專利名稱：澤瀉活性成分組合物及其在醫(yī)藥上應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種澤瀉活性成分組合物及其在醫(yī)藥上的應(yīng)用。該組合物含有澤瀉醇A24-乙酸酯和澤瀉醇B23-乙酸酯，且兩個(gè)活性成分總含量大于90％。該組合物可用于制成口服制劑，用于治療高血脂癥和由高血脂癥引發(fā)的脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病。
背景技術(shù)：
伴隨著物質(zhì)生活的提高，高血脂癥的發(fā)病率也越來越高。由此引發(fā)的各種心、腦血管病已成為威脅中老年人生命的主要禍?zhǔn)住?jù)統(tǒng)計(jì)，我國約有9000萬人患高血脂癥。高血脂癥的病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，牽涉多種因素和機(jī)制。針對(duì)不同發(fā)病機(jī)制而開發(fā)的各種降血脂藥種類較多，各有特點(diǎn)。主要分為二種，一種以降低總膽固醇、低密度脂蛋白為主，但對(duì)降甘油三脂和升高高密度脂蛋白略差，如他汀類藥物；另一種以降甘油三脂為主，如立平脂。但迄今沒有一種對(duì)所有脂質(zhì)紊亂均有效的藥物。
澤瀉主要產(chǎn)于福建、四川、江西等省，為多年生沼澤植物，現(xiàn)多系栽培。澤瀉的主要功效用于小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈，熱淋澀痛。
實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔每只口服澤瀉生藥，結(jié)果表明澤瀉降低血清總膽固醇和甘油三酯作用顯著，促進(jìn)血清HDL-C水平升高，明顯地抑制主動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊的生成。實(shí)驗(yàn)性高血脂大鼠口服澤瀉液，結(jié)果表明澤瀉降低血清總膽固醇和LDL-C作用非常顯著，且具有抗血小板聚集、抗血栓形成及促進(jìn)纖溶酶活性等作用。澤瀉醇提取物動(dòng)物試驗(yàn)表明，對(duì)家兔試驗(yàn)性高血脂癥有治療作用及抗脂肪肝作用，其效果比山楂、地骨皮更好。
澤瀉的化學(xué)成分主要為含有多種四環(huán)三萜化合物，包括澤瀉醇(Alisol)A、B、C及澤瀉醇A24-乙酸酯(Alisol A monoacetate)、澤瀉醇B23-乙酸酯(Alisol B monoacetate)，澤瀉醇C乙酸酯(Alisol Cmonoacetate)、表澤瀉醇A(Epi-alisol A)，還含有少量的膽堿、卵磷脂、揮發(fā)油等。
經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明，澤瀉中降血脂的活性成分為四環(huán)三萜。而中藥的化學(xué)成分及其復(fù)雜，為了保證澤瀉提取物的療效，必須明確澤瀉提取物中有效成分的含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)藥理論，經(jīng)降血脂動(dòng)物模型試驗(yàn)，提供一種成分明確、質(zhì)量可控、療效確切的澤瀉活性成分組合物。
本發(fā)明的另一目的在于該組合物可用于制成口服制劑。
本發(fā)明的又一目的在于該組合物可用于制備治療高血脂藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的還在于該組合物可用于制備治療由高血脂癥引發(fā)的脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施來達(dá)到本發(fā)明是含澤瀉醇A24-乙酸酯和澤瀉醇B23-乙酸酯活性提取物，二者總含量大于90％，其重量比值為1∶0.05～20，優(yōu)選重量比值為1∶0.5～5，其最佳重量比值為1∶1。
本發(fā)明含有上述澤瀉活性提取組合物和一種或多種藥用賦形劑制成的藥用組合物。
本發(fā)明中澤瀉醇A24-乙酸酯和澤瀉醇B23-乙酸酯的提取來源可以是澤瀉屬植物，本屬植物在中國有6種(《中國植物志第八卷》)，優(yōu)選為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.更優(yōu)選為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖。
本發(fā)明具有合理利用澤瀉資源、明確有效成分及含量，可用于制成片劑、膠囊劑，可用于制成治療高血脂的藥物，以及制成治療由高血脂癥引發(fā)的脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的藥效學(xué)研究如下取體重150-180g的SD雄性大鼠，70只，隨機(jī)分為7組，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(洛伐他仃8mg/kg)、A組(澤瀉醇A24-乙酸酯，24mg/kg)，B組(澤瀉醇B23-乙酸酯，24mg/kg)、C組(澤瀉醇A24-乙酸酯+澤瀉醇B23-乙酸酯，1∶1，24mg/kg)、D組(澤瀉醇A24-乙酸酯+澤瀉醇B23-乙酸酯，1∶2，24mg/kg)?？瞻讓?duì)照組給予常規(guī)飼料，其余六組給予高脂飼料(膽固醇2％，牛膽鹽0.5％，丙硫氧嘧啶0.2％，豬油10％，基礎(chǔ)飼料87.3％)，15天后正常飼料組于高脂飼料組各取10只，眼眶取血(取血前動(dòng)物禁食16小時(shí))，靜置凝固，離心，分離血清，以酶法經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定總膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。
給藥方法從第16天起停止高脂飼料喂養(yǎng)，全部改用普通飼料。同時(shí)各組大鼠每天下午分別灌胃給予相應(yīng)的藥物，即陽性對(duì)照組(洛伐他仃8mg/kg)、A組(24mg/kg)、B組(24mg/kg)、C組(24mg/kg)、D組(24mg/kg)，空白對(duì)照組與模型對(duì)照組給予等量的0.5％CMC-Na。給藥14天之后，禁食16小時(shí)，稱體重，股動(dòng)脈取血，取肝稱重并制肝勻漿，測(cè)定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C及肝TC、TG，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
血脂測(cè)定血液靜置凝固，離心(2000pm×20min)，分離血清，參照試劑盒說明書，以酶法經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定TC、TG、HDL-C、LDL-C，結(jié)果見表1。
表1對(duì)血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的影響(X±S)(n＝10)

注**P＜0.01，各組均與模型對(duì)照組比較表1說明A藥24mg/kg劑量組可極顯著降低血清甘油三酯、血清總膽固醇、升高高密度脂蛋白，降低低密度脂蛋白不明顯；B藥24mg/kg劑量組可極顯著降低血清總膽固醇、血清低密度脂蛋白，降低血清甘油三脂不明顯，升高高密度脂蛋白不明顯。C藥24mg/kg劑量組可極顯著降低血清甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白，極顯著升高血清高密度脂蛋白；D藥24mg/kg劑量組可極顯著降低血清甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白，升高血清高密度脂蛋白不明顯。C藥比單獨(dú)的A藥，B藥效果好。
肝脂測(cè)定每只大鼠取100mg左葉肝組織加1ml0.9％生理鹽水，磨成勻漿，離心(3000pm×15min)后取上清液，再按上法測(cè)定肝TG、TC，結(jié)果見表2。
表2對(duì)肝勻漿甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)的影響(X±S)(n＝10)

注**P＜0.01，各組均與模型對(duì)照組比較表2說明A藥24mg/kg劑量組可極顯著降低肝勻漿甘油三酯、總膽固醇。B藥效果不明顯。C藥24mg/kg劑量組可極顯著降低肝勻漿甘油三酯、總膽固醇，升高高密度脂蛋白；D藥24mg/kg劑量組效果不明顯。A藥和C藥效果相當(dāng)。B藥和D藥效果不明顯。
結(jié)論有本次實(shí)驗(yàn)可得出結(jié)論，A藥和B藥各有特點(diǎn)，A藥以降低甘油三酯、總膽固醇，升高高密度脂蛋白為主，降低低密度脂蛋白較差；B藥以降低低密度脂蛋白為主，降低甘油三酯和升高高密度脂蛋白不明顯。而A藥和B藥的組合C藥起到了互補(bǔ)的作用，在六個(gè)指標(biāo)方面都有很好的療效，比單用A藥或B藥效果好。所以，C藥對(duì)大鼠高血脂模型有明顯的治療作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1藥材浸膏的制備方法a取澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖2公斤粉碎，用4升氯仿回流提取2次，每次3小時(shí)。合并提取液，回收溶劑得到油狀浸膏87克。
方法b取澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖2公斤粉碎，用80％的乙醇滲漉，回收乙醇，得到的油狀物94克。
方法c取澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖粉碎，過20目篩，稱取藥粉4公斤，置二氧化碳超臨界萃取10L提取桶中，萃取條件二氧化碳?jí)毫?0～45MPa，萃取溫度46～49℃，萃取時(shí)間2.5小時(shí)，得到油狀物150克。
方法d取澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖1公斤飲片，使用甲醇回流提取，甲醇用量3000ml，提取3次，每次3小時(shí)，得到油狀物45克。
方法e取澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖1公斤飲片，使用90％乙醇醇回流提取，甲醇用量3000ml，提取3次，每次3小時(shí)，得到油狀物50克。
實(shí)施例2澤瀉醇B23-乙酸酯的制備方法a稱取實(shí)施例1油狀浸膏100克，上硅膠柱(500克)以石油醚、乙酸乙酯(10∶1)洗脫后，再以石油醚、乙酸乙酯(10∶3)洗脫，200mL為一個(gè)流份，以TLC檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，得結(jié)晶0.8g。用石油醚-乙酸乙酯重結(jié)晶得到0.5克結(jié)晶。鑒定為澤瀉醇B23-乙酸酯。
方法b稱取實(shí)施例1油狀浸膏100克，上三氧化二鋁(500克)柱以石油醚、氯仿(20∶1)洗脫后，再以石油醚、氯仿(10∶1)洗脫，200mL為一個(gè)流份，以TLC檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，得結(jié)晶0.7g。用甲醇重結(jié)晶后，得到0.5克結(jié)晶，鑒定為澤瀉醇B23-乙酸酯。
實(shí)施例3澤瀉醇A24-乙酸酯的制備
方法a按實(shí)施例2方法a中將石油醚、乙酸乙酯(10∶3)洗脫完畢后，再在以石油醚、乙酸乙酯(10∶5)洗脫，以TLC檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，得結(jié)晶0.4g，石油醚-乙酸乙酯重結(jié)晶得0.3克。鑒定為澤瀉醇A24-乙酸酯。
方法b按實(shí)施例2方法b中將石油醚、氯仿(10∶1)洗脫完畢后，再以石油醚、氯仿(10∶3)洗脫，以TLC檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，得結(jié)晶0.4g，用甲醇重結(jié)晶后得到0.3克結(jié)晶。鑒定為澤瀉醇A24-乙酸酯。
實(shí)施例4澤瀉醇B23-乙酸酯+澤瀉醇A24-乙酸酯組合物制備方法a將實(shí)施例2和實(shí)施例3拿到的產(chǎn)品按照1∶1混合，得到澤瀉提取組合物。
方法b將實(shí)施例2和實(shí)施例3拿到的產(chǎn)品按照1∶2混合，得到澤瀉提取組合物。
方法c稱取實(shí)施例1油狀浸膏100克，上硅膠柱(500克)以石油醚、乙酸乙酯(10∶1)洗脫后，再以石油醚、乙酸乙酯(10∶5)洗脫，以TLC檢測(cè)，收集目標(biāo)組分，得到油狀物5克，再用石油醚-乙酸乙酯反復(fù)重結(jié)晶，得到固體2克。HPLC檢測(cè)，含澤瀉醇B23-乙酸酯+澤瀉醇A24-乙酸酯＞90％，比例為1.2∶1。
方法d稱取實(shí)施例1油狀浸膏100克，上三氧化二鋁(500克)柱以石油醚、氯仿(20∶1)洗脫后，再以石油醚、氯仿(10∶3)洗脫，以TLC檢測(cè)，收集目標(biāo)組分，得到油狀物5.5克，再用石油醚-乙酸乙酯反復(fù)重結(jié)晶，得到固體1.8克。HPLC檢測(cè)，含澤瀉醇B23-乙酸酯+澤瀉醇A24＞90％，比例為1.1∶1。
實(shí)施例5澤瀉活性成分組合物的制劑將實(shí)施例4拿到的組合物50克，加淀粉50g，混合均勻，制粒后填充膠囊或制成片劑。
實(shí)施例6澤瀉活性成分組合物的制劑將實(shí)施例4拿到的組合物40克，加淀粉60g制粒后填充膠囊或制成片劑。
權(quán)利要求
1.一種澤瀉活性提取組合物，其特征是該組合物含有澤瀉醇A24-乙酸酯和澤瀉醇B23-乙酸酯，且兩個(gè)活性成分總含量大于90％，該組合物中澤瀉醇A24-乙酸酯和澤瀉醇B23-乙酸酯的重量比值為1∶0.05～20。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的澤瀉活性提取組合物，其特征是該組合物中澤瀉醇A24-乙酸酯和澤瀉醇B23-乙酸酯的重量比值為1∶0.5～5。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的澤瀉活性提取組合物，其特征是該組合物中澤瀉醇A24-乙酸酯和澤瀉醇B23-乙酸酯的重量比值為1∶1。
4.一種藥物組合物，它含有權(quán)利要求1所定義的澤瀉活性提取組合物和一種或多種藥用賦形劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的澤瀉活性提取組合物，其特征是所述的藥用組合物為口服制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的澤瀉活性提取組合物，其特征是所述的藥用組合物為片劑、膠囊。
7.澤瀉的活性提取組合物在制備治療高血脂癥藥物中的應(yīng)用。
8.澤瀉的活性提取組合物在制備治療由高血脂癥引發(fā)的脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)藥理論，經(jīng)降血脂動(dòng)物模型試驗(yàn)，提供一種成分明確、質(zhì)量可控、療效確切的澤瀉活性成分組合物及其在醫(yī)藥上應(yīng)用，可用于治療高血脂癥和由高血脂癥引發(fā)的脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病。該活性提取物含澤瀉醇A24－乙酸酯和澤瀉醇B23－乙酸酯，二者總含量大于90％，二者重量比為1∶0.05～20。
文檔編號(hào)A61K9/48GK1872252SQ20051004038
公開日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2005年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月3日
發(fā)明者吳永平, 蘇國強(qiáng), 陸步實(shí), 曹園, 邊軍 申請(qǐng)人:江蘇省藥物研究所