專利名稱：新的硫辛酸衍生物、其制備方法、其作為藥物的應用和含有這些衍生物的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的目的是新的硫辛酸衍生物，它們對產(chǎn)生一氧化氮NO的NO-合酶具有抑制活性和/或是抗氧化劑再生的試劑或捕集活性氧物質(zhì)(ROS)并以更通常的方式參與硫羥基氧化還原反應的物質(zhì)。這些捕集活性氧物質(zhì)的抗氧化劑或物質(zhì)可以是天然來源的例如維生素E或谷胱甘肽，或者是合成的例如某些捕集活性氧物質(zhì)的產(chǎn)物或者既對NO-合酶具有抑制活性、又具有捕集ROS活性的產(chǎn)物。合成產(chǎn)物的實例尤其可見于PCT專利申請WO 96/09653、WO 98/42696和WO 98/58934中。
因此，本發(fā)明尤其涉及與下面定義的通式(I)相應的衍生物、其制備方法、含有這些衍生物的藥物制劑及其治療目的的應用，特別是作為NO合酶抑制劑和/或使抗氧化劑再生的試劑或捕集ROS并以更通常的方式參與硫羥基氧化還原反應的物質(zhì)的應用。
由于NO和ROS以及谷胱甘肽的代謝在病理生理學中的潛在作用，因此，該新的與通式(I)相應的所述衍生物可以在有一氧化氮和谷胱甘肽代謝以及硫羥基氧化還原反應參與的疾病治療中產(chǎn)生有益作用。尤其是·心血管和腦血管疾病，包括例如動脈粥樣硬化、偏頭痛、高動脈壓、膿毒性休克、局部缺血性或出血性心或腦梗塞、局部缺血和血栓形成。·中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病例如神經(jīng)退化疾病，其中尤其可以提及腦梗塞，蛛網(wǎng)膜下出血，老化，老年性癡呆包括阿爾茨海默氏癥、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森氏病、Creutzfeld Jacob病和朊病毒病，肌萎縮性側(cè)索硬化，以及疼痛，腦和骨髓損傷，對鴉片類物質(zhì)、酒精和成癮物質(zhì)成癮，勃起和生殖障礙，認知障礙，腦病，病毒或毒物導致的腦病，抑郁，焦慮，精神分裂癥，癲癇癥，昏睡病，進食障礙(厭食、食欲過盛等)；·骨骼肌和神經(jīng)肌肉關(guān)節(jié)疾病(肌病、肌炎)以及皮膚??；·增殖炎性疾病例如動脈粥樣硬化、肺動脈高血壓、呼吸窘迫、腎小球性腎炎、白內(nèi)障、門靜脈高血壓、關(guān)節(jié)病和類風濕性關(guān)節(jié)炎、纖維組織形成、淀粉樣變性、胃腸系統(tǒng)炎癥(結(jié)腸炎、節(jié)段性回腸炎)或肺及呼吸系統(tǒng)炎癥(哮喘、竇炎、鼻炎)以及接觸和延遲過敏；·器官移植；·自免疫和病毒疾病例如狼瘡、AIDS、寄生蟲和病毒感染、糖尿病及其并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病、腎病和多神經(jīng)病、多發(fā)性硬化、肌?。弧ぐ┌Y；·常染色體遺傳疾病例如Unverricht-Lunborg??；·與中毒(鎘中毒、吸入正己烷、農(nóng)藥、除草劑)有關(guān)的神經(jīng)疾病、與治療(放射治療)或遺傳起源的疾病(Wilson病)有關(guān)的神經(jīng)疾病；·與糖尿病有關(guān)的陽萎；·所有以一氧化氮過多產(chǎn)生或機能障礙和/或谷胱甘肽代謝和硫羥基氧化還原反應為特征的疾病。
在所有這些疾病中，有實驗證據(jù)表明其中涉及一氧化氮或谷胱甘肽代謝機能障礙(Kerwin等，氧化氮一種新型的第二信使(Nitricoxidea new paradigm for second messengers)，J.Med Chem.38，4343-4362，1995；Packer等，α-硫辛酸作為生物抗氧化劑(Alpha-lipoic acid as biological antioxidant)，F(xiàn)ree RadicalBiology & Medicine 19，227-250，1995)。這種情況、特別是帕金森氏病說明了本發(fā)明(Beal MF，帕金森氏病發(fā)病機理中的興奮毒性和氧化氮(Excitotoxicity and nitric oxide in Parkison’s diseasepathogenesis)，Ann.Neurol.44[Suppl 1]，S110-S114，1998；Donato A等，帕金森氏病中的谷胱甘肽氧化應激反應與線粒體損害之間的聯(lián)系(Gluthathion in Parkinson’s diseasea link betweenoxidative stress and mitochondrial damage)，Ann.Neurol.32，S111-S115，1992)。在本文中，可以抑制一氧化氮形成或使硫羥基或谷胱甘肽生物功能重建的藥物可以產(chǎn)生有益的作用。
此外，在早期專利中，本發(fā)明人已經(jīng)描述了NO合酶抑制劑及其應用(US 5,081,148；US 5,360,925)，并且最近描述了這些抑制劑與具有抗氧化或抗自由基(antiradicular)性質(zhì)的產(chǎn)物的組合物(PCT WO98/09653)。他們還在PCT專利申請WO 98/42696和WO 98/58934中描述了脒衍生物，并在PCT專利申請WO 00/02860中描述了氨基吡啶衍生物。這些脒和氨基吡啶衍生物兼具有NO合酶抑制劑和ROS抑制劑的特征。
本發(fā)明的目的是新的硫辛酸衍生物、其制備方法及其在治療中的應用。
因此，本發(fā)明涉及通式(I)的產(chǎn)物或其鹽，其特征在于它包括式(I)a和(I)b產(chǎn)物 其中R1和R2獨立地表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；A表示下列基團之一-(CH2)m-NR3-CO(CH2)n-、-(CH2)m-CO-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-CONR3-(CH2)p-NR4-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n-或-(CH2)m-，m和n是0-6的整數(shù)，p是2-6的整數(shù)，并且R3和R4獨立地表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；X表示下式基團 其中與Y基團相連的基團T表示基團-(CH2)i-，其中i表示0-6的整數(shù)，并且R5表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或-(CH2)m-Q基團，其中Q表示鹵素、羥基、氰基、氨基、烷氧基、烷硫基、烷氨基或二烷氨基，或者R5還表示5-6元雜環(huán)，該雜環(huán)原子選自-O-、-N(R6)-和-S-基團，R6表示氫原子、具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或者是與X基團的苯基環(huán)相連的鍵；或者X還表示-(CH2)q-基團，其中q表示0-6的整數(shù)；并且最后Y表示下列基團之一 其中B表示具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、5-6元碳環(huán)芳基或含有1-4個選自O(shè)、S、N雜原子的5-6元雜環(huán)芳基，特別是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，該芳基可以任選地被一個或多個選自具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或烷氧基的基團取代，或者B表示NR8R9，其中R8和R9獨立地表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或者R8和R9中的一個表示硝基、而另一個表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或者R8和R9與氮原子結(jié)合在一起表示5-6元非芳族雜環(huán)，鏈的組成部分選自-CH2-、-NH-、-O-或-S-，或者B還表示SR10基團，其中R10表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，并且R7表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
優(yōu)選的是，當R5表示5-6元雜環(huán)時，R5是下列雜環(huán)之一吡咯、咪唑、吡唑、三唑、噻唑烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、N-烷基-哌嗪、硫代嗎啉、嗎啉、氮雜環(huán)丁烷。
再者，本發(fā)明尤其涉及前面定義的通式(I)產(chǎn)物，其中獨立地發(fā)現(xiàn)以下特征·A表示下列基團之一-(CH2)m-NR3-CO-(CH2)n-、-(CH2)m-CONR3-(CH2)n-或-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n，m表示0-4的整數(shù)并且n表示0-6的整數(shù)，R3和R4獨立地表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；·X表示下式基團 其中與Y基團相連的基團T表示-(CH2)i-基團，其中i表示0或1，并且R5表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或-(CH2)m-Q，其中Q表示鹵原子或羥基、氰基、氨基、烷氧基、烷氨基或二烷氨基，或者R5表示5-6元雜環(huán)，其中的雜環(huán)原子選自-O-、-N(R6)-和-S-基團，R6表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或與X基團的苯基環(huán)相連的鍵；或者·Y表示下式基團 其中B表示具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，5-6元碳環(huán)芳基或具有1-4個選自O(shè)、S、N的雜原子的5-6元雜環(huán)芳基，尤其是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，該芳基任選地被一個或多個選自具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或烷氧基的基團取代。
特別優(yōu)選的是，本發(fā)明涉及實施例中描述的下列產(chǎn)物(有時是鹽的形式)-N-{4-[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-乙酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}苯基)-2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}芐基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-(二甲基氨基)芐基]-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-(1H-吡咯-1-基)芐基]-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-以及這些化合物的鹽。
此外，本發(fā)明提供了一些獲得上述通式(I)產(chǎn)物的方法，在下文中將描述優(yōu)選方法的條件。
因此，本發(fā)明尤其涉及如上定義的通式(I)的脒的制備方法，其特征在于將通式(II)中間體 其中A和X如上所定義，與通式(I.i)中間體反應 其中B如上所定義，并且L表示部分基團例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、鹵素、芳基醇基或甲苯磺酰基。
此外，本發(fā)明涉及通式(I)化合物的制備方法，其中A表示如上定義的-(CH2)m-CONR3-(CH2)n-基團，其特征在于將下面所示的通式(VII)a中間體 R3、X和Y如上所定義，并且A′表示-(CH2)n-基團，n如上所定義，與通式(I.vi)化合物反應 m如上所定義。
再者，本發(fā)明涉及通式(I)化合物的制備方法，其中A表示如上定義的-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n基團，其特征在于將如下所示的通式(VII)b中間體HN(R4)-A’-X-Y(VII)bR4、X和Y如上所定義，并且A′表示-(CH2)n-基團，n如上所定義，與通式(I.vi)化合物和二苯基磷?；B氮化物在堿例如三乙胺存在下反應 m如上所定義。
本發(fā)明還涉及通式(I)化合物的制備方法，其中B是胺，其特征在于將通式(II)中間體 其中A和X如上所定義，a)與通式(I.ii)中間體反應 其中L表示部分基團，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、鹵素、芳基醇基或甲苯磺?；?，或者b)與通式(I.iii)中間體反應 其中L表示部分，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、鹵素、芳基醇基或甲苯磺?；?，并且Gp是氨基甲酸酯類的保護基例如叔丁氧羰基，如果選擇與通式(I.iii)化合物反應，則在該反應之后，在強酸例如三氟乙酸存在下進行水解，或者c)與式(I.iv)衍生物(N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍)反應 或者d)最后與式(I.v)衍生物反應，其中Gp表示保護基S＝＝N-Gp.
(I.v)
在某些情況下，本發(fā)明化合物可以包括不對稱碳原子，因此具有兩種可能的對映異構(gòu)形式，即“R”和“S”構(gòu)型。本發(fā)明包括這兩種對映異構(gòu)形式以及它們的組合，包括外消旋“RS”混合物。為了簡化，當在結(jié)構(gòu)式中沒有具體指明構(gòu)型時，應該理解為其表示兩種對映異構(gòu)形式及其混合物。
此外，在本申請中，除非另外指明，烷基是指含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。除非另外指明，鏈烯基是指含有1-6個碳原子、并具有至少一個不飽和雙鍵的直鏈或支鏈烷基。
烷硫基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基和鏈烯基是指相對于具有上面所述含義烷基的烷硫基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基和鏈烯基。
含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基尤其是指甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基、戊基、新戊基、異戊基、己基、異己基。鹵素是指福、氯、溴或碘原子。
本發(fā)明的目的還有作為藥物的上述化合物及其可藥用鹽。本發(fā)明還涉及含有這些化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，以及這些化合物或其可藥用鹽在制備抑制神經(jīng)元NO合酶或可產(chǎn)生NO的合酶、使天然或合成的抗氧化劑再生的藥物中的應用，或者本發(fā)明提供了NO合酶抑制和使抗氧化劑再生的雙重功能。
可藥用鹽尤其是指無機酸的加成鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽和硝酸鹽，或者有機酸的加成鹽例如乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、雙羥萘酸鹽、草酸鹽和硬脂酸鹽。由堿例如氫氧化鈉或氫氧化鉀形成的鹽也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)，只要其可以使用?？伤幱名}的其他實例可參見″Pharmaceutical salts″，J.Pharm.Sci.661(1977)。
本發(fā)明的目的還涉及通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備治療有一氧化氮和/或硫羥基的氧化還原反應參與的疾病的藥物中的應用，所述疾病是例如中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病，尤其有代表性的是帕金森氏病、腦血管疾病、增殖和炎性疾病、嘔吐、膿毒性休克、由放射活性輻射、日光照射或器官移植引起的疾病、自免疫和常染色體疾病、癌癥和所有涉及一氧化氮產(chǎn)生或機能障礙和/或涉及硫羥基氧化還原反應的疾病。
本發(fā)明的目的還涉及通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備治療腦血管疾病例如偏頭痛、局部缺血或出血引起的腦梗塞、局部缺血和血栓形成的藥物中的應用。
最后，本發(fā)明的目的是通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備治療中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應用，所述疾病是例如神經(jīng)退化疾病、疼痛、腦和骨髓損傷、對鴉片類物質(zhì)、酒精和成癮物質(zhì)成癮、勃起和生殖障礙、認知障礙、腦病、抑郁、焦慮、精神分裂癥、癲癇癥、昏睡病和進食障礙。
藥物組合物可以是固體形式例如粉末、顆粒、片劑、膠囊、脂質(zhì)體或栓劑。合適的固體載體可以是例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮和蠟。
含有本發(fā)明化合物的藥物組合物還可以以液體形式存在，例如溶液、乳液、懸浮液或糖漿。合適的液體載體可以是例如水、有機溶劑例如甘油或二元醇及其在水中的不同比例的混合物。
本發(fā)明的藥物可以局部、經(jīng)口或非腸道途徑，通過肌內(nèi)注射等形式給藥。
根據(jù)所用的活性化合物類型，本發(fā)明藥物的給藥劑量為0.1mg至10g。
根據(jù)本發(fā)明，可以按照下述方法制備通式(I)化合物。制備通式(I)化合物A)制備其中Y表示下式結(jié)構(gòu)的通式(I)化合物 第一種途徑按照方案1，可以由通式(II)、(III)和(IV)中間體制備通式(I)化合物，其中A、B、X和Y如上所定義并且Gp是氨基甲酸酯型保護基。 反應方案1可以使通式(II)的苯胺或胺衍生物與通式(I.i)化合物縮合，其中L表示部分基團(特別是烷氧基、烷硫基、磺酸基、鹵素、芳基醇基或甲苯磺?；?，以制備最終的取代脒型通式(I)化合物(參見反應方案1)。例如，當B是噻吩時，通式(II)衍生物可以與S-甲基噻吩硫代氨基甲酰胺氫碘酸鹽縮合，后者是按照文獻中所述方法制備的(Ann.Chim.(1962)，7，303-337)。該縮合反應可以任選地在DMF存在下、在50-100℃優(yōu)選的溫度范圍內(nèi)、在醇(例如甲醇或異丙醇)中加熱幾小時或者過夜進行。
如果B＝SR10，例如S-CH3，則將通式(II)的胺或苯胺與其中Gp表示保護基例如苯甲酰基的異硫氰酸酯(I.v)進行縮合反應。然后通過在合適的條件下裂解保護基使其脫保護，最后用例如鹵代烷處理所形成的硫脲，得到最終的通式(I)化合物。
如果B＝NR8R9，則最終的通式(I)化合物是胍。它們可以通過例如將通式(II)的胺或苯胺與通式(I.ii)或(I.iii)的衍生物縮合進行制備。按照文獻中所述的方法，使其中L表示例如吡唑環(huán)的通式(I.ii)試劑與通式(II)的胺縮合(J.Org.Chem.(1992)57，2497-2502)，對于其中L表示例如吡唑環(huán)并且Gp為tBuOCO基團的通式(I.iii)試劑(Tetrahedron Lett.(1993)34(21)，3389-3392)或者其中L表示-N-SO2-CF3基團并且Gp為tBuOCO基團的通式(I.iii)試劑(J.Org.Chem.(1998)63，3804-3805)也是類似。在合成的最后階段，在強酸例如三氟乙酸存在下使胍功能基脫保護。
如果B＝-NHNO2，則可以采用文獻所述條件，通過例如通式(II)的胺或苯胺與通式(I.iv)的試劑(N-甲基-N′-亞硝基胍)縮合，制備最終的通式(I)化合物(J.Amer.Chem.Soc.(1947)，69，3028-3030)。
由其中A、X和Y如上所定義的通式(I)a化合物得到通式(I)b化合物。在醇溶劑例如甲醇中、在還原劑例如NaBH4、NaBH3CN或LiAlH4存在下，將通式(I)a的硫辛酸化合物轉(zhuǎn)化為其中R1＝R2＝H的通式(I)b的二氫硫辛酸衍生物。通過將其中R1＝R2＝H的通式(I)b化合物與其中R1和R2如上所定義并且鹵原子是部分基團的式R1-Hal和/或R2-Hal(Hal＝鹵原子)反應，制備其中R1和R2不是氫的通式(I)b化合物。該反應例如在合適的溶劑如THF、丙酮、乙酸乙酯中，在堿如碳酸鉀或三乙胺存在下進行，以制備通式(I)b中間體。制備通式(II)化合物通過使保護基(Gp)裂解或者使硝基還原，制得通式(II)中間體。
其中A和X如上所定義的通式(II)中間體可以由反應方案1中的通式(III)或(IV)中間體制備，通式(III)和(IV)中間體是分別含有例如氨基甲酸酯或硝基形式的保護的胺或苯胺(NHGp)的化合物。尤其是，在保護基為BOC的情況下，它們以標準方式用TFA或HCl脫保護，以最終產(chǎn)生通式(II)的伯胺或苯胺。在反應方案1中，其中A和X如上所定義的通式(IV)中間體的硝基官能團的還原通過例如在下述條件下加熱產(chǎn)物進行在合適的溶劑例如含少量乙醇的乙酸乙酯中，在SnCl2存在下(J.Heterocyclic Chem.(1987)，24，927-930；TetrahedronLetters(1984)，25(8)，839-842)、在SnCl2/Zn存在下(Synthesis.(1996)，9，1076-1078)，使用在溶劑例如乙醇中的NaBH4-BiCl3(Synth.Com.(1995)25(23)，3799-3803)，或者然后使用其中加有水合肼的阮內(nèi)鎳(Monatshefte für Chemie，(1995)，126，725-732)，或者在回流條件下使用在乙醇或氯化銨混合物中的銦(Synlett(1998)9，1028)。然后在氯化鐵存在下(FeCl3)(Synlett(1991)10，717-718)或者在碘存在下(Tetrahedron Letters.(1997)，38(33)，5785-5788)將雙還原產(chǎn)物再氧化，以最終產(chǎn)生再含通式(II)的二硫雜環(huán)戊烷的胺和苯胺。制備通式(III)和(IV)化合物合成通式(III)和(IV)的甲酰胺在反應方案1中，通過將通式(I.vi)的酸與通式(V)的單保護的胺或苯胺或者其中A′表示-(CH2)n-基團的通式(VI)的硝基衍生物縮合，制備其中A、X、R3和m如上所定義的通式(III)和(IV)的甲酰胺。在本申請的該合成反應方案中，根據(jù)情況，Rx是指R3或R4。在標準肽合成條件下(M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice of PeptideSynthesis，145(Springer-Verlag，1984))，在THF、二氯甲烷或DMF中，在偶合試劑例如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)(J.Med.Chem.(1992)，35(23)，4464-4472)或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC或WSCI)(John Jones，Thechemical synthesis of peptides，54(Clarendon Press，Oxford，1991))存在下，或者在氯甲酸異丁酯和N-甲基嗎啉存在下(Org Prep.Proced.Int.，(1975)，35，215)形成甲酰胺鍵。非市售的通式(I.vi)羧酸以及通式(V)和(VI)的胺/苯胺的合成如下文所述。 反應方案2第二種途徑按照反應方案3，還可以由通式(VII)、(VIII)、(IX)和(X)中間體制備通式(I)化合物，其中A、B、X和Y如上所定義，A’表示-(CH2)n-基團，根據(jù)情況，Rx是指R3或R4，并且Gp是保護基例如氨基甲酸酯型保護基。
反應方案3合成通式(I)的甲酰胺在反應方案4中，通過將通式(I.vi)的酸與通式(VII)的胺/苯胺縮合，制備其中A’、X、R3、Y和m如上所定義的通式(I)化合物。在標準肽合成條件下(M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice ofPeptide Synthesis，145(Springer-Verlag，1984))，在THF、二氯甲烷或DMF中，在偶合試劑例如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)(J.Med.Chem.(1992)，35(23)，4464-4472)或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC或WSCI)(John Jones，The chemical synthesis of peptides，54(Clarendon Press，Oxford，1991))存在下，或者在氯甲酸異丁酯和N-甲基嗎啉存在下(Org Prep.Proced.Int.，(1975)，35，215)形成甲酰胺鍵。非市售的通式(I.vi)羧酸的合成如下文所述。 反應方案4合成通式(I)的脲在反應方案5中，在溶劑例如甲苯中、在二苯基磷酰基疊氮化物(DPPA)和堿例如三乙胺存在下，將將通式(I.vi)的酸與通式(VII)的胺/苯胺縮合，優(yōu)選2-3小時，并且優(yōu)選在40-110℃、例如80℃加熱。
反應方案5制備通式(VII)、(VIII)、(IX)和(X)化合物通過將保護基裂解得到通式(VII)化合物。在反應方案3中，可以由通式(VIII)化合物制備其中Rx、A’、X和Y如上所定義的通式(VII)化合物，它們是含有例如氨基甲酸酯形式的保護胺(NGp)的化合物。尤其是當保護基為BOC時，這些化合物以標準的方式，用三氟乙酸(TFA)或HCl脫保護，以最終制備通式(VII)的胺。
按照反應方案3，可以由通式(IX)和(X)中間體制備通式(VIII)化合物，其中B、A’、X、Y和Rx如上所定義并且Gp是例如氨基甲酸酯型保護基。
如上面反應方案1中對通式(I)化合物所述，可以將通式(IX)的胺/苯胺衍生物與其中L表示部分基團的通式(I.i)、(I.ii)和(I.iii)化合物縮合，或者與通式(I.iv)和(I.v)化合物縮合，以最終制備反應方案中的通式(VIII)化合物。如果R3表示2-羥基-4，6-二甲氧基芐基并且Gp表示叔丁氧羰基(BOC)，這些條件則使得其就地N-脫芐基化，從而直接制得反應方案6中的通式(VIII)化合物。 反應方案6通過將通式(X)化合物的硝基還原，制備通式(IX)化合物。在反應方案3中，其中Rx、A′和X如上所定義的通式(X)化合物的硝基官能團的還原通過例如在下述條件下加熱產(chǎn)物進行在合適的溶劑例如含少量乙醇的乙酸乙酯中，在SnCl2存在下(J.Heterocyclic Chem.(1987)，24，927-930；Tetrahedron Letters(1984)，25(8)，839-842)、在SnCl2/Zn存在下(Synthesis.(1996)，9，1076-1078)，或者使用在溶劑例如乙醇中的NaBH4-BiCl3(Synth.Com.(1995)25(23)，3799-3803)，或者然后使用其中加有水合肼的阮內(nèi)鎳(Monatsheftefür Chemie，(1995)，126，725-732)，或者在回流條件下使用在乙醇或氯化銨混合物中的銦(Synlett(1998)9，1028)，以最終產(chǎn)生通式(IX)的伯胺和苯胺。
非市售的通式(X)化合物的制備如下文所述。B)制備其中Y表示下式結(jié)構(gòu)的通式(I)化合物 按照反應方案7所述的方法，可以由通式(II)中間體制備其中A、X、Y和R7如上所定義的通式(I)化合物。 反應方案7按照J.Chem.Soc.Perkin Trans.(1984)，12，2801-2807中所述的實驗方案，通過在60-100℃的溫度范圍內(nèi)、在羥胺鹽酸鹽存在下、在溶劑例如乙醇中進行加熱，使通式(II)化合物的2，5-二甲基吡咯保護基裂解，制得最終的通式(I)分子。制備通式(II)化合物可以按照下列合成反應方案制備通式(II)化合物1)通式(II.x)的取代2-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶的制備方法1.1)在反應方案8中，由通式(II.1)化合物例如2-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶制備用獲得通式(II)中間體的合成前體。這是按照J.Chem.Soc.Perkin Trans.，(1984)，12，2801-2807中所述實驗方案，由市售的6-氨基-2，4-二甲基吡啶制得的。在-50℃至-30℃的溫度范圍內(nèi)，在無水溶劑例如乙醚中，在惰性氣氛下并且任選地在N，N，N’，N’-四甲基乙二胺存在下，用強堿例如n-BuLi處理通式(II.1)化合物，使得衍生物鋰化形成中間體(II.2)，后者在親電子試劑E+存在下形成通式(II.x)加成物。 反應方案81.2)可以與通式(II.2)的鋰化衍生物反應的親電子試劑E+是例如保護的鹵化胺。通式(II.3)的胺由中間體(II.2)制備，后者是例如在上述條件下、在保護的鹵化胺上(例如以甲硅烷基化的衍生物或鄰苯二甲酰亞胺形式)縮合的。在文獻所述的條件下進行脫保護后，最終得到通式(II.4)的胺(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groupsin Organic Synthesis，Second edition(Wiley-Interscience，1991))。 反應方案92)通式(II)化合物的制備方法制備通式(II)的甲酰胺
在反應方案10中，還可以在上述條件下，通過將通式(I.vi)的羧酸與通式(II.4)的胺縮合，制備其中m、R3、A’和R7如上所定義的通式(II)的甲酰胺。非市售的通式(I.vi)羧酸的合成如下所述。 反應方案103)制備某些非市售的中間體按照文獻所述方法制備其中m如上所定義的非市售通式(I.vi)的酸。例如，按照Tetrahedron Letters(1997)，38(33)，5785-5788所述實驗方案，在步驟5中得到trisnorlipoic acid。
當X表示-(CH2)q-基團時，按照文獻所述方法制得其中R3表示H的選擇性單保護的通式(V)和(IX)的伯胺，(例如Synthesis(1984)，12，1032-1033；Synth.Commun.(1990)，20(16)，2559-2564；J.Amer.Chem.Soc.(1993)，115(9)，3548-3557；J.Med.Chem.(1989)，32(2)，391-396).JAmer.Chem.Soc.(1995)，117(11)，3308-3309)。按照文獻所述方法制備其中R3表示H的通式(VI)的伯硝基-胺(例如J.Chem.Soc.(1947)，1487)。
當X表示亞苯基并且n和R5如上所定義時，按照下文反應方案2.1中說明的方法，制備其中R3表示H的通式(V)的胺/苯胺。 反應方案2.1在反應方案2.1中，由通式(VI.1)的胺或硝基苯胺制備通式(V)化合物。例如，在合適的溶劑如二噁烷或二氯甲烷或乙腈中，在Fmoc-C1(Tetrahedron Lettes.(1989)，30(11)，1401-1404)或(Boc)2或本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員已知的其他保護基的前體(Gp)存在下，將胺或苯胺官能團進行保護，以制備通式(V.2)化合物(或通式(X)化合物)。通常，在乙醇中、在10％Pd/C存在下進行催化氫化，或者采用前面描述的其他方法使通式(V.2)中間體的硝基官能團還原，以制備苯胺(V.3)(或通式(IX)化合物)。例如，在Fmoc-Cl或(Boc)2或本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員已知的其他保護基的前體(Gp)存在下，將通式(V.3)的苯胺官能團進行保護，應該理解在反應方案2.1中Gp1≠Gp2。合成的最后階段是通過單脫保護使伯胺再生，例如，當Gp1＝Fmoc時，例如在合適的溶劑如DMF或二噁烷中，在堿例如哌啶、嗎啉、DMAP或二異丙基乙胺存在下進行脫保護(Tetrahedron Letters.(1989)，30(11)，1401-1404)。當Gp2＝Boc時，以標準方式，使用三氟乙酸或HCl進行脫保護，以最終制備通式(V)的單保護苯胺。
在反應方案6.1中，由通式(VI.1)的硝基胺或硝基苯胺制備其中R3表示2-羥基-4，6-二甲氧基酚基團、Gp表示Boc并且n和R5如上所定義的通式(IX)和(X)化合物。 反應方案6.1在反應方案6.1中，在還原介質(zhì)中，通過將2-羥基-4，6-二甲氧基苯甲醛與通式(VI.1)的胺/苯胺縮合，制備通式(IX)和(X)化合物。該反應在醇性溶劑例如甲醇中、在還原劑例如NaBH4或NaBH3CN存在下進行。采用標準方法，在二氯甲烷中，用(Boc)2對所形成的仲胺進行保護，以制備通式(X)化合物。在乙醇中、在10％Pd/C存在下，通過催化氫化使通式(X)化合物的硝基官能團還原，以制備苯胺(IX)。
在反應方案3.1和3.2中，當X表示亞苯基并且R5表示含氮原子的5-6元雜環(huán)(het)或者含雜原子W的基團(所述基團是指Wαβ，其中W＝O、N或S，當W＝O或S時，α表示烷基并且β不存在，或者當W＝N時，β表示H或烷基)時，按照文獻所述方法制備其中R3表示H的非市售通式(X)的胺/苯胺(例如J.Med.Chem.(1980)，23，973-975；J.Med.Chem.(1990)，33，633-641；Chem.Heterocycl.Compd.(EN).(1969)，5，683-687；J.Org.Chem.USSR.(EN)(1989)，3，599-600；J.Med.Chem.(1994)，37，467-475；J.Med.Chem.(1999)，42，4362-4379)。例如可以按照反應方案3.1所述的方法制備通式(X)化合物。 反應方案3.1在反應方案3.1中，由通式(X.2)的鹵代硝基苯甲腈制備其中n、het和Wap如上所定義的通式(X)化合物。在反應方案3.1中，例如在合適的溶劑如乙醚或THF中，在乙硼烷或LAH存在下，將通式(X.2)中間體的腈官能團還原。然后以Boc的形式(X.4)或本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員已知的其他保護基(Gp)的形式將鹵代硝基苯胺/胺(X.3)保護，然后在溶劑例如DMSO或DMF中，在堿例如碳酸鉀、氫氧化鉀或氫氧化鈉存在下，用雜環(huán)基(het)將通式(X.4)化合物親核取代，以制備通式(X)中間體。
或者，可以按照下文反應方案3.2中所給出的方法制備如上所定義的通式(X)化合物
反應方案3.2在反應方案3.2中，由通式(X.2)的鹵代硝基苯甲腈制備其中R5表示含氮原子的5-6元雜環(huán)(het)或含雜原子W的基團(Wαβ如上所定義)的通式(X)化合物。在溶劑例如DMSO或DMF中，在堿例如碳酸鉀、氫氧化鉀或氫氧化鈉存在下，用合適的試劑將通式(X.2)化合物親核取代，以制備通式(X.5)中間體。
在反應方案3.2中，例如在在合適的溶劑如乙醚或THF中，在乙硼烷或LAH存在下，將通式(X.5)中間體的腈官能團還原。然后以Boc的形式或本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員已知的其他保護基(Gp)的形式將鹵代硝基苯胺/胺(X.6)保護，以最終制備反應方案3.2中的通式(X)中間體。
下面的實施例用于說明上述方法，而不是意在限制本發(fā)明的范圍。
采用與中間體7.B.1的方案相同的實驗方案，但用中間體2.B.1代替對硝基芐胺。得到白色固體，產(chǎn)率60％。熔點133.5-134.4℃2.B.3)2-(4-氨基苯基)乙基(2-羥基-4，6-二甲氧基芐基)氨基甲酸叔丁基酯采用與中間體7.B.1的方案相同的實驗方案，但用中間體2.B.2代替中間體7.1。得到淺黃色油狀物，產(chǎn)率90％。2.B.4)2-(4-{[(氨基(2-噻吩基)亞甲基}氨基}苯基)乙基氨基甲酸叔丁基酯采用與中間體1.3的方案相同的實驗方案，但用中間體2.B.3代替中間體1.2。這些條件下，發(fā)生了N-脫芐基化，從而得到了以Boc保護的單保護的伯胺。得到黃色固體，產(chǎn)率79％。熔點144℃2.B.5)N’-[4-(2-氨基乙基)苯基]-2-噻吩甲亞胺酰胺(thiophenecarboximidamide)采用與中間體1.2的方案相同的實驗方案，但用中間體2.B.4代替中間體1.1。得到白色固體，產(chǎn)率79％。熔點169.2-170.5℃。2.B.6)N-{2-{4[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3戊酰胺采用與中間體1.1的方案相同的實驗方案，但用中間體2.B.5代替N-BOC-1，4-亞苯基二胺。得到黃色固體，產(chǎn)率79％。熔點146-148℃。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.32(m，2H，CH2)；1.60(m，4H，CH2)；1.88(m，1H，CH2)；2.07(t，2H，CH2，J＝7.36Hz)；2.41(m，1H，CH2)；2.65(m，2H，CH2)；3.10-3.30(m，4H，CH2)；3.60(m，1H，-S-CH-)；6.33(寬峰，2H，NH，脒)；6.78(d，2H，芳香性，J＝8,04Hz)；7.08(m，1H，噻吩)；7.12(d，2H，芳香性，J＝8.16Hz)；7.60-7.80(m，2H，噻吩)；7.81(t，1H，CONH J＝5.56Hz).IRνC＝N(脒)1590cm-1；νC＝O(酰胺)1629cm-1.2.C.第二種途徑的另一種方法也可采用方案3所示的另一種合成方法，其中Gp＝Boc。在這種情況下，實驗方案類似于之后7.B方法所述，但用4-硝基苯乙胺代替對硝基芐胺。實施例3N-{2-{4[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-乙酰胺鹽酸鹽3.A.第一種途徑的方法采用與化合物1所述方法相同的實驗方案，但用trisnorlipoicacid[2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酸](按照Tetrhetron Letters，(1997)，38，33，5785制備)代替硫辛酸。黃色固體。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.91(m，1H，CH2)；2.30-2.60(m，3H，CH2)；2.70-2.90(m，2H，CH2)；3.17(m，2H，CH2)；3.40(m，2H，CH2)；3.93(m，1H，-S-CH-)；7.30-7.50(m，5H，芳香性)；8.10-8.30(m，3H，芳香性+CONH)；8.86(寬峰，1H，NH+)；9，80(寬峰，1H，NH+)；11.50(寬峰，1H，NH+).MSMH+＝392.1.3.B.第二種途徑的方案或者，按照方案3(其中Gp＝Boc并且R3＝2-羥基-4，6-二甲氧基芐基)和6所示方法合成實施例3的化合物。采用與方法2.B所述方案相同的實驗方案，但用trisnorlipoic acid[2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酸](按照Tetrhetron Letters，(1997)，38，33，5785制備)代替硫辛酸。黃色固體。3.C.第二種途徑的另一種方法也可采用方案3所示的另一種合成方法，其中Gp＝Boc。采用與之后的方法7.B所述方案相同的實驗方案，但用硝基苯乙胺代替對硝基芐胺并且用trisnorlipoic acid[2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酸](按照Tetrhetron Letters，(1997)，38，33，5785制備)代替硫辛酸。實施例4N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺4.1)6-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4-甲基-2-吡啶丁酰胺在氮氣氛下，將1g(5mmol)2-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4，6-二甲基吡啶(按照J.Chem.Soc.，Perkin Trans.，1984，12，2801的方法，由6-氨基-2，4-二甲基吡啶制備)溶于10ml無水乙醚和1.132ml(7.5mmol)N，N，N，N-四甲基二乙胺(TMEDA)中。將該反應混合物冷卻到-20℃后，滴加2,4ml(6mmol)2.5M BuLi的己烷溶液。在-20℃保持5小時后，將反應混合物冷卻到-45℃，加入1.68g(6mmol)1-(3-溴丙基)-2，2，5，5-四甲基-1-氮雜-2，5-二disila環(huán)戊烷并使溫度回升至室溫過夜。加入50ml飽和氯化銨溶液并將該混合物在25℃攪拌2小時。潷析有機相并順序用40ml水和40ml鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂洗滌，過濾并真空濃縮。所得殘余物經(jīng)二氧化硅柱純化(洗脫劑＝含5％乙醇的二氯甲烷)，得到黃色油狀物，產(chǎn)率62％。NMR1H(CDCl3，400MHz，δ)1.52(m，2H，CH2)；1.78(m，2H，CH2)；2.11(s，6H，2x CH3吡咯)；2.39(s，3H，CH3吡啶)；2.72(t，2H，CH2J＝7.02Hz)；2.79(t，2H，CH2J＝7.62Hz)；5.87(s，2H，吡咯)；6.85(s，1H，吡啶)；6.98(s，1H，吡啶).4.2)N-{4-[6-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4-甲基-2-吡啶基]丁基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺采用與如中間體1.1所述方案的相同的方法，但用中間體4.1代替N-BOC-1，4-亞苯基二胺。獲得黃色油狀物。NMR1H(CDCl3，400MHz，δ)1.30-2.00(m，11H，CH2)；2.07(m，2H，CH2)；2.11(s，6H，2x CH3吡咯)；2.40(s，3H，CH3吡啶)；2.45(m，1H，CH2)；2.82(m，2H，CH2)；3.10-3.30(m，4H，CH2)；3.57(m，1H，-S-CH-)；5.87(s，2H，吡咯)；5.94(寬峰，1H，CONH)；6.87(s，1H，吡啶)；6.99(s，1H，吡啶).MSMN+＝446.24.3)N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺將中間體4.2(1.53g；3,43mmol)溶于加有18ml水的55ml乙醇中并加入1.2g(17.2mmoles)鹽酸羥胺。將該反應混合物加熱回流24小時。溫度回落到25℃后，該混合物用20ml飽和碳酸氫鈉溶液稀釋并用100ml二氯甲烷萃取產(chǎn)物。潷析后，有機溶液用40ml飽和碳酸氫鈉溶液和40ml鹽水順序洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。蒸發(fā)得到的殘余物經(jīng)二氧化硅柱純化(洗脫劑＝含2.5％乙醇的二氯甲烷)，得到黃色油狀物，產(chǎn)率76％。NMR1H(CDCl3，400MHz，δ)1.30-1.80(m，10H，CH2)；1.89(m，1H，CH2)；2.16(m，2H，CH2)；2.19(s，3H，CH3吡啶)；2.40(m，1H，CH2)；2.58(m，2H，CH2)；3.05-3.30(m，4H，CH2)；3.56(m，1H，-S-CH-)；4.35(寬峰，2H，NH2)；5.80(寬峰，1H，CONH)；6.17(s，1H，吡啶)；6.35(s，1H，吡啶).IRνC＝O(酰胺)1637cm-1.實施例5N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-乙酰胺富馬酸鹽采用與化合物4所述方案相同的試驗方案，但trisnorlipoicacid[或2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酸](按照TetrhetronLetters，(1997)，38，33，5785制備)代替硫辛酸。然后在丙酮/甲基乙基酮(50/50)混合溶劑中，將該游離堿用富馬酸鹽化。得到乳白色粉末的富馬酸鹽，產(chǎn)率14.8％。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.40(m，2H，CH2)；1.57(m，2H，CH2)；1.92(m，1H，CH2)；2.15(s，3H，CH3吡啶)；2.30-2.70(m，5H，CH2)；3.03-3.18(m，4H，(m，1H，-S-CH-)；6.17(s，1H，吡啶)；6.26(s，1H，吡啶)；6.00-6.60(寬峰，2H，-CO2H富馬酸)；6.60(s，2H，CH＝CH，富馬酸)；7.90(寬峰，1H，CONH).IRνC＝O(酰胺)1649cm-1MSMH+＝326.2實施例6N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基}氨基}苯基)-2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酰胺采用與化合物1所述方案相同的試驗方案，但trisnorlipoicacid[或2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酸](按照TetrhetronLetters，(1997)，38，33，5785制備)代替硫辛酸。得到黃色泡沫。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)2.00(m，1H，CH2)；2.40-2.80(m，3H，CH2)；3.00-3.30(m，2H，CH2)；4.10(m，1H，-S-CH-)；6.50-6.80(寬峰，2H，NH+)；6.80-7.10(m，3H，芳香性)；7.50-7.80(m，4H，芳香性)；9.93(s，1H，CONH).MH+＝364.1實施例7N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}芐基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺7.A.第一種途徑的方法采用與化合物1所述方案相同的試驗方案，但用1-叔丁基4-(氨甲基)苯基氨基甲酸酯代替N-BOC-1，4-亞苯基二胺。白色固體。熔點151.9-152.1℃7.B.1. 4-硝基芐基氨基甲酸叔丁基酯將5.66g(30.0mmol)對硝基芐胺鹽酸鹽溶于100ml二氯甲烷和9.2ml三乙胺。用冰浴冷卻該混合物后，分數(shù)次加入7.2g(33.0mmol)(Boc)20。該反應混合物在23℃攪拌12小時后，傾入冰水混合物中。潷析有機層并順序用20ml水和20ml鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥后，過濾并真空濃縮，用異丙基醚研制，得到白色固體，產(chǎn)率67.4％。熔點107.8℃7.B.2. 4-氨基芐基氨基甲酸叔丁基酯
將7.B.1(5.1g；20.2mmol)在66ml二氯甲烷、乙酸乙酯和THF(1ml/60ml/5ml)混合液中的溶液以及1.0g 10％Pd/C加到安裝有磁力攪拌器的不銹鋼高壓釜中。將該混合物在氫氣壓(1.5巴)和20℃下攪拌20小時。過濾除去Pd/C，濾液真空濃縮。蒸發(fā)的殘余物用異丙基醚研制純化，得到灰白色粉末，產(chǎn)率42％。熔點74.4℃7.B.3. 4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基}氨基}芐基氨基甲酸叔丁基酯采用與中間體1.3所述方案相同的試驗方案，但用中間體7.B.2代替中間體1.2。獲得橙色油狀物，產(chǎn)率99％。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.40(s，9H，3xCH3)；4,19(d，2H，CH2，J＝6.00 Hz)；7.30-7.40(m，5H，芳香性)；7.46(t，1H，CONH，J＝6.00Hz)；8.10-8.20(m，2H，噻吩)；9,00-10,00(寬峰，2H，NH2脒)；11.10-11.40(寬峰，1H，HI).MH+＝332.27.B.4.N’-[4-(氨甲基)苯基]-2-噻吩甲亞胺酰胺采用與中間體1.2所述方案相同的試驗方案，但用中間體7.B.3代替中間體1.1。獲得白色固體，產(chǎn)率92％。熔點241.1-241.6℃。7.B.5.N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基}氨基}芐基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺采用與中間體1.2所述方案相同的試驗方案，但用中間體7.B.4代替N-BOC-1，4-亞苯基二胺。獲得白色固體，產(chǎn)率40％。熔點151.9-152.1℃實施例8N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺(采用第一種方案的方法制備)8.1. 5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)-N-(2-甲氧基-5-硝基苯基)戊酰胺將3.36g(21.0mmol)2-甲氧基-5-硝基苯胺、三乙胺(6.0ml)、3.0g(22.0mmol)羥基苯并三唑和4.21g(22.0mmol)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽順序加到4.12g(21.0mmol)(DL)-硫辛酸在50ml DMF中的溶液中。該反應混合物在80℃攪拌18小時后，用400ml水稀釋并繼續(xù)攪拌30分鐘。產(chǎn)物用200ml二氯甲烷萃取三次。有機溶液經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。過濾獲得的固體并用乙醚洗滌，干燥后得到2.6g黃色固體產(chǎn)物，產(chǎn)率37％。熔點116.7-117.1℃。8.2.N-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺將10ml飽和氯化銨水溶液和12.0g(0.183mol)碘粉順序加到2.6g(13.20mmol)中間體8.1在40ml乙醇中的溶液中。將該反應混合物加熱回流4.5小時(Synlett(1988)，9，1028)。該混合物冷卻到室溫后，濾過硅藻土。濾液用50％氫氧化鈉溶液堿化到pH 10。還原產(chǎn)物用150ml二氯甲烷萃取4次。有機溶液經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到棕色油狀物。將該油狀物溶于50ml乙酸乙酯中并用冰浴將該混合物冷卻到0℃。然后，滴加10％碳酸氫鉀水溶液。該反應混合物在0℃攪拌約10分鐘后，滴加碘溶液(0.8g在10ml乙酸乙酯中的溶液)直至碘顏色不再變化。產(chǎn)物用100ml乙酸乙酯萃取4次，有機溶液經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。經(jīng)二氧化硅柱純化(洗脫劑＝5％乙醇的二氯甲烷溶液)，得到棕色油狀物(1.0g；產(chǎn)率63％)。MH+＝327.208.3.N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基}氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺采用與步驟1.1所述方案相同的試驗方案，但用中間體8.2代替N-BOC-1，4-亞苯基二胺。得到棕色的膠狀物，產(chǎn)率32％。MH+＝436.10實施例9N-[5-{{氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-(二甲基氨基)芐基]-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺(采用第二種方案的方法制備)9.1. 2-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈在氬氣氛下，將1.66g(10.0mmol)2-氟-5-硝基芐腈、1.22g(15.1mmol)鹽酸二甲胺和3.46g(25.1mmol)碳酸氫鉀溶于DMF(30ml)中，然后將反應物在80℃下加熱18小時。將反應混合物冷卻到0℃后，加入冰水。反應混合物用乙酸乙酯萃取，有機相順序用50ml水和50ml鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。蒸發(fā)得到的殘余物用異丙基醚研制純化，過濾得到的固體并用異戊烷洗滌，干燥后得到2.0g黃色固體產(chǎn)物(產(chǎn)率100％)。熔點109-110.5℃9.2. 2-(氨甲基)-N，N-二甲基-4-硝基苯胺在氬氣氛下，將中間體9.1(1.5g；7.85mmol)溶于THF(40ml)中。然后將乙硼烷溶液(16ml，1M THF溶液)加到該反應混合物中并加熱回流6小時。加入甲醇(30ml)后，通入15分鐘氯化氫氣。將反應物蒸發(fā)至干并加到碳酸氫鈉溶液中。用二氯甲烷萃取，有機相順序用50ml水和50ml鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。蒸發(fā)得到的殘余物用異丙基醚和二氯甲烷的混合液結(jié)晶純化，得到黃色固體產(chǎn)物，產(chǎn)率82％。熔點196-200℃9.3. 2-(二甲氨基)-5-硝基芐基氨基甲酸叔丁基酯采用與實施例7的步驟7.B.1所述方案相同的試驗方案，但用中間體9.2代替對硝基芐胺鹽酸鹽。得到黃色固體，產(chǎn)率100％。熔點101-102℃。9.4. 5-氨基-2-(二甲氨基)芐基氨基甲酸叔丁基酯采用與實施例7的步驟7.B.2所述方案相同的試驗方案，但用中間體9.3代替中間體7.B.1。得到棕色的油狀物，產(chǎn)率15％。MH+＝266.209.5. 5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-(二甲氨基)芐基氨基甲酸叔丁基酯采用與實施例1的步驟1.3所述方案相同的試驗方案，但用中間體9.4代替中間體1.2。得到黃色固體，產(chǎn)率64％。熔點175.8-177.0℃9.6.N’-[3-(氨甲基)-4-(二甲基氨基)苯基]-2-噻吩甲亞胺酰胺采用與實施例1的步驟1.2所述方案相同的試驗方案，但用中間體9.5代替中間體1.1。得到黃色固體，產(chǎn)率66％。熔點169.0-170.0℃。9.7.N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基}氨基}-2-(二甲基氨基)芐基]-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺采用與實施例1的步驟1.1所述方案相同的試驗方案，但用中間體9.6代替N-BOC-1，4-亞苯基二胺。得到白色固體，產(chǎn)率67％。熔點183.5-185.0℃實施例10N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-(1H-吡咯-1-基)芐基]-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺采用與實施例9化合物所述方案相同的試驗方案，但在第一步中用吡咯代替鹽酸二甲胺。得到白色固體，產(chǎn)率72％。熔點156.1-157.6℃。本發(fā)明產(chǎn)物的藥理研究對大鼠小腦神經(jīng)元固有NO合酶作用的研究按照Bredt和Snyder(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(1990)87682-685)方法的改進方法，通過測定本發(fā)明產(chǎn)物對通過NO合酶的[3H]L-精氨酸向[3H]L-瓜氨酸的轉(zhuǎn)化作用的影響確定其抑制活性。快速取出Sprague-Dawley大鼠(300g-Charles River)的小腦，在4℃下切碎并在一定體積的提取緩沖液(HEPES 50mM，EDTA 1mM，pH7.4，胃酶抑素A 10mg/ml，亮肽素10mg/ml)中勻化。然后于4℃將勻化物在21000g下離心15分鐘。在玻璃試管中進行配制，其中裝有組成如下的100μl培養(yǎng)緩沖液100mM HEPES(pH7.4)、2mM’EDTA、2.5mMCaCl2、2mM二硫蘇糖醇、2mM還原的NADPH和10μg/ml鈣調(diào)素。加入25μl含有100nM[3H]L-精氨酸(特定活性56.4Ci/mmole，Amersham)和40uM非放射性的L-精氨酸的溶液。加入50μl勻化物引發(fā)反應，終體積為200μl(減少的25μl是水或測試產(chǎn)物)。15分鐘后，加入2ml停止反應緩沖液(20mM HEPES，pH5.5，2mM EDTA)使反應停止。使樣品通過1ml DOWEX樹脂柱后，用液體閃爍分光計定量測定放射性。
上述實施例1、2、3、4和5的化合物的IC50值均低于4.5μM。谷氨酸鹽誘導的氧化應力(oxidation stress)對培養(yǎng)細胞(HT-22)影響的研究通過測定本發(fā)明產(chǎn)物保護小鼠海馬系細胞(HT-22)免受谷氨酸鹽誘導的氧化應力的能力來確定其抑制活性。谷胱甘肽是細胞清除自由基的一種必要成分，其生物合成需要將胱氨酸活化轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)部。對抗胱氨酸滲透的谷氨酸鹽可降低谷光甘肽的水平，使細胞由于氧化應力的作用而死亡(Davis，J.B.和Maher，P.，Brain Res.，(1994)652169-173；Murphy，T.H.等人，Neuron，(1989)21547-1558)。于37℃，在加有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細胞。在96孔平板上進行實驗，每孔含5000個細胞。將谷氨酸鹽(5mM)加到含有或不含測試產(chǎn)物的培養(yǎng)基中。24小時后，通過MTT方法(Hansen，M.B.等人，J Immunol.Methods(1989)，119，203-210)測定細胞的存活率。用EC50評價化合物保護細胞使其免受谷氨酸鹽毒性作用的能力，以沒有接受谷氨酸鹽作用的細胞存活率為100％，計算相對細胞存活率EC50。
上述實施例1、2、3、4和5的化合物顯示EC50均低于30μM。
權(quán)利要求
1.通式(I)的產(chǎn)物或其鹽，其特征在于它包括式(I)a和(I)b產(chǎn)物 其中R1和R2獨立地表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；A表示下列基團之一-(CH2)m-NR3-CO(CH2)n-、-(CH2)m-CO-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-CONR3-(CH2)p-NR4-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n-或-(CH2)m-，m和n是0-6的整數(shù)，p是2-6的整數(shù)，并且R3和R4獨立地表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；X表示下式基團 其中與Y基團相連的基團T表示基團-(CH2)i-，其中i表示0-6的整數(shù)，并且R5表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或-(CH2)m-Q基團，其中Q表示鹵素、羥基、氰基、氨基、烷氧基、烷氨基或二烷氨基，或者R5還表示5-6元雜環(huán)，該雜環(huán)原子選自-O-、-N(R6)-和-S-基團，R6表示氫原子、具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或者是與X基團的苯基環(huán)相連的鍵；或者X還表示-(CH2)q-基團，其中q表示0-6的整數(shù)；并且最后Y表示下列基團之一 其中B表示具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、5-6元碳環(huán)芳基或含有1-4個選自O(shè)、S、N雜原子的5-6元雜環(huán)芳基，特別是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，該芳基可以任選地被一個或多個選自具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或烷氧基的基團取代，或者B表示NR8R9，其中R8和R9獨立地表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或者R8和R9中的一個表示硝基、而另一個表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或者R8和R9與氮原子結(jié)合在一起表示5-6元非芳族雜環(huán)，鏈的組成部分選自-CH2-、-NH-、-O-或-S-，或者B還表示SR10基團，其中R10表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，并且R7表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
2.權(quán)利要求1的產(chǎn)物，其特征在于X表示下式基團 其中與Y基團相連的基團T表示-(CH2)i-基團，其中i表示0-6的整數(shù)，并且R5表示吡咯、咪唑、吡唑、三唑、噻唑烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、N-烷基-哌嗪、硫代嗎啉、嗎啉或氮雜環(huán)丁烷基。
3.權(quán)利要求1的產(chǎn)物，其特征在于為下列化合物之一-N-{4-[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亞氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-乙酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-戊酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}苯基)-2-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}芐基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-(二甲基氨基)芐基]-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亞甲基]氨基}-2-(1H-吡咯-1-基)芐基]-5-(1，2-二硫雜環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺；-以及這些化合物的鹽。
4.權(quán)利要求1的通式(I)的脒的制備方法，其特征在于將通式(II)中間體 其中A表示-(CH2)m-CONH-(CH2)n-、-(CH2)m-NR1-(CH2)n-、-(CH2)m-CONH-(CH2)p-NR1-(CH2)n-、或-(CH2)m-基團，m和n是0-6的整數(shù)，p是2-6的整數(shù)，并且R1表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；并且X表示亞苯基或-(CH2)q-基團，其中q表示0-6的整數(shù)，與通式(I.i)中間體反應 其中B表示具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，5-6元碳環(huán)芳基或具有1-4個選自O(shè)、S、N的雜原子的5-6元雜環(huán)芳基，尤其是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，該芳基任選地被一個或多個選自具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或烷氧基的基團取代，并且L表示部分基團例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、鹵素、芳基醇基或甲苯磺?；?br> 5.權(quán)利要求1的通式(I)產(chǎn)物的制備方法，其中B是胺，其特征在于將通式(II)中間體 其中A表示-(CH2)m-CONH-(CH2)n-、-(CH2)m-NR1-(CH2)n-、-(CH2)m-CONH-(CH2)p-NR1-(CH2)n-、或-(CH2)m-基團，m和n是0-6的整數(shù)，p是2-6的整數(shù)，并且R1表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；并且X表示亞苯基或-(CH2)q-基團，其中q表示0-6的整數(shù)，a)與通式(I.ii)中間體反應 其中L表示部分基團，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、鹵素、芳基醇基或甲苯磺?；?，或者b)與通式(I.iii)中間體反應 其中L表示部分，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、鹵素、芳基醇基或甲苯磺?；⑶褿p是氨基甲酸酯類的保護基例如叔丁氧羰基，如果選擇與通式(I.iii)化合物反應，則在該反應之后，在強酸例如三氟乙酸存在下進行水解，或者c)與式(I.iv)衍生物(N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍)反應 或者d)最后與式(I.v)衍生物反應，其中Gp表示保護基S＝＝N-Gp.(I.v)
6.權(quán)利要求1的通式(I)化合物的制備方法，其中A表示-(CH2)m-CONR3-(CH2)n-基團，其中R3表示氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，其特征在于將下面所示的通式(VII)a中間體HN(R3)-A’-X-Y(VII)aR3如上所定義，X和Y如權(quán)利要求1所定義，并且A′表示-(CH2)n-基團，n是0-6的整數(shù)，與通式(I.vi)化合物反應 其中m是0-6的整數(shù)。
7.權(quán)利要求1的通式(I)化合物的制備方法，其中A表示如上定義的-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n基團，其特征在于將如下所示的通式(VII)b中間體HN(R4)-A’-X-Y(VII)bR4如上所定義，X和Y如權(quán)利要求1所定義，并且A′表示-(CH2)n-基團，n是0-6的整數(shù)，與通式(I.vi)化合物和二苯基磷?；B氮化物在堿例如三乙胺存在下反應 m是0-6的整數(shù)。
8.作為藥物的權(quán)利要求1-3中任一項的通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽。
9.含有至少一種權(quán)利要求1-3中任一項的產(chǎn)物或其可藥用鹽作為活性成分的藥物組合物。
10.權(quán)利要求1-3中任一項的通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備抑制NO合酶的藥物中的應用。
11.權(quán)利要求1-3中任一項的通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備使抗氧化劑再生的藥物中的應用。
12.權(quán)利要求1-3中任一項的通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備抑制NO合酶活性并使抗氧化劑再生的藥物中的應用。
13.權(quán)利要求1-3中任一項的通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備治療有一氧化氮和/或硫羥基的氧化還原反應參與的疾病的藥物中的應用，所述疾病是例如中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病，尤其有代表性的是帕金森氏病、腦血管疾病、增殖和炎性疾病、嘔吐、膿毒性休克、由放射活性輻射、日光照射或器官移植引起的疾病、自免疫和常染色體疾病、癌癥和所有涉及一氧化氮產(chǎn)生或機能障礙和/或涉及硫羥基氧化還原反應的疾病。
14.權(quán)利要求1-3中任一項的通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備治療腦血管疾病例如偏頭痛、局部缺血或出血引起的腦梗塞、局部缺血和血栓形成的藥物中的應用。
15.權(quán)利要求1-3中任一項的通式(I)產(chǎn)物或其可藥用鹽在制備治療中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應用，所述疾病是例如神經(jīng)退化疾病、疼痛、腦和骨髓損傷、對鴉片類物質(zhì)、酒精和成癮物質(zhì)成癮、勃起和生殖障礙、認知障礙、腦病、抑郁、焦慮、精神分裂癥、癲癇癥、昏睡病和進食障礙。
全文摘要
本發(fā)明的目的是新的硫辛酸衍生物,它們對產(chǎn)生一氧化氮NO的NO－合酶具有抑制活性和/或是抗氧化劑再生的試劑或捕集活性氧物質(zhì)(ROS)并以更通常的方式參與硫羥基氧化還原反應的物質(zhì)。本發(fā)明還涉及這些物質(zhì)的制備方法,含有這些物質(zhì)的藥物組合物以及它們的治療應用,特別是這些物質(zhì)作為NO－合酶抑制劑和/或通常在硫羥基氧化還原反應中發(fā)生作用的試劑的應用。
文檔編號A61P9/00GK1349523SQ0080697
公開日2002年5月15日 申請日期2000年3月31日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月2日
發(fā)明者J·哈內(nèi)特, M·奧格特, P－E·查布里爾德拉索尼爾 申請人:科學研究與運用咨詢公司