專利名稱：雷帕霉素(rapamycin)衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雷帕霉素衍生物、包含這類衍生物的藥物組合物、以及治療致病性真菌的方法、誘導(dǎo)免疫抑制(immunosuppression)的方法和利用這樣的雷帕霉素衍生物治療致癌性腫瘤的方法。
雷帕霉素是一種天然存在的大環(huán)三烯抗生素，它可以通過在一種含水的營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)有機(jī)體來(lái)產(chǎn)生。它的結(jié)構(gòu)可以表示如下
至少有一種產(chǎn)生雷帕霉素的Streptomyces hygroscopius菌種被保存在Northern Utilization and Research Division，Agricultural Research Service，U.S.Department of Agriculture，Peorias，Illinois，U.S.A.，寄存號(hào)為NRRL 5491。雷帕霉素，以及通過培養(yǎng)NRRL 5491來(lái)制備它的方法都公開在美國(guó)專利3929992號(hào)中，
公開日為1975年12月30日，全部公開內(nèi)容在這里被編入作為參考。
本發(fā)明涉及新型雷帕霉素衍生物，其通式如下
其中R1選自由＝O，(-OR6，H)和(H，H)組成的組;
R2選自由＝O或(H，H)組成的組，前提條件是當(dāng)R1為(-OR6，H)或＝O時(shí)，R2為(H，H);
R3和R6獨(dú)立地選自由-H、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7、-C(＝O)NHR7和-C(＝S)OR7組成的組;
R5選自由-H和C1-C4烷基組成的組;和R7選自由C1-C10烷基、C3-C6環(huán)烷基、芳基、和雜環(huán)基組成的組;
前提條件是，當(dāng)R1為＝O時(shí)，則至少滿足下列情況之一(a)R2不是＝O，(b)R3不是H，和(c)R5不是H。
還涉及其藥物上可接受的鹽、水合物或者溶劑化物。
本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，它包含有效量的一種或多種通式Ⅱ的化合物和一種藥物上可接受的載體或稀釋劑。
本發(fā)明還涉及一種在需要抑制致病性真菌的人或其他動(dòng)物體內(nèi)抑制致病性真菌生長(zhǎng)的方法，它包括向這樣的人或其他動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的一種或多種通式Ⅱ的化合物。
本發(fā)明還涉及一種在需要誘導(dǎo)免疫抑制的人或其他動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)免疫抑制的方法，它包括向這樣的人或其他動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的一種或多種通式Ⅱ的化合物。
另外，本發(fā)明涉及一種治療人或其他動(dòng)物體內(nèi)的致癌性腫瘤的方法，它包括向這樣的人或其他動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的一種或多種通式Ⅱ的化合物。
此外，本發(fā)明進(jìn)一步涉及通式Ⅲ的化合物，它們可用作制備通式Ⅱ的化合物的中間體
其中R′為-(S)COPh，其中Ph為苯基;
R″選自由H和-(S)COPh組成的組，以及其中R2和R5是上面已定義的基團(tuán)。
此外，本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種從通式Ⅲ的中間體來(lái)制備通式Ⅱ的新型化合物的方法。
當(dāng)任何取代基或變量(例如，芳基、烷氧基、R1、R2、R3、R5、R6、等)在通式Ⅱ的任何化合物的結(jié)構(gòu)式中出現(xiàn)不止一次時(shí)，每種情況下該變量或取代基的定義都與每種其他情況下的定義無(wú)關(guān)，除非被特別說(shuō)明的外。取代基和/或變量的結(jié)合是本發(fā)明化合物的一個(gè)組分，只有當(dāng)這種結(jié)合會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生一種穩(wěn)定的化合物時(shí)，這種結(jié)合才被允許。
在取代基例如R1的定義中所采用的括號(hào)中的術(shù)語(yǔ)[例如，(H，OR6)]是用來(lái)反映相關(guān)原子的兩化合價(jià)上的取代基。本發(fā)明并不限于特定的同分異構(gòu)體，并且括號(hào)中部分的次序也并不認(rèn)為是一種特定的構(gòu)型。
如這里所采用的，除非其中另有別的說(shuō)明外，術(shù)語(yǔ)“烷基”意指支鏈的、直鏈的、飽和的和不飽和的脂族烴基。優(yōu)選的烷基有1-6個(gè)碳原子，除非有另外說(shuō)明的外。這樣的烷基可以任選地被一種或多種獨(dú)立選自下列組中的基團(tuán)所取代，這組基團(tuán)是由芳基、羥基、C1-C6烷氧基、酸基、氨基、N-酰氨基、酮基、鹵素、氰基和羧基組成的。術(shù)語(yǔ)“烷基”還包括上述基團(tuán)，其中選自氧、氮和硫的雜原子取代烷基部分中的一個(gè)或多個(gè)碳原子。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“芳基”意指包括環(huán)狀的、雜環(huán)的、多環(huán)的和雜多環(huán)的不飽和C4-C14部分，特別是苯基或萘基。這樣的芳基可以任選地被1-5個(gè)的獨(dú)立地選自以下由C1-C6烷基、芳基、羥基、被護(hù)羥基、C1-C6烷氧基、酸基、氨基，N-酰氨基、-S(O)n烷基、硝基、氰基、羧基和鹵素組成的組的基所取代。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“烷氧基”代表在此定義的指定數(shù)目碳原子的與氧橋相連的烷基。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“酸基”被用來(lái)代表基團(tuán)-OC(O)-(烷基)和-OC(O)-(芳基)。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“氨基”被用來(lái)代表基團(tuán)-NH2、-N(烷基)2、-NH(烷基)、-N(芳基)2、和-NH(芳基)。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“N-酰氨基”被用來(lái)代表基團(tuán)-NHC(O)-(烷基)和-NHC(O)-(芳基)。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“酮基”被用來(lái)表示-C(O)-部分。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“鹵素”被用來(lái)包括氟，氯，溴和碘。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”被用來(lái)包括有特定數(shù)目碳原子的飽和的和不飽和的烴的脂環(huán)基團(tuán)。這樣的環(huán)烷基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自由芳基、羥基、C1-C6烷氧基、酸基、氨基，N-酰氨基、酮基，和鹵素組成的組的基團(tuán)所取代。
如這里所采用的，術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”被用來(lái)包括穩(wěn)定的5元～7元的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)、或穩(wěn)定的7元-10元的雙環(huán)雜環(huán)，它或者是飽和的、或者是不飽和的，并且由碳原子和獨(dú)立地選自由N、O和S組成的組中的1-3個(gè)雜原子組成，并且其中氮和硫雜原子可以任選地被氧化，而且氮雜原子可以任選地被季銨化，它還包括任何的雙環(huán)基團(tuán)，其中任何的上述定義的雜環(huán)是與苯環(huán)相稠合的。該雜環(huán)可以被連接到任何導(dǎo)致形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的雜原子或碳原子上。這種雜環(huán)組分的實(shí)例包括，但并不局限于，哌啶基、哌啶子基(piperidinyl)、哌嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噁唑基、呋喃基、和噻吩基。雜環(huán)可以使與一雜原子相連的碳原子不是直接被雜原子所取代的方式而被一～四個(gè)的獨(dú)立地選自由C1-C6烷基、芳基、羥基、C1-C6烷氧基、酸基、氨基、N-酰氨基、硝基和鹵素組成組中的取代基所隨意地取代。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括下列化合物，其中，一起或獨(dú)立的是1.R1選自由(H，H)、(H，OH)和＝0組成的組;
2.R2為＝O;
3.R3為H;和4.R5為H。
特別優(yōu)選的化合物是下列化合物，其中1.R1為(H，H)，R2為＝O，R3為-H和R5為-H。
2.R1為(H，OH)，R2為(H，H)，R3為-H和R5為-H。
3.R1為(H，H)，R2為(H，H)，R3為-H和R5為-H。
4.R1為＝O，R2為(H，H)，R3為-H和R5為H。
5.R1為(H，H)，R2為(H，H)，R3為-C(O)R6和R5為-H。
6.R1為(H，H)，R2為＝O，R3為-C(＝O)R6，和R5為H。
7.R1為(H，OC(O)OR7)，R2為(H，H)，R3為-H，和R5為-H。
8.R1為(H，OH)，R2為(H，H)，R3為-H，和R5為C1-C4烷基。
本發(fā)明的化合物可以以游離的形式存在，或者在適當(dāng)?shù)膱?chǎng)合以鹽的形式存在。藥物上可接受的鹽及其制備方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已經(jīng)所熟知的。本發(fā)明化合物的藥物上可接受的鹽包括那些例如由無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或堿形成的這樣化合物的慣用的無(wú)毒性的鹽或季銨鹽。
本發(fā)明的化合物可以形成水合物或溶劑化物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員都知道，帶電的化合物當(dāng)與水一起冷凍干燥時(shí)會(huì)形成水合物，或者當(dāng)與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑在溶液中被濃縮時(shí)會(huì)形成溶劑化物。
本發(fā)明的化合物可以通過下面所公開的方法或其慣用的改進(jìn)方法由雷帕霉素來(lái)制備，而采用的試劑或者是文獻(xiàn)中所描述的，或者是市場(chǎng)上可買到的。
本發(fā)明的某些化合物可以用通式Ⅲ的新型苯硫羰碳酸鹽中間體來(lái)制備。這些中間體的制備，以及它們向本發(fā)明化合物的轉(zhuǎn)化都表示在圖A中。如圖A所示，雷帕霉素(盡管也可以采用雷帕霉素的衍生物)在一種堿例如二甲氨基吡啶(DMAP)的存在下與苯氯硫羰甲酸鹽接觸來(lái)制備在C-28和/或C-43原子上衍生的雷帕霉素。這些中間體(通式Ⅲ)可以通過和一種基于游離基的還原劑例如氫化三烷基錫或三(三甲基甲硅基)硅烷和一種自由基引發(fā)劑例如偶氮二異丁腈(AIBN)、過氧化苯甲?；蛉一鹜榉磻?yīng)來(lái)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的在C-43位帶一個(gè)含氧(＝O)部分的化合物可以按圖B所示的方法制備。圖B表明了43-脫氫雷帕霉素的制備，它是作為制備本發(fā)明其他化合物的中間體。
本發(fā)明的在C-28位衍生的化合物可以在堿例如二甲氨基吡啶的存在下通過使R5為H的化合物與適宜的酰基氯(例如，R7C(O)Cl、R7OC(O)Cl、R7NHC(O)Cl或R7OC(S)Cl相接觸來(lái)制備。
在下面的說(shuō)明書中所提供的實(shí)施例給出了制備本發(fā)明化合物的各種合成方法。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，包含一種藥物上可接受的載體或稀釋劑和有效劑量的一種或多種通式Ⅱ的化合物。
通式Ⅱ的化合物是以常規(guī)劑量的形式來(lái)供給的，它是按照常規(guī)步驟將治療上有效量的化合物(“活性成分”)與標(biāo)準(zhǔn)的藥物載體或稀釋劑相混合來(lái)制備的。這些步驟根據(jù)適于所需的制備的情況可包括將各種成分的混合、造粒和壓制或溶解。
藥物載體可以采用，例如，或者是固體或者是液體。典型的固體載體是乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸等。典型的液體載體是糖漿、花生油、椰欖油、水等。類似地，載體或稀釋劑可以包括本領(lǐng)域眾所周知的延時(shí)材料，例如單獨(dú)采用單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯，或者將其與蠟、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸甲酯等一起使用。
可以廣泛采用各種各樣的藥物形式。因此，如果用固體載體，則制劑可以被制成片、以粉末或丸的形式放入硬明膠囊、或制成錠劑或糖錠。固體載體的量可以在很寬范圍內(nèi)變化，但優(yōu)選的是在約25毫克～約1克范圍內(nèi)。如果用液體載體，則制劑可采取糖漿、乳液、軟明膠囊、無(wú)菌注射液或在針?biāo)幑芑蚬苄纹恐械膽腋┗驘o(wú)水液態(tài)懸浮劑。
為了獲得一種穩(wěn)定的水溶性的劑量形式，把本發(fā)明化合物的藥物上可接受的鹽溶解在有機(jī)或無(wú)機(jī)酸的水溶液中，例如0.3M的琥珀酸溶液，或者優(yōu)選為檸檬酸溶液。另一種方法是，可以把酸性衍生物溶解在適當(dāng)?shù)膲A溶液中。如果得不到可溶性鹽的形式，則把本發(fā)明的化合物溶解在適當(dāng)?shù)墓踩軇┗蚱浠旌衔镏?。這類適宜的共溶劑的實(shí)例包括，但不局限于乙醇、丙二醇、聚乙二醇300、多乙氧基醚80，丙三醇等，濃度在總體積的0-60%范圍內(nèi)。
試驗(yàn)表明，本發(fā)明的化合物可用于需要抑制致病真菌生長(zhǎng)的人體或其他動(dòng)物體內(nèi)在預(yù)防或治療方面抑制致病真菌的生長(zhǎng)。因此，本發(fā)明包括在需要抑制致病真菌生長(zhǎng)的人體或其他動(dòng)物體內(nèi)抑制致病真菌生長(zhǎng)的方法，它包括向這樣的人或動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的通式Ⅱ的化合物。
術(shù)語(yǔ)“致病真菌”是指能夠在人體或其他動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生疾病的真菌。致病真菌的實(shí)例包括，但不局限于白色念珠菌和其他念珠菌種、石膏樣小孢子菌、須瘡毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes)、曲霉菌種和孢子絲菌種。本發(fā)明的化合物抑制致病真菌生長(zhǎng)的能力可以通過已知的并用于此目的的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)來(lái)證明或預(yù)測(cè)，例如，在下面所描述的酵母測(cè)定。
本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定將用多大劑量的有效的、無(wú)毒性化合物來(lái)實(shí)現(xiàn)抑制致病真菌生長(zhǎng)的目的。但一般來(lái)說(shuō)，有效劑量應(yīng)在每千克體重每天約0.05-100毫克范圍內(nèi)。
試驗(yàn)表明，本發(fā)明的化合物也可用于誘發(fā)免疫抑制，即誘發(fā)一種人或動(dòng)物免疫系統(tǒng)的抑制。因此，本發(fā)明還涉及在需要誘發(fā)免疫抑制的人體或動(dòng)物體內(nèi)在預(yù)防或治療方面誘發(fā)免疫抑制的方法，它包括向這樣的人或其他動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物誘發(fā)免疫抑制的能力可以從用于此目的的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中得到證明，例如，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)或通過測(cè)定攝取胸苷(thimidine)的量來(lái)測(cè)定抑制T細(xì)胞增殖的試驗(yàn)。
本發(fā)明的化合物可用于誘發(fā)免疫抑制的事實(shí)意味著它們可用于治療或預(yù)防對(duì)移植的器官或組織(例如腎、心臟、肺、骨髓、皮膚、角膜等)的抵抗或排斥;治療或預(yù)防自身免疫的、發(fā)炎的、增殖的和高增殖的疾病，和治療或預(yù)防免疫學(xué)上中間疾病在皮膚上的表現(xiàn)(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、淋巴瘤性甲狀腺腫、多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、1型糖尿病、眼色素層炎、腎病綜合癥、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎和其他濕疹性皮炎、皮脂溢性皮炎、扁平性紅苔蘚、天皰瘡、大皰性天皰瘡(bullous Pemphigoid)、大皰性表皮松解(Epidermolysis bullosa)、熱激性皮炎、血管水腫、脈管炎、紅皮病、皮膚嗜曙紅細(xì)胞增多、簇狀脫發(fā)等);治療可逆性氣道阻塞疾病、腸炎和過敏反應(yīng)(例如腹腔疾病、直腸炎、嗜曙紅細(xì)胞增多胃腸炎、乳大細(xì)胞(貯積)病、Chrohn病和潰瘍性結(jié)腸炎)以及與食物有關(guān)的過敏反應(yīng)(例如偏頭痛、鼻炎和濕疹)。
本發(fā)明技術(shù)熟練人員能夠通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)測(cè)定出多大劑量的有效的、無(wú)毒性化合物能實(shí)現(xiàn)誘發(fā)免疫抑制的目的。但一般來(lái)說(shuō)，有效劑量應(yīng)在每千克體重每天約0.05-100毫克范圍內(nèi)。
本發(fā)明的化合物還應(yīng)當(dāng)適用于治療哺乳動(dòng)物體內(nèi)的致癌腫瘤。更確切地說(shuō)，該化合物應(yīng)當(dāng)適用于減少腫瘤大小、抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或延長(zhǎng)帶腫瘤動(dòng)物的存活時(shí)間。因此，本發(fā)明還涉及一種治療人或其他動(dòng)物體內(nèi)致癌腫瘤的方法，它包括向這樣的人或動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的通式Ⅱ的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員能夠通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)測(cè)定出多大劑量的有效的、無(wú)毒性化合物能實(shí)現(xiàn)治療致癌腫瘤的目的。但一般來(lái)說(shuō)，有效劑量預(yù)計(jì)在每千克體重每天約0.05-100毫克范圍內(nèi)。
本發(fā)明的化合物可以按照前述治療方法，以足以產(chǎn)生治療或預(yù)防效果的劑量來(lái)供給人體或其他動(dòng)物。本發(fā)明的這種化合物可以以一種常規(guī)劑量的形式供給這類人或其他動(dòng)物，該化合物是通過使本發(fā)明的化合物和常規(guī)的醫(yī)藥上可接受的載體或稀釋劑按照已知技術(shù)混合來(lái)制備的。本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員都將認(rèn)識(shí)到，醫(yī)藥上可接受的載體或稀釋劑的形式和特點(diǎn)取決于活性成分和與之混合的物質(zhì)的量、供給途徑及其他眾所周知的可變因素。
本發(fā)明化合物的供給途徑可以是口服的、非經(jīng)腸道的、通過吸入或局部的。這里所用術(shù)語(yǔ)“非經(jīng)腸道的”包括靜脈內(nèi)的、肌內(nèi)的、皮下的、直腸的、鞘的或腹膜內(nèi)的供藥。皮下的和肌內(nèi)形式的非經(jīng)腸道供藥通常是優(yōu)選的。
為了用本發(fā)明的化合物達(dá)到在預(yù)防或治療上抑制致病真菌的生長(zhǎng)、在預(yù)防或治療上誘發(fā)免疫抑制、或治療致癌腫瘤的目的，每天非經(jīng)腸道的或口服的劑量規(guī)定通常在每千克體重約0.05-100毫克范圍內(nèi)，但優(yōu)選約0.5-10毫克。
本發(fā)明的化合物也可以通過吸入法供給。通過“吸入法”意思是鼻內(nèi)或口內(nèi)吸入法供藥。這種供藥的適宜劑量形式，例如氣霧劑制劑或計(jì)量劑量吸入器，可以用常規(guī)技術(shù)來(lái)制備。應(yīng)采用的本發(fā)明化合物的優(yōu)選劑量通常是在約10-100毫克范圍內(nèi)。
本發(fā)明的化合物還可以局部性地被供給。術(shù)語(yǔ)“局部性供給”意思是非全身的供給和包括將本發(fā)明的化合物外用于表皮、口腔前庭和將這種化合物滴注入耳朵、眼睛和鼻子、以及該化合物不能大量進(jìn)入血流的地方。術(shù)語(yǔ)“全身供給”的意思是口的、靜脈內(nèi)的、腹膜內(nèi)的和肌內(nèi)的供給。當(dāng)然，在致病真菌生長(zhǎng)抑制或免疫抑制劑誘發(fā)方面有治療或預(yù)防效果所需要的以局部性供給的本發(fā)明化合物的劑量(以下均指活性成分)將隨著所選的化合物、所治療的性質(zhì)和條件的嚴(yán)重程度以及接受治療的動(dòng)物而變化，并最終由醫(yī)生的酌定。本發(fā)明化合物適宜的局部劑量通常在每千克體重每天約1-100毫克范圍內(nèi)。
盡管活性成分能以原化學(xué)品形式單獨(dú)供給，但是最好是以藥物制劑形式存在。對(duì)于局部的給藥來(lái)說(shuō)，活性成分可以占0.001%-10%w/w，例如為制劑的1%-2%重量，盡管也可以多達(dá)10%，但優(yōu)選的是不超過5%，更優(yōu)選的是占制劑重量的0.1-1%w/w。
本發(fā)明的局部制劑，既可用于獸醫(yī)也可用于人體治療，它包含活性成分和一種或多種其可接受的載體并任選地包含任何其他治療成分。載體必須是“可接受的”意思是與制劑的其他成分相容并且對(duì)其接受者無(wú)害。
適于通過皮膚滲透到所需治療部位的局部供給的制劑包括液體或半液體制劑，例如搽劑、洗劑、霜?jiǎng)④浉嗷蚝齽?，以及適于供給眼睛、耳朵或鼻子的滴劑。
本發(fā)明的滴劑可以包含無(wú)菌的含水或含油的溶液或懸浮液，并且可以通過將活性成分溶解在殺菌劑和/或殺真菌劑和/或其他適宜的防腐劑，并優(yōu)選還包括一種表面活性劑的含水溶液中來(lái)制備。然后可將所得溶液用過濾法澄清，轉(zhuǎn)移到一個(gè)適當(dāng)?shù)娜萜?，然后密封并通過高壓滅菌或在90-100℃下保持半小時(shí)來(lái)消毒。另一種可選擇的方法是，溶液可通過過濾來(lái)消毒并用無(wú)菌技術(shù)轉(zhuǎn)移到容器中。滴劑中適宜包括的殺菌劑和殺真菌劑的實(shí)例是硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002%)，滅藻銨(0.01%)和醋酸洗必太(0.01%)。適于制備含油溶液的溶劑包括丙三醇、稀醇和丙二醇。
本發(fā)明的洗劑包括那些適用于皮膚或眼睛的洗劑。洗眼劑可以包含一種任選地含有殺菌劑的無(wú)菌水溶液，并且可以用類似于制備滴劑的方法來(lái)制備。適用于皮膚的洗劑或搽劑還可以包含一種促進(jìn)皮膚干燥和涼爽的試劑，例如乙醇或丙酮，和/或一種濕潤(rùn)劑例如丙三醇或油例如蓖麻油或花生油。
本發(fā)明的霜?jiǎng)?、軟膏或糊劑是活性成分的供外用的半固體制劑。它們可以通過下述方法制備供助于適當(dāng)?shù)臋C(jī)械，將細(xì)粉碎的或粉末形式的活性成分單獨(dú)地或在含水或不含水的液體中以溶液或懸浮液的形式與一種油脂的或非油脂的基料混合。該基料可以包括烴類，例如硬的、軟的或液體的石蠟，丙三醇，蜂蠟，金屬皂;膠漿;天然油例如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或椰欖油;羊毛脂或其衍生物，或脂肪酸例如硬脂酸或油酸與醇例如丙二醇或聚乙二醇(macrogol)的混合物。該制劑可以混入任何適宜的表面活性劑，例如陰離子的、陽(yáng)離子的或非離子的表面活性劑，例如脫水山梨(糖)醇酯或其聚氧乙烯衍生物。還可以摻入懸浮劑例如天然膠、纖維素衍生物或有機(jī)材料例如硅膠，和其他成分例如羊毛脂。
本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員將認(rèn)識(shí)到本發(fā)明化合物的最佳劑量和各劑量的間隔時(shí)間將取決于治療條件的性質(zhì)和程度，供藥的形式、途徑和部位，以及被治療的具體動(dòng)物，并且該最佳值可通過常規(guī)方法來(lái)測(cè)定。本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員還將認(rèn)識(shí)到治療的最佳過程，即對(duì)于規(guī)定天數(shù)的每天提供的本發(fā)明化合物的劑量數(shù)，可以由那些本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員用常規(guī)的治療測(cè)定試驗(yàn)來(lái)確定。
無(wú)需贅述，相信本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員能夠用前面的說(shuō)明，將本發(fā)明實(shí)施到最充分的程度。因此，下列實(shí)施例僅被用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。
實(shí)施例Ⅰ、組合物實(shí)施例實(shí)施例A-膠囊組合物本發(fā)明以膠囊形式的藥物組合物是通過將50毫克的粉末的形式的本發(fā)明化合物，100毫克的乳糖，32毫克的滑石粉和8毫克的硬脂酸鎂填充在標(biāo)準(zhǔn)的兩片硬質(zhì)明膠膠囊中制備的。
實(shí)施例B-可注射的非經(jīng)腸道的組合物本發(fā)明的適于用注射供給的藥物組合物是通過在10%體積的丙二醇水溶液中攪拌1.5%重量的本發(fā)明化合物來(lái)制備的。該溶液通過過濾被消毒。
實(shí)施例C-軟膏組合物本發(fā)明的化合物1.0克加白色軟石蠟直100.0克將本發(fā)明的化合物分散在小體積的載體中，并逐漸加入大量的載體以形成一種光滑、均勻的制品。然后將此分散體填充到可折疊的金屬管中。
實(shí)施例D-局部使用的霜?jiǎng)┙M合物本發(fā)明的化合物1.0克Polawax GP 200 20.0克無(wú)水羊毛脂2.0克白色蜂蠟2.5克羥基苯甲酸甲酯0.1克加蒸餾水直到100.0克將polawax、蜂蠟和羊毛脂在60℃下一起加熱。加入羥基苯甲酸甲酯溶液并通過高速攪拌實(shí)現(xiàn)均化。然后讓溫度降到50℃。再加入本發(fā)明的化合物并使其充分分散，在低速攪拌下將組合物冷卻。
實(shí)施例E-表面洗劑組合物本發(fā)明的化合物1.0克脫水山梨(糖)醇單月桂酸酯0.6克多乙氧基醚200.6克十六醇十八醇混合物1.2克丙三醇6.0克羥基苯甲酸甲酯0.2克加純化水(英國(guó)藥典)直到100.00毫升將羥基苯甲酸甲酯和丙三醇溶解在75℃的70毫升水中。脫水山梨(糖)醇單月桂酸酯，多乙氧基醚20和十六醇十八醇混合物也在75℃下一起熔混并被加入到水溶液中。使所得的溶液均化，讓其在連續(xù)攪拌下冷卻，并在剩余的水中加入本發(fā)明的化合物成為懸浮液。攪拌整個(gè)懸浮液直到均化為止。
實(shí)施例F-滴眼劑組合物本發(fā)明的化合物0.5克羥基苯甲酸甲酯0.01克羥基苯甲酸丙酯0.04克加純化水(英國(guó)藥典)直到100.00毫升在75℃下將羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯溶解在70毫升的純化水中，并將所得的溶液冷卻。然后加入本發(fā)明的化合物，再通過膜過濾器(0.22微米孔徑大小)進(jìn)行過濾消毒并無(wú)菌裝填在適當(dāng)?shù)臒o(wú)菌容器中。
實(shí)施例G-通過吸入法供藥的組合物對(duì)于一個(gè)容量為15-20毫升的氣霧劑容器將10毫克本發(fā)明的化合物與0.2-0.2%的潤(rùn)滑劑例如多乙氧基醚85或油酸一起混合，并將這種混合物分散在一種推進(jìn)劑，例如氟里昂，優(yōu)選為在一種(1，2-二氯四氟乙烷)和二氟氯甲烷的混合物中，然后放入一個(gè)適宜的氣霧劑容器中，用于鼻內(nèi)吸入或者口腔吸入來(lái)供藥。
實(shí)施例H-通過吸入法供藥的組合物對(duì)于一個(gè)容量為15-20毫升的氣霧劑容器將10毫克本發(fā)明的化合物溶解在乙醇(6-8毫升)中，加入0.1-0.2%的潤(rùn)滑劑，例如多乙氧基醚85或油酸;并將這種混合物分散在一種推進(jìn)劑，例如氟里昂，優(yōu)選為在一種(1，2-二氯四氟乙烷)和二氟氯甲烷的混合物中，然后放入一個(gè)適宜的氣霧劑容器中，用于鼻內(nèi)吸入或者口腔吸入來(lái)供藥。
Ⅱ.合成實(shí)施例在下列實(shí)施例中，雷帕霉素是通過發(fā)酵獲得的，所有其他原料和化學(xué)試劑除非特殊聲明外，都是從市場(chǎng)上買來(lái)的。
實(shí)施例1.43-脫羥基雷帕霉素(43-Deshydroxyrapamycin)[R1為(H，H)，R2為＝O，R3為H和R5為H]A.雷帕霉素苯硫羰碳酸酯(Phenylthionocarbonates)在冰浴和氬氣氛下將雷帕霉素(80.5毫克，88.1摩爾)溶解在1.5毫升的無(wú)水二氯甲烷中。然后加入二甲氨基吡啶(80.0毫克，0.655毫摩爾)和苯硫羰甲酸酯(40.0微升，0.289毫摩爾)。將所得的桔黃色溶液攪拌4小時(shí)，其后用薄層色譜法(硅膠，35%乙酸乙酯/石油醚)進(jìn)行分析表明除了存在少量的雷帕霉素外，還存在三種截然不同的產(chǎn)物。然后將反應(yīng)混合物用1.0毫升的二氯甲烷稀釋，并將此混合物直接加到含硅膠的快速色譜柱中。用25%乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)生28，43-雙-硫羰碳酸酯雷帕霉素衍生物(28毫克，Rf＝0.82)和43-硫羰碳酸酯雷帕霉素衍生物(18.5毫克，Rf＝0.58)。繼續(xù)用60%乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)生28-硫羰碳酸酯雷帕霉素衍生物(18.5毫克，Rf＝0.19)和殘留的雷帕霉素(6毫克，Rf＝0.07)。
B.43-脫羥基雷帕霉素在0.2毫升的甲苯中，在室溫和氬氣氛下，將三乙基硼烷(15微升，1.0M己烷溶液)加入到正在攪拌的雷帕霉素-43-苯硫羰碳酸酯(10毫克，9.5摩爾)中(按照實(shí)施例1A中的描述制備)。加入三(三甲基甲硅基)硅烷(30微升，97微摩爾)并將所得溶液攪拌10分鐘。然后再注入另外的10微升的三乙基硼烷溶液，并將此混合物暫時(shí)暴露在空氣中。在總反應(yīng)時(shí)間為30分鐘后，用0.5毫升的甲苯將溶液稀釋，并直接加入到快速色譜柱中。用25%乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)生1.5毫克的43-脫羥基雷帕霉素白色固體，熔點(diǎn)(m.p.97-100℃)。下面是對(duì)43-脫羥基雷帕霉素獲得的核磁共振數(shù)據(jù)氫核 雷帕霉素 43-脫羥基雷帕霉素(TMS) (TMS)Me(46)O 3.41(s) 3.34(s)C(42)H 2.93(m) 3.07(m)實(shí)施例2.43-脫氫雷帕霉素(R′為＝O，R2為＝O，R3為H，和R5為H)在0℃下將雷帕霉素(109.7毫克0.12微摩爾)加入到在二氯甲烷(1.2毫升)中的含有過釕酸四丙基銨(8.4毫克，24微摩爾)，N-甲基嗎啉氧化物(42.2毫克，0.36微摩爾)和4A分子篩(120毫克)的反應(yīng)混合物中，共用3小時(shí)。反應(yīng)的TLC(薄層色譜法)分析(硅膠，洗脫液是20∶80己烷/乙酸乙酯)表明有一些初始的未反應(yīng)雷帕霉素。因此，加入額外量的過釕酸四丙基銨(8.4毫克，24微摩爾)和N-甲基嗎啉氧化物(42.2毫克，0.36微摩爾)，并在0℃下再連續(xù)攪拌2小時(shí)以上。粗混合物(黑色懸浮液)用硅膠快速色譜法(梯度洗脫液是40∶60-20∶80的己烷/乙酸乙酯)提純以產(chǎn)生55毫克(50%)的43-脫氫雷帕霉素白色粉末(在硅膠、20∶80己烷/乙酸乙酯中的Rf值43-脫氫雷帕霉素為0.45和雷帕霉素為0.30)。下面是對(duì)43-脫氫雷帕霉素所獲得的核磁共振數(shù)據(jù)氫核 雷帕霉素 43-脫氫雷帕霉素(TMS) (TMS)Me(46)O 3.41(s) 3.36(s)C(42)H 2.93(m) 3.80(dd)實(shí)施例3.14-脫氧雷帕霉素[R1為(H，OH)，R2為(H，H)，R3為H和R5為H]在室溫下使硫化氫呈泡狀通過正在攪拌的在5毫升1∶1的甲醇-吡啶中的雷帕霉素(100毫克，0.109毫摩爾)溶液，為時(shí)1小時(shí)。然后將黃色反應(yīng)混合物蓋住并攪拌過夜。過量的硫化氫被穩(wěn)定的氬氣流驅(qū)散，其后在減壓下除去溶劑。所得殘留物用快速色譜分離(80%乙酸乙酯/己烷)產(chǎn)生標(biāo)題化合物，即14-脫氧雷帕霉素，為白色固體，熔點(diǎn)106-109℃。下面是對(duì)14-脫氧雷帕霉素所獲得的核磁共振數(shù)據(jù)氫核 雷帕霉素 14-脫氧雷帕霉素(TMS) (TMS)Me(16)H's N/A 2.42(d,J=15.3HzC(20)H 5.29 2.71(d,J=15.3Hz)實(shí)施例4.43-脫羥基-14-脫氧雷帕霉素[R1為(H，H)，R2為(H，H)，R3為H和R5為H]
將43-脫羥基雷帕霉素(100毫克)溶解在5毫升1∶1的甲醇和吡啶混合物中。向所得溶液中通1小時(shí)硫化氫。然后將反應(yīng)混合物放置一天。過量的硫化氫被向溶液中鼓泡通過的氬氣所驅(qū)散，溶液隨后被濃縮。用乙酸乙酯-己烷混合物作為洗脫劑，使標(biāo)題化合物通過硅膠上的柱色譜法而從殘留物中分離出來(lái)。
實(shí)施例5.43-脫氫-14-脫氧雷帕霉素[R1為＝O，R2為(H，H)，R3為H和R5為H]將43-脫氫雷帕霉素(100毫克，實(shí)施例4)溶解在5毫升1∶1的甲醇和吡啶混合物中。向所得溶液通入1小時(shí)硫化氫。然后將反應(yīng)混合物放置一天。過量的硫化氫被向溶液中鼓泡通過的氬氣所驅(qū)散，隨后溶液被濃縮。用乙酸乙酯-己烷混合物作為洗脫劑，將標(biāo)題化合物通過硅膠上的柱色譜法而被從殘留物中分離出來(lái)。
實(shí)施例6.43-脫羥基-14-脫氧-28-酸基雷帕霉素[R1為(H，H)，R2為(H，H)，R3為-C(O))R7，和R5為H]在冰浴中和氬氣氣氛下，將43-脫羥基-14-脫氧雷帕霉素(80毫克，實(shí)施例5)溶解在1.5毫升的無(wú)水二氯甲烷中。然后加入二甲氨基吡啶(80毫克)和烷基?；萚R7C(O)Cl，3毫摩爾)。將溶液攪拌4-12小時(shí)，其后反應(yīng)混合物用1.0毫升二氯甲烷稀釋并被直接加入到含硅膠的快速色譜柱中。用乙酸乙酯/己烷混合物洗脫產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
實(shí)施例7.43-脫羥基-28-酸基雷帕霉素[R1為(H，H)，R2為＝O，R3為C(O)R7和R5為H]
除了43-脫羥基-14-脫氧雷帕霉素用43-脫羥基雷帕霉素取代外，標(biāo)題化合物是采用與43-脫羥基-14-脫氧-28-酸基雷帕霉素(實(shí)施例6)相同的步驟獲得的。
實(shí)施例8.43-?；?14-脫氧雷帕霉素[R1為(H，OC(O)R7)，R2為(H，H)，R3為H和R5為H]在冰浴中和氬氣氛下，將14-脫氧雷帕霉素(80毫克，實(shí)施例3)溶解在1.5毫升的無(wú)水二氯甲烷中。然后加入二甲氨基吡啶(80毫克)和烷基?；萚R7C(O)Cl，3毫摩爾]。將溶液攪拌4～12小時(shí)，此后用1.0毫升二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物并將其直接加入到含硅膠的快速色譜柱中。用乙酸乙酯/己烷混合物洗脫產(chǎn)生標(biāo)題化合物和28，43-雙?；?4-脫氧雷帕霉素衍生物。
實(shí)施例9.13-烷氧基-14-脫氧雷帕霉素[R1為(H，OH)，R2為(H，H)，R3為H和R5為烷基]將14-脫氧雷帕霉素(80毫克，實(shí)施例3)溶解在2毫升的C1-C4醇(例如甲醇、乙醇、丙醇)和催化量(2毫克)的樟腦磺酸中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌一天，此后溶液被濃縮并且用柱色譜分離法將標(biāo)題化合物從殘留物中分離出來(lái)。
Ⅲ.生物試驗(yàn)例用下面的試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明的化合物作抗菌和免疫抑制活性分析。
抗菌活性試驗(yàn)將以對(duì)數(shù)方式生長(zhǎng)的酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)涂敷在完整的瓊脂介質(zhì)(YPD)上。把溶解在適當(dāng)水或有機(jī)溶劑中的化合物放入到穿透瓊脂的孔中。將培養(yǎng)皿培育48小時(shí)并測(cè)量抑制區(qū)域的大小。所有經(jīng)這項(xiàng)試驗(yàn)的本發(fā)明的化合物都顯示出抗菌活性。
免疫抑制活性的有絲分裂試驗(yàn)在RPMI中用10%的胎牛血清以5×106/毫升植入從BDF1雌鼠身上分離出的脾細(xì)胞。將此懸浮液的100毫升(5×106細(xì)胞)等量分配在96-穴的圓底微滴度皿上(Linbro，F(xiàn)low Laboratories)。加入作為有絲分裂刺激物的伴刀豆球蛋白A(5微克/毫升)，并將微滴度穴的最終體積用RPMI調(diào)整到200微升。在37℃下和5%的CO2氣氛中將細(xì)胞培養(yǎng)物培育72小時(shí)，并在72小時(shí)培養(yǎng)的最后18小時(shí)加上0.5微居里3H-胸苷(比活性為2.00居里/摩爾)。在一臺(tái)自動(dòng)多樣采集器上采集細(xì)胞并在貝克曼液體閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)算與細(xì)胞有關(guān)的放射活性。結(jié)果用以四份測(cè)量值的所得的平均值來(lái)表示。細(xì)胞存活力用72小時(shí)培育后的錐蟲藍(lán)排除法來(lái)測(cè)定。在加入細(xì)胞前，將要被試驗(yàn)的化合物加入到在適當(dāng)稀釋劑下的微滴度皿上。在這項(xiàng)試驗(yàn)中所有本發(fā)明的化合物都顯示出免疫抑制活性。
這兩項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果，即本發(fā)明化合物的抗菌活性試驗(yàn)和免疫抑制活性的有絲分裂試驗(yàn)的結(jié)果被提供在表1中。
表1化合物活性化合物 酵母 有絲分裂IC12(毫微克/毫升) IC50(毫微摩爾濃度)43-脫羥基-雷帕霉素 8 0.5(實(shí)施例1)14-脫氧-雷帕霉素 13 15(實(shí)施例3)14-脫氧-13-甲氧 52 1000基-雷帕霉素雖然上述說(shuō)明和實(shí)施例充分描述了本發(fā)明及其優(yōu)選的實(shí)施方案，但應(yīng)該理解本發(fā)明并不局限于屬于權(quán)利要求范圍內(nèi)的特定公開的實(shí)施方案。
權(quán)利要求
1.一種化合物及其所有的藥物上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，該化合物的通式如下
其中R1選自由=O、(-OR6，H)和(H，H)組成的組；R2選自由=O或(H，H)組成的組，前提條件是當(dāng)R1為(-OR6，H)或=O時(shí)，R2為(H，H)；R3和R6均獨(dú)立地選自由-H、-C(=O)R7、-C(=O)OR7、-C(=O)NHR7和-C(=S)OR7組成的組；R5選自由-H和C1-C4烷基組成的組；和R7選自由C1-C10烷基、C3-C6環(huán)烷基、芳基、和雜環(huán)基組成的組；前提條件是，當(dāng)R1為=O時(shí)，則至少滿足下列情況之一(a)R2不是=O，(b)R3不是H，和(c)R5不是H。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自由(H，H)和(H，OH)組成的組。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為＝0。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R3為H。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R5為H。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中(a)R1為(H，H)，R2為＝O，R3為-H和R5為-H;(b)R1為(H，OH)，R2為(H，H)，R3為-H和R5為-H;(c)R1為(H，H)，R2為(H，H)，R3為-H和R5為-H;(d)R1為＝O，R2為(H，H)，R3為-H和R5為H;(e)R1為(H，H)，R2為(H，H)，R3為-C(O)R6，和R5為-H;(f)R1為(H，H)，R2為＝O，R3為-C(O)R6，和R5為H;(g)R1為[H，OC(O)OR6]，R2為(H，H)，R3為-H和R5為-H;或者(h)R1為(H，OH)，R2為-H，R3為-H，和R5為C1-C4烷基。
7.一種藥物組合物，它包含藥物上可接受的載體或稀釋劑，和有效的治療或預(yù)防劑量的一種或多種權(quán)利要求1的化合物。
8.一種藥物組合物，它包含藥物上可接受的載體或稀釋劑和有效的治療或預(yù)防劑量的一種或多種權(quán)利要求2的化合物。
9.一種藥物組合物，它包含一種藥物上可接受的載體或稀釋劑和有效的治療或預(yù)防劑量的一種或多種權(quán)利要求3的化合物。
10.一種藥物組合物，它包含藥物上可接受的載體或稀釋劑和有效的治療或預(yù)防劑量的一種或多種權(quán)利要求4的化合物。
11.一種藥物組合物，它包含藥物上可接受的載體或稀釋劑和有效的治療或預(yù)防劑量的權(quán)利要求5的化合物。
12.一種藥物組合物，它包含藥物上可接受的載體或稀釋劑和有效的治療或預(yù)防劑量的權(quán)利要求6的化合物。
13.一種在需要抑制致病真菌生長(zhǎng)的人或其他動(dòng)物中抑制致病真菌生長(zhǎng)的方法，它包括向這樣的人或其他動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的權(quán)利要求1的化合物。
14.一種在需要誘發(fā)免疫抑制的人或其他動(dòng)物中誘發(fā)免疫抑制的方法，它包括向這樣的人或其他動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的權(quán)利要求1的化合物。
15.一種治療人或其他動(dòng)物中的致癌腫瘤的方法，它包括向這樣的人或其他動(dòng)物供給有效的、無(wú)毒劑量的權(quán)利要求1的化合物。
16.一種化合物，其通式如下
其中R′為-(S)COPh，此處Ph為苯基，R″選自由H和-(S)COPh組成的組，此處Ph為苯基，R2選自由＝O或(H，H)組成的組;和R5選自由-H和C1-C4烷基組成的組。
17.一種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，包括將下列通式的化合物與一種自由基還原劑和一種自由基引發(fā)劑相接觸，所說(shuō)的通式為
式中R1為-(S)COPh，此處Ph為苯基，R″選自由H和-(S)COPh組成的組，此處Ph為苯基，R2選自由＝O或(H，H)組成的組;和R5選自由-H和C1-C4烷基組成的組。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述的自由基還原劑選自由氫化三烷基錫和三(三甲基甲硅烷基)硅烷組成的組，并且所述的自由基引發(fā)劑選自由偶氮二異丁腈、過氧化苯甲酰和三乙基甲硼烷組成的組。
全文摘要
雷帕霉素衍生物，包含這種雷帕霉素衍生物和藥物上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物，和使用這樣的衍生物抑制致病真菌生長(zhǎng)、誘發(fā)免疫抑制或治療致癌腫瘤的方法。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1087912SQ93116589
公開日1994年6月15日 申請(qǐng)日期1993年7月17日 優(yōu)先權(quán)日1992年7月17日
發(fā)明者D·A·霍爾特, 小·L·W·羅沙穆斯, J·I·盧恩戈 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司