專(zhuān)利名稱(chēng)：一種藥物載體系統(tǒng)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物材料領(lǐng)域，特別涉及藥物載體系統(tǒng)及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前，惡性腫瘤已經(jīng)成為人類(lèi)生命的重大威脅。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，2008年全世界約有760萬(wàn)人死于癌癥，預(yù)計(jì)到2030年將超過(guò)1310萬(wàn)(GL0B0CAN2008 (IARC) Sectionof Cancer Information (28/6/2012))。因此,抗腫瘤治療受到了研究者們的普遍關(guān)注?；瘜W(xué)療法是癌癥的傳統(tǒng)治療方法之一，但目前在臨床治療中藥物普遍缺乏選擇性，施藥后將分布到一些正常器官和組織中，不僅降低了藥物的利用度，還對(duì)正常組織和器官造成顯著的毒副作用。除此之外，長(zhǎng)期使用化療藥物也會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性，反而增加了后期治療的困難。所以，如何提高藥物對(duì)腫瘤的選擇性，降低其在非病變部位的分布，提高藥物利用度等都是亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。納米載藥體系是將納米生物技術(shù)與藥物相結(jié)合，以納米生物材料作載體，藥物分子可以通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)的化學(xué)手段或者包裹、吸附等物理手段與基質(zhì)材料整合在一起形成納米尺度的顆粒。與傳統(tǒng)藥物相比，納米藥物具有顆粒小、比表面積大等特點(diǎn)，可以顯著提高藥物的溶解速率，促進(jìn)藥物的吸收，并提高生物利用度；還可以增強(qiáng)藥物對(duì)病變部位的導(dǎo)向性和對(duì)組織的滲透性，控制藥物的釋放，進(jìn)而提高療效，降低副作用。(ShiJj Votruba AR, Farokhzad OCj Langer R.Nanotechnology in Drug Delivery and TissueEngineering:From Discovery to Applications.Nano Lett., 10 (2010):3223 - 3230.)。藥物智能型可控釋放是納米載藥體系重要的特性之一。藥物智能型可控釋放體系按照來(lái)源可分為內(nèi)部刺激響應(yīng)型和外部`刺激響應(yīng)型(Lehner R, Wang X, Wolf M, HunzikerP.Designing switchable nanosystems for medical application.J.Control.Release.，161 (2012):307 - 316.)。前者包括pH值響應(yīng)型、氧化還原響應(yīng)型、酶響應(yīng)型等，后者包括光、超聲和電/磁響應(yīng)型等。理想的藥物釋放模式是:納米藥物在體液循環(huán)時(shí)不釋放或者少釋放活性藥物，而到達(dá)病灶部位時(shí)，能以一定速度釋放活性藥物。目前現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)了多種能夠感應(yīng)特殊環(huán)境并伴隨藥物釋放的智能型藥物載體(FleigeE, Quadir MA, Haag R.Stimul1-responsive polymeric nanocarriers for the controlledtransport of active compounds: Concepts and applications.Adv.Drug Deliv.Rev., 64(2012) 866 - 884.)。但是要達(dá)到理想的藥物釋放模式，還需要進(jìn)一步的研究。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種藥物載體系統(tǒng)，本發(fā)明提供的藥物載體系統(tǒng)具有PH值響應(yīng)性，能智能釋放藥物。本發(fā)明提供了一種藥物載體系統(tǒng)，包括:pH敏感遮蔽體系、陽(yáng)離子載體和負(fù)電性藥物；所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5 100):1。優(yōu)選的，所述陽(yáng)離子載體與藥物的質(zhì)量比為(0.05 50):1。優(yōu)選的，所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述賴(lài)氨酸與超支化的聚乙烯亞胺的摩爾比為(10 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述賴(lài)氨酸與超支化的聚乙烯亞胺的摩爾比為(10 50):1。優(yōu)選的，所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(20 80):1。優(yōu)選的，所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.7 10):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.7 10):1。優(yōu)選的，所述負(fù)電性藥物為負(fù)電性的抗癌類(lèi)藥物。優(yōu)選的，所述陽(yáng)離子載體為聚乙烯亞胺、樹(shù)枝狀的聚酰胺-胺或聚賴(lài)氨酸。

優(yōu)選的，所述陽(yáng)離子載體中，聚乙烯亞胺的分子量為20000 40000。本發(fā)明提供了一種藥物載體系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟:A)將負(fù)電性藥物與陽(yáng)離子載體混合孵育，得到二元復(fù)合物；B)將所述二元復(fù)合物與pH敏感遮蔽體系混合，得到藥物載體系統(tǒng)；所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5 100):1。優(yōu)選的，所述步驟A)中，所述孵育時(shí)間為10 30分鐘。本發(fā)明提供的藥物載體系統(tǒng)，包括:pH敏感遮蔽體系、陽(yáng)離子載體和負(fù)電性藥物；所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5 100):1。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的藥物載體系統(tǒng)包括PH敏感遮蔽體系、陽(yáng)離子載體和負(fù)電性藥物，因此藥物載體系統(tǒng)具有智能型可控釋放的特性，在中性或偏堿性的環(huán)境下即正常組織細(xì)胞周?chē)梢杂行У囊种扑幬镙d體系統(tǒng)中負(fù)電性藥物的釋放，而當(dāng)在酸性的環(huán)境下即腫瘤細(xì)胞周?chē)?，可以提高藥物載體系統(tǒng)與細(xì)胞的吸附及內(nèi)吞，增大藥物進(jìn)入細(xì)胞的程度，加速負(fù)電性藥物的釋放，提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的藥物載體系統(tǒng)對(duì)Hela細(xì)胞(人宮頸癌細(xì)胞)在不同pH條件下的細(xì)胞毒性具有明顯差異性，在酸性PH中的細(xì)胞毒性要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于正常pH7.4中的細(xì)胞毒性，即對(duì)腫瘤部位的殺傷力較大(細(xì)胞存活率45 65%)，而對(duì)正常組織細(xì)胞的毒性相對(duì)較低(細(xì)胞存活率80 95%)，十分有利于應(yīng)用在抗腫瘤治療中。
具體實(shí)施例方式為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，這些描述只是為進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的特征和優(yōu)點(diǎn)，而不是對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求的限制。本發(fā)明提供了一種藥物載體系統(tǒng)，包括:pH敏感遮蔽體系、陽(yáng)離子載體和負(fù)電性藥物；所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比 為(1.5 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5 100):1。本發(fā)明所述藥物載體系統(tǒng)中，所述陽(yáng)離子載體與藥物的質(zhì)量比優(yōu)選為(0.05 50):1，更優(yōu)選為(1.0 40):1 ;所述陽(yáng)離子載體優(yōu)選為聚乙烯亞胺、樹(shù)枝狀的聚酰胺-胺或聚賴(lài)氨酸，更優(yōu)選為聚乙烯亞胺，其作用為擔(dān)載負(fù)電性藥物；所述聚乙烯亞胺的分子量?jī)?yōu)選為20000 40000，更優(yōu)選為25000 30000。本發(fā)明對(duì)所述陽(yáng)離子載體的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，在市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的即可。本發(fā)明所述藥物載體系統(tǒng)中，所述負(fù)電性藥物優(yōu)選為負(fù)電性的抗癌類(lèi)藥物，更優(yōu)選為烏頭酸酐改性的阿霉素。本發(fā)明對(duì)負(fù)電性藥物沒(méi)有特別限制，在市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的即可。本發(fā)明對(duì)烏頭酸酐改性的阿霉素沒(méi)有特別限制，可以在市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)也可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。本發(fā)明所有原料，對(duì)其來(lái)源沒(méi)有特別限制，在市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的即可。本發(fā)明所述藥物載體系統(tǒng)中，所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的共聚物；或者超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的共聚物。所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量?jī)?yōu)選為2600 60000，更優(yōu)選為5000 40000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比優(yōu)選為(1.5 50):1,更優(yōu)選為(10 50):1,最優(yōu)選為(20 40):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000，更優(yōu)選為5000 40000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述賴(lài)氨酸與超支化的聚乙烯亞胺的摩爾比優(yōu)選為(1.5 50):1，更優(yōu)選為(10 50):1，最優(yōu)選為(20 40):lo本發(fā)明對(duì)所述pH敏感遮蔽體系的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，可以由市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)，當(dāng)其為超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物時(shí)，優(yōu)選按照以下方法制備:將聚乙烯亞胺與賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺-聚賴(lài)氨酸共聚物；將所述聚乙烯亞胺-聚賴(lài)氨酸共聚物與谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物。在上述制備超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物時(shí)，首先以聚酰亞胺為引發(fā)劑，與賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺-聚賴(lài)氨酸共聚物；所述反應(yīng)的溶劑優(yōu)選為二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的混合物，二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的體積比優(yōu)選為1: (I 10)，更優(yōu)選為1: (3 7);所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為60 80h，更優(yōu)選為62 78h。所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為20 40°C，更優(yōu)選為25 35°C。得到聚乙烯亞胺-聚賴(lài)氨酸共聚物后，將其與谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物。所述反應(yīng)的溶劑優(yōu)選為二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的混合物，二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的體積比優(yōu)選為1: (I 10)，更優(yōu)選為1:(3 7);所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為60 80h，更優(yōu)選為62 78h ；所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為20 40°C，更優(yōu)選為25 35°C。上述反應(yīng)結(jié)束后，聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物如果帶有保護(hù)基，可以?xún)?yōu)選對(duì)所述保護(hù)基進(jìn)行脫除。本發(fā)明對(duì)所述脫保護(hù)基的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。將上述反應(yīng)得到的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物，優(yōu)選經(jīng)過(guò)透析并凍干處理，所述透析所用的透析袋的截留量為3000 4000Da。本發(fā)明對(duì)所述透析和凍干的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。在本發(fā)明中當(dāng)所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的無(wú)規(guī)共聚物時(shí)，優(yōu)選按照以下方法制備:將聚乙烯亞胺與賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐和谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的無(wú)規(guī)共聚物。在上述制備超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的無(wú)規(guī)共聚物時(shí)，首先以聚乙烯亞胺為引發(fā)劑，將其與賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐和谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的無(wú)規(guī)共聚物；所述反應(yīng)的溶劑優(yōu)選為二氯甲烷和N, N- 二甲基甲酰胺的混合物，二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的體積比優(yōu)選為1: (I 10)，更優(yōu)選為1: (3 7);所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為60 80h，更優(yōu)選為62 78h ;所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為20 40°C，更優(yōu)選為25 35°C。上述反應(yīng)結(jié)束后，聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的無(wú)規(guī)共聚物如果帶有保護(hù)基，可以對(duì)所述保護(hù)基進(jìn)行脫除。本發(fā)明對(duì)所述脫保護(hù)基的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。將上述反應(yīng)得到的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚谷氨酸的無(wú)規(guī)共聚物，優(yōu)選經(jīng)過(guò)透析并凍干處理，所述透析所用的透析袋的截留量為3000 4000Da。本發(fā)明對(duì)所述透析和凍干的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。在本發(fā)明中當(dāng)所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物時(shí) ，優(yōu)選按照以下方法制備:
將聚乙烯亞胺與天冬氨酸-N-內(nèi)羧酸酐反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺-聚天冬氨酸共聚物；
將所述聚乙烯亞胺-聚天冬氨酸共聚物與賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物。在上述制備超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物時(shí)，首先以聚酰亞胺為引發(fā)劑，與天冬氨酸-N-內(nèi)羧酸酐反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺-聚天冬氨酸共聚物；所述反應(yīng)的溶劑優(yōu)選為二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的混合物，二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的體積比優(yōu)選為1: (I 10)，更優(yōu)選為1:(3 7);所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為60 80h，更優(yōu)選為62 78h ;所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為20 40°C，更優(yōu)選為25 35。。。得到聚乙烯亞胺-聚天冬氨酸共聚物后，將其與賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物。所述反應(yīng)的溶劑優(yōu)選為二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的混合物，二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的體積比優(yōu)選為1: (I 10)，更優(yōu)選為1:(3 7);所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為60 80h，更優(yōu)選為62 78h ;所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為20 40°C，更優(yōu)選為25 35°C。上述反應(yīng)結(jié)束后，聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物如果帶有保護(hù)基，可以?xún)?yōu)選對(duì)所述保護(hù)基進(jìn)行脫除。本發(fā)明對(duì)所述脫保護(hù)基的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。將上述反應(yīng)得到的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的嵌段共聚物或接枝共聚物，優(yōu)選經(jīng)過(guò)透析并凍干處理，所述透析所用的透析袋的截留量為3000 4000Da。本發(fā)明對(duì)所述透析和凍干的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。在本發(fā)明中當(dāng)所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的無(wú)規(guī)共聚物時(shí)，優(yōu)選按照以下方法制備:將聚乙烯亞胺與天冬氨酸-N-內(nèi)羧酸酐和賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的無(wú)規(guī)共聚物。在上述制備超支化的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的無(wú)規(guī)共聚物時(shí)，首先以聚乙烯亞胺為引發(fā)劑，將其與天冬氨酸-N-內(nèi)羧酸酐和賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐發(fā)生聚合反應(yīng)，得到聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的無(wú)規(guī)共聚物；所述反應(yīng)的溶劑優(yōu)選為二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的混合物，二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺的體積比優(yōu)選為1: (I 10)，更優(yōu)選為1: (3 7);所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為60 80h，更優(yōu)選為62 78h ;所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為20 40°C，更優(yōu)選為25 35°C。上述反應(yīng)結(jié)束后，聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的無(wú)規(guī)共聚物如果帶有保護(hù)基，可以對(duì)所述保護(hù)基進(jìn)行脫除。本發(fā)明對(duì)所述脫保護(hù)基的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。將上述反應(yīng)得到的聚乙烯亞胺、聚賴(lài)氨酸和聚天冬氨酸的無(wú)規(guī)共聚物，優(yōu)選經(jīng)過(guò)透析并凍干處理，所述透析所用的透析袋的截留量為3000 4000Da。本發(fā)明對(duì)所述透析和凍干的方法沒(méi)有特殊限制，可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式進(jìn)行。本發(fā)明所述藥物載體系統(tǒng)中，所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比優(yōu)選為(0.5 100):1，更優(yōu)選為(20 80):1，最有選為(40 60):1 ;所述陽(yáng)離子載體與藥物的質(zhì)量比為(0.05 50):1，更優(yōu)選為(1.0 40):1。本發(fā)明提供了一種藥物載體系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟:A)將負(fù)電性藥物與陽(yáng)離子載體混合孵育，得到二元復(fù)合物；B)將所述二元復(fù)合物與pH敏感遮蔽體系混合，得到藥物載體系統(tǒng)；所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5 100):1。本發(fā)明首先將藥物與陽(yáng)離子載體混合孵育，得到二元復(fù)合物。所述陽(yáng)離子載體優(yōu)選為聚乙烯亞胺、樹(shù)枝狀的聚酰胺-胺或聚賴(lài)氨酸，更優(yōu)選為聚乙烯亞胺，其作用為擔(dān)載負(fù)電性藥物；所述聚乙烯亞胺的分子量?jī)?yōu)選為20000 40000，更優(yōu)選為25000 30000。本發(fā)明對(duì)所述陽(yáng)離子載體的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，在市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的即可。本發(fā)明所述負(fù)電性藥物優(yōu)選為負(fù)電性的抗癌類(lèi)藥物，更優(yōu)選為烏頭酸酐改性的阿霉素。本發(fā)明對(duì)負(fù)電性藥物沒(méi)有特別限制，在市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的即可。本發(fā)明對(duì)烏頭酸酐改性的阿霉素沒(méi)有特別限制，可以在市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)也可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。所述陽(yáng)離子載體與藥物的質(zhì)量比為(0.05 50):1，更優(yōu)選為(1.0 40):1。所述混合孵育的溶劑優(yōu)選為水，為了提高混合孵育的效果，本發(fā)明優(yōu)選先將藥物與陽(yáng)離子載體分別溶于水形成水溶 液，再將上述水溶液進(jìn)行混合孵育，所述混合孵育的時(shí)間優(yōu)選為10 30分鐘，更優(yōu)選為15 25分鐘。本發(fā)明對(duì)水的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)方法獲得即可。本發(fā)明對(duì)混合孵育的方式?jīng)]有特別限制，以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)方法孵育即可。然后將上述二元復(fù)合物與pH敏感遮蔽體系混合。所述混合時(shí)所用的溶劑優(yōu)選為水。為了保證混合均勻，優(yōu)選將pH敏感遮蔽體系溶于水形成水溶液，再將上述pH敏感遮蔽體系水溶液與二元復(fù)合物進(jìn)行混合，得到藥物載體系統(tǒng)。所述pH敏感遮蔽體系水溶液的pH值優(yōu)選為7.0 7.8，更優(yōu)選為7.2 7.6 ;所述混合的時(shí)間優(yōu)選為10 30分鐘，更優(yōu)選為15 25分鐘；所述混合的溫度優(yōu)選為O 40°C，更優(yōu)選為室溫。本發(fā)明對(duì)水的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)方法獲得即可。本發(fā)明對(duì)混合的方式?jīng)]有特別限制，以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)方法混合即可。本發(fā)明所述的藥物載體系統(tǒng)的制備方法中的pH敏感遮蔽體系與本發(fā)明所提供的藥物載體系統(tǒng)中的PH敏感遮蔽體系，其來(lái)源、制備方法和條件均一致，此處不再贅述。將上述方法得到的藥物載體系統(tǒng)在不同pH條件下對(duì)Hela細(xì)胞(人宮頸癌細(xì)胞)進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該體系在酸性PH中的細(xì)胞毒性要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于正常pH7.4中的細(xì)胞毒性，即對(duì)腫瘤部位的殺傷力較大(細(xì)胞存活率45 65%)，而對(duì)正常組織細(xì)胞的毒性相對(duì)較低(細(xì)胞存活率80 95%)為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的藥物載體系統(tǒng)及其制備方法進(jìn)行說(shuō)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍不受以下實(shí)施例的限制。
實(shí)施例1 8分別將聚乙烯亞胺(PEI)和賴(lài)氨酸-N-內(nèi)羧酸酐溶于二氯甲烷和DMF的混合溶劑中，二氯甲烷和DMF的體積比為1:2。將兩者混合，在30°C下反應(yīng)72小時(shí)。然后加入ε-芐氧羰基-L-谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐的二氯甲烷和DMF的混合溶液，35°C反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后用乙醚沉降，過(guò)濾干燥后，溶解在三氟乙酸中，加入溴化氫的乙酸溶液，在室溫下脫保護(hù)2小時(shí)，然后用乙醚沉降，干燥后用水溶解，3500Da的透析袋透析3天，換水6次，產(chǎn)物冷凍干燥后得到聚乙烯亞胺-聚賴(lài)氨酸-聚谷氨酸的嵌段共聚物，記為PE1-b-PLL-b-PGA。使用不同分子量的引發(fā)劑PEI,改變賴(lài)氨酸-NCA和谷氨酸-NCA的摩爾量，可以得到不同分子量和組成的PE1-b-PLL-b-PGA。其分子組成以及在不同pH值時(shí)的粒徑和電位數(shù)值如表I所示。表I實(shí)施例1 8的原料比例及產(chǎn)物的顆粒大小和表面電位
權(quán)利要求
1.一種藥物載體系統(tǒng)，包括φΗ敏感遮蔽體系、陽(yáng)離子載體和負(fù)電性藥物； 所述PH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5 100):1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物載體系統(tǒng)，其特征在于，所述陽(yáng)離子載體與藥物的質(zhì)量比為(0.05 50):lo
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物載體系統(tǒng)，其特征在于，所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述賴(lài)氨酸與超支化的聚乙烯亞胺的摩爾比為(10 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述賴(lài)氨酸與超支化的聚乙烯亞胺的摩爾比為(10 50):1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物載體系統(tǒng)，其特征在于，所述PH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(20 80):1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物載體系統(tǒng)，其特征在于，所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.7 10):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.7 10):1o
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物載體系統(tǒng)，其特征在于，所述負(fù)電性藥物為負(fù)電性的抗癌類(lèi)藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物載體系統(tǒng)，其特征在于，所述陽(yáng)離子載體為聚乙烯亞胺、樹(shù)枝狀的聚酰胺-胺或聚賴(lài)氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物載體系統(tǒng)，其特征在于，所述陽(yáng)離子載體中，聚乙烯亞胺的分子量為20000 40000。
9.一種藥物載體系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟: A)將負(fù)電性藥物與陽(yáng)離子載體混合孵育，得到二元復(fù)合物； B)將所述二元復(fù)合物與pH敏感遮蔽體系混合，得到藥物載體系統(tǒng)； 所述PH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物的分子量為2600 60000 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5 50):1 ;所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5 100):1。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述步驟A)中，所述孵育時(shí)間為10 30分鐘。
全文摘要
本發(fā)明提供一種藥物載體系統(tǒng)，包括pH敏感遮蔽體系、陽(yáng)離子載體和負(fù)電性藥物；所述pH敏感遮蔽體系為超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物，或者超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和谷氨酸的共聚物中，所述谷氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5～50)1；所述超支化的聚乙烯亞胺、賴(lài)氨酸和天冬氨酸的共聚物中，所述天冬氨酸與賴(lài)氨酸的摩爾比為(1.5～50)1；所述pH敏感遮蔽體系與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為(0.5～100)1。所述藥物載體系統(tǒng)具有pH值響應(yīng)性，在不同pH條件下的細(xì)胞毒性具有明顯差異性，能智能釋放藥物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK103169974SQ20131013813
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月19日
發(fā)明者田華雨, 關(guān)秀文, 陳學(xué)思, 焦自學(xué), 陳杰, 郭兆培, 林琳 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所