。新生血管生成，在正常生理?xiàng)l件下，受到高度調(diào)節(jié)，在生殖、胚胎發(fā)育、組織修復(fù)和創(chuàng)傷愈合中是必不可少的過(guò)程。血管生成在多種病理?xiàng)l件下也會(huì)發(fā)生，所述病理?xiàng)l件包括腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移；炎性障礙，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、骨關(guān)節(jié)炎、炎性腸病、克隆病、潰瘍性結(jié)腸類以及其它炎性障礙。整合素是a V 0 3能識(shí)別配體分子中的精-甘-天冬序列(arg-gly-asp, RGD)并與多細(xì)胞活動(dòng)過(guò)程中的多種配體結(jié)合參與腫瘤的血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移、炎癥、傷ロ愈合和凝血等生理和病理過(guò)程。因此，含有RGD序列的多肽具有整合素拮抗劑作用，RGD序列可以作為ー種載體，靶向運(yùn)輸?shù)叫律軆?nèi)皮，從而對(duì)新生血管性疾病達(dá)到更高效率的治療。因此，血管抑制多肽通過(guò)抑制血管生成不僅可阻止向滑膜輸送氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，且直接導(dǎo)致血管退化，從而可能抑制RA滑膜增生。抑制新生血管的形成是治療這類疾病的關(guān)鍵，而內(nèi)皮細(xì)胞的増殖和遷移是新生血管形成的關(guān)鍵步驟。多肽II和多肽III含有RGD序列(Arg-Gly-Asp)，使該多肽序列可以有效地結(jié)合于整合素，并通過(guò)抑制胞內(nèi)細(xì)胞骨架蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)分子的相互作用，抑制細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互黏附，來(lái)抑制細(xì)胞與細(xì)胞外介質(zhì)及細(xì)胞與細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制血管生成。此外該序列中還含有新生血管抑制序列，研究發(fā)現(xiàn)其具有高效抑制新生血管生成的活性，特別是對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類疾病有很好的作用。血管抑制多肽針對(duì)抑制血管新生治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用靶點(diǎn)，為開(kāi)發(fā)新型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物提供新的研究方向。新設(shè)計(jì)的多肽序列多肽II和多肽III是對(duì)整合素具有靶向結(jié)合作用和親和性的多肽，前期研究發(fā)現(xiàn)多肽II和多肽III能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞的増殖、遷移、小管生成，并用流式細(xì)胞儀分析了多肽II和多肽III的作用靶點(diǎn)為整合素a V 03。后研究發(fā)現(xiàn)其還能抑制大鼠動(dòng)脈環(huán)的管狀結(jié)構(gòu)形成，并通過(guò)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了多肽II和多肽III的作用靶點(diǎn)為整合素a V ￠3，并發(fā)現(xiàn)其對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有治療作用，増加了適用癥，拓展了其社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明針對(duì)多肽I、多肽II和多肽III做了進(jìn)ー步研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)多種實(shí)體腫瘤和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有治療作用，増加了其適應(yīng)癥。
技術(shù)方案整合素阻斷劑多肽，其特征在于其氨基酸序列為X-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-GIy-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Y, X 的序列為缺失、Arg-Gly-Asp^Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly^ Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys 或 Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-CyS-Gly-Gly-Gly-Gly ；Y 的序列為缺失、Arg-Gly-Asp^Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly^ Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys 或 Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Glyo所述的整合素阻斷劑多肽，其特征在于所述的氨基酸序列為多妝I :Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多妝II Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-AIa-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-CyS-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多妝III Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp ；多妝IV Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-CyS-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu~Val-A_La-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-G_Ly-Met-Arg-Gly-I Ie-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-CyS-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多妝V Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-CyS-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe-GIn-Pro~Val-Leu-His-Leu~Val—Ala_Leu—Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-G _Ly-Gly—Met—Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多妝VI Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-GIy-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-VaI-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp ；多妝VII Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Arg-Gly-Asp ；多妝VIII Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys ；
多妝IX Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-GIy-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-VaI-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys ；
多妝X Arg-Gly-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-PrO-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala及其含有有效量上述多肽可接受的鹽，或必要時(shí)藥學(xué)上可接受的載體或者賦形劑。根據(jù)權(quán)利要求1、2任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為起源于人的頭頸部、腦部、甲狀腺、食管、胰腺、肺臟、肝臟、胃、乳腺、腎臟、膽囊、結(jié)腸或直腸、卵巣、子宮頸、子宮、前列腺、膀胱或睪丸的原發(fā)或繼發(fā)的癌、黑色素瘤以及肉瘤。根據(jù)權(quán)利要求1、2任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑多肽在制備治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)權(quán)利要求1、2任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑的制備方法，其特征在于所述的多肽是通過(guò)固相合成方法或通過(guò)重組表達(dá)體的方法制備而得。根據(jù)權(quán)利要求根據(jù)權(quán)利要求1、2任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑，其特征在于所述的多肽共價(jià)連接佐劑，佐劑是牛血清白蛋白、人血清白蛋白或聚こニ醇。根據(jù)權(quán)利要求4整合素阻斷劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物可通過(guò)多種給藥方式治療原發(fā)或繼發(fā)的癌、黑色素瘤及肉瘤，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，ロ服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑。有益效果I、先前專利ZL200610039298. 2報(bào)道了內(nèi)皮抑素第6_49個(gè)氨基酸具有較好的抗腫瘤作用，本發(fā)明對(duì)此做了大量研究，發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮抑素第6-48個(gè)氨基酸(多肽I，命名為EDSM，見(jiàn)SeqNO. I)具有更好的抗腫瘤作用，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)多肽I能有效治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，增強(qiáng)了適應(yīng)性，増加了適用癥，同時(shí)減少一個(gè)氨基酸，合成成本更低，拓展了其社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。多肽II和多肽III是本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)合成的新的氨基酸序列，尚未在國(guó)內(nèi)外申請(qǐng)發(fā)明專利授權(quán)，先前專利ZL200610039298. 2所報(bào)道的EDSM-I和EDSM-2氨基酸數(shù)目分別是47和55，相比之前的序列，多肽II和多肽III在整合素配體序列RGD和新生血管抑制序列之間加入了 4個(gè)Gly，在EDSM-I的基礎(chǔ)上增加了柔性，使得整合素配體序列R⑶更易與靶點(diǎn)結(jié)合，活性更高；在EDSM-2的基礎(chǔ)上減少了氨基酸數(shù)目，但依然保持了較高的抗腫瘤活性，大大降低了成本；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)多肽II和多肽III具有較好的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用，增強(qiáng)了適應(yīng)性，増加了適用癥，拓展了其社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。2、藥理作用機(jī)理介紹研究發(fā)現(xiàn)，多肽I具有抑制腫瘤血管生成和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列是整合素的ー個(gè)重要配體，因此，含有RGD序列的多肽Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp也能夠特異性的識(shí)別整合素。本發(fā)明的整合素阻斷劑多肽是在具有抑制血管生成作用的序Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-GIy-GIy-Met-Arg-GIy-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-CyS-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala 的 N/C 端連接上與整合素家族具有親和性和結(jié)合能力的含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp序列，構(gòu)建了與整合素有親和性和結(jié)合能力的多肽II和多妝 III。該整合素阻斷劑多妝 II (Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu~Vai—Ala-Leu—Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly—Met—Arg-Gly-IIe—Arg—Gly—Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala)和多妝 III(Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-AIa-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp),為含有 50 個(gè)氛基酸的多肽，分子中RGD序列具有整合素親和性和結(jié)合能力，研究表明其作用靶點(diǎn)主要為整合素a V ￠3，具有整合素拮抗劑作用，能減少細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。并且該序列中含有新生血管抑制序列，從而抑制腫瘤新生血管形成，進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的效果。國(guó)內(nèi)外大量的研究表明即使是同一組織類型、分化程度相同的腫瘤，對(duì)同一藥物的敏感性也有可能不同，因此，藥物開(kāi)發(fā)中對(duì)某一分子需要進(jìn)行抗腫瘤譜的篩選。因?yàn)橛行┧幬镏粚?duì)特定腫瘤細(xì)胞有效，對(duì)其他腫瘤是無(wú)效或低效，因此需要實(shí)驗(yàn)去摸索和驗(yàn)證其治療效果。發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)獲知該整合素阻斷劑靶點(diǎn)明確，在體外能夠明顯抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的遷移、增殖及管狀結(jié)構(gòu)的形成，對(duì)人的某些腫瘤細(xì)胞的增殖也有抑制作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)具有明顯的抗腫瘤效果，且副作用小、用量少、成本低。說(shuō)明本發(fā)明設(shè)計(jì)的整合素阻斷劑多肽科學(xué)、合理、可行有效，能作為制備治療人類實(shí)體腫瘤的治療藥物，極大拓展了該整合素阻斷劑的治療譜，為將來(lái)藥物開(kāi)發(fā)提供了新的思路和前景，具有顯著的社會(huì)價(jià)值和市場(chǎng)價(jià)值。本發(fā)明的多肽II和多肽III含有由于具有靶向性的RGD序列，多肽可以靶向到RA中血管翳形成過(guò)程中新生血管內(nèi)皮，抑制新生血管形成，進(jìn)而達(dá)到預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果。發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)獲知多肽II、多肽III能夠抑制佐劑型大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和DBA/1小鼠膠原型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的治療類風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎的效果，并且副作用少，用量少成本降低。說(shuō)明本發(fā)明設(shè)計(jì)的多肽科學(xué)、合理、可行有效，能作為治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物，極大拓展了該多肽的疾病治療范圍，為將來(lái)藥物開(kāi)發(fā)提供了新的思路和前景，具有顯著的社會(huì)價(jià)值和市場(chǎng)價(jià)值。


附圖I Western blotting 檢測(cè) integrin a v 和 integrin P 3 在 Bel-7402 細(xì)胞中的表達(dá)；附圖2流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)整合素阻斷劑多肽II與靶點(diǎn)的結(jié)合；附圖3流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)整合素阻斷劑多肽III與靶點(diǎn)的結(jié)合；
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I整合素阻斷劑多肽合成肽的制備及檢驗(yàn)多肽I、II、III均采用固相合成法合成，采用高效液相色譜法純化，并采用MS測(cè)定多肽的分子量，RP-HPLC測(cè)定多肽的純度。多妝多妝I 固相合成法是以 Fmoc-Phe (Otbu)-wang resin 或Fmoc-Arg (Otbu)-CTCresin為起始原料，多肽II固相合成法是以Fmoc_Arg(Otbu)-wang resin或Fmoc-Arg (Otbu) -CTC resin 為起始原料，多妝 III 固相合成法是以 Fmoc-Phe (Otbu)-wangresin或Fmoc-Phe(Otbu)-CTC resin為起始原料,然后用保護(hù)氨基酸依次接ニ肽至四十三/五十肽，接肽工作完成后充分洗滌，然后切肽、后處理即得整合素阻斷劑多肽11/多肽III粗品。將粗品溶解，用制備型高效液相經(jīng)過(guò)兩次純化，最后濃縮凍干得到純品。該方法不僅保證了合成的效率，又提高了純度。I.接肽(包括接ニ肽至四十三/五十肽)的步驟如下多妝I :稱取 Fmoc-Phe (Otbu)-wang resin 或 Fmoc-Arg (Otbu)-CTC resin 適量，倒入玻璃砂芯反應(yīng)柱中，加入CH2Cl2適量使樹(shù)脂充分膨脹。
·
多妝II :稱取 Fmoc-Arg (Otbu)-wang resin 或 Fmoc-Arg (Otbu)-CTC resin 適量，倒入玻璃砂芯反應(yīng)柱中，加入CH2Cl2適量使樹(shù)脂充分膨脹。多妝III :稱取Fmoc-Phe (Otbu)-wang resin或Fmoc-Phe (Otbu)-CTC resin適量，倒入玻璃砂芯反應(yīng)柱中，加入CH2Cl2適量使樹(shù)脂充分膨脹。a、脫帽加入六氫吡啶/DMF的脫帽液適量，反應(yīng)一段時(shí)間后將脫帽液抽干，中間用DMF洗滌一次，然后再加入一次脫帽液適量反應(yīng)，脫去Fmoc保護(hù)基。b、洗滌將脫帽液抽干，用DMF洗滌樹(shù)脂幾次，充分洗凈副產(chǎn)物。C、縮合將用于接肽的保護(hù)氨基酸和激活劑溶于DMF和縮合劑中，搖勻，并充分反應(yīng)。d、洗滌將反應(yīng)液抽干，用DMF充分洗滌樹(shù)脂，洗凈副產(chǎn)物。所述切肽的步驟如下把抽干的樹(shù)脂裝入圓底燒瓶中，加入切割液充分裂解合好的五十肽中間體，用砂芯漏斗將樹(shù)脂與多肽分離，所述的裂解液的體積組成為三氟こ酸苯酚水苯甲硫BI: EDT = 88-92 2. 5-3. 5 2. 5-3. 5 I. 5-2. 5 I. 5-2. 5。2.后處理步驟如下先加無(wú)水こ醚到切割液中將多肽析出，然后離心，把清液倒掉，然后再用無(wú)水こ醚洗滌多肽，抽干得多肽粗品。3.純化的步驟如下a、溶解稱取粗品配制成5_20g/l的溶液，用0. 45 y m的混合濾膜過(guò)濾。制備①一次純化用30% -40%的こ腈和60% -70%的緩沖溶液，流速為50ml/min-100ml/min下沖洗10min-20min平衡制備柱。用輸液泵上樣,采集基線，收集紫外波長(zhǎng)220nm吸收值大于200mv的溶液，檢驗(yàn)是否有樣品。用梯度洗脫，こ腈的起始百分?jǐn)?shù)為30% -40%，30-50min后こ腈的百分?jǐn)?shù)為80% -90%。收集紫外波長(zhǎng)220nm吸收值大于200mv的溶液，檢測(cè)純度大于95%的合并作為峰頂，待做二次分離純化。②二次純化將ー次收到的峰頂旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)掉有機(jī)溶劑后用輸液泵上樣，用30% -40%的こ腈和60% -70%的緩沖溶液。流速50-100ml/min，并采集基線，收取在紫外波長(zhǎng)220nm吸收大于200mv的溶液，檢測(cè)是否有樣品沖出。用梯度洗脫，こ腈的起始百分?jǐn)?shù)為30% -40%，30-50min后こ腈的百分?jǐn)?shù)為80% -90%。收取在紫外波長(zhǎng)220nm吸收大于200mv的溶液，通過(guò)檢測(cè)純度大于95%的作為合格。b、濃縮、過(guò)濾、凍干將合格溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀37°C減壓濃縮，除去殘留溶劑和注射用水。最后用0. 22 ii m濾膜過(guò)濾,濾液裝入凍干盤中,用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。
4.純度檢測(cè)及分子量檢測(cè)收集凍干后的純化產(chǎn)物，通過(guò)反向液相檢測(cè)多肽純度分析純度。本實(shí)驗(yàn)成功采用固相合成法合成了整合素阻斷劑多肽I、多肽II和多肽III，此方法重復(fù)性高，可操作性強(qiáng)，污染少；實(shí)驗(yàn)可采用兩種樹(shù)脂來(lái)合成多肽即wang resin或CTCresin ;實(shí)驗(yàn)用wang resin,相對(duì)其它樹(shù)脂比較穩(wěn)定,副反應(yīng)少,エ藝粗品峰型較好,純化相對(duì)收率高，所以成本相對(duì)較低；實(shí)驗(yàn)用CTC resin反應(yīng)受溫度影響小，反應(yīng)速率快；并使用反相高效液相法純化多肽，使用梯度洗脫相對(duì)于等度洗脫來(lái)說(shuō)，分離效果更好，分離過(guò)程中，保留時(shí)間合適，生產(chǎn)效率高，純度高。結(jié)果合成的多肽經(jīng)反向液相色譜分析進(jìn)行純度鑒定結(jié)果如下多肽I、多肽II、多肽III純度分別為95. 39%,98. 41%,96. 40%純度均大于95%，符合設(shè)計(jì)要求。實(shí)施例2 整合素阻斷劑多肽II和多肽III靶點(diǎn)分析。(I)Western Blotting 分析細(xì)胞表達(dá)的祀點(diǎn) integrin a v ￠3用0. 25%胰蛋白酶消化對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞Bel-7402，800rpm離心5min收集細(xì)胞；計(jì)數(shù)，按20 iil/1 X IO5個(gè)細(xì)胞加入蛋白質(zhì)提取液，吹吸打散細(xì)胞，4°C放置30min使細(xì)胞裂解；加入1/4體積5X蛋白質(zhì)上樣緩沖液，沸水浴5-10min。取20ii I蛋白質(zhì)樣品，進(jìn)行10%SDS-PAGE電泳；半干式電轉(zhuǎn)移法將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，恒流lmA/cm2，3h ;將PVDF膜在麗春紅中染色30s，dH20脫色至有清晰條帶，將右上角剪去以區(qū)分蛋白面；將PVDF膜用封閉液室溫封閉I. 5h ；PBST洗膜2-3次，每次5-10min。加入ー抗，4°C過(guò)夜或37°C孵育I. 5h ；PBST洗膜3-5次，每次5-10min。加入ニ抗，室溫孵育Ih ；PBST洗膜3_5次，每次5-10min。在暗室(允許紅色光源)中，將PVDF膜蛋白面朝上放在保鮮膜上，向表面均勻滴加發(fā)光液，反應(yīng)5min ;將PVDF膜包裹在保鮮膜中，剪下一塊等大的X光膠片，放置夾片盒曝光0.5-5min(視條帶光強(qiáng)度而定)；取出X光膠片，在顯影劑中漂至條帶出現(xiàn)，放到停影液(5%冰醋酸)中停影l(fā)min，用流水沖洗Imin后在定影劑中漂至背景部分透明，最后流水沖洗20min固定影像。(2)流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分析整合素阻斷劑多肽II和多肽III與靶點(diǎn)的結(jié)合細(xì)胞Bel-7402在細(xì)胞瓶中培養(yǎng)至80%的融合后，消化收集，用冰預(yù)冷的PBS洗2次，將細(xì)胞用含1% BSA的PBS重懸30min ;用2yl鼠抗人a v @ 3功能阻斷單克隆抗體(I. Oiig/iil，I 200)和2iil 鼠抗人 a 53 I 功能阻斷單克隆抗體(I. Oiig/iil，I 200)與細(xì)胞懸液在4°C孵育I. 5h ;將細(xì)胞收集，并用冰預(yù)冷的PBS洗滌2次，之后用100 ill FITC標(biāo)記的修飾多肽II和多肽III (2mg/ml)與細(xì)胞懸液在4°C孵育I. 5h ;標(biāo)記后將細(xì)胞收集并用冰預(yù)冷的PBS洗滌2次，之后400 u I PBS重懸，用流式細(xì)胞儀分析，F(xiàn)ITC熒光用FLl通道檢測(cè)熒光強(qiáng)度。結(jié)果細(xì)胞表達(dá)的靶點(diǎn)integrin a v ￠3的測(cè)定，如圖I所示，Bel-7402細(xì)胞表面表達(dá)integrin a v 0 3，可以作為后期靶點(diǎn)結(jié)合試驗(yàn)的對(duì)象。流式細(xì)胞試驗(yàn)分析整合素阻斷劑多肽II和多肽III與靶點(diǎn)的結(jié)合，結(jié)果如圖2、3所示FITC標(biāo)記的整合素阻斷劑多肽II在細(xì)胞不加入抗體孵育是熒光強(qiáng)度大約是80. 4%,加入integrin a v 0 3抗體之后突光強(qiáng)度減弱至13. 4%,加入integrin a 5 0 I抗體之后熒光強(qiáng)度減弱至33. 2% ;FITC標(biāo)記的整合素阻斷劑多肽III在細(xì)胞不加入抗體孵育是熒光強(qiáng)度大約是82.4%，加入a V ￠3抗體之后熒光強(qiáng)度減弱至11.3%，加入integrina 5 @ I抗體之后熒光強(qiáng)度減弱至25. 9%。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)，多肽II和多肽III能夠同時(shí)和integrin a v 0 3和integrin a 5 @ I結(jié)合,但主要的結(jié)合祀點(diǎn)仍為integrina V 旦 3。實(shí)施例3整合素阻斷劑多肽對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的遷移抑制試驗(yàn)將10mg/ml Matrigel (BD公司，USA)用HUVEC專用培養(yǎng)基以I : 2稀釋，涂布于transwell小室膜上，室溫風(fēng)干。將培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVEC細(xì)胞用胰蛋白酶消化液消化，收集，用PBS洗滌兩次后用空白HUVECs專用培養(yǎng)基重懸。在顯微鏡下計(jì)數(shù)，將細(xì)胞濃度調(diào)整到I X IO5個(gè)/ml。配制各組的試驗(yàn)用液，用空白HUVECs專用培養(yǎng)基稀釋到100 yl。將細(xì)胞接種到transwell小室中，每孔IOOy 1，并且將各組試驗(yàn)用液加入小室中。24孔板中加入0. 6ml含5%胎牛血清和1% ECGS的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液刺激細(xì)胞遷移，于5% CO2, 37°C 培養(yǎng)24h。棄去孔中培液，用90%酒精常溫固定30min，0. I %結(jié)晶紫常溫染色lOmin，清水漂凈，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，顯微鏡下觀察并選擇四個(gè)視野拍照計(jì)數(shù)。按照公式計(jì)算遷移抑制率(migration inhibition, MI)
NtestMI (%) = I - - X100%
^control其中Nt6st為測(cè)試組的細(xì)胞遷移數(shù)，Ncontrol為空白對(duì)照組的細(xì)胞遷移數(shù)。試驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次，試驗(yàn)得到的結(jié)果計(jì)算mean土 SD，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)t檢驗(yàn)，*P < 0. 05為顯著性差異，**P < 0. 01為極顯著性差異。表I整合素阻斷劑多肽I對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)遷移抑制作用
權(quán)利要求
1.整合素阻斷劑多肽，其特征在于其氨基酸序列為X-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Y, X的序列為缺失或含有Arg-Gly-Asp序列的多肽，Y的序列為缺失或含有Arg-Gly-Asp序列的多肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的整合素阻斷劑多肽，其特征在于所述的氨基酸序列中X的序列包括Arg_Gly_Asp、Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly、Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly ；Y 的序列包括Arg_Gly_Asp、Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly、Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys 或 Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Glyο
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的整合素阻斷劑多肽，其特征在于所述的氨基酸序列為多月太 I Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多妝 II Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多月太 III Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-GIy-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp ；多月太 IV Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-CyS-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多妝 V Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-IIe-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala ；多月太 VI Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-GIy-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp ；多月太 VII Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-GIy-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Arg-Gly-Asp ；多月太 VIII Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys ；多月太 IX Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-GIy-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys ；多月太 X Arg-Gly-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-LeU-Ser-Gly-Gly-Met-Arg-Gly-Ile-Arg-Gly-Ala-Asp-Phe-Gln-Cys-Phe-Gln-Gln-Ala-Arg-Ala-Val-Gly-Leu-Ala-Gly-Thr-Phe-Arg-Ala及其含有有效量上述多肽可接受的鹽，或必要時(shí)藥學(xué)上可接受的載體或者賦形劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為起源于人的頭頸部、腦部、甲狀腺、食管、胰腺、肺臟、肝臟、胃、乳腺、腎臟、膽囊、結(jié)腸或直腸、卵巣、子宮頸、子宮、前列腺、膀胱或睪丸的原發(fā)或繼發(fā)的癌、黑色素瘤以及肉瘤。
5.根據(jù)權(quán)利要求根據(jù)權(quán)利要求1、2、3任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑，其特征在于所述的多肽共價(jià)連接佐劑，佐劑是牛血清白蛋白、人血清白蛋白或聚こニ醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑多肽在制備治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求5整合素阻斷劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物可通過(guò)多種給藥方式治療原發(fā)或繼發(fā)的癌、黑色素瘤及肉瘤，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，ロ服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3任意一項(xiàng)所述的整合素阻斷劑的制備方法，其特征在于所述的多肽是通過(guò)合成方法或通過(guò)重組表達(dá)體的方法制備而得。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制腫瘤血管生成、具有整合素親和性和結(jié)合能力的一類整合素阻斷劑，可用于實(shí)體腫瘤和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療。所述的多肽具體是指多肽I、多肽II和多肽III(見(jiàn)Seq NO.1、Seq NO.2、Seq NO.3)；該多肽可用于治療實(shí)體腫瘤和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。該三種整合素阻斷劑多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為起源于人的頭頸部、腦部、甲狀腺、食管、胰腺、肺臟、肝臟、胃、乳腺、腎臟、膽囊、結(jié)腸或直腸、卵巢、子宮頸、子宮、前列腺、膀胱、睪丸的原發(fā)或繼發(fā)的癌、黑色素瘤以及肉瘤。
文檔編號(hào)A61K38/16GK102850443SQ20111044305
公開(kāi)日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2011年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月27日
發(fā)明者徐寒梅, 浦春艷, 康志安 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)