專利名稱：一種治療多囊腎病的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療多囊腎病的藥物。
近年來(lái)有些學(xué)者認(rèn)為多囊腎病是一種類腫瘤的疾病。其病理特征為腎小管或集合管上皮細(xì)胞異常增生，形成囊腫，囊內(nèi)有液體分泌?，F(xiàn)已證實(shí)表皮生長(zhǎng)因子/轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子/表皮生長(zhǎng)因子受體(EGF/TGF-α/EGFR)軸的異常與囊腫的形成與增大有關(guān)。多囊腎病時(shí)EGFR軸出現(xiàn)質(zhì)與量的異常。量的異常表現(xiàn)在人類多囊腎囊腫上皮細(xì)胞具有合成、加工、分泌EGF類多肽的功能。質(zhì)的異常包括多囊腎中EGFR極性錯(cuò)誤，出現(xiàn)在腔膜面，與囊壁上皮分泌的EGF和EGF類多肽直接結(jié)合；EGFR對(duì)配體親和力明顯增高，形成自分泌環(huán)，直接導(dǎo)致了囊腫上皮的高增生特性。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)囊腫上皮細(xì)胞對(duì)EGF等的促分裂作用呈高敏感性。目前已知EGFR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與多囊腎病囊腫上皮細(xì)胞高增殖密切相關(guān)。因此阻斷異?；钴S的EGFR信號(hào)通路，即采用“信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)治療”(signal transduction therapy)方法就能治療多囊腎病。在EGFR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中酪氨酸蛋白激酶(PTK)是重要的信號(hào)分子，同時(shí)它還是與其它信號(hào)通路相關(guān)的交聯(lián)點(diǎn)之一。
1998年Wissner等發(fā)明了一種新型的酪氨酸激酶抑制劑CL-387785，用于腫瘤的治療。CL387，785(化學(xué)名N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨)屬于氨基喹唑啉類，是EGFR、erbB2特異性的酪氨酸蛋白激酶抑制劑。它通過(guò)與酪氨酸蛋白激酶活性部位形成烷基化的共價(jià)鍵達(dá)到非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。1999年Discafani等進(jìn)行了CL387，785的藥效學(xué)研究。發(fā)現(xiàn)它能特異性抑制酪氨酸蛋白激酶活性(IC50＝370±120pmol/L)，阻斷EGF刺激的受體自身磷酸化(IC50＝5nmol/L)，以細(xì)胞周期抑制方式抑制過(guò)表達(dá)EGFR或erbB2細(xì)胞的增殖活動(dòng)(IC50＝31-125nmol/L)。顯著地阻斷裸鼠過(guò)度表達(dá)EGFR的腫瘤生長(zhǎng)作用時(shí)間長(zhǎng)，藥物在體內(nèi)被清除后抑制作用仍存在(不可逆抑制)。1999年Sweeney等報(bào)道在體外應(yīng)用CL-387，785有效抑制了集合管的囊腫形成。2000年Sweeney等又在ARPKD小鼠模型上應(yīng)用CL-387，785，發(fā)現(xiàn)它能減輕腎臟集合管囊腫，延長(zhǎng)小鼠壽命，是一種藥效好、毒性小的具有開(kāi)發(fā)前景的多囊腎病治療藥物。
本發(fā)明提供的治療多囊腎病的藥物是由N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨作為活性成份與藥用輔料組成的醫(yī)學(xué)上可接受的以各種途徑給藥的制劑。
本發(fā)明所述的醫(yī)學(xué)上可接受的以各種途徑給藥的制劑是指口服制劑(如固體制劑、液體制劑、控釋或緩釋制劑等)、注射劑、透皮制劑以及可以通過(guò)其他途徑給藥的制劑。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題是提供了上述治療多囊腎病的藥物的制備方法，該方法是按處方量將活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨與藥用輔料混合，按常規(guī)方法制成各種劑型。
本發(fā)明的制劑可以由重量百分比為0.001％～99.99％的活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨與99.999％～0.01％的藥用輔料組成，制成的口服固體制劑如片劑、膠囊劑、顆粒劑等制劑，每片、?；虼钚猿煞軨L-387，785的范圍為0.1～3000mg。
本發(fā)明制成的口服液體制劑如口服液每10ml含有效成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的范圍為0.1～3000mg。
本發(fā)明制成的注射劑每ml含有效成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的范圍為0.001～300mg。
本發(fā)明的再一目的是提供上述含活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的藥物在制備治療多囊腎病藥物中的應(yīng)用。
用本發(fā)明的含N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨(CL387，785)活性成份的制劑進(jìn)行了臨床研究，發(fā)現(xiàn)治療多囊腎病(包括常染色體顯性遺傳性多囊腎病和常染色體隱性遺傳性多囊腎病)具有療效顯著、毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明用N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨作為活性成份的藥物通過(guò)口服形式給藥，也包括通過(guò)其他途徑給藥，每次給藥的劑量范圍為0.001～5000mg/kg體重，每次給藥間隔的時(shí)間為0.5小時(shí)～2年或連續(xù)給藥，療程根據(jù)患者的病情決定，一般伴隨患者終生。
本發(fā)明所述的給藥方式可以通過(guò)口服形式給藥，也可以其他醫(yī)學(xué)上可接受的途徑給藥，如肌肉注射、皮下注射、靜脈注射、腹腔注射、局部組織注射；透皮給藥、程控釋放；各種形式的緩釋、控釋給藥等。
本發(fā)明的含N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨(CL387，785)活性成份制劑也適用于治療因多囊腎病(包括常染色體顯性遺傳性多囊腎病和常染色體隱性遺傳性多囊腎病)累及的腎外多個(gè)臟器病變，如肝囊腫、心臟瓣膜異常、顱內(nèi)動(dòng)脈瘤等并發(fā)癥。
CL387，785是一種灰黃色結(jié)晶體，在水及酒精中溶解度很小，一20℃、避光可保存3年以上。CL387，785的分子式如下 CL387，785是一種低毒性的化合物，能安全地用于治療。ICR小鼠的半數(shù)致死量(LD50)為3.27g/Kg。
本發(fā)明將PTK作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)治療的靶點(diǎn)，通過(guò)藥物抑制或阻斷EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的酪氨酸蛋白激酶的功能及作用，來(lái)阻斷該異?；钴S的信號(hào)通路，以達(dá)到治療多囊腎病的目的。
CL-387，785治療多囊腎病的依據(jù)包括(1)在體外實(shí)驗(yàn)中，EGF、TGF-α能誘導(dǎo)囊腫形成；(2)ARPKD、ADPKD及小鼠PKD模型中囊液里含有具分裂活性濃度的EGF類似多肽；(3)PKD的TGF-αmRNA水平增高；(4)過(guò)高表達(dá)TGF-α的轉(zhuǎn)基因小鼠形成了腎臟囊腫；(5)在人類及小鼠模型中PKD都存在異常高表達(dá)及錯(cuò)位于上皮腔膜面的EGFR；(6)異常表達(dá)于腔膜面的EGFR能高親和力地結(jié)合EGF，并引起一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致高分裂活性；(7)后腎組織培養(yǎng)證實(shí)針對(duì)EGFR的CL-387，785能降低EGF誘導(dǎo)的囊腫進(jìn)展。CL-387，785針對(duì)以上病理機(jī)制，阻斷異常上調(diào)的EGF/TGF-α/EGFR軸，阻斷EGFR介導(dǎo)的異常信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)達(dá)到治療PKD的目的。CL-387，785具有以下特點(diǎn)(1)非競(jìng)爭(zhēng)性、不可逆性抑制酶的活性；(2)選擇性高；(3)活性強(qiáng)；(4)具有體內(nèi)活性；(5)不可逆抑制；(6)毒副作用較小。
經(jīng)藥代動(dòng)力學(xué)研究，口服CL-387，785藥物后能經(jīng)胃腸道迅速吸收，且有效血藥濃度能維持較長(zhǎng)時(shí)間。一次性給予健康人口服100mg的CL387，785后2.5到4小時(shí)血藥濃度達(dá)到峰值，24小時(shí)后志愿者體內(nèi)的藥物濃度仍保持在150～300g/ml。因此CL387，785具有作為藥物應(yīng)用的條件。
一、CL387，785治療多囊腎病小鼠的試驗(yàn)研究試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1表1試驗(yàn)動(dòng)物分組正常小鼠多囊腎病小鼠對(duì)照組 治療組對(duì)照組 治療組數(shù)量 12 7 7 6藥物劑量(mg/Kg/3d) 090 0 90蒸餾水(mg/Kg/3d) 15 15 15 15多囊腎病動(dòng)物采用常染色體隱性遺傳性多囊腎病的BPK模型，是由Balb/c小鼠的近交系突變而來(lái)。未治的囊腫動(dòng)物存活期21-29天，平均24天。腎外表現(xiàn)包括膽道系統(tǒng)增生和膽管壞死(BDE)。用已確認(rèn)的BPK同窩雜合子小鼠(包括BPK囊腫動(dòng)物BPK/BPK，雜合子BPK/+，野生型+/+)，分別在出生后第7天(P-7)開(kāi)始每3天于腹腔內(nèi)注射(IP)90mg/kg的CL-387，785。動(dòng)物從出生后第7天治療至第22天(6個(gè)劑量組)，出生后24天取腎臟、肝臟、心臟、脾臟、胃及甲狀腺。每個(gè)劑量組最少取6只受累動(dòng)物及12只未受累動(dòng)物進(jìn)行分析。對(duì)照動(dòng)物包括CL387，785治療和未治療(僅用酒精)的同窩仔。
在第48天給予動(dòng)物禁水。禁水8小時(shí)后，收集尿樣和血樣以測(cè)定腎功能和腎小管功能，并取腎臟和肝臟進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。為確定撤藥的影響，停止4只存活的病變小鼠的CL387，785治療，嚴(yán)密觀察動(dòng)物的情況，直至出現(xiàn)一些臨死前的表現(xiàn)時(shí)殺死動(dòng)物，取肝腎組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。
腎小管囊腫形成的程度用囊腫指數(shù)定量。囊腫指數(shù)由光學(xué)顯微鏡形態(tài)學(xué)方法確定并經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化，用來(lái)定量體內(nèi)、體外的囊腫形成程度、腎臟功能及最大尿濃縮的測(cè)定。
試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2表2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果BUN Scr尿滲透壓 囊腫指數(shù)膽管壞死(mg/ml) (mg/ml) (mOsm/L)對(duì)照(P24) 18±3 0.3±0.1 1254±6800囊腫組(P24) 183±28 0.7±0.2 298±87 5.2±0.5 3.5±0.7對(duì)照+Cl-387，785(P24) 16±2 0.3±0.1 1202±4500囊腫組+CL387，785(P24)18±3 0.3±0.1 1103±54 1.8±0.4 1.1±0.3對(duì)照+CL387，785(P48) 16±2 0.3±0.1 1189±6000囊腫組+CL387，785(P48)21±3 0.4±0.2 998±65 1.9±0.32.3±0.6上述動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明應(yīng)用90mg/kg的CL387，785治療后BDE指數(shù)為1.8(表2)，比未治療組的BDE指數(shù)3.5有顯著降低(p＜0.02)。表2的數(shù)據(jù)證實(shí)采用CL387，785治療(90mg/kg)的囊腫動(dòng)物腎功能與對(duì)照組保持相同或相近的水平。而未治療的BPK囊腫小鼠(N＝9)在死時(shí)BUN值比無(wú)病變的同窩仔(N＝16)高10倍(p＜0.01)。最大尿液濃縮能力下降3倍(p＜0.01)。從出生后第7天至24天接受CL387，785治療的BPK囊腫小鼠(N＝10)血清肌酐、BUN水平顯著低于未治BPK小鼠(p＜0.01)，最大尿液濃縮能力顯著增加(p＜0.01)。治療維持至第46天的囊腫動(dòng)物(N＝8)集合管囊腫指數(shù)有輕微升高，但血清肌酐、BUN水平與24天的未治療動(dòng)物(N＝9)及48天的治療對(duì)照(N＝12)相比基本不變。而48天的治療病變動(dòng)物的最大尿液濃縮能力(998±65mOsm/L)比24天的未治療動(dòng)物(298±87mOsm/L)明顯升高(p＜0.01)。48天的治療病變動(dòng)物的最大尿液濃縮能力與未治組(N＝10)和治療對(duì)照組(N＝11)相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。
二、CL387，785的臨床試驗(yàn)本發(fā)明選用口服CL387，785片劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)。
18名確診ADPKD且腎功能正常的志愿者入選臨床試驗(yàn)(入選標(biāo)準(zhǔn)明確家族遺傳史及B超確診為多囊腎病。僅表現(xiàn)為雙側(cè)腎臟多發(fā)囊腫而腎功能正常者)。給藥方法為口服CL387，785片100mg/3d。
試驗(yàn)結(jié)果如下1.一般臨床資料所有入選試驗(yàn)的志愿者都能耐受治療。受試者接受100mg/3dCL387，785口服治療沒(méi)有出現(xiàn)嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)，如嘔吐、腹瀉等，也沒(méi)有出現(xiàn)頭昏、口干、發(fā)熱等不良反應(yīng)，只有2名志愿者有輕微的惡心。沒(méi)有檢測(cè)到肝功能異?；蚰I功能惡化。血常規(guī)檢查正常。
2.腎囊腫變化共18名ADPKD接受口服CL387，785治療。其中11名患者(61.1％)經(jīng)超聲檢查證實(shí)腎臟囊腫體積無(wú)顯著增大，2名患者(11.1％)腎臟囊腫體積顯著縮小，5名患者(27.8％)腎臟囊腫體積有輕度增加，總有效率72.2％。
表3 臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果(口服片組)腎臟囊腫體積改變 患者數(shù)(治療3月后)囊腫進(jìn)展5(27.8％)囊腫無(wú)改變 11(61.1％)囊腫縮小2(11.1％)通過(guò)臨床試驗(yàn)證實(shí)口服CL387，785能延緩或阻斷腎囊腫的進(jìn)展，減小腎囊腫體積，且沒(méi)有明顯毒性，是具有臨床開(kāi)發(fā)價(jià)值的多囊腎病的治療藥物。
多囊腎病是臨床較常見(jiàn)的遺傳性腎病，發(fā)病率高、危害性大，約50％患者最終進(jìn)展至尿毒癥，需依賴透析維持生命。據(jù)保守估計(jì)，我國(guó)至少有100多萬(wàn)患者，但目前對(duì)于多囊腎病的治療僅以支持、對(duì)癥為主，沒(méi)有治療藥物，也沒(méi)有針對(duì)病因的有效治療。多囊腎病對(duì)于患者家庭、社會(huì)都是巨大的負(fù)擔(dān)，本發(fā)明公開(kāi)的治療多囊腎病的藥物可以有效地預(yù)防、控制和治療多囊腎病的發(fā)生、發(fā)展，具有重大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
CL387，785(g) 50微晶纖維素(g) 150碳酸鈣(g) 65磷酸氫鈣(g)5PVP-k30(g) 8硬脂酸鎂(g)14制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例3 片劑的制備處方CL387，785(g) 50微晶纖維素(g) 150碳酸鈣(g) 65PVP-k30(g) 5硬脂酸鎂(g) 8制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例4 片劑的制備處方CL387，785(g) 50微晶纖維素(g) 130磷酸氫鈣(g) 87PVP-k30(g) 5硬脂酸鎂(g) 8制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例5 膠囊劑的制備處方CL387，785 250g碳酸鈣 2100g淀粉2100g將碳酸鈣與淀粉混合，過(guò)篩，再與適量乙醇分散的CL387，785粉末混合均勻，過(guò)120目篩，于60～70℃烘干2小時(shí)，裝膠囊，制成1萬(wàn)粒，每粒膠囊含CL387，785為25mg。實(shí)施例6 口服液的制備處方
CL387，785 10gD，L-蘋果酸適量對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.3g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.2g蔗糖 35g單硬脂酸蔗糖酯 5g食用桔子香精 適量蒸餾水 加至1000ml將處方量的蔗糖溶于適量蒸餾水中，使其溶解，將CL387，785、單硬脂酸蔗糖酯、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯配成10％的酒精溶液，加入上述配液中，邊加邊攪拌均勻，再加入D，L-蘋果酸2.0％的蒸餾水溶液，調(diào)節(jié)pH值約為5，加入適量香精，加蒸餾水至1000ml，混勻，取樣測(cè)定含量、pH值，合格后灌裝滅菌即得。每10ml含CL387，785為0.1g。實(shí)施例7 口服液防腐劑不同用量的抑菌效果試驗(yàn)表4CL387，785口服液防腐劑不同用量的抑菌效果對(duì)羥基苯甲酸 對(duì)羥基苯甲酸霉菌 雜菌致病菌試品號(hào)甲酯用量(‰) 丙酯用量(‰) (個(gè)/ml) (個(gè)/ml) (個(gè)/ml)1 0.25 0.15 10 95 未檢出2 0.30 0.20未檢出 2 未檢出3 0.75 0.35未檢出 2 未檢出結(jié)果表明，配比2防腐劑的量是比較合適的量。實(shí)施例8 口服CL387，785治療多囊腎病的臨床試驗(yàn)患者，女性，38歲。1998年經(jīng)B超診斷為常染色體顯性遺傳性多囊腎病，有明確家族史，經(jīng)檢查腎功能正常。予口服CL387，785片劑100mg/3d，治療6個(gè)月后復(fù)查各項(xiàng)指標(biāo)。
治療過(guò)程中沒(méi)有出現(xiàn)嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)，如嘔吐、腹瀉等，也沒(méi)有出現(xiàn)頭昏、口干、發(fā)熱等不良反應(yīng)。復(fù)查肝功能、腎功能正常，血常規(guī)檢查正常，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯毒性。超聲檢查證實(shí)腎臟囊腫體積顯著縮小，最大腎囊腫由治療前的5.4×3.2cm縮小到4.3×2.8cm，且囊腫數(shù)目沒(méi)有增加。
權(quán)利要求
1.一種治療多囊腎病的藥物，其特征在于該藥物是由N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨作為活性成份與藥用輔料組成的。
2.一種如權(quán)利要求1所述的治療多囊腎病的藥物，其特征在于該藥物的劑型是醫(yī)學(xué)上可接受的以各種途徑給藥的制劑，包括口服制劑、注射劑、透皮貼劑以及通過(guò)其他途徑給藥的制劑。
3.一種如權(quán)利要求1或2所述的治療多囊腎病的藥物，其特征在于該藥物的制劑由重量百分比為0.001％～99.99％的活性成份N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨與99.999％～0.01％的藥用輔料組成；固體制劑每片、粒或袋含活性成份為0.1～3000mg；口服液每10ml含活性成份為0.1～3000mg；注射劑每ml含活性成份為0.001～300mg。
4.一種如權(quán)利要求1所述的治療多囊腎病的藥物的制備方法，其特征在于該藥物的制備方法是按處方量將N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨與藥用輔料混合后，按常規(guī)方法制成各種制劑。
5.一種如權(quán)利要求1所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的藥物在制備治療多囊腎病藥物中的應(yīng)用。
6.一種如權(quán)利要求5所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的藥物在制備治療多囊腎病藥物中的應(yīng)用，其特征在于其中所述的多囊腎病包括常染色體顯性遺傳性多囊腎病ADPKD和常染色體隱性遺傳性多囊腎病ARPKD。
7.一種如權(quán)利要求5或6所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的藥物在制備治療多囊腎病藥物中的應(yīng)用，其特征在于該藥物可通過(guò)口服形式給藥，也包括通過(guò)其他途徑給藥，每次給藥的劑量范圍為0.001～5000mg/kg體重，每次給藥間隔的時(shí)間為0.5小時(shí)～2年或連續(xù)給藥，療程根據(jù)患者的病情決定，一般伴隨患者終生。
8.一種如權(quán)利要求5或6所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的藥物在制備治療多囊腎病藥物中的應(yīng)用，其特征在于該藥物也適用于治療因多囊腎病累及的腎外多個(gè)臟器，如肝囊腫、心臟瓣膜異常、顱內(nèi)動(dòng)脈瘤等并發(fā)癥。
9.一種如權(quán)利要求4或5所述的含活性成分N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰氨的藥物在制備治療多囊腎病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的給藥方式為通過(guò)口服形式給藥，也包括其他醫(yī)學(xué)上可接受的途徑給藥，如肌肉注射、皮下注射、靜脈注射、腹腔注射、局部組織注射；透皮給藥、程控釋放；各種形式的緩釋、控釋給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種臨床治療多囊腎病的藥物。本發(fā)明的藥物是由N－[4－[(3－溴苯基)氨基]－6－喹唑啉基]－2－丁炔酰氨與藥物輔料組成的。具有非競(jìng)爭(zhēng)性、不可逆性抑制酶的活性,活性強(qiáng)、選擇性高和毒副作用小的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P13/12GK1370534SQ0112662
公開(kāi)日2002年9月25日 申請(qǐng)日期2001年9月4日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月4日
發(fā)明者梅長(zhǎng)林, 李林 申請(qǐng)人:梅長(zhǎng)林, 李林, 顧書華