專利名稱：雪蓮培養(yǎng)物提取物及其新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雪蓮培養(yǎng)物提取物的制備方法及其應(yīng)用，特別涉及雪蓮培養(yǎng)物提取物在制備用于預(yù)防和治療痛經(jīng)的藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
原發(fā)性痛經(jīng)指女性在行經(jīng)前或后、行經(jīng)期出現(xiàn)腹痛、腰痛、下腹墜脹或其他不適， 影響生活和工作者，多見于未婚未孕女性。在發(fā)展中國家約25% 50%成年女性和75%的青少年發(fā)生痛經(jīng)，其中5% -20%為嚴(yán)重痛經(jīng)。痛經(jīng)的常規(guī)治療主要用前列腺素拮抗劑、激素或水楊酸等，但止痛、解痙藥物療效不滿意。因此尋找有效的藥物預(yù)防及治療痛經(jīng)是非常重要的。雪蓮培養(yǎng)物是選取雪蓮愈傷組織做為繼代種子，通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)繼代培養(yǎng)獲得的，即中國專利ZL200510115902. 0說明了雪蓮培養(yǎng)物大規(guī)模培養(yǎng)的方法，雪蓮培養(yǎng)物含有黃酮、多糖、綠原酸、紫丁香苷、微量元素及萜類等多種有效成份，雪蓮培養(yǎng)物提取液采用醇提的方法獲得純度較高的雪蓮黃酮，具有溫腎助陽，祛風(fēng)勝濕，通經(jīng)活血的作用?，F(xiàn)有文獻(xiàn)和專利都沒有其在治療痛經(jīng)方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的就是為了解決以上問題，提供一種雪蓮培養(yǎng)物提取物及其制備方法， 本發(fā)明另一目的在于提供雪蓮培養(yǎng)物提取物用于制備預(yù)防和治療原發(fā)性痛經(jīng)的藥物的新用途。雪蓮培養(yǎng)物是按照專利號ZL200510115902. 0，CN1961650上記載的工藝制備，選取雪蓮離體組織，經(jīng)脫分化形成的愈傷組織作為繼代種，給與一定條件進(jìn)行大規(guī)模繼代培養(yǎng)獲得的紫紅色團(tuán)塊狀顆粒，或該顆粒經(jīng)干燥粉碎得到的粉末。本發(fā)明中雪蓮培養(yǎng)物提取物是指經(jīng)過提取、濃縮、滅菌、噴干等工藝得到的雪蓮培養(yǎng)物提取液、雪蓮培養(yǎng)物提取液噴干粉等。本發(fā)明雪蓮培養(yǎng)物提取液制備工藝為在雪蓮培養(yǎng)物中加入30-95 %乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為 1 10-1 40，超聲提取，溫度為30-95°C，每次提取30-180min，連續(xù)提取2-3次，所得液體采用50-70°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量-60% ；再在100-130°C下，高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。本發(fā)明雪蓮培養(yǎng)物提取液制備工藝可以優(yōu)選為在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取，溫度為85°C，每次提取60min，連續(xù)提取2次，兩次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量_60%，120°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。雪蓮培養(yǎng)物提取液的制備工藝可以優(yōu)選為
在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取，溫度為45°C，每次提取60min，連續(xù)提取2次，兩次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量-60%;110°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。雪蓮培養(yǎng)物提取液的制備工藝可以優(yōu)選為在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取，溫度為45°C，每次提取60min，連續(xù)提取3次，三次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量-60%;110°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。將雪蓮培養(yǎng)物提取液在溫度40-50°C，-0. 05-0. IOMPa條件下濃縮，濃縮至固形物含量25% -35%,噴干，真空度2500Pa，60-130°C，冷卻至室溫包裝檢驗(yàn)，按照常規(guī)工藝制成口服液、膠囊、片劑。雪蓮培養(yǎng)物提取液噴干粉經(jīng)檢測含有總黃酮大于30%，多糖大于20%、綠原酸大于1%，具有溫腎助陽，祛風(fēng)勝濕，通經(jīng)活血。本發(fā)明提供了雪蓮培養(yǎng)物提取液及其新用途，治療痛經(jīng)，療效好，治愈率較高，且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用。下面實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例1:本實(shí)驗(yàn)以總黃酮含量為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)的方法對超聲波提取雪蓮培養(yǎng)物總黃酮的工藝條件進(jìn)行了研究。雪蓮培養(yǎng)物提取液中總黃酮的測定以槲皮素為標(biāo)準(zhǔn)對照品、硝酸鋁為顯色劑，進(jìn)總黃酮的測定。1、溶液的配制對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)120°C干燥至恒重的蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解， 并稀釋至刻度，搖勻。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5與6mL，分別置25mL量瓶中，各加水至6mL，加入 5%亞硝酸鈉溶液lmL，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液lmL，搖勻，放置6分鐘，加4% 氫氧化鈉試液IOmL加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法(中國藥典2005版二部附錄VB)，在500nm的波長處測定吸收度，以吸收度與其對應(yīng)的濃度計(jì)算線性回歸方程。得方程y = kx+b3、供試品溶液的制備取本發(fā)明約2克，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流至提取液無色，放冷，提取液定量移入IOOmL量瓶中，并用甲醇少量洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。4、測定法精密吸取供試品溶液3mL，置25mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6mL”起，依法操作；另取相應(yīng)試劑為空白，在500nm的波長處測定吸收度，從線性回歸方程計(jì)算總黃酮含量以蘆丁計(jì)含量計(jì)算公式
X= (A 樣-b) XV 樣/(kXM 樣)Χ100%................................. (Α. 1)式中X——樣品中含有雪蓮總黃酮的百分含量A樣——樣品測定的吸收度值k、b——標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率及截距V樣——樣品提取過程中稀釋的倍數(shù)M樣——樣品測定時(shí)樣品的取樣量單因素實(shí)驗(yàn)由于乙醇作為提取溶劑具有選擇性好，滲透性強(qiáng)，浸出率較高的優(yōu)點(diǎn)， 因此本實(shí)驗(yàn)選擇一定濃度的乙醇溶液作為提取劑，并分別考察了雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比、萃取溫度、超聲波萃取時(shí)間及萃取次數(shù)等因素對提取率的影響。(1)提取溶劑的影響提取溶劑95%乙醇、70%乙醇、30%乙醇，水提，Ph2. 7提取，Phl2提取。雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比1 15原料粉碎，每份30g(總黃酮含量12% )提取溫度85°C提取時(shí)間Ih提取液過濾后定容到500ml評價(jià)指標(biāo)固形物得率、總黃酮含量
權(quán)利要求
1.一種雪蓮培養(yǎng)物提取液，其特征在于該雪蓮培養(yǎng)物提取液由如下方法制成在雪蓮培養(yǎng)物中加入30-95%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 10-1 40，超聲提取，溫度為30-95°C，每次提取30-180min，連續(xù)提取2_3次，所得液體采用50-70°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量-60% ；再在100-130°C下，高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫， 包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液；所述雪蓮培養(yǎng)物是按照專利號ZL200510115902. 0， CN1961650上記載的工藝制備。
2.如權(quán)利要求1所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液，其特征在于該雪蓮培養(yǎng)物提取液由如下方法制成在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取，溫度為85°C，每次提取60min，連續(xù)提取2次，兩次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量1 % -60 %，1200C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。
3.如權(quán)利要求1所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液，其特征在于該雪蓮培養(yǎng)物提取液由如下方法制成在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取，溫度為45°C，每次提取60min，連續(xù)提取2次，兩次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量1 %-60% ； 110°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。
4.如權(quán)利要求1所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液，其特征在于該雪蓮培養(yǎng)物提取液由如下方法制成在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取，溫度為45°C，每次提取60min，連續(xù)提取3次，三次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量1%-60%;110°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液，其特征在于在溫度 40-50 °C, -0. 05—0. IOMPa條件下濃縮，濃縮至固形物含量25% -35%,噴干，真空度 2500Pa，60-130°C，冷卻至室溫包裝檢驗(yàn)，按照常規(guī)工藝制成口服液、膠囊、片劑。
6.一種雪蓮培養(yǎng)物提取液的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟在雪蓮培養(yǎng)物中加入30-95%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 10-1 40，超聲提取，溫度為30-95°C，每次提取30-180min，連續(xù)提取2_3次，所得液體采用50_70°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量"60% ；再在100-130°C下，高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)， 即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。
7.如權(quán)利要求6所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取， 溫度為85°C，每次提取60min，連續(xù)提取2次，兩次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量-60%，120°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。
8.如權(quán)利要求6所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取， 溫度為45°C，每次提取60min，連續(xù)提取2次，兩次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量1 %-60% ； 110°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。
9.如權(quán)利要求6所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟在雪蓮培養(yǎng)物中加入30%乙醇溶液，雪蓮培養(yǎng)物與乙醇的體積比為1 15，超聲提取， 溫度為45°C，每次提取60min，連續(xù)提取3次，三次所得液體采用60°C減壓濃縮，濃縮至目標(biāo)成分總黃酮含量-60%; 110°C高溫瞬時(shí)滅菌，冷卻至室溫，包裝檢驗(yàn)，即得雪蓮培養(yǎng)物提取液。
10.如權(quán)利要求1-4任一所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液在制備預(yù)防和治療痛經(jīng)的藥物中的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求5所述的雪蓮培養(yǎng)物提取液在制備預(yù)防和治療痛經(jīng)的藥物中的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于所述痛經(jīng)指原發(fā)性痛經(jīng)。
13.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于所述痛經(jīng)指原發(fā)性痛經(jīng)。
全文摘要
本發(fā)明提供了雪蓮培養(yǎng)物提取物及其新用途，治療痛經(jīng)，療效好，治愈率較高，且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用。雪蓮培養(yǎng)物具有溫腎助陽，祛風(fēng)勝濕，通經(jīng)活血。用于風(fēng)寒濕痹痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，小腹冷痛，月經(jīng)不調(diào)等病的治療。本發(fā)明雪蓮培養(yǎng)物提取物采用醇提、濃縮、噴干的方法獲得純度較高的雪蓮黃酮、雪蓮多糖，通過臨床觀察發(fā)現(xiàn)，對治療原發(fā)痛經(jīng)療效確切，值得臨床參考和推廣使用。
文檔編號A61K36/285GK102366432SQ201110340779
公開日2012年3月7日 申請日期2011年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月2日
發(fā)明者劉漢石 申請人:大連普瑞康生物技術(shù)有限公司