專利名稱：牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
牡丹皮為毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，已有2000余年的藥用歷史。性微寒，味苦、辛，具有清熱涼血、活血化淤的功效，現(xiàn)代藥理研究顯示，牡丹皮具有調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、抗驚厥、保肝、調(diào)節(jié)泌尿系統(tǒng)、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞、抗菌抗炎作用等。但未見牡丹皮作為抗真菌藥物增效劑與抗真菌藥物聯(lián)合使用治療真菌病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供牡丹皮的新用途，具體是指用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途。本發(fā)明提供了牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途。本發(fā)明所述的牡丹皮的藥材原料是毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosaAndr.)的干燥根皮。本發(fā)明所述的牡丹皮是牡丹皮藥材乙醇提取物。本發(fā)明所述的乙醇提取是指用75%乙醇提取。具體步驟為把粉碎后的藥材粉末加入IOOOml圓底燒瓶中，加入70%乙醇水浴回流2h，回流液過濾，放入已稱重的燒瓶中，50°C左右減壓旋蒸至粘稠浸膏狀。本發(fā)明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其中的真菌包括臨床株敏感白念珠菌(100、255、天津10)，耐藥白念珠菌(271、天津25、958、876、842、649、天津 20)。本發(fā)明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，抗真菌藥物具體是指氟康唑，本文所稱的耐藥白念珠菌是對(duì)氟康唑耐受，敏感白念珠菌是對(duì)氟康唑敏感。本發(fā)明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物的用途，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度>5000 μ g / ml ；本發(fā)明所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑的用途，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度 >4. 88 μ g/mlo本發(fā)明經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，牡丹皮對(duì)各種臨床分離的白念珠菌具有抑制活性；其對(duì)氟康唑抗真菌藥物有明顯的增效作用，對(duì)于臨床耐藥性菌株，當(dāng)抗真菌藥物氟康唑和牡丹皮提取物合用時(shí)，能明顯降低抗真菌藥物的用藥劑量，增強(qiáng)對(duì)耐藥真菌的抑制作用。因此牡丹皮可用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品，用于不同深部和淺部真菌感染的治療。本發(fā)明為牡丹皮開辟了新的用途，將其用于抗真菌藥物或抗真菌藥物的增效劑，不僅能提高藥物的抗真菌作用，而且在臨床治病真菌耐藥性日趨普遍，耐藥程度日趨嚴(yán)重的情況，使抗真菌藥物恢復(fù)對(duì)耐藥真菌的作用，具有良好的臨床應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施作詳細(xì)說明，以下實(shí)施例是在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例I :牡丹皮單獨(dú)使用，牡丹皮和氟康唑聯(lián)用對(duì)不同臨床真菌株的作用材料和方法 I.試藥牡丹皮的藥材原料是毛茛科植物牡丹的干燥根皮。提取過程把粉碎后的藥材粉末加入IOOOml圓底燒瓶中，加入70%乙醇水浴回流2h，回流液過濾，放入已稱重的燒瓶中，50°C左右減壓旋蒸至粘稠浸膏狀。在燒瓶中加入蒸餾水，加熱使充分溶解(取出少許作為水提液，得到Ig / ml的生藥濃度)，再加入與蒸餾水等量的無水乙醇，加熱充分混勻，合并提取液混勻，得O. 5g / ml的生藥濃度，取少許到EP管中做體外實(shí)驗(yàn)。氟康唑注射液輝瑞制藥有限公司，批號(hào)9149102。各試藥置于_20°C保存。實(shí)驗(yàn)前，將藥物取出置于35°C溫箱融化，充分混勻，分別進(jìn)行藥效學(xué)檢驗(yàn)。2.菌株臨床株敏感白念珠菌(100、255、天津10 )，耐藥白念珠菌(271、天津25、958、876、842、649、天津20)分別采自醫(yī)院不同科室臨床樣本，并經(jīng)形態(tài)學(xué)和生化學(xué)鑒定。所有實(shí)驗(yàn)用菌株均于沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)劃板活化，將球狀菌于30°C培養(yǎng)2周后，分別挑取單克隆再次劃板活化，取第二次所得單克隆置SDA斜面，用上述方法培養(yǎng)后于4°C保存?zhèn)溆谩?.培養(yǎng)液RPMI1640液體培養(yǎng)液RPMI1640 (Gibco BRL) IOg，NaHCO3 2. 0g，嗎啡啉丙磺酸(MOPS) (Sigma) 34. 5g(O. 165M),加三蒸水900ml溶解，IN NaOH調(diào)pH至7. O (25 °C )，三蒸水定容至1000ml，O. 22 μ m微孔濾膜過濾除菌，分裝后于4°c保存?zhèn)溆谩Ｉ潮て咸烟黔傊腆w培養(yǎng)基(SDA)蛋白胨10g，葡萄糖40g，瓊脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，調(diào)整pH至7. 0，以三蒸水定容至1000ml，高壓滅菌(121°C，15min)后于4°C保存?zhèn)溆?。YEPD 培養(yǎng)液酵母浸膏IOg,蛋白胨20g,葡萄糖20g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高壓滅菌(121 °C，15min)后于4°C保存?zhèn)溆谩?.儀器設(shè)備Multiskan MK3型酶標(biāo)檢測(cè)儀(芬蘭Labsystems產(chǎn)品)隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)THZ - 82A臺(tái)式恒溫振蕩器(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)Sff-CT-IF型超凈化工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)
5.菌液制備實(shí)驗(yàn)前，用接種圈從4°C保存的SDA培養(yǎng)基上挑取白念珠菌球狀菌少量，接種至Iml YEPD培養(yǎng)液，于30°C，200rpm振蕩培養(yǎng)，活化16h，使真菌處于指數(shù)生長(zhǎng)期后期。取該菌液至ImlYEro培養(yǎng)液中，用上述方法再次活化，16h后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整菌液濃度至I X IO3 5 X 103CFU/ml。6.藥敏板制備各菌株分別取無菌96孔板一塊，于每排I號(hào)孔加R PMI1640液體培養(yǎng)基100 μ I作空白對(duì)照；3 12號(hào)孔各加上述新鮮配制的菌液99 μ I ;2號(hào)孔分別加菌液196 μ I和牡丹皮75%的乙醇提取物2μ I ;12號(hào)孔不含藥物，只加菌液100μ I作陽(yáng)性生長(zhǎng)對(duì)照。調(diào)配不同濃度的氟康唑?yàn)?、4、2、1、0. 5、0. 25 μ g / ml。在每排的2號(hào)孔加相應(yīng)濃度的氟康唑2 μ 1，3^11號(hào)孔各加I μ I。對(duì)2 11號(hào)孔進(jìn)行10級(jí)倍比稀釋，使各孔的最終牡丹皮75%的乙醇提取物濃度分別為 2500、1250、625、312· 5,156. 25,78. 125,39. 06,19. 53,9. 76μ g/ml、4. 88 μ g / ml。
而氟康唑提取物的濃度保持恒定，各孔中DMSO含量均低于I %。將各藥敏板于30°C恒溫箱培養(yǎng)。7. MIC8。值判定在30°C恒溫箱中，念珠菌培養(yǎng)48h后，用酶標(biāo)分析儀于630nm測(cè)各孔OD值。與陽(yáng)性對(duì)照孔比，以O(shè)D值下降80%以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC8q (真菌生長(zhǎng)80%被抑制時(shí)的藥物濃度)。當(dāng)藥物的MIC8tl值超過測(cè)定濃度范圍時(shí)，按以下方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)MICm值高于最高濃度64yg / ml時(shí)，計(jì)為“>64μ8 / ml” ;MIC8(I值為最低濃度或在最低濃度以下時(shí)，不作區(qū)別，均計(jì)為“<0. 125yg / ml”。上述實(shí)驗(yàn)均平行操作2到3次，當(dāng)MIC8tl值能準(zhǔn)確重復(fù)或只差一個(gè)濃度時(shí)才被接受，并以較高濃度作為MIC8tl值；當(dāng)MIC8tl值相差兩個(gè)濃度以上時(shí)，則需重新實(shí)驗(yàn)，直到符合要求為止。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表I :表I牡丹皮與氟康唑合用對(duì)不同臨床菌株的MIC8tl值(μ g / ml)

權(quán)利要求
1.牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的牡丹皮是牡丹皮藥材乙醇提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的牡丹皮藥材乙醇提取物是用75%乙醇提取的。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的牡丹皮藥材乙醇提取物是用以下方法制得的 把粉碎后的藥材粉末加入IOOOml圓底燒瓶中，加入70%乙醇水浴回流2小時(shí)，回流液過濾，放入已稱重的燒瓶中，50°C左右減壓旋蒸至粘稠浸膏狀。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，所述的真菌包括白念珠菌100、白念珠菌255、白念珠菌天津10、白念珠菌271、白念珠菌天津25、白念珠菌958、白念珠菌876、白念珠菌842、白念珠菌649、白念珠菌天津20。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，牡丹皮用于制備抗真菌藥物中，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度>5000ii g/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，抗真菌藥物增效劑中的抗真菌藥物是指氟康唑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的牡丹皮用于制備抗真菌藥物或抗真菌藥物增效劑的用途，其特征在于，牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑中，牡丹皮藥材乙醇提取物的濃度>4. 88 Ug/ml o
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及牡丹皮用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途。牡丹皮為毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr．)的干燥根皮，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，已有2000余年的藥用歷史。本發(fā)明經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，牡丹皮對(duì)各種臨床分離的白念珠菌具有抑制活性；牡丹皮提取物與氟康唑抗真菌藥合用，能不同程度地提高對(duì)淺表部和深部真菌感染的治療效果，并能使抗真菌藥物恢復(fù)對(duì)耐藥真菌的作用。因此牡丹皮可用作抗真菌藥物的增效劑。
文檔編號(hào)A61K36/71GK102764310SQ201210228529
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月3日
發(fā)明者姜遠(yuǎn)英, 曹永兵, 熊娟, 閻瀾, 鹿輝 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)