專利名稱：通過阻斷il-20受體活性治療與il-20受體介導的信號通路相關(guān)的病癥的制作方法
通過阻斷IL-20受體活性治療與IL-20受體介導的信號通路相關(guān)的病癥相關(guān)申請本申請依據(jù)35U.S.C. § 119要求于2010年4月16日提交的美國臨時申請?zhí)?1/324,820的權(quán)益，該臨時申請的全部內(nèi)容通過引用并入本文。
背景技術(shù)：
炎癥是由組織損傷引發(fā)的一組局部的非特異性免疫反應(yīng)。一方面，炎癥反應(yīng)是保護性的，因為它們起到破壞、稀釋或隔絕損傷原和被損傷的組織的作用。另一方面，它們或者作為影響因素、或者作為疾病綜合征幾乎在所有疾病/病癥中被觀察到。骨質(zhì)疏松癥是特征為低骨量和骨組織流失的疾病，導致了骨骼脆弱和易碎。腎衰竭是腎臟不能正常發(fā)揮功能的病癥。糖尿病腎病是與長時間的糖尿病相關(guān)的進行性腎臟疾病。在所有這三種疾病中都已經(jīng)觀察到了炎癥反應(yīng)。IL-20受體為二聚體復合物，包含亞單位Rl和R2 (也被稱為RA和RB)。它是三種功能不同的細胞因子即IL-19、IL-20和IL-24的共同受體。這表明，IL-20受體被不同細胞因子激活時能夠觸發(fā)不同的信號通路。發(fā)明概述本公開內(nèi)容基于以下意想不到的發(fā)現(xiàn)IL_20R1敲除的小鼠(即無IL-20受體小鼠(IL-20receptor-null mice))發(fā)生的骨質(zhì)疏松癥、腎衰竭和糖尿病腎病遠不如它們的野生對應(yīng)物嚴重，以及兩種單克隆抗-1L-20R1抗體成功地抑制了破骨細胞的分化和IL-19誘導的CE81T細胞的增殖。 因此，該公開內(nèi)容提供了通過向需要治療的對象施用有效量的阻抑IL-20受體活性的物質(zhì)從而治療與由IL-20受體介導的信號通路相關(guān)的病癥(例如，骨質(zhì)疏松癥、腎衰竭、糖尿病腎病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥如口腔癌、乳腺癌和食道癌、癌癥誘發(fā)的骨質(zhì)溶解以及缺血性再關(guān)注或中風)的方法。該物質(zhì)可以是結(jié)合并中和IL-20受體的抗體，IL-20受體的反義核酸，IL_19、IL_20或IL-24的顯性負突變體(dominant negative mutant),或者是抑制IL-20受體活性的小分子。能夠中和IL-20受體(即結(jié)合IL-20受體并阻斷該受體介導的信號轉(zhuǎn)導)的抗體可以是抗-1L-20R1抗體。它可以是完整的免疫球蛋白、其抗原結(jié)合片段、或者基因工程抗體(例如，人源化抗體、嵌合抗體或單鏈抗體)。在一些實施方案中，用于本文公開的治療的抗-1L-20R1抗體是單克隆抗體mAb7GW、單克隆抗體mAb51D、其抗原結(jié)合片段、或其功能等同物?？笽L-20R1抗體可以具有(a)包含與在單克隆抗體mAb7GW或mAb51D的重鏈可變區(qū)中的互補決定區(qū)相同的互補決定區(qū)(CDR)的重鏈可變區(qū)、以及(b)包含與在mAb7GW或mAb51D的輕鏈可變區(qū)中⑶R相同的CDR的輕鏈可變區(qū)。在一個實例中，它包含與mAb7GW或mAb51D相同的重鏈可變區(qū)和相同的輕鏈可變區(qū)。mAb7GW和mAb51D抗體、它們的抗原結(jié)合片段和功能等同物也在本公開內(nèi)容的范圍內(nèi)。mAb7GW和mAb51D的功能等同物包括具有與mAb7GW或mAb51D相同的重鏈和輕鏈⑶R的抗體。在一些實施方案中，這些功能等同物是mAb7GW或mAb51D衍生的基因工程抗體，例如嵌合抗體、單鏈抗體或人源化抗體。反義核酸可以是靶向IL-20R1的反義RNA，例如通過RNA干擾阻抑IL-20R1表達的siRNA 或微 RNA。如本文所用的，術(shù)語“治療”指將包括一種或多種活性物質(zhì)在內(nèi)的組合物應(yīng)用于或施用給具有與IL-20受體介導的信號通路相關(guān)的病癥/疾病、具有該疾病/病癥的癥狀、或具有患該疾病/病癥傾向性的對象，目的是治療、治愈、減輕、緩解、改變、補救、改善、改進或影響該疾病/病癥、該疾病/病癥的癥狀、或者患該疾病/病癥的傾向性。還在本公開內(nèi)容范圍內(nèi)的有(a)包含阻抑IL-20受體活性的一種或多種物質(zhì)的藥物組合物，其用于治療IL-20受體介導的病癥(例如，骨質(zhì)疏松癥、腎衰竭、糖尿病腎病、癌癥如口腔癌和乳腺癌、類風濕性關(guān)節(jié)炎和癌癥誘發(fā)的骨質(zhì)溶解)，以及(b)該藥物組合物在制備用于上述治療的藥物中的用途。本公開內(nèi)容的一個或多個實施方案的細節(jié)在下面的說明中進行闡述。通過下文的附圖和幾個實施例的詳細描述，以及還通過所附的權(quán)利要求書，本公開內(nèi)容的其他特征和優(yōu)點是顯而易見的。附圖簡述首先描述附圖。

圖1是顯示在來自L-20Rr/+、IL-20Rl+/-和IL-20R1+小鼠的外周血單個核細胞中誘導IL-10的圖。圖2是顯示在IL-20R1+/+、IL-20R1+/-和IL-20R1+小鼠中OVX-誘發(fā)的骨質(zhì)疏松骨流失的圖。圖面a:0VX 小鼠脛骨中的骨礦物質(zhì)密度(對每一類型的小鼠，n=5)。圖面b:TRAP-染色的切片中每一骨表面的破骨細胞數(shù)目。(對每一類型的小鼠，n=5)。值為平均值土標準偏差。數(shù)據(jù)是3次獨立實驗的代表。圖3是顯示在IL-20R1+/+、IL_20R1+/-和IL-20R1+小鼠中腎衰竭嚴重度的圖。圖面 A:在第 3 天分析了 HgCl2-處理的 IL-20R1+/+ (n=5)、IL-20Rl+/_(n=5)和 IL_20Rl+(n=5)小鼠中血清BUN水平。值為平均值土標準誤差均值。與IL-20R1+/+小鼠比較，P〈0. 01。圖面 B:4 天后，來自用 HgCl2 處理的 IL-20Rl+/+(n=5)、IL-20R1—(n=5)和 IL-20R1+(n=5)小鼠的損傷的腎小管細胞面積的定量分析。值為平均值土標準誤差均值。與IL-20R1V+小鼠比較，*P〈0. 05。圖4 是顯示在 IL-20Rr/+、IL-20Rl+/-和STZ-誘發(fā)的糖尿病腎病嚴重度的圖。圖面A:血液葡萄糖水平。圖面B:存活率。圖面C:STZ-處理后第49天時，血清 BUN 水平。圖面 D:1L-20RlvMhH (n=7)、IL-20R1+小鼠(n=7)和 IL_20Rl+(n=5)小鼠中STZ-處理后第6天和第49天確定的腎小球面積。值為平均值土標準誤差均值。與IL-20R1+/+小鼠比較，*P〈0. 05。用鹽水緩沖液處理的小鼠作為對照。圖5是顯示通過單克隆抗體mAb7GW和mAb51D抑制破骨細胞分化的圖。圖6是顯示通過單克隆抗體mAb7GW和mAb51D抑制IL-19誘發(fā)的人食道癌細胞(CE81T細胞)增殖的圖。發(fā)明詳述本文描述了利用阻抑IL-20受體活性的物質(zhì)來治療對象與IL-20受體介導的信號通路相關(guān)的病癥的方法。在一些實施方案中，病癥與過度的IL-20受體介導的信號有關(guān)。這種病癥包括但不限于骨質(zhì)疏松癥(包括由雌激素缺乏、更年期、或炎癥誘發(fā)的骨質(zhì)疏松)、腎衰竭(例如急性腎衰竭或慢性腎疾病)、糖尿病腎病、癌癥(例如，口腔癌、食道癌和乳腺癌)、類風濕性關(guān)節(jié)炎、由癌癥(例如，乳腺癌、前列腺癌、肺癌、腎細胞癌、骨巨細胞瘤或伴有骨轉(zhuǎn)移的骨髓瘤)誘發(fā)的骨質(zhì)溶解、以及缺血性再灌注(中風)。用于本文的術(shù)語“IL-20受體”指由IL-20R1和IL-20R2亞單位形成的二聚體復合物。人IL-20R1和IL-20R2亞單位分別以 GenBank 登錄號 NP_055247 (蛋白)/NM_014432. 2 (mRNA)和 NP_653318 (蛋白)/NM_144717(mRNA)公開。阻抑IL-20受體活性的物質(zhì)可以是(i)通過例如結(jié)合IL-20R1中和IL-20受體活性的抗體，(ii) IL-20受體亞單位之一的反義核酸，(iii) IL-19、IL-20或IL-24的顯性負突變體、或者(iv)抑制IL-20受體的小分子。(i) IL-20受體中和抗體中和IL-20受體活性的抗體能夠結(jié)合受體(即結(jié)合Rl或R2亞單位)，并阻抑由受體介導的信號轉(zhuǎn)導(例如，降低IL-20受體介導的信號至少20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%或更多)。本文使用的術(shù)語“抗體”包括完整免疫球蛋白分子例如IgG、IgA和IgM，其抗原結(jié)合片段例如Fab、和Fv，以及基因工程抗體分子例如嵌合抗體、人源化抗體、scFv (單鏈抗體)、dAb (域抗體；參見Ward, et. al. (1989)Nature, 341:544)和雙特異性抗體。用于本文描述的治療中的抗體可以是單克隆的或多克隆的。“單克隆抗體”指同源抗體群，以及“多克隆抗體”指異源抗體群。這兩個術(shù)語并不限制抗體來源或其制備的方式。在一個實例中，IL-20受體中和抗體是人源化抗體。人源化抗體包含人免疫球蛋白(即，受體抗體)，其中負責抗原結(jié)合的區(qū)域/殘基(例如，互補確定區(qū)，特別是其中的特異性決定殘基)用 來自非-人免疫球蛋白(即，供體抗體)的區(qū)域/殘基替代。鑒定抗體重鏈和輕鏈中的區(qū)域/殘基的方法是本領(lǐng)域熟知的。參見,例如，Almagro, J. Mol.Recognit. 17:132-143 (2004);和 Chothia et al.，J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987)。在一些情況下，受體抗體的框架區(qū)內(nèi)一個或多個殘基也由來自供體抗體的殘基替代。人源化抗體還可以包含既不是來自受體抗體也不是來自供體抗體的殘基。這些殘基被包括以進一步改善和優(yōu)化抗體性能。在一些實施方案中，IL-20受體中和抗體是單克隆抗體mAb7GW或mAb51D、其抗原結(jié)合片段、或者mAb7GW或mAb51D的功能等同物。下面顯示的是mAb7GW和mAb51D的重鏈和輕鏈的氨基酸序列，以及它們的編碼核苷酸序列。mAb7Gff 的重鏈氨基酸序列(SEQID NO:1)MRVLILLffLFTAFPGILS VVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSI信號肽T SDYAffN WIRQFPGNRLEffM GYIDYSGSTKYNPSLKS R I S V T RD
CDRjCD.R2TSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCAR DFGDAY WGQGTLVTVSAj^
權(quán)利要求
1.用于治療與IL-20受體介導的信號通路相關(guān)的病癥的方法，其包括向需要治療的對象施用有效量的阻抑IL-20受體活性的物質(zhì)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥是骨質(zhì)疏松癥、腎衰竭、糖尿病腎病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、口腔癌、食道癌、乳腺癌、癌癥誘發(fā)的骨質(zhì)溶解和缺血性中風。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述物質(zhì)是結(jié)合并中和IL-20受體的抗體、IL-20受體的反義核酸、抑制IL-20受體的小分子、或者細胞因子IL-19、IL-20或IL-24的顯性負突變體。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述病癥是骨質(zhì)疏松癥、腎衰竭或糖尿病腎病。
5.權(quán)利要求1、2或4的方法，其中所述物質(zhì)是結(jié)合IL-20R1的抗體。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述抗體是完整免疫球蛋白分子、其抗原結(jié)合片段、人源化抗體、嵌合抗體或scFv。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述抗體是既結(jié)合IL-20R1又結(jié)合IL-19或IL-20的雙特異性抗體。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述抗體包含(i)含有與單克隆抗體mAb7GW重鏈可變區(qū)中的互補決定區(qū)相同的互補決定區(qū)(CDR)的重鏈可變區(qū)，以及含有與mAb7GW輕鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的輕鏈可變區(qū)；或者(ii)含有與單克隆抗體mAb51D重鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的重鏈可變區(qū)，以及含有與mAb51D輕鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的輕鏈可變區(qū)。
9.權(quán)利要求5的方法，其中所述抗體包含(i)mAb7GW的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)；或者(ii)mAb51D的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。
10.權(quán)利要求5的方法，其中所述抗體是mAb7GW或mAb51D的人源化抗體。
11.權(quán)利要求1、2或4的方法，其中所述物質(zhì)是靶向IL-20R1的反義RNA。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述反義RNA是使IL-20R1表達沉默的siRNA。
13.權(quán)利要求1、2或4的方法，其中所述病癥是骨質(zhì)疏松癥。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述物質(zhì)是結(jié)合IL-20R1的抗體。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述抗體是完整免疫球蛋白分子、其抗原結(jié)合片段、人源化抗體、嵌合抗體或scFv。
16.權(quán)利要求14的方法，其中所述抗體包含(i)含有與單克隆抗體mAb7GW重鏈可變區(qū)中的互補決定區(qū)相同的互補決定區(qū)(CDR)的重鏈可變區(qū)，以及含有與mAb7GW輕鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的輕鏈可變區(qū)；或者(ii)含有與單克隆抗體mAb51D重鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的重鏈可變區(qū)，以及含有與mAb51D輕鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的輕鏈可變區(qū)。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述抗體包含(i)mAb7GW的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)；或者(ii)mAb51D的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。
18.權(quán)利要求14的方法，其中所述抗體是mAb7GW或mAb51D的人源化抗體。
19.結(jié)合IL-20R1的分離的抗體，其中所述抗體包含(i)含有與單克隆抗體mAb7GW重鏈可變區(qū)中的互補決定區(qū)相同的互補決定區(qū)(CDR)的重鏈可變區(qū)，以及含有與mAb7GW輕鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的輕鏈可變區(qū)；或者(ii)含有與單克隆抗體mAb51D重鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的重鏈可變區(qū)，以及含有與mAb51D輕鏈可變區(qū)中的CDR相同的CDR的輕鏈可變區(qū)。
20.權(quán)利要求19的分離的抗體，其中所述抗體包含(i)mAb7GW的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)；或者(ii)mAb51D的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。
21.權(quán)利要求20的分離的抗體，其中所述抗體是mAb7GW或mAb51D、或者其抗原結(jié)合片段。
22.權(quán)利要求19的分離的抗體，其中所述抗體是嵌合抗體或單鏈抗體。
23.結(jié)合IL-20R1的分離的抗體，其中所述抗體是mAb7GW或mAb51D的人源化抗體。
全文摘要
用阻抑IL-20受體活性的物質(zhì)治療與IL-20受體介導的信號通路相關(guān)的病癥(例如，骨質(zhì)疏松癥、腎衰竭或糖尿病腎病)，所述物質(zhì)例如通過結(jié)合IL-20R1中和IL-20受體的抗體、抑制IL-20R1表達的反義核酸、抑制IL-20受體活性的小分子、或者IL-19、IL-20或IL-24的顯性負突變體。
文檔編號A61P3/10GK103052403SQ201180026884
公開日2013年4月17日 申請日期2011年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月16日
發(fā)明者M-S·張 申請人:成功大學