專利名稱：熱淋清顆粒原料的醇提有效部位及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，用于制備中藥熱淋清顆粒的原料即藥材頭花寥的提取物。具體地，本發(fā)明涉及由熱淋清的原料即藥材頭花寥的醇提取物所獲得的有效部位，以及該有效部位的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
頭花寥(Polygonum capitatum Buch-Ham ex D. Don)為寥科寥屬多年生草本植物。具有清熱利濕、利尿通淋之功效，在臨床上治療泌尿系統(tǒng)感染有著顯著的效果。以其為原料制成的中成藥制劑“熱淋清顆?！?2004年進(jìn)入國家基本醫(yī)療保險目錄，2012年進(jìn)入貴州省基本藥物目錄。 頭花寥是少數(shù)民族地區(qū)的常用藥，主要用于腎盂腎炎、尿道感染、利尿通淋等癥。相關(guān)的藥理學(xué)研究少見，目前僅有任光友等幾篇報道。任光友采用大鼠細(xì)菌性腎盂腎炎模型進(jìn)行實驗，結(jié)果頭花寥水提取物組大鼠尿液中的WBC和BLD與對照組比較明顯減少，顯示頭花寥水提物對腎盂腎炎具有一定的抗炎作用。任光友等以小鼠腹腔注射大腸桿菌菌液觀察5天內(nèi)小鼠死亡情況，結(jié)果對照組死亡率為100%，頭花寥組死亡率分別為20%和50%，顯示頭花寥水提物能夠?qū)勾竽c桿菌引起的感染。任光友等以頭花寥水提物灌胃給藥予家兔，結(jié)果，頭花寥水提物組與對照組比較，體溫?zé)o顯著性差異，但能降低靜脈注射傷寒副傷寒菌苗引起的家兔的發(fā)熱體溫。任光友等，以頭花寥水提物分別灌胃給藥家兔、大鼠，與空白組和速尿?qū)φ战M比較尿量。結(jié)果顯示頭花寥水提物對家兔和大鼠無明顯利尿作用。徐英春等人采用瓊脂稀釋法檢測了頭花寥對10株淋病奈瑟球菌(淋球菌)的體外抑菌活性，結(jié)果頭花寥對淋球菌有抑菌活性。其對10株淋球菌的最小抑菌濃度范圍為8 32g/L，平均值為 11.2g/L。中國專利申請公開說明書0附0548994(中國專利申請?zhí)?0107810.7，
公開日1991年10月2日)中公開了一種泌感靈沖劑、糖漿生產(chǎn)工藝。該生產(chǎn)工藝是以四季草為原料用水煎煮30-60分鐘，提取液過濾濃縮，將其上清液減壓濃縮成膏，再用60-70%乙醇提取，將乙醇提取液真空干燥，得四季紅浸膏，進(jìn)一步配制成沖劑或糖漿劑，據(jù)信其具有解毒、散瘀、利尿、通淋的功效。中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會1998年編的中華人民共和國衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)一中藥成方制劑》(第十七冊)中收載了名為“熱淋清顆粒”的中成藥制劑，其是通過將頭花寥加水煎煮兩次后過濾濃縮制成的。CN1481832A(中國專利申請?zhí)?2129686. 3，
公開日2004年3月17日)和CN1483466A (中國專利申請?zhí)?3146381. 9，
公開日2004年3月24日)公開了頭花寥提取物，其基本上是由以下步驟制備的a.由頭花寥全草的鮮品或干品用水分兩次煎煮或者用醇水混合物分二至三次回流提取，每次1-2小時，合并煎煮液，過濾濃縮至20°C時的相對密度為I. 2，噴霧干燥或減壓干燥得到；或者，b.由頭花寥全草及其水提藥渣經(jīng)二氧化碳超臨界萃取得到。據(jù)信此提取物可用于抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿、治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石、治療腎盂腎炎以及前列腺炎。盡管目前有諸多關(guān)于制備頭花寥提取物的報道，然而本領(lǐng)域技術(shù)人員仍然期待從頭花寥獲得更為有效的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是期待從頭花寥獲得一種有效的產(chǎn)品。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，使用醇提取頭花寥，得到的提取物經(jīng)特定的大孔樹脂洗脫所獲得的洗脫物，其在生物活性方面具有令人期待的效果。本發(fā)明基于此發(fā)現(xiàn)而得以完成。為此，本發(fā)明第一方面提供了一種頭花寥提取物，其基本上由包括以下步驟的方法制備得到(I)將頭花寥地上部分鮮品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如約70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次 1-3小時(例如約I. 5小時)，過濾，使濾液濃縮、干燥，得醇浸膏；(2)使醇浸膏混懸于甲醇中，超聲處理O. 5飛小時(例如O. 5^3小時，例如f 2小時，例如約I. 5小時)，離心，將上清液加載到MCI大孔樹脂柱(例如，每IOOg浸膏使用樹脂的量為O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上；(3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100% 甲醇依次進(jìn)行梯度洗脫(例如每種溶劑用量為O. 5^5倍柱體積，例如O. 5^2. 5倍柱體積，例如O. 5^2倍柱體積，例如I倍柱體積)，收集各部分洗脫液，回收溶劑，由不同溶劑洗脫獲得的部位干燥，得到30%-50%之間任意濃度間隔或濃度點的甲醇洗脫物，或者它們的混合物，即得。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中步驟(3)所得甲醇洗脫物是30%甲醇洗脫物(在本發(fā)明中可簡稱為部位A)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中步驟(3)所得甲醇洗脫物是35%_40%甲醇洗脫物(在本發(fā)明中可簡稱為部位B)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中步驟(3)所得甲醇洗脫物是40%甲醇洗脫物(在本發(fā)明中可簡稱為部位C)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中步驟(3)所得甲醇洗脫物是40%_50%甲醇洗脫物(在本發(fā)明中可簡稱為部位D)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中步驟(3)所得甲醇洗脫物是30%_50%之間甲醇洗脫物的混合物(在本發(fā)明中可簡稱為部位X)。在本發(fā)明中，該部位X可以是部位A至部位D干燥品的混合物，亦可以是30%-50%甲醇洗脫所得混合液經(jīng)除溶劑干燥后的干燥品。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中部位A中含有可水解鞣質(zhì)例如二沒食子酰葡萄糖。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中部位B中含有可水解鞣質(zhì)例如三沒食子酰葡萄糖。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中部位C中含有可水解鞣質(zhì)和/或原花青素。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中部位D中含有可水解鞣質(zhì)例如可水解革柔質(zhì)davidiin。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其中部位X中含有可水解鞣質(zhì)和/或原花青素，例如二沒食子酰葡萄糖、三沒食子酰葡萄糖、原花青素和/或可水解鞣質(zhì)davidiin。根據(jù)本發(fā)明第一方面的頭花寥提取物，其照超高效液相色譜-飛行時間-質(zhì)譜聯(lián)用法(在本發(fā)明中可簡稱為UPLC-T0F-MS)測定，結(jié)果(a)在保留時間l_3min之間顯示可水解鞣質(zhì)(例如二沒食子酰葡萄糖)的色譜峰；(b)在保留時間3. 4-4. 4min之間(例如約3. 9min處)和保留時間4. 8-5. 8min之間(例如約5. 3min處)顯示可水解鞣質(zhì)(例如三沒食子酰葡萄糖)的色譜峰；(c)在保留時間3. 4-4. 4min之間(例如約3. 9min處)、保留時間4. 8-5. 8min之間(例如約5. 3min處)、保留時間8. 2-9. 2min之間(例如約8. 7min處)、保留時間 12. 0-13. Omin之間(例如約12. 5min處)顯示可水解鞣質(zhì)的色譜峰，和/或在保留時間6. 2-7. 2min之間(例如約6. 7min處)、保留時間8. 1-9. Imin之間(例如約8. 6min處)、保留時間8. 6-9. 6min之間(例如約9. Imin處)顯示原花青素的色譜峰；(d)在保留時間12. 0-13. Omin之間(例如約12. 5min處)顯示可水解鞣質(zhì)(例如davidiin)的色譜峰；和/或(X)顯示以上(a)至(d)中所示任一或全部色譜峰；其中，UPLC-T0F-MS的測定方法如下(i)供試液配制稱取適量頭花寥提取物粉末，加入70%甲醇制成濃度約5mg/ml的混懸液，超聲使盡量溶解，混懸液稀釋10倍，過濾，進(jìn)樣2 μ I作質(zhì)譜檢測；(ii)色譜及質(zhì)譜分析條件色譜柱AcquityBEH C18 柱(2. IXlOOmm, I. 7 μ m)，柱溫40°C ;流速0. 35ml/min;進(jìn)樣量2μ1 ;質(zhì)譜條件離子源ESI源；干燥氣體溫度180°C ;毛細(xì)管電壓4500eV ;檢測模式負(fù)離子模式；噴霧壓力2. 5bar ;干燥氣(N2)流速8L/min ;掃描范圍100-2000amu ;碰撞能量IOev ;以O(shè). 1%甲酸水溶液為流動相A，0. 1%甲酸乙腈溶液為流動相B，按下表規(guī)定的程序進(jìn)行梯度洗脫
權(quán)利要求
1.一種頭花寥提取物，其基本上由包括以下步驟的方法制備得到 (1)將頭花寥地上部分鮮品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如約70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次1-3小時(例如約I. 5小時)，過濾，使濾液濃縮、干燥，得醇浸膏； (2)使醇浸膏混懸于甲醇中，超聲處理O.5飛小時(例如O. 5 3小時，例如廣2小時，例如約I. 5小時)，離心，將上清液加載到MCI大孔樹脂柱(例如，每IOOg浸膏使用樹脂的量為O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上； (3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100%甲醇依次進(jìn)行梯度洗脫(例如每種溶劑用量為O. 5^5倍柱體積，例如O. 5^2. 5倍柱體積，例如O. 5^2倍柱體積，例如I倍柱體積)，收集各部分洗脫液，回收溶劑，由不同溶劑洗脫獲得的部位干燥，得到30%-50%之間任意濃度間隔或濃度點的甲醇洗脫物，或者它們的混合物，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的頭花寥提取物，其特征在于， 步驟(3)所得甲醇洗脫物是30%甲醇洗脫物(部位A)； 步驟(3)所得甲醇洗脫物是35%-40%甲醇洗脫物(部位B)； 步驟(3)所得甲醇洗脫物是40%甲醇洗脫物(部位C); 步驟(3)所得甲醇洗脫物是40%-50%甲醇洗脫物(部位D);和/或 步驟⑶所得甲醇洗脫物是30%-50%之間甲醇洗脫物的混合物(部位X)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的頭花寥提取物，其特征在于， 部位A中含有可水解鞣質(zhì)例如二沒食子酰葡萄糖； 部位B中含有可水解鞣質(zhì)例如三沒食子酰葡萄糖； 部位C中含有可水解鞣質(zhì)和/或原花青素； 部位D中含有可水解鞋質(zhì)例如可水解鞋質(zhì)davidiin ； 部位X中含有可水解鞣質(zhì)和/或原花青素，例如二沒食子酰葡萄糖、三沒食子酰葡萄糖、原花青素和/或可水解鞋質(zhì)davidiin。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的頭花寥提取物，其照超高效液相色譜-飛行時間-質(zhì)譜聯(lián)用法測定，結(jié)果 (a)在保留時間l_3min之間顯示可水解鞣質(zhì)的色譜峰； (b)在保留時間3.4-4. 4min之間和保留時間4. 8-5. 8min之間顯示可水解鞋質(zhì)的色譜峰； (c)在保留時間3.4-4. 4min之間、保留時間4. 8-5. 8min之間、保留時間8. 2-9. 2min之間、保留時間12. 0-13. Omin之間顯示可水解鞣質(zhì)的色譜峰，和/或在保留時間6. 2-7. 2min之間、保留時間8. 1-9. Imin之間、保留時間8. 6-9. 6min之間顯示原花青素的色譜峰； (d)在保留時間12.0-13. Omin之間顯示可水解鞋質(zhì)(例如davidiin)的色譜峰；和/或 (X)顯示以上(a)至(d)中所示任一或全部色譜峰； 其中，UPLC-TOF-MS的測定方法如下 (i)供試液配制稱取適量頭花寥提取物粉末，加入70%甲醇制成濃度約5mg/ml的混懸液，超聲使盡量溶解，混懸液稀釋10倍，過濾，進(jìn)樣2 μ I作質(zhì)譜檢測； ( )色譜及質(zhì)譜分析條件色譜柱:Acquity BEH C18 柱(2· I X 100mm, I. 7 μ m),柱溫40°C ;流速0. 35ml/min ;進(jìn)樣量2 μ I ;質(zhì)譜條件離子源ESI源；干燥氣體溫度180°C ;毛細(xì)管電壓4500eV ;檢測模式負(fù)離子模式；噴霧壓力2. 5bar ;干燥氣(N2)流速8L/min ;掃描范圍100-2000amu ；碰撞能量IOev ;以O(shè). 1%甲酸水溶液為流動相A，0. 1%甲酸乙腈溶液為流動相B，按下表規(guī)定的程序進(jìn)行梯度洗脫
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項的頭花寥提取物，其特征在于如說明書第一方面任一實施方案所述。
6.一種頭花寥提取物，其照超高效液相色譜-飛行時間-質(zhì)譜聯(lián)用法測定，結(jié)果 (a)在保留時間l_3min之間顯示可水解鞣質(zhì)的色譜峰； (b)在保留時間3.4-4. 4min之間和保留時間4. 8-5. 8min之間顯示可水解鞋質(zhì)的色譜峰； (c)在保留時間3.4-4. 4min之間、保留時間4. 8-5. 8min之間、保留時間8. 2-9. 2min之間、保留時間12. 0-13. Omin之間顯示可水解鞣質(zhì)的色譜峰，和/或在保留時間6. 2-7. 2min之間、保留時間8. 1-9. Imin之間、保留時間8. 6-9. 6min之間顯示原花青素的色譜峰； (d)在保留時間12.0-13. Omin之間顯示可水解鞣質(zhì)的色譜峰；和/或 (X)顯示以上(a)至(d)中所示任一或全部色譜峰； 其中，UPLC-T0F-MS的測定方法如下 (i)供試液配制稱取適量頭花寥提取物粉末，加入70%甲醇制成濃度約5mg/ml的混懸液，超聲使盡量溶解，混懸液稀釋10倍，過濾，進(jìn)樣2 μ I作質(zhì)譜檢測； ( )色譜及質(zhì)譜分析條件色譜柱:Acquity BEH C18 柱(2. I X 100mm，I. 7 μ m),柱溫40°C ;流速0. 35ml/min ;進(jìn)樣量2μ I ;質(zhì)譜條件離子源ESI源；干燥氣體溫度180°C ;毛細(xì)管電壓4500eV ;檢測模式負(fù)離子模式；噴霧壓力2. 5bar ;干燥氣(N2)流速8L/min ;掃描范圍100-2000amu ；碰撞能量IOev ;以0. 1%甲酸水溶液為流動相A，0. 1%甲酸乙腈溶液為流動相B，按下表規(guī)定的程序進(jìn)行梯度洗脫
7.根據(jù)權(quán)利要求6的頭花寥提取物，其基本上由包括以下步驟的方法制備得到 (1)將頭花寥地上部分鮮品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如約70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次1-3小時(例如約I. 5小時)，過濾，使濾液濃縮、干燥，得醇浸膏； (2)使醇浸膏混懸于甲醇中，超聲處理O.5飛小時(例如O. 5 3小時，例如廣2小時，例如約I. 5小時)，離心，將上清液加載到MCI大孔樹脂柱(例如，每IOOg浸膏使用樹脂的量為O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上； (3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100%甲醇依次進(jìn)行梯度洗脫(例如每種溶劑用量為O. 5^5倍柱體積，例如O. 5^2. 5倍柱體積，例如O. 5^2倍柱體積，例如I倍柱體積)，收集各部分洗脫液，回收溶劑，由不同溶劑洗脫獲得的部位干燥，得到30%-50%之間任意濃度間隔或濃度點的甲醇洗脫物，或者它們的混合物，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的頭花寥提取物，其特征在于 步驟⑶所得甲醇洗脫物是30%甲醇洗脫物(部位Α)； 步驟(3)所得甲醇洗脫物是35%-40%甲醇洗脫物(部位B)； 步驟(3)所得甲醇洗脫物是40%甲醇洗脫物(部位C); 步驟(3)所得甲醇洗脫物是40%-50%甲醇洗脫物(部位D)； 步驟(3)所得甲醇洗脫物是30%-50%之間甲醇洗脫物的混合物(部位X)； 部位A中含有可水解鞣質(zhì)例如二沒食子酰葡萄糖； 部位B中含有可水解鞣質(zhì)例如三沒食子酰葡萄糖； 部位C中含有可水解鞣質(zhì)和/或原花青素； 其中部位D中含有可水解鞋質(zhì)例如可水解鞋質(zhì)davidiin ;和/或部位X中含有可水解鞣質(zhì)和/或原花青素，例如二沒食子酰葡萄糖、三沒食子酰葡萄糖、原花青素和/或可水解鞋質(zhì)davidiin。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項的頭花寥提取物，其特征在于如說明書第二方面任一實施方案所述。
10.制備權(quán)利要求1-5或權(quán)利要求6-9任一項所述頭花寥提取物的方法，其基本上包括以下步驟 (1)將頭花寥地上部分鮮品或干品加5-15倍量(例如5-12倍量，例如6-10倍量)的50 90%(例如60 80%，例如65 75%，例如約70%)乙醇回流提取1-3次(例如2次)，每次1-3小時(例如約I. 5小時)，過濾，使濾液濃縮、干燥，得醇浸膏； (2)使醇浸膏混懸于甲醇中，超聲處理O.5飛小時(例如O. 5 3小時，例如廣2小時，例如約I. 5小時)，離心，將上清液加載到MCI大孔樹脂柱(例如，每IOOg浸膏使用樹脂的量為O. 5-4升，例如1-3升，例如I. 5-2. 5升，例如2升)上； (3)用水，10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、100%甲醇依次進(jìn)行梯度洗脫(例如每種溶劑用量為O. 5^5倍柱體積，例如O. 5^2. 5倍柱體積，例如O. 5^2倍柱體積，例如I倍柱體積)，收集各部分洗脫液，回收溶劑，由不同溶劑洗脫獲得的部位干燥，得到30%-50%之間任意濃度間隔或濃度點的甲醇洗脫物，或者它們的混合物，即得。
11.權(quán)利要求1-5或權(quán)利要求6-9任一項所述頭花寥提取物在制備清熱利濕用藥，利尿通淋用藥，泌尿系統(tǒng)感染或結(jié)石用藥，腎盂腎炎用藥，解毒、散瘀用藥，抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛用藥，前列腺炎用藥的藥物中的用途。
12.—種藥物組合物,其中包含權(quán)利要求1-5或權(quán)利要求6-9任一項所述頭花寥提取物，以及任選的藥學(xué)可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及熱淋清顆粒原料的醇提有效部位及其制備方法和用途。具體地，本發(fā)明涉及一種頭花蓼提取物，其制法包括(1)將頭花蓼地上部分鮮品或干品加5-15倍量的50～90%乙醇回流提取1-3次，過濾，使濾液濃縮、干燥，得醇浸膏；(2)使醇浸膏混懸于甲醇中，超聲處理0.5～5小時，離心，將上清液加載到MCI大孔樹脂柱上；(3)用水，10%～100%甲醇依次進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液，回收溶劑，由不同溶劑洗脫獲得的部位干燥，得到30%-50%之間任意濃度間隔或濃度點的甲醇洗脫物，或者它們的混合物，即得。本發(fā)明頭花蓼提取物具有如說明書所述的有益效果。
文檔編號A61P13/12GK102772499SQ20121030138
公開日2012年11月14日 申請日期2012年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月22日
發(fā)明者唐靖雯, 姜志宏, 張麗艷, 李孟林, 梁斌, 潘梅, 謝宇 申請人:貴州威門藥業(yè)股份有限公司