專利名稱：干擾素λ1在制備抗腸道病毒71型藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及干擾素λ 1在制備抗腸道病毒71型藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
新型腸道病毒是指近年來新發(fā)現(xiàn)的腸道病毒68 71型，為微小RNA病毒，具有腸道病毒的理化特性。新型腸道病毒可累及全身各個(gè)系統(tǒng)。新型腸道病毒感染在世界各國(guó)均有流行和傳播，尤其是最近幾年在東南亞和我國(guó)，嬰幼兒中流行的手足口病主要是由腸道病毒 71 型(enterovirus type 71，EV71)引起。腸道病毒 71 型(enterovirus type 71， EV71)屬于微小RNA病毒科人腸道病毒A血清型。EV71病毒主要感染嬰幼兒，能引起嬰幼兒手、足、口腔等部位出現(xiàn)皰疹等。少數(shù)能夠引起嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)(包括腦心肌炎、肺水腫、 無菌性腦炎等)和呼吸系統(tǒng)疾病，甚至是死亡。由流行病學(xué)資料顯示，EV71具有季節(jié)性但無地域性限制，近年來全世界各地不斷有腸病毒流行的報(bào)告。但是目前尚無有效的抗EV71 病毒藥物。而且大多數(shù)重癥患兒病情進(jìn)展迅速，在就診時(shí)就已經(jīng)發(fā)展成為嚴(yán)重的腦損傷，若不及時(shí)治療很快會(huì)發(fā)展為致死性肺出血和肺水腫。有效抗EV71藥物的發(fā)現(xiàn)和研制就顯得更加迫切。EV71為正義單鏈RNA病毒，基因組約為7400bp。其中只有一個(gè)開放閱讀框(ORF)， 被分為三個(gè)區(qū)域(Pl-P;3)，編碼含2194個(gè)氨基酸的多聚蛋白。其中Pl區(qū)編碼四個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白 (VP4.VP2.VP3和VPl)，非結(jié)構(gòu)蛋白由P2 (2A、2B和2C)和P3 (3A、3B、3C和3D聚合酶)區(qū)編碼。在其兩側(cè)為5’和3’-非編碼區(qū)(UTRs)，在3’非編碼區(qū)的末端含有一個(gè)多聚腺苷酸尾巴(poly-Α)，可以調(diào)控病毒的復(fù)制。目前對(duì)VPl的研究較多，VPl蛋白暴露在外，通常是宿主中和抗體的目標(biāo)，使得VPl基因長(zhǎng)期處于免疫選擇壓力下。EV71基因組RNA的復(fù)制過程同其他正義RNA鏈病毒的復(fù)制過程相同經(jīng)過幾輪蛋白翻譯后，病毒RNA作為模板合成負(fù)義 RNA鏈，后者隨后又作為正義RNA鏈合成的模板。目前，基于結(jié)構(gòu)特性、所使用的受體和生物學(xué)活性，干擾素可分為三大類1型干擾素、II型干擾素和III型干擾素。其中根據(jù)I型干擾素的保守序列，又將其分為α，β， ω, κ , ε , τ , ζ , δ和ν亞型。II型干擾素僅有IFN-γ構(gòu)成。III型干擾素由IFN-λ 1、 IFN- λ 2 和 IFN-λ 3 或白介素 19(IL_29)、白介素-28A(IL_28A)和白介素-28B(IL_28B) 所構(gòu)成。基于其抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性，I型干擾素已被用于臨床治療，包括病毒感染如HCV和HBV、癌癥如黑色素瘤以及多發(fā)性硬化癥。但是I型干擾素會(huì)引起嚴(yán)重的負(fù)作用，包括流感樣癥狀、骨髓抑制、胃腸道癥狀、自身免疫性失調(diào)誘導(dǎo)或加劇、神經(jīng)毒性反應(yīng)和情緒抑郁。I型干擾素的另一問題是，某些病人會(huì)產(chǎn)生I型干擾素抗性。IFN-λ s作為III型細(xì)胞因子家族新成員，具有和I型干擾素相似的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。而且III型干擾素激活的基因似乎也與I型干擾素的相同。由于 IFN-λ s受體特異性表達(dá)模式，IFN-λ s可作為除I型干擾素外另一治療選擇，且能降低I型干擾素引起的負(fù)作用。Zymogenetics公司最近研發(fā)了 IL-四聚乙二醇形式(PEG-IL-29) 用于治療病毒感染。臨床Ia和Ib期研究結(jié)果似乎很客觀，而且沒有明顯的免疫介導(dǎo)的負(fù)作用。因?yàn)橹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)對(duì)IFN- λ s基本無反應(yīng)，所以相對(duì)IFN- α/β , IFN- λ s的神經(jīng)毒性很小?；谝陨蠈?duì)于IFN- λ s的研究取得的成果，本發(fā)明想證實(shí)IFN- λ 1是否是有效的抗EV71病毒藥物。目前還無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道IFN-λΙ與EV71的關(guān)系，但本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IFN-λ 1可以作為一種有效的抗EV71的藥物，具有很大的開發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供IFN-λ 1在制備抗EV71病毒藥物中的應(yīng)用， 從而為臨床上EV71病毒性疾病的治療提供一種安全有效毒副作用小的藥物。在小鼠感染模型中，I型干擾素IFN- α能夠保護(hù)小鼠抵抗EV71感染和抑制EV71 復(fù)制。關(guān)于三型干擾素IFN-λΙ和EV71復(fù)制間關(guān)系的研究還沒有報(bào)道。采用體外細(xì)胞模型-RD細(xì)胞，來研究IFN-λ 1抑制病毒的復(fù)制等抗病毒機(jī)制。EV71感染RD細(xì)胞引起明顯細(xì)胞致病作用(CPE)現(xiàn)象，而且明顯上調(diào)了 IFN-λ ImRNA水平。為了研究RD細(xì)胞是否會(huì)對(duì)IFN-λ 1處理做出反應(yīng)，我們檢測(cè)了 IFN-λ 1受體的表達(dá)情況，結(jié)果顯示RD細(xì)胞中 IFN- λ Rl和IL20RB mRNA表達(dá)水平要高于H印G2細(xì)胞O倍)。而且，IFN- λ 1對(duì)RD細(xì)胞幾乎沒有毒性作用，不會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，體外實(shí)驗(yàn)證明用IFN-λ 1作抗EV71病毒藥物是對(duì)細(xì)胞沒有毒性的。接著我們做了探索性的實(shí)驗(yàn)，用lOng/mL IFN-λ 1和30U/mL IFN-α分別處理 EV71感染的RD細(xì)胞，通過Real-time PCR和Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IFN- λ 1確實(shí)能降低細(xì)胞內(nèi)以及上清中EV71拷貝數(shù)，說明IFN-λ 1具有抗EV71活性。隨后我們研究了 IFN-λ 1抗EV71活性的劑量依賴性和時(shí)間效應(yīng)。發(fā)現(xiàn)IFN-λ 1 對(duì)EV71復(fù)制的抑制具有一定劑量依賴性，50ng/mL IFN- λ 1處理后的效果最好。在25ng/ mL IFN- λ 1處理后，第18小時(shí)病毒抑制率達(dá)到最大，在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)(32h)，IFN-λ 1都具有抗病毒活性。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果都說明，IFN-λ 1是一種很有潛力的抗EV71藥物，可以用于制備抗 EV71藥物。本發(fā)明也公開了抗EV71的藥物，其中含有IFN-λ 1，其制備方法按制藥工業(yè)現(xiàn)有技術(shù)制備。此外，我們建立快速檢測(cè)EV71病毒拷貝數(shù)的方法。我們建立的Real-time PCR檢測(cè)方法具有高度特異性，其靈敏度可達(dá)到10個(gè)拷貝數(shù)。自制標(biāo)準(zhǔn)品可靠、重復(fù)性高，且結(jié)果較好，節(jié)約了成本，省去了探針的設(shè)計(jì)以及探針法反應(yīng)條件的摸索。為以后EV71病毒滴度檢測(cè)提供了高效、靈敏和快捷的分子生物學(xué)檢測(cè)方法。


圖1. EV71檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品STOR Green I實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)特異性擴(kuò)增曲線。圖2. EV71檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品STOR Green I實(shí)時(shí)熒光PCR溶解曲線。三組獨(dú)立實(shí)驗(yàn)中的
線性一致。
圖3. EV71檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品STOR Green I實(shí)時(shí)熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖4. IFN-λ受體在H印G2和RD細(xì)胞中的表達(dá)。圖5. EV71感染RD細(xì)胞后誘導(dǎo)IFN-λ ImRNA表達(dá)上升。圖6. IFN- λ 1對(duì)RD細(xì)胞生長(zhǎng)的影響?？v坐標(biāo)為不同濃度IFN- λ 1處理后0D490 與正常RD細(xì)胞0D490的比值。圖7. IFN- λ 1抑制EV71復(fù)制。(A)為細(xì)胞培養(yǎng)上清中EV71拷貝數(shù)；(B)RD細(xì)胞內(nèi) VPl蛋白表達(dá)情況。圖8. IFN- λ 1對(duì)EV71復(fù)制的抑制具有劑量依賴性。㈧IFN- α (陽性對(duì)照)劑量梯度抑制EV71在RD細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制；(B)EV71感染的RD細(xì)胞培養(yǎng)物上清中病毒拷貝數(shù)變化； (C)EV71感染的RD細(xì)胞中VPl表達(dá)變化。圖9. IFN- λ 1抑制EV71復(fù)制的時(shí)間梯度。(A)EV71感染的RD細(xì)胞培養(yǎng)物在不同時(shí)間點(diǎn)的上清中病毒拷貝數(shù)變化。(B)IFN-X 1在各時(shí)間點(diǎn)對(duì)EV71復(fù)制的抑制率。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下列實(shí)施例中未注明具體實(shí)驗(yàn)條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件，如Sambrook等編的《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》中所述的實(shí)驗(yàn)條件，或按照制造廠商所建議的實(shí)驗(yàn)條件。建。
一 :EV71拷貝數(shù)快速檢測(cè)方法(Real-time PCR)的建立 1材料質(zhì)粒、病毒和細(xì)胞
pCMV-Tag2B-VPl 是攜帶EV71 VPl基因片段的真核表達(dá)質(zhì)粒，由本實(shí)驗(yàn)室宋煜構(gòu)
EV71 由湖北省襄樊市一例EV71感染死亡幼兒腦內(nèi)分離得到，本實(shí)驗(yàn)室保存。 其序列尚未傳至NCBI數(shù)據(jù)庫。
橫紋肌肉瘤RD細(xì)胞由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)提供，保存于本實(shí)驗(yàn)室c HepG2細(xì)胞由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)提供，保存于本實(shí)驗(yàn)室。 2工具酶及試劑盒
購自普洛麥格公司(Promega) 購自普洛麥格公司(Promega) 購自ABI公司
購自北京莊盟國(guó)際生物基因科技有限公司購自Invitrogen公司
M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶 RNA 抑制劑(RNasin) SYBR Green PCR Master Mix 高純度質(zhì)粒小提試劑盒 Trizol
3相關(guān)試劑及其配制卡那霉素(100mg/mL) 稱取0. Ig卡那霉素溶于ImL去離子水中，0. 22 μ m濾
器過濾，一20°C保存?zhèn)溆谩?br> LB液體培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨Ig
細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物 0. 5g
NaClIg
溶于80mL去離子水中，定容至lOOmL。121°C高壓滅菌 15min, 4°C保存?zhèn)溆谩?br> MEM細(xì)胞培養(yǎng)基粉末購自Gibco公司
MEM粉末IOg
NaHC032. 2gHEPES3g
溶于950mL超純水中，待完全溶解后調(diào)pH至7. 1-7. 3， 定容至IOOOmL,過濾后分裝，4°C保存?zhèn)溆谩?br> 胰蛋白酶胰蛋白酶2.5g
EDTA0.2g
PBS ( pH7.4)IOOmL
PBS需現(xiàn)配現(xiàn)用，加超純水至900mL，調(diào)pH至7. 4后， 4°C攪拌過夜使其徹底溶解。第二天定容至IOOOmL,攪勻后過濾分裝，4°C保存?zhèn)溆谩?br> 1 X PBS (細(xì)胞用) NaCl8g
KCl0. 2g
Na2HPO43.63g
KH2PO40. 24g
溶于850mL去離子水中，待溶解后調(diào)pH值7. 4，加水定容至1000mL。121°C高壓滅菌15min，4°C保存?zhèn)溆谩?br> 胎牛血清購自GIBCO公司
青霉素、鏈霉素武漢大學(xué)校醫(yī)院提供4實(shí)驗(yàn)儀器高速離心機(jī)(Thermo Scientific Heraeus Pico 17)臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(Heal Force Neofuge 13R)紫外可見分光光度計(jì)(Shimadzu，BioSpec-nano)臺(tái)式恒溫振蕩器(THZ-D)pH 計(jì)PCR擴(kuò)增儀(東勝)冷凍、冷藏冰箱(Haier)超低溫冰箱(SANYOMDF-U4086S)全自動(dòng)滅菌鍋(SANYO)
Real-time PCRft (Roche, LightCycle 480II)RD細(xì)胞復(fù)蘇1)準(zhǔn)備600mL 37_42°C去離子水，用鑷子將細(xì)胞凍存管從液氮中取出，放入其中， 待其融化。2) 1500rpm離心5min，取出放進(jìn)細(xì)胞操作臺(tái)。3)用75% (液體體積比)酒精將凍存管擦拭一遍，尤其是蓋口處。4)吸去上層液體，加入ImL含10% (體積比)Gibco胎牛血清和2%青霉素-鏈霉素的MEM培養(yǎng)基重懸，轉(zhuǎn)移到25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)基至5mL。5) 37°C ,5% (氣體體積比)(X)2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。RD細(xì)胞凍存1)吸去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用ImL胰蛋白酶或細(xì)胞用PBS清洗一遍，加入0. 5-lmL 胰蛋白酶，37°C，5% (氣體體積比)(X)2條件消化2-5min。2)加入2-3mL培養(yǎng)基終止消化反應(yīng)，轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，1500rpm離心5min，棄上清。3)將胎牛血清與二甲亞砜(DMSO)以9 1的體積比混合，加入細(xì)胞沉淀中，吹勻，
轉(zhuǎn)移至凍存管。4)逐步降溫冰箱放置半個(gè)小時(shí)，-20°C冰箱放置2小時(shí)，-70°C冰箱放置過夜)，隨后轉(zhuǎn)移至液氮內(nèi)。病毒擴(kuò)增1)使用含10% Gibco胎牛血清和2%青霉素-鏈霉素的MEM培養(yǎng)基在75cm2 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)RD細(xì)胞，37°C，5% (氣體體積比)CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層細(xì)胞(約 6 X IO6個(gè)細(xì)胞)，鋪滿底面積90 %。2)將50 μ L EV71病毒保存液加入4mL無血清MEN培養(yǎng)基中，混勻。吸去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入病毒稀釋液，輕搖鋪勻。37°C，5% (氣體體積比)C02培養(yǎng)箱中吸附lhr。每隔15-20min輕搖一下細(xì)胞培養(yǎng)瓶，使病毒均勻吸附。3)吸附后，吸去上清，用IXPBS洗兩遍后，加入含2% (液體體積比)Gibco胎牛血清和2% (單位體積比)青霉素-鏈霉素的MEM培養(yǎng)基，37°C，5% (氣體體積比)(X)2培
養(yǎng)才苜培養(yǎng)。4)每天觀察細(xì)胞致病作用現(xiàn)象，待90%細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞致病作用效應(yīng)時(shí)，收集上清，4000rpm 離心 5min。5)使用0. 22 μ m濾器過濾病毒上清，每個(gè)離心管500 μ L分裝，_70°C冰箱保存，避免反復(fù)凍融。EV71 RNA 提取1)取病毒上清200 μ L于1. 5mL離心管中，加入ImL Trizol，劇烈振蕩混勻15s，室溫放置15-30min。2)每管加入五分之一體積的三氯甲烷Ο40μ L)，劇烈搖勻15s，靜置2_;3min。在 4°C條件下，12000rpm離心15min (離心后分為三層)。3)將最上層液體轉(zhuǎn)移到新的離心管中，避免吸取到蛋白部分。加入等體積的異丙醇，混勻后室溫靜置lOmin。4°C條件下，12000rpm離心15min，倒去上清。
4)在4°C條件下，12000rpm離心30s，吸棄上清。5)每管加入750μ L無水乙醇和250μ L 0. 1 % DEPC水，搖勻。4°C條件下， 12000rpm離心5min，倒去上清。6)4°C條件下，12000rpm離心2min，吸棄上清。7)無RNA酶污染的空氣中干燥5min。8)每管加入16. 5 μ L 0. 1 % (體積比)DEPC水溶解沉淀，待用。注RNA提取過程中的槍頭、離心管以及試劑盡量用DEPC水處理或配制。操作時(shí)應(yīng)戴手套、口罩。RT-PCR 反應(yīng)1)取上述處理后的RNA樣品16. 5 μ L于PCR管中，每管依次加入RNA酶抑制劑 0. 5 μ L，引物 Oligo dT lyL，混勻。2)在PCR擴(kuò)增儀上，65°C處理15min，取出立即置于冰上。3)每管再依次加入5 XM-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液5 μ L，IOmM dNTP 1 μ L，M-MLV逆轉(zhuǎn)
錄酶1 μ L。充分混勻。反應(yīng)總體系如下
RNA1. OPg
RNase 抑制劑0. 5μ
Oligo dT primerIM-L
5XRT-PCR buffer5μ
10 mmol/L dNTP mix μ
Reverse TranscriptaseIM-L
補(bǔ)足DEPC水至25μ 反應(yīng)條件42°C，lh,72°C，IOmin,終止反應(yīng)。標(biāo)準(zhǔn)品制備A :pCMV-Tag2B-VPl 質(zhì)粒的提取1)柱平衡步驟向吸附柱內(nèi)(吸附柱放在收集管中)加入500 μ L平衡液， 12000rpm離心lmin，倒掉收集管內(nèi)的廢液，將吸附柱放回收集管。2)取l-5mL過夜培養(yǎng)的菌液加到離心管中，12000rpm離心lmin，盡量吸去上清。3)向有菌體沉淀的離心管中加入200 μ L溶液1(先檢查是否加入了 RNase Α)，使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮沉淀。4)向離心管中加入200 μ L溶液2，溫和上下翻轉(zhuǎn)6_8次讓菌體充分裂解。5)向離心管中加入250 μ L溶液4，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次，充分混勻，此時(shí)會(huì)
9出現(xiàn)白色絮狀沉淀物。12000rpm離心lOmin。6)小心地吸取上清溶液至新離心管中，向其中加入200 μ L異丙醇顛倒混勻，將混合液轉(zhuǎn)移至吸附柱中，12000rpm離心30-60s，倒掉收集管里的廢液，吸附柱放回收集管中。7)往吸附柱中加入500 μ L去內(nèi)毒素緩沖液，12000rpm離心30_60s，倒掉收集管里的廢液，吸附柱放回收集管中。8)往吸附柱中加入600yL漂洗液W2(先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心30-60s，倒掉收集管里的廢液，吸附柱放回收集管中。重復(fù)此步驟1次。9)吸附柱放入收集管中，12000rpm離心2min，除去吸附柱里殘余的漂洗液，10)將吸附柱置于干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100 μ L的滅菌去離子水，室溫放置2min，12000rpm離心2min，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。B 質(zhì)粒濃度與拷貝數(shù)換算1)在分光光度計(jì)上，取2 μ L質(zhì)粒溶液測(cè)定其濃度，重復(fù)幾次，要求測(cè)得濃度值穩(wěn)定，初步估計(jì)質(zhì)粒純度以及是否有蛋白質(zhì)污染的狀況。2)配制瓊脂糖凝膠，檢測(cè)質(zhì)粒純度及條帶亮度。3)根據(jù)以下公式將濃度換算為質(zhì)?？截悢?shù)amount :0D 值(ng/ μ L)；length 質(zhì)粒DNA堿基對(duì)數(shù)目(bp)。C:標(biāo)準(zhǔn)品制備將上述已知拷貝數(shù)的質(zhì)粒用滅菌去離子水進(jìn)行稀釋，如稀釋到IXlOltlc0Pies/ μ L，然后再進(jìn)行倍比稀釋，濃度依次為 IO9, IO8, IO7, IO6, IO6, IO5, IO4, IO3, IO2, IO1Copies/ UL0以此作為測(cè)定EV71拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品。Real-time PCR1)反應(yīng)體系
SYBR Green PCR Master MixΙΟμ
VPl TestPrimer (Forward + μ Reverse)
TemplateIM-L
H2O8μ
總體積20μ 2) VPl檢測(cè)片段及引物
VPl檢測(cè)片段序列CCCTTTAGTGGTTAGGATTTACATGAGGATGAAGCACGTCAGGGCGTGGATACCTCGCCCAATGCGCAACCAAAACTACCTATTCAAAGCCAACCCAAATTATGCTGGCAACTCCATTAAGCCAACTGGTG (SEQ IDNO 1)引物=Forward :5，-CCCTTTAGTGGTTAGGATTT-3，(SEQ ID NO 2)Reverse :5，-CACCAGTTGGTTTAATGGAG-3，(SEQ ID NO 3)幻反應(yīng)程序
權(quán)利要求
1.干擾素λ1在制備抗腸道病毒71型藥物中的應(yīng)用。
2.抗腸道病毒71型的藥物，其中含有干擾素λ1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種干擾素λ1在制備抗腸道病毒71型藥物中的應(yīng)用，證實(shí)IFN-λ1在體外對(duì)EV71感染的RD細(xì)胞具有良好的抑制病毒復(fù)制作用。同時(shí)，IFN-λ1不會(huì)抑制RD細(xì)胞生長(zhǎng)，證實(shí)IFN-λ1對(duì)細(xì)胞是沒有毒性的。IFN-λ1抑制EV71復(fù)制的作用效果與陽性對(duì)照Ⅰ型干擾素IFN-α比較近似甚至還要好些。IFN-λs(包括IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3)具有和Ⅰ型干擾素相似的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等生物活性，并且能降低Ⅰ型干擾素引起的負(fù)作用，揭示IFN-λ1具有開發(fā)成抗EV71藥物的前景。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102512666SQ20111042170
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者吳建國(guó), 徐秀鵬, 朱應(yīng), 蔡艷艷 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)