專利名稱：使用ice抑制劑治療感染疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用ICE抑制劑治療感染和其它疾病和病癥的方法及 組合物。
背景技術(shù)：
綠膿假單胞菌(P. aeruginosa)角膜炎是一種威脅視力的角膜疾 病，占所報(bào)道的與接觸鏡片(隱形眼鏡)有關(guān)的微生物感染病例的約 3/4(Liesegang， 1997)。如不積極治療，疾病會(huì)迅速發(fā)展，引起角膜 潰瘍且可潛在導(dǎo)致由于角膜瘢痕所致的永久性視力損失(Laibson， 1972)。假單胞菌角膜炎過程中的組織損害可由于多種微生物(Engel 等人，1998; Kernacki等人，1995)和宿主-相關(guān)因素(Steuhl等人， 1987; Steuhl等人，1989)而發(fā)生。然而，宿主炎性反應(yīng)已在實(shí)驗(yàn)方 面表現(xiàn)出對(duì)綠膿假單胞菌所致眼睛感染的結(jié)果起重要作用(Hazlett， 2002; Huang等人，2002; Kernacki等人，2000; McClellan等人， 2003; Rudner等人，2000; Thakur等人，2002; Xue等人，2003a; Xue等人,2003b)。
細(xì)菌性角膜炎的治療是要除去感染性生物并抑制宿主的破壞性炎 癥反應(yīng)。通常，將在強(qiáng)化眼用溶液中使用氨基糖苷類和第三代頭孢菌 素的雙重療法(Baum和Barza， 2000; Dart和Seal， 1988; Guzek等 人，1994)或使用氟壹諾酮的單一療法(Leibowitz， 1991; Parks等人， 1993)用于治療假單胞菌角膜炎。近來(lái)，抗生素(特別是氟喹諾酮)抗性 綠膿假單胞菌菌林所致的頑固性細(xì)菌性角膜炎發(fā)生率的增加 (Chaudhry等人，1999; Garg等人，1999; Kunimoto等人，1999; Landman 等人，2002)受到重大關(guān)注且還可限制未來(lái)的治療選擇。
皮質(zhì)類固醇是標(biāo)準(zhǔn)的抗炎藥物療法，用于治療抗細(xì)菌療法殘余的炎癥。目前，在細(xì)菌性角膜感染之后，僅把皮質(zhì)類固醇用于眼用溶液 中來(lái)抑制進(jìn)行性炎性反應(yīng)。然而，病原生物的鑒別和對(duì)抗細(xì)菌療法的 反應(yīng)(或抗細(xì)菌敏感性)是關(guān)鍵的限制性因素，在開始皮質(zhì)類固醇治療 之前必須加以考慮。還沒有在細(xì)菌性角膜炎中確定地證實(shí)皮質(zhì)類固醇
對(duì)降低宿主介導(dǎo)的組織損害方面的(有益或有害)作用(Hobden等人， 1993; Hobden等人,1992; Phillips等人,1983; Waterbury等人， 1987; Wilhelmus， 2002)。因此，皮質(zhì)類固醇引起爭(zhēng)議的作用和已經(jīng) 出現(xiàn)的綠膿假單胞菌對(duì)抗生素的抗性使有理由研制新的輔助治療形 式。
細(xì)胞因子(特別是IL-1 P和TNF-a)是最佳的治療乾，這是因?yàn)樗?們可引發(fā)并繼續(xù)多種疾病。各種策略如可溶性受體、抗體、受體拮抗 劑或抑制劑用于阻斷細(xì)胞因子。這些特異性的、基于抗-細(xì)胞因子的療 法已經(jīng)顯示出可減輕許多慢性炎性或自身免疫疾病中的炎癥且已由 FM批準(zhǔn)人類使用(Bresnihan等人，1998; Mohler等人，1993; Nuki 等人，2002; vanDeventer， 1999)。 IL-1 P在假單胞菌角膜炎發(fā)病機(jī) 理中的重要性已在先前的研究中被證實(shí)(Rudner等人，2000; Thakur 等人，2002; Xue等人，2003b)。 IL-1 P表達(dá)水平的持續(xù)升高與角膜 疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，而水平降低(抗體中和或IL-1 P受體抑制之后) 導(dǎo)致疾病嚴(yán)重程度降低。
盡管廣譜抗細(xì)菌劑有效，但是細(xì)菌性角膜炎仍然是限制視力的瘢 痕形成和視覺損傷的主要原因，特別是在接觸鏡片(隱形眼鏡)的使 用者中(Poggio等人，1989; Schein等人，1989; Schein和Poggio， 1990)。僅在美國(guó)就有超過3千萬(wàn)人使用接觸鏡片(Barr等人，2000)， 每天佩戴接觸鏡片的使用者中每2， 500人中就有l(wèi)人，且每年長(zhǎng)期佩 戴接觸鏡片的使用者中每500人中就有1人發(fā)展成細(xì)菌性角膜炎 (Schein和Poggio, 1990)。傳統(tǒng)上，在獲得培養(yǎng)物從而鑒別出病原生 物之后，在角膜炎病例中迅速建立廣語(yǔ)抗細(xì)菌(常常是環(huán)丙沙星)療法。 雖然抗-微生物治療常常能夠使角膜無(wú)菌，但它不能確保澄明的視軸， 這是由于殘留的宿主衍生的炎癥。這可能需要使用皮質(zhì)類固醇來(lái)恢復(fù)角膜澄明。在一些情況下，皮質(zhì)類固醇的使用可具有潛在不利的作用，
包括延遲角膜傷口愈合(Leibowitz等人，1996; Singh, 1985)。 因此，需要其它治療感染，特別是眼睛感染中炎癥的方法。 ICE，也稱作天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1,是一種將IL-1 P和IL-18的前體裂解成活性細(xì)胞因子的胞內(nèi)蛋白酶(Akita等人， 1997; Kuida等人，1995)。雖然其它蛋白酶(包括細(xì)菌和宿主蛋白酶) 可處理前-IL-1 P ,但I(xiàn)CE-缺陷(ICE勺小鼠已經(jīng)顯示不能在應(yīng)答內(nèi)毒 素時(shí)釋放成熟的IL-1 P (Fantuzzi等人，1997; Li等人，1995)。
然而，ICE抑制劑還沒有顯示出可有效地治療特定疾病，如細(xì)菌 性角膜炎。因此，需要小分子ICE抑制劑來(lái)治療感染，如細(xì)菌性角膜 炎。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及使用ICE抑制劑治療感染和相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明 還涉及通過給予ICE抑制劑治療眼睛的損傷、變態(tài)反應(yīng)、化學(xué)刺激、 或燒傷的方法。
申請(qǐng)人已經(jīng)在由綠膿假單胞菌或環(huán)丙沙星抗性綠膿假單胞菌菌林 的臨床分離物誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性角膜感染中證實(shí)了 ICE抑制劑的功效。采 用臨床得分、病理組織學(xué)、MP0活性、細(xì)菌平板計(jì)數(shù)和ELISA分析來(lái) 評(píng)價(jià)在綠膿假單胞菌菌林19660感染角膜后的C57BL/6(B6)小鼠中， 使用ICE抑制劑與安慰劑+/-環(huán)丙沙星相比治療的功效(？. i.第18小 時(shí))。在10￡抑制劑與安慰劑+/-環(huán)丙沙星相比治療的小鼠中，感染后 (p. i.)第3、 5和7天的臨床得分明顯降低。炎性反應(yīng)的降低還可通過 在用ICE抑制劑與安慰劑+/-環(huán)丙沙星治療相比的小鼠角膜中，p. i. 笫7天時(shí)，MP0活性和IL-1 p及MIP-2蛋白水平的降低加以證實(shí)。
在用ICE抑制劑與沒有環(huán)丙沙星的安慰劑治療相比的小鼠中，在 p. i.第7天時(shí)的角膜中，細(xì)菌負(fù)荷量同樣降低。ICE抑制劑還可降低 由臨床分離物-1025或環(huán)丙沙星抗性綠膿假單胞菌菌林誘導(dǎo)的角膜感 染后的臨床得分。ICE抑制劑單獨(dú)或與環(huán)丙沙星聯(lián)合給藥可顯著降低角膜疾病的嚴(yán)重程度并顯示出細(xì)菌感染后的宿主炎性反應(yīng)可由耙向
ICE和IL-1卩的治療策略成功控制。
本發(fā)明包括ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-l的用途，無(wú)論 對(duì)ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1是選擇性的，還是廣泛作用 于其它天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(例如，2-14)。該治療，通過 抑制ICE和抑制IL-lp產(chǎn)生，可減輕感染的癥狀和/或減少感染。在 優(yōu)選實(shí)施方案中，該抑制劑是選擇性ICE抑制劑。
本發(fā)明還涉及鑒別用于治療這些疾病的藥劑的方法。
發(fā)明詳述
本發(fā)明提供了通過給予ICE抑制劑治療感染，特別是眼睛感染的 方法。
申請(qǐng)人已證實(shí)單獨(dú)或與抗細(xì)菌劑聯(lián)合使用ICE抑制劑可非常有效 地治療動(dòng)物模型的角膜炎。
具體而言，申請(qǐng)人已證實(shí)ICE抑制劑能夠通過調(diào)節(jié)宿主炎性反應(yīng)， 以及抑制劑限制細(xì)菌生長(zhǎng)的能力而控制角膜降解，這可能是由于有效 殺死了炎性降低環(huán)境中的細(xì)菌。數(shù)據(jù)提供的證據(jù)表明，內(nèi)源性IL-lp 活性的降低可通過組織-損害宿主衍生的炎性反應(yīng)的負(fù)調(diào)節(jié)而提高宿 主抗綠膿假單胞菌。
因此，本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施方案提供了一種調(diào)節(jié)宿主炎性反應(yīng)的 治療策略。
申請(qǐng)人意外地證實(shí)了 ICE抑制劑不僅可減輕模型的炎癥，還可降 低細(xì)菌生長(zhǎng)。不受理論的束縛，申請(qǐng)人相信ICE抑制劑可減少細(xì)菌生 長(zhǎng)，這在一定程度上是由于細(xì)菌不能在損害降低的角膜中散播。
本發(fā)明的另一優(yōu)點(diǎn)在于ICE抑制劑可減輕癥狀如與各種感染有關(guān) 的疼痛、騷癢和不適。有利的是，這些益處可通過使用單一化合物， 而不是使用多種化合物(例如，抗細(xì)菌和抗炎劑)來(lái)實(shí)現(xiàn)。因此，本發(fā)明提供了預(yù)防、抑制、控制、終止、處理、或降低微生物感染的毒力 和/或炎癥和/或疼痛。在優(yōu)選實(shí)施方案中，感染、炎癥或疼痛位于眼 睛中。
ICE抑制劑治療的小鼠表現(xiàn)出與安慰劑治療組相比，IL-1卩和 MIP-2 (PMN的化學(xué)吸引劑)水平顯著降低、PMN浸潤(rùn)和細(xì)菌負(fù)荷量降低。 ICE抑制劑治療組的病理組織學(xué)檢查表明完整角膜上皮的浸潤(rùn)細(xì)胞顯 著減少且支持了臨床得分的觀察結(jié)果。向局部用抗細(xì)菌劑(環(huán)丙沙星) 中加入ICE抑制劑可進(jìn)一步改善角膜疾病的結(jié)果。
重要的是，申請(qǐng)人已經(jīng)證實(shí)ICE抑制不僅對(duì)標(biāo)準(zhǔn)ATCC實(shí)驗(yàn)菌林 (19660)有效，而且對(duì)臨床分離物(KEI-1025)也有效。此外，發(fā)現(xiàn)ICE 抑制可有效抗來(lái)源于親代19660抹的環(huán)丙沙星抗性抹。在被環(huán)丙沙星 抗性綠膿假單胞菌菌林感染后，ICE抑制劑治療的角膜的臨床得分顯 著降低。
各種研究(Chaudhry等人，1999; Garg等人，1999; Kowalski等 人，2001; Kunimoto等人，1999)已經(jīng)顯示出體外抗細(xì)菌劑抗性和角 膜炎患者應(yīng)答抗細(xì)菌劑臨床失敗之間的關(guān)聯(lián)。Garg等人(1999)報(bào)道了 在141例經(jīng)證實(shí)的假單胞菌角膜炎培養(yǎng)物中，有22例是由對(duì)環(huán)丙沙星 產(chǎn)生抗性的分離物所引起的(平均MIC 43mg/ml)。在最初用環(huán)丙沙星 治療的(22例中的)19例中，3天強(qiáng)化治療后，15例(76. 7W惡化或表 現(xiàn)出沒有臨床改善且需要改進(jìn)抗細(xì)菌治療、角膜移植或去臟術(shù)。假單 胞菌抗生素抗性發(fā)生率的增加和導(dǎo)致不利結(jié)果的對(duì)抗細(xì)菌治療應(yīng)答的 失敗為研究新的治療策略提供了有力的原因。ICE抑制劑可以是抗生 素抗性假單胞菌角膜炎病例的新的治療策略。因此，本發(fā)明提供了一 種控制細(xì)菌生長(zhǎng)的方法，特別是在由抗生素抗性菌林引起的微生物角 膜炎病例中。
由任何微生物或病原性物質(zhì)，如US 2004/0229802 (見，特別是， 段落0028-0039)中所公開那些導(dǎo)致的感染可根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療。正 如所理解的那樣，這類病原性物質(zhì)可引起刺激、炎癥、發(fā)紅、疼痛、 組織損害、和其它副作用和癥狀。因此，本發(fā)明的方法可用于改善、治療、或預(yù)防受治療者的感染，或其癥狀(包括細(xì)菌感染、病毒感染、
寄生蟲感染、或真菌感染)，包括給予受治療者抑制ICE的化合物。在 優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法用于改善、治療或預(yù)防眼睛感染。在優(yōu)選實(shí) 施方案中，該方法用于改善、治療、或預(yù)防角膜炎(包括浸潤(rùn)性角膜炎) 或角膜潰瘍?？蓮谋景l(fā)明的治療受益的其它眼睛疾病包括，但不限于， US 2004/0229802 (見，特別是，段落0025)中描述的那些。還包括與 接觸鏡片使用有關(guān)的感染(例如，與接觸鏡片有關(guān)的紅眼(CLARE)、接 觸鏡片誘導(dǎo)的外周潰瘍(CLPU))。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種減少受治療者細(xì)菌生長(zhǎng)的 方法，包括給予受治療者抑制ICE的化合物。在另一實(shí)施方案中，本 發(fā)明提供了一種共同給予ICE抑制劑和抗微生物劑，由此減少受治療 者細(xì)菌生長(zhǎng)的方法。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種改善、治療或預(yù)防受治療 者眼睛的損傷、變態(tài)反應(yīng)、化學(xué)刺激、或燒傷的方法，包括給予受治 療者抑制ICE的化合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了促進(jìn)眼睛 損傷愈合并提高視覺清晰度的方法。在優(yōu)選實(shí)施方案中，眼睛損傷是 角膜損傷，包括但不限于，擦傷、裂傷、抓傷、手術(shù)創(chuàng)傷、意外或偶 然創(chuàng)傷、和挫傷。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種改善、治療 或預(yù)防千眼癥(干性角膜結(jié)膜炎)、斯耶格倫氏綜合癥、眼睛衰老的方 法，包括給予受治療者抑制ICE的化合物。另一方面，本發(fā)明可用于 改善、治療或預(yù)防感染或與眼睛手術(shù)有關(guān)的感染或炎癥或疼痛的副作 用。
本發(fā)明特別用于治療眼睛表層組織的炎癥或變紅。與炎癥有關(guān)的 眼睛疾病包括，例如，結(jié)膜炎(細(xì)菌性結(jié)膜炎、真菌性結(jié)膜炎、或病毒 性結(jié)膜炎)、眼色素層炎、角膜后沉著物、斑性水腫、眼內(nèi)晶狀體移植 后的炎性反應(yīng)、和由眼睛手術(shù)或眼睛損傷引起的創(chuàng)傷。在另一實(shí)施方 案中，本發(fā)明提供改善、治療或預(yù)防這些疾病的方法。
因此，本發(fā)明提供了改善、治療或預(yù)防眼睛的刺激、炎癥、發(fā)紅、 疼痛、組織損害、和其它不利癥狀的方法。該化合物可用于治療受治療者如動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，且更優(yōu)選 人的疾病和病癥，包括感染疾病狀態(tài)。本發(fā)明的方法可用于獸醫(yī)環(huán)境 包括動(dòng)物園、實(shí)驗(yàn)室、和農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物。因此，受治療者包括動(dòng)物，如靈 長(zhǎng)類動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物、和鳥(包括但不限于，豚鼠、倉(cāng)鼠、沙土鼠、大 鼠、小鼠、兔子、狗、貓、馬、豬、綿羊、牛、山羊、恒河猴、猴、
絹毛猴(tamarinds)、猿、狒狒、大猩猩、黑猩猩、猩猩、長(zhǎng)臂猿、 雞、火雞、鴨、鵝、鹿和鴕鳥)。
抑制ICE的任何化合物均可用于本發(fā)明的方法和組合物中。這類 化合物包括選擇性抑制ICE的那些化合物和抑制天冬氨酸特異性半胱 氨酸蛋白酶或ICE/CED-3家族中一種或多種酶的那些化合物。這種ICE 抑制劑包括但不限于，W0 04/058718、 WO 04/002961、 WO 03/088917、 WO 03/068242、WO 03/042169、WO 98/16505、WO 93/09135、WO 00/55114、 WO 00/55127、 WO 00/61542、 WO 01/05772、 WO 01/10383、 WO 01/16093、 WO 01/42216、 WO 01/72707、 WO 01/90070、 WO 01/94351、 WO 02/094263、 WO 02/42278、 WO 03/106460、 WO 03/103677、 WO 03/104231、 US 6，184，210、 US 6，184， 244 、 US 6, 187, 771 、 US 6，197， 750 、 US 6， 242， 422、2001年4月在美國(guó)加利福尼亞San Diego召開的American Chemical Society (ACS)會(huì)議、WO 02/22611、 US 2002/0058630、 WO 02/085899、 WO 95/35308、 US 5， 716， 929、 WO 97/22619、 US 6， 204， 261， WO 99/47545和W001/90063 (這些，如本文提出的，全文引入本文作 為參考)中描述的化合物。用于本發(fā)明的優(yōu)選化合物在WO 04/058718、 WO 04/002961 、 WO 95/35308 、 US 5, 716, 929 、 WO 97/22619 、 US 6, 204, 261、 WO 99/47545和WO 01/90063中描述。
還包括結(jié)構(gòu)的所有異構(gòu)體(例如，對(duì)映異構(gòu)、非對(duì)映異構(gòu)、和幾何 異構(gòu)(或構(gòu)象異構(gòu)))形式；例如，各不對(duì)稱中心的R和S構(gòu)型、(Z)和 (B)雙鍵異構(gòu)體、及(Z)和(E)構(gòu)象異構(gòu)體。因此，本發(fā)明化合物的單一 立體化學(xué)異構(gòu)體以及對(duì)映異構(gòu)、非對(duì)映異構(gòu)、和幾何(或構(gòu)象)混合物
落在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。除非另有說明，本發(fā)明化合物的所有互變異 構(gòu)形式均落在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。此外，除非另有說明，本文所述結(jié)構(gòu)還包括區(qū)別僅在于存在一個(gè)或多個(gè)同位素富集原子的化合物。例如，
具有所列結(jié)構(gòu)，區(qū)別在于氫被氘或氚取代，或碳被"c-或"c-碳取代的 化合物落在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明所用化合物還可通過附加適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)而被修飾，從而提 高選擇性生物學(xué)性質(zhì)。這種修飾是本領(lǐng)域熟知的且包括增加向規(guī)定生 物學(xué)系統(tǒng)(例如，血液、淋巴系統(tǒng)、或中樞神經(jīng)系統(tǒng))中的生物學(xué)滲透、 增加口服可利用率、增加溶解度以注射給藥、改變代謝和/或改變分泌 速率的那些。
本發(fā)明更優(yōu)選的化合物包括
及其各自的立體異構(gòu)體，
及其各自的立體異構(gòu)體，包括及其各自的立體異構(gòu)體，包括:
本發(fā)明的化合物可抑制ICE和/或降低IL-1，特別是IL-1P和 IL-18水平?？蓽y(cè)定這些化合物例如抑制IL-1 P和/或IL-18產(chǎn)生，調(diào) 節(jié)IL-1 P和/或IL-18水平，和/或影響IL-1 p和/或IL-18活性的能 力。各種活性的測(cè)定法是本領(lǐng)域熟知的，包括下面描述的實(shí)施例中的 那些。因此，這些化合物能夠靶向并抑制本文提出的ICE和/或IL-1 P介導(dǎo)的疾病中的事件。
本發(fā)明還提供根據(jù)本文所述和本領(lǐng)域已知的方法，測(cè)定化合物 (ICE抑制劑)抗-感染活性的方法。
因此本發(fā)明的藥物組合物和方法可用于控制體外或體內(nèi)IL-1 P 水平和/或活性。因此本發(fā)明的組合物和方法可用于控制體內(nèi)IL-lp水平并治療或降低特定情況，包括本文提出的疾病、病癥或效應(yīng)的發(fā) 展、嚴(yán)重程度或效應(yīng)。
根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明提供一種組合物，它包含上述本發(fā)明
的化合物(ICE抑制劑)或其藥學(xué)可接受的衍生物(例如，鹽)以及藥學(xué) 可接受的載體。
根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步包含其它治療劑。 這種藥劑包括，但不限于，溶解血栓的藥劑如組織纖溶酶原激活劑和 鏈激酶、抗-炎劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、脂氧合酶抑制劑、細(xì)胞因 子拮抗劑、免疫抑制劑、抗-癌劑、抗-病毒劑、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、 免疫調(diào)節(jié)劑(例如，溴匹利明、抗-人oc干擾素抗體、IL-2、 GM-CSF、 曱硫氨酸腦啡肽、干擾素oc、 二乙基二硫代氨基曱酸鹽、腫瘤壞死因 子、納曲酮和rEPO)、前列腺素、或抗-血管過度增殖化合物。其它藥 劑包括，但不限于，下列一種或多種另外的ICE抑制劑、NSAID(見， 例如，W0 01/08689)、抗微生物劑、抗細(xì)菌劑、抗-炎劑、和其它藥劑， 條件是它們不會(huì)與本發(fā)明的目的相矛盾(包括，但不限于，US 2004/0191332，特別是段落0042-0051和WO 01/08689中描述的藥劑)。
在僅含本發(fā)明化合物作為活性組分的藥物組合物中，給予這些組 合物的方法可另外包括給予受治療者另外的藥物，如本文所述那些的 步驟。當(dāng)使用第二種藥劑時(shí)，可以以分開的劑量形式或作為混合了本 發(fā)明化合物或組合物的單一劑量形式的 一部分該給予第二種藥劑。
術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受的載體"是指可連同本發(fā)明化合物給予患者， 且不會(huì)破壞其藥理學(xué)活性的無(wú)毒載體。
可用于這些組合物中的藥學(xué)可接受的載體包括，但不限于，離子 交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、緩 沖物質(zhì)如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸郜、飽和植物脂肪酸的部 分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)如硫酸魚精蛋白、磷酸氬二鈉、磷 酸氫二鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態(tài)二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷 酮、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、 蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。存在于上述組合物中的化合物的用量應(yīng)足以引起疾病嚴(yán)重程度、
或ICE抑制、IL-1和/或IL-18水平、或IL-1和/或IL-18活性的可 檢測(cè)的降低。
如果將本發(fā)明化合物藥學(xué)可接受的鹽用于這些組合物中，則那些 鹽優(yōu)選來(lái)源于無(wú)機(jī)或有機(jī)酸和堿。酸式鹽包括下列乙酸鹽、己二酸 鹽、藻酸鹽、天門冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸 鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸 鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷 酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫》典酸鹽、 2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸 鹽、草酸鹽、樸酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基-丙酸鹽、苦味 酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺 酸鹽和十一烷酸鹽。堿式鹽包括銨鹽、堿金屬鹽，如鈉和鉀鹽、堿土 金屬鹽，如鈣和鎂鹽、有機(jī)堿鹽，如二環(huán)己胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺和 與氨基酸的鹽，如精氨酸、賴氨酸的鹽等。
也可以使用下列試劑將堿性含氮基團(tuán)季銨化，如低級(jí)烷基囟，如 曱基、乙基、丙基、和丁基氯、渙、和碘；二烷基硫酸鹽，如二曱基、 二乙基、二丁基和二戊基硫酸鹽；長(zhǎng)鏈囟化物如癸基、十二烷基、十 四烷基和硬脂酰氯、溴和碘;芳烷基卣，如節(jié)基和苯乙基溴和其它。 由此獲得水或油-溶性或分散性產(chǎn)物。
根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案，將本發(fā)明的組合物配制成藥用給予受治療者 的形式，例如，哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人。
本發(fā)明這類藥物組合物可口服、非腸道、通過吸入噴霧劑、局部、 直腸、鼻、口腔、陰道或經(jīng)由植入的貯器給藥。本文所用術(shù)語(yǔ)"非腸 道"包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝 內(nèi)、損害內(nèi)和顱內(nèi)注射和輸注技術(shù)。優(yōu)選，將組合物配制成用于眼睛 給藥的形式。
本發(fā)明組合物的無(wú)菌可注射形式可以是含水或含油混懸液。這些 混懸液可根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)，使用適宜的分散或濕潤(rùn)劑和懸浮劑配制。該無(wú)菌可注射制劑還可以是溶于無(wú)毒的非腸道可接受的稀釋劑
或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液或混懸液，例如，溶于l,3-丁二醇中的溶 液。所用可接受的載體和溶劑是水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。 此外，無(wú)菌的不揮發(fā)油也常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。就該目的而言，可 使用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的單-或二-甘油酯。脂肪酸，如 油酸及其甘油酯衍生物也可用于可注射制劑的制備，因?yàn)樗鼈兪翘烊?的藥學(xué)可接受的油，如橄欖油和蓖麻油，特別是它們的聚氧化乙基化 形式。這些油溶液或混懸液還可含有長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或分散劑，如羧甲 基纖維素或類似的分散劑，它們通常用于配制藥學(xué)可接受的劑量形式， 包括乳液和混懸液。其它常用的表面活性劑，如吐溫、司盤和其它乳 化劑或生物可利用率增強(qiáng)劑，它們通常用于制造藥學(xué)可接受的固體、 液體、或其它劑量形式，也可用于配制的目的。
如果使用固體載體，可將該制品壓片、以粉末或顆粒形式放在硬 明膠膠嚢中、或是錠劑或糖錠的形式。固體載體的用量將在約 25mg-400mg變化。當(dāng)使用液體載體時(shí)，該制品可以是糖漿劑、乳液、 軟明膠膠嚢、無(wú)菌可注射液體如安瓿或非水性液體混懸液的形式。當(dāng) 組合物為膠嚢形式時(shí)，任何常規(guī)的膠嚢化都是適宜的，例如，在硬明 膠膠囊殼中使用上述載體。
糖漿制劑可包括化合物溶于液體載體(例如含調(diào)味劑或著色劑的 乙醇、甘油或水)中的混懸液或溶液。氣溶膠制品可包括化合物溶于 液體載體(如水、乙醇或甘油)中的溶液或混懸液；而在干粉氣溶膠 中，該制品可包括，如，濕潤(rùn)劑。
本發(fā)明的制劑包括活性成分及其一種或多種可接受的載體和任選 的任何其它治療成分。從與制劑其它成分相容的意義上說，載體應(yīng)是 "可接受的"且對(duì)其受體無(wú)害。
本發(fā)明的藥物組合物可以任何口服可接受的劑量形式口服給藥， 包括，但不限于，膠嚢劑、片劑和含水混懸液或溶液。就口服使用的 片劑而言，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤(rùn)滑劑， 如硬脂酸鎂。以膠嚢形式口服給藥時(shí)，有效的稀釋劑包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)含水混懸液需要口服使用時(shí)，將活性成分與乳化和懸浮劑 混合。如需要，還可加入特定甜味劑、調(diào)味劑或著色劑。
或者，本發(fā)明的藥物組合物可以直腸給藥的栓劑形式給予。這些 可通過將藥劑與適宜的無(wú)-刺激性賦形劑混合而制備，所述賦形劑在室 溫下為固體，而在直腸溫度下為液體，且因此在直腸中融化而釋放出 藥物。這類物質(zhì)包括椰子油、蜂蠟和聚乙二醇。
本發(fā)明的藥物組合物還可局部給藥，特別是當(dāng)治療的靶包括很容 易通過局部應(yīng)用而進(jìn)入的區(qū)域或器官時(shí)，包括眼睛、皮膚或腸道下部 的疾病。適宜的局部制劑很容易相對(duì)于這些區(qū)域或器官分別制備。
腸道下部的局部應(yīng)用可以直腸栓劑(見上面)或適宜的灌腸劑形式 進(jìn)行。還可使用局部透皮貼劑。
局部應(yīng)用時(shí)，可將藥物組合物配制成含有混懸或溶于一種或多種 載體中的活性成分的適宜軟膏劑。用于局部給予本發(fā)明化合物的載體 包括，但不限于，礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化 乙烯、聚氧化丙烯化合物、乳化蠟和水?；蛘?，可將該藥物組合物配 制成適宜的含有混懸或溶于一種或多種藥學(xué)可接受栽體中的活性成分 的洗劑或霜?jiǎng)＿m宜的載體包括，但不限于，礦物油、脫水山梨糖醇
一硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十 二烷醇、節(jié)醇和水。
在眼用組合物中，載體應(yīng)是眼睛可接受的，即應(yīng)當(dāng)是在討論的濃 度或用量下，與眼睛組織相容的物質(zhì)。當(dāng)與眼睛組織接觸時(shí)，這類物 質(zhì)不會(huì)引起顯著或不適當(dāng)?shù)挠泻ψ饔谩＿@類載體的例子是本領(lǐng)域技術(shù) 人員已知的(見例如，W001/08689和US2004/0229802)。優(yōu)選含水載體， 特別是含至少50重量％水的那些。
在眼用組合物中，載體可包括一種或多種藥學(xué)或眼睛可接受的成 分，如滲透壓(或等滲)調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、粘度劑(例如，增稠劑)、潤(rùn) 滑劑、表面活性劑、防腐劑、乳化劑、濕潤(rùn)劑、增稠劑、觸變劑、緩 和劑和通常用于眼用制劑中的其它成分。這類載體和眼睛可接受成分 的例子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的(見，例如，WO 01/08689 、 US2004/0198763 、 US 2004/0191332 、 US2004/0191332 和 US 2004/0229802，其在本文提出，全文引入作為參考)。
優(yōu)選，眼用組合物的pH為目標(biāo)受治療者的生理學(xué)范圍(例如，約 3、 4或5-約7. 5、 8. 5或9,優(yōu)選約7、約7.5或約8)。
本發(fā)明的眼用組合物可以是適于給予眼睛的任何形式，如溶液、 混懸液、軟膏、凝膠、和固體(見，例如，WO 01/08689)。還包括固體 插入物和人造眼淚組合物。
眼用時(shí)，可將藥物組合物配制成溶于等滲、pH調(diào)節(jié)的無(wú)菌鹽水中 的微粉化混懸液或，優(yōu)選，溶于等滲、pH調(diào)節(jié)的無(wú)菌鹽水中的溶液， 其含有或不含防腐劑如苯扎氯銨(benzylalkonium chloride)?；蛘?， 眼用時(shí)，可將藥物組合物配制成軟膏劑，如在凡士林中配制。在其中 一個(gè)實(shí)施方案中，按照本文所述配制該組合物。其它眼用制品可在， 例如，美國(guó)專利US 6， 645， 994和/或美國(guó)專利US 6， 630, 473中找到。
本發(fā)明的藥物組合物還可通過鼻氣溶膠或吸入給藥。這種組合物 是按照藥物制劑領(lǐng)域熟知的技術(shù)制備的且可制備成溶于鹽水中的溶 液，其中使用節(jié)醇或其它適宜的防腐劑，提高生物可利用率的吸收促 進(jìn)劑、氟碳和/或本領(lǐng)域已知的其它常規(guī)溶解或分散劑。
本發(fā)明的組合物還可包括螯合或多價(jià)螯合組分或穩(wěn)定劑(如 WO01/08689和US 2004/0229802中描述的那些)。
本發(fā)明的組合物可按照常規(guī)技術(shù)制備。本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施方案 提供一種制備滴眼組合物的方法，包括將ICE抑制劑和載體(優(yōu)選無(wú)菌 純化水)混合且任選包括混合本文所述的另外的藥物。眼用軟膏劑可通 過將ICE抑制劑和基質(zhì)混合而制備(見，例如，US 2004/0198763)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到藥學(xué)可接受載體或稀釋劑的形式和性質(zhì) 由與其混合的活性成分用量、給藥途徑和其它熟知的變量決定。
眼用和其它制劑的制備和給藥的描述可在Remington: The Science and Practice of Pharmacy (以前的 Remington's Pharmaceutical Sciences)中找到。
上述化合物和組合物還用于和特定感染疾病有關(guān)的治療應(yīng)用。本發(fā)明的化合物可抑制釋放IL-1 P和/或IL-18，并由此可用于抑 制或阻斷本文提出的特定疾病的若干病理生理學(xué)作用。
本發(fā)明還涉及一種通過(l)抑制IL-1 P和/或IL-18從細(xì)胞釋放和 /或(2)防止哺乳動(dòng)物(包括人)中過高組織水平的IL-1 P和/或IL-18 的不利、有毒或致命作用而治療特定疾病的治療方法。該方法包括給 予哺乳動(dòng)物有效ICE抑制量的一種或多種ICE/CED-3抑制劑。該方法
還可用于特定疾病的預(yù)防性治療或預(yù)防，包括細(xì)菌感染、病毒感染、 真菌感染和寄生蟲感染。本發(fā).明提供一種對(duì)有此需要的哺乳動(dòng)物，包 括人給予有效量的(即，治療有效量)的這類化合物而治療這些疾病的 方法。
這些化合物，通過抑制ICE和阻斷IL-1 P和/或IL-18釋放或降 低IL-1 P和/或IL-18水平和活性，以及在這些情況中過量水平的IL-1 P和/或IL-18的病理生理學(xué)作用，直接促進(jìn)特定疾病的抑制或消除， 并促進(jìn)正常功能的恢復(fù)。同時(shí)，這些作用涉及它們?cè)谥委煾腥拘约膊?中的新用途。
ICE抑制可通過本領(lǐng)域已知和本文更全面描述的方法測(cè)量。
這些化合物可用于抑制單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、內(nèi)皮 細(xì)胞、表皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞(例如，成纖維細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、平滑肌 細(xì)胞、心肌細(xì)胞)和許多其它類型細(xì)胞釋放IL-1 P和/或IL-18。
術(shù)語(yǔ)"情況"或"狀態(tài)"是指在受治療者中產(chǎn)生有害生物學(xué)結(jié)果 的任何疾病、病癥或作用。
患者的血液或細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物中(即，細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi))的 IL-lp和/或IL-18蛋白水平可通過下列方法測(cè)定，例如，與IL-lp 和/或IL-18或已知由于活性IL-1 P和/或IL-18的存在而產(chǎn)生的其它 蛋白免疫特異性結(jié)合的測(cè)定法。這種方法是本領(lǐng)域已知的。例如，可 使用的免疫測(cè)定法包括，但不限于，竟?fàn)幮院头?竟?fàn)幮詼y(cè)定系統(tǒng)、蛋 白質(zhì)印跡、放射性免疫測(cè)定法、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)、"三明 治"免疫測(cè)定法、免疫沉淀測(cè)定法、沉淀反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀反應(yīng)、 免疫擴(kuò)散測(cè)定法、凝集測(cè)定法、補(bǔ)體-固定測(cè)定法、免疫放射測(cè)定法、熒光免疫測(cè)定法、蛋白A免疫測(cè)定法和使用標(biāo)記抗體進(jìn)行的FACS分析。 這類測(cè)定法是本領(lǐng)域熟知的(見，例如，Ausubel等人eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1， John Wiley & Sons, Inc. ， New York,其全文引入本文作為參考)。
竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定法還可用于測(cè)定IL-1 P和/或IL-18的水平。竟 爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法的其中一個(gè)例子是放射免疫測(cè)定法，包括在有增量未 標(biāo)記IL-1 P存在的條件下，用抗-IL-1 P抗體培養(yǎng)來(lái)源于表達(dá)IL-1 p 的細(xì)胞的標(biāo)記蛋白(例如3H或125I)，并檢測(cè)與標(biāo)記的IL-1 0結(jié)合的抗 -IL-IP抗體。目標(biāo)抗體對(duì)特定抗原的親和性及結(jié)合分離率(binding off-rates )可根據(jù)Scatchard繪圖分析由數(shù)據(jù)測(cè)定。與第二種抗體的 竟?fàn)庍€可使用放射免疫測(cè)定法測(cè)定。在這種情況下，在有增量未標(biāo)記 的第二種抗體存在的條件下，將抗原與和標(biāo)記化合物(例如，4或1251) 接合的目標(biāo)抗體一起培養(yǎng)。
IL-1 P和/或IL-18水平還可通過活性測(cè)定，例如，IL-1 P水平可 通過能夠檢測(cè)細(xì)胞因子(如IL-1或生長(zhǎng)因子)的生物活性水平的細(xì)胞 系測(cè)定。根據(jù)其中一個(gè)實(shí)施方案，生物學(xué)樣品中生物活性的IL-IP的 水平是通過用異丙基-b-D-硫代半乳吡喃糖苷培養(yǎng)基因工程改造的細(xì) 胞系而檢測(cè)的。將細(xì)胞系與所檢測(cè)樣品進(jìn)行培養(yǎng)并通過測(cè)定表示所檢 測(cè)樣品中生物活性細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子的藍(lán)色強(qiáng)度而監(jiān)測(cè)細(xì)胞系中的 細(xì)月包死亡。[還參見，例如，X.-S. Liu， Burns 20(1)， pp. 40-44 (1994)，用于TNF監(jiān)測(cè)]
在單一療法中使用約0. 01-約100mg/kg體重/天、優(yōu)選約0. 5-約 75mg/kg體重/天且最優(yōu)選約1-約50mg/kg體重/天的活性成分化合物 的劑量水平。在局部用(例如，滴眼)制劑中，約300nM-3mM，優(yōu)選約3 UM-約300ijM的ICE抑制劑濃度是有效的。這種局部眼用制劑將根據(jù) 需要給藥，優(yōu)選速率為約1-約10滴/眼和約1-約10次/天。在本發(fā)明 其它眼用制劑中，ICE抑制劑以至少約0. 001% (w/v或w/w)、至少約 0. 03。/。(w/v或w/w)、至少約0. 15。/"w/v或w/w)的量和不超過約10%(w/v 或w/w)、不超過約3% (w/v或w/w)、不超過約1% (w/v或w/w)或不超過約0. 5%(w/v或w/w)的量存在。如果存在，防腐劑的量為至少約 0. OOOlwt0/"約0. lwt%、約0. 2wt。/。-約0. 5 wt%、約lwt°/。、或約2. 5wt%。
通常，可每天約1-5次給藥或者連續(xù)輸注給予本發(fā)明的藥物組合 物。這種給藥可用作慢性或急性治療。與載體物質(zhì)混合，以產(chǎn)生單一 劑量形式的活性成分的用量將根據(jù)所治療的宿主和特定的給藥方式而 變化。典型的制劑含有約5%-約95y?；钚曰衔?w/w)。優(yōu)選，這類制 品可含有約20%-約80%活性化合物。
當(dāng)本發(fā)明組合物含本發(fā)明化合物與 一種或多種另外的治療劑的組 合時(shí)，化合物和另外的藥物應(yīng)以占單一治療方案通常給藥劑量的約10 %-約80%的劑量水平存在。
患者的情況改善后，如果需要，可給予維持劑量的本發(fā)明化合物、 組合物或組合。隨后，可根據(jù)癥狀降低給藥劑量或頻率，或兩者均降 低，達(dá)到保持情況改善的水平。當(dāng)癥狀已經(jīng)減輕至所需水平時(shí)，治療 應(yīng)停止。然而，患者可以在任何復(fù)發(fā)或疾病癥狀后，要求長(zhǎng)期間歇治 療。
還應(yīng)理解，任何特定患者的具體劑量和治療方案將取決于多種因 素，包括所用具體化合物的活性、年齡、體重、 一般健康狀況、性別、 飲食、給藥時(shí)間、分泌速率、藥物組合、及治療醫(yī)師的判斷和所治療 特定疾病的嚴(yán)重程度?；钚猿煞值挠昧窟€取決于組合物中特定的化合 物以及，如果存在，其它治療劑。
因此，治療或預(yù)防受治療者中本發(fā)明所述疾病的方法包括給予受 治療者本文所述任何化合物、藥物組合物、或組合的步驟。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療患有上述其中一種疾病 的哺乳動(dòng)物(優(yōu)選，人)的方法，包括給予所述哺乳動(dòng)物上述藥學(xué)可接 受的組合物的步驟。在該實(shí)施方案中，如果還給予患者其它治療劑， 它可與本發(fā)明化合物一起以單一劑量形式遞送，或，作為分開的劑量 形式遞送。當(dāng)以分開的劑量形式給藥時(shí)，可在給予含本發(fā)明化合物的 藥學(xué)可接受的組合物之前，之時(shí)、或之后給予其它治療劑。
本發(fā)明還提供了根據(jù)本文所述和本領(lǐng)域已知的方法測(cè)定化合物(ICE抑制劑)抗-感染活性的方法。
用于鑒別治療本發(fā)明所述疾病的化合物或組合物的方法包括篩選 許多化合物或組合物減輕特定疾病的效應(yīng)和/或改善患有本發(fā)明特定 疾病患者情況的能力的方法。根據(jù)本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施方案，高通量 篩選可通過下列方法進(jìn)行在微量滴定平板的多個(gè)孔中培養(yǎng)細(xì)胞，向 各孔中加入不同的化合物或組合物并將各孔培養(yǎng)物中的ICE抑制作用 和/或IL-lp和/或IL-18水平和/或活性與對(duì)照孔細(xì)胞培養(yǎng)物中的水 平或活性進(jìn)行比較。用于本發(fā)明比較步驟的對(duì)照組包括沒有用化合物 或組合物處理的細(xì)胞或受治療者和使用已知對(duì)ICE抑制或活性沒有作 用的化合物或組合物處理的細(xì)胞或受治療者。
根據(jù)本發(fā)明其中一個(gè)實(shí)施方案，高通量篩選是自動(dòng)化的，步驟包 括將細(xì)胞加入到平板中直到數(shù)據(jù)釆集，且加入化合物或組合物后的分 析由機(jī)器進(jìn)行。用于本發(fā)明比較步驟的儀器，例如，可檢測(cè)標(biāo)記物質(zhì)(例 如，放射性標(biāo)記的、熒光或彩色標(biāo)記的物質(zhì))或本身是可檢測(cè)的物質(zhì)的 儀器從商業(yè)得到和/或本領(lǐng)域已知。因此，可迅速且有效地篩選用于治 療本文公開的特定疾病的本發(fā)明的化合物和組合物。
其中一個(gè)實(shí)施方案提供了一種鑒別減輕、治療、或預(yù)防感染疾病 (或這里公開的其它疾病或病癥)的化合物的方法，包括使感染的細(xì)胞 種群或細(xì)胞培養(yǎng)物與抑制ICE的化合物接觸，并將細(xì)胞種群或細(xì)胞培 養(yǎng)物中的感染量與沒有用ICE抑制劑處理的細(xì)胞種群或細(xì)胞培養(yǎng)物中 的感染量進(jìn)行比較。
另一實(shí)施方案提供了一種鑒別減輕、治療、或預(yù)防受治療者中感 染疾病狀態(tài)的化合物的方法，包括給予任何下列文獻(xiàn)中所述的ICE抑 制劑或含該化合物的藥物組合物，并比較用化合物治療之前和之后， 受治療者的感染疾病狀態(tài)W0 04/058718 、 W0 04/002961 、 WO 03/088917、 WO 03/068242、 WO 03/042169、 WO 98/16505、 WO 93/09135、 W0 00/55114、 WO 00/55127、 WO 00/61542、 WO 01/05772、 WO 01/10383、 WO 01/16093、 WO 01/42216、 WO 01/72707、 WO 01/90070、 WO 01/94351、 WO 02/094263、 WO 02/42278、 WO 03/106460、 WO 03/103677、 WO03/104231 、 US 6,184,210、 US 6,184,244 、 US 6, 187, 771 、 US 6，197， 750、 US6， 242， 422、 2001年4月在美國(guó)加利福尼亞San Diego 召開的American Chemical Society (ACS)會(huì)議、WO 02/22611 、 US 2002/0058630、 WO 02/085899、 WO 95/35308、 US 5,716,929、 WO 97/22619、 US 6,204,261、 WO 99/47545和WO 01/90063。
本發(fā)明另一方面包括一種患者在本發(fā)明治療中使用的包裝試劑 盒，包括各藥物組分的單一或多個(gè)藥物制劑；在貯存過程中和給藥 之前盛裝藥物制劑的容器；和以有效進(jìn)行本發(fā)明方法的方式進(jìn)行藥物 給藥的說明。通常，這種試劑盒包含，例如，各ICE抑制劑和任選的 另外的藥物以及藥學(xué)可接受載體的組合物(和一種或多種藥物制劑)以 及同時(shí)或順序給藥的書面說明。該試劑盒還包含固體形式的ICE抑制 劑和藥學(xué)可接受的載體以及用于制備藥物組合物的書面說明。
在另一實(shí)施方案中，提供了一種包裝試劑盒，它含有用于自我給 藥的一個(gè)或多個(gè)劑量形式；用于在貯存過程中和使用之前盛裝劑量形 式的容器，優(yōu)選密封的；和對(duì)患者進(jìn)行藥物給藥的說明書。該說明書 通常是包裝插入物、標(biāo)簽、和/或試劑盒其它組件上的書面說明，且一 種或多種劑量形式是如本文所描述的。各劑量形式可單獨(dú)盛裝在金屬 箔-塑料層壓品片中，其中各劑量形式與獨(dú)立室或泡中的其它劑量形式 分開，或可將劑量形式盛裝在單一容器中，如塑料瓶中。本發(fā)明試劑 盒通常還包括用于包裝各試劑盒組件的工具，即劑量形式、容器、和 使用書面說明的工具。這種包裝工具可采用紙板或紙盒、塑料或箔袋 等的形式。
本文公開的所有申請(qǐng)、專利和參考文獻(xiàn)均引入作為參考。 為了更全面了解本發(fā)明，給出下列制備和試驗(yàn)實(shí)施例。這些實(shí)施 例僅用于舉例說明的目的，而不解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例 實(shí)施例1
動(dòng)物感染在這些實(shí)驗(yàn)中使用8周大的雌性B6小鼠(The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)。在立體顯微鏡下，使用無(wú)菌25 5/8號(hào)針，用三個(gè) 平行的l腿切口劃破各麻醉小鼠的左角膜。用l.Ox 106CFU/jli1綠膿 假單胞菌(如前所述，5 u 1劑量，ATCC菌林19660或臨床分離物-1025 或環(huán)丙沙星抗性19660菌林(Kwon和Hazlett， 1997))局部攻擊劃破的 角膜。在感染后(p. i.)第1天和下述時(shí)間，肉眼檢查眼睛以確保所有 小鼠均類似被感染并監(jiān)測(cè)疾病的病程。所有動(dòng)物均被人道處理且在研 究中，有關(guān)動(dòng)物的使用和處理完全遵從Association for Research in Vision and Ophthalmology決議。
實(shí)施例2
細(xì)菌菌抹
將綠膿假單胞菌菌抹19660用作標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室菌抹并在B6小鼠模型 中產(chǎn)生可再現(xiàn)的角膜病變(Kernacki等人，2000; Rudner等人，2000)。 1999年，在Kresge Eye Institute, Detroit, MI,從人孩i生物角膜 炎病例中分離出了綠膿假單胞菌菌林1025 (KEI-1025)。實(shí)驗(yàn)室-衍生 的環(huán)丙沙星-抗性突變體是通過在含環(huán)丙沙星的Luria-Bertani (LB) 肉湯中連續(xù)傳代野生型綠膿假單胞菌菌林19660從而獲得環(huán)丙沙星抗 性而研制出來(lái)的(Sanchez等人，2002)。與親代菌林相比，環(huán)丙沙星-抗性綠膿假單胞菌菌林顯示出體外殺死細(xì)菌所需的環(huán)丙沙星最小抑制 濃度(MIC)增加了 IOO-倍(O. 25mg/ml對(duì)25mg/ml)。在該突變體的體外 產(chǎn)生過程中，環(huán)丙沙星-抗性(綠膿假單胞菌19660)突變體的毒性與親 代菌林相比降低，其并不罕見且先前已經(jīng)報(bào)道過(Bjorkman等人， 1998)。
實(shí)施例3
ICE抑制劑的制劑
與其它非-ICE天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶相比，這些實(shí)驗(yàn)中 所用的ICE抑制劑顯示出有效的ICE抑制(Ki=0. 8nM)和M00倍的選擇性。研究了 4種含或不含ICE抑制劑(300inM)載體(PBS)的盲編碼制劑 的結(jié)膜下和局部給藥。發(fā)現(xiàn)所有制劑對(duì)另外未處理的小鼠眼睛均無(wú)毒， 且沒有直接(體外)殺死細(xì)菌的能力。
實(shí)施例4
處理方案
在p. i.第18小時(shí)，給B6小鼠(n-5/組)結(jié)膜下注射5口口1 600 口M濃度的ICE抑制劑或安慰劑，接著在p. i.第18小時(shí)開始，局部應(yīng) 用D(ICE抑制劑)或(:(安慰劑)+/-環(huán)丙沙星(Ciloxan; Alcon， Ft. Worth, TX)， 3x/天共7天。在p. i.第18小時(shí)選擇開始ICE抑制劑治 療，從而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，以提供更多臨床相關(guān)的數(shù)據(jù)。此外，到該時(shí) 間點(diǎn)止，預(yù)期患者將注意到眼睛的癥狀如模糊、不適和疼痛且會(huì)小心 摸索。
實(shí)施例5
臨床檢驗(yàn)
將小鼠(n-5/組)用顏色編碼，并以遮蔽方式由兩名獨(dú)立的觀察者， 在p. i.第l、 3、 5和7天時(shí)檢查，評(píng)價(jià)綠膿假單胞菌感染后疾病的嚴(yán) 重程度。評(píng)價(jià)眼病并使用下列已確立的等級(jí)(Hazlett等人，1987)表 示臨床得分Q，澄明或稍混濁，部分覆蓋瞳孔；+1，稍混濁，完全覆 蓋前面的部分；+2，密集的混濁，部分或完全覆蓋瞳孔；+3,密集的 混濁，覆蓋前面的部分；和+4,角膜穿孔。
實(shí)施例6
病理組織學(xué)
進(jìn)行病理組織學(xué)檢查時(shí)，在p. i.第7天，摘除ICE抑制劑或安慰 劑+/-環(huán)丙沙星處理的小鼠眼睛(11=3/組)。將眼睛浸泡在PBS中，沖洗 并放在4'C下、含1:1:1比例的1%四氧化鋨、2. 5%戊二醛、和0. 2M Sorenson's磷酸鹽緩沖液(pH7. 4)的固定液中3小時(shí)。將眼睛轉(zhuǎn)移到新鮮的固定液中，1.5小時(shí)后，在梯度乙醇中脫水，包埋在Epon-araldite中，切片，用改性的Richardson's染料染色并如以前所述 照相(Hazlett等人，2000)。
實(shí)施例7 髓過氣化物酶(MP0)活性的測(cè)量
如以前所述，測(cè)定樣品的MP0活性(Williams等人，1982)。在 p. i.第7天采集ICE抑制劑或安慰劑+/-環(huán)丙沙星處理的小鼠角膜 (n-5/組)并在lml的溴化十六烷基三甲銨(HTAB)緩沖液(O. 5% HTAB, 溶于50mM磷酸鹽緩沖液，pH 6. 0)中勻化。使樣品經(jīng)過3次凍-融循環(huán), 然后14， 000 rpm離心20分鐘。將上清液與共3ml體積、含1: 30的 0.167mg/ml 0-聯(lián)茴香胺鹽酸鹽和0. 0005°/。過氧化氫的50mM磷酸鹽緩 沖液(pH 6. O)混合。連續(xù)監(jiān)測(cè)460nm處吸光度的變化達(dá)5分鐘。結(jié)果 以MPO的單位/角膜表示。 一個(gè)單位的MPO活性相當(dāng)于約2. Oxl05PMN 細(xì)胞(Williams等人，1982)。
實(shí)施例8
角膜中活細(xì)菌的量化
在p. i.第7天，采集10￡抑制劑或安慰劑+/-環(huán)丙沙星處理的小 鼠角膜(n-5/組)并測(cè)定活細(xì)菌數(shù)。為此，將各角膜在無(wú)菌PBS中勻化 并一式三份將連續(xù)稀釋的等分試樣(100jj l)接種在假單胞菌分離瓊脂 (Difco, Detroit, MI)平板中。37。C培養(yǎng)平板24小時(shí)。結(jié)果以CFU 的1og!。數(shù)/角膜土SEM表示。
實(shí)施例9 角膜勻漿中細(xì)胞因子蛋白的量化
按照制造商的說明，使用ELISA試劑盒(R & D Systems, Minneapolis, MN)檢測(cè)ICE抑制劑或安慰劑+Z-環(huán)丙沙星處理的小鼠中 IL-1 P和MIP-2的蛋白水平。在p. i.第7天除去角膜(n-5/組)并立即在-70。C貯存。分析之前，用玻璃Kontes研才奉(Fisher， Itasca, IL) 在0. 1%吐溫20-PBS中勻化各角膜，4匸下，5000xg離心IO分鐘，上 清液用于量化IL-1 p和MIP-2蛋白。結(jié)果以pg/ml報(bào)告。
實(shí)施例10
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
組內(nèi)臨床得分隨時(shí)間的變化是通過排列、由方差的Fr iedman雙向 分析檢測(cè)的。ICE抑制劑和安慰劑處理的B6小鼠之間，在各實(shí)驗(yàn)時(shí)間 點(diǎn)的臨床得分差異是通過Mann-WhitneyU試驗(yàn)檢測(cè)的。不成對(duì)的，雙 尾Student' s t-試驗(yàn)用于測(cè)定處理組和對(duì)照組之間的MPO測(cè)定、細(xì) 菌計(jì)數(shù)和ELISA分析數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。P口 0. 05的平均差異 被認(rèn)為是顯著的。實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少2次以確保再現(xiàn)性，并給出單一實(shí)驗(yàn) 的代表性數(shù)據(jù)。
實(shí)施例11
結(jié)果
與載體-處理的小鼠相比，ICE抑制劑-處理的小鼠在p. i.第 3(P=0. 012)、 5(P-0.007)和7(P=0. 007)天表現(xiàn)出疾病嚴(yán)重程度明顯 降低。使用ICE抑制劑和環(huán)丙沙星聯(lián)合治療還導(dǎo)致與載體和環(huán)丙沙星-處理組相比，p.i.第5(P-0. 050)和7(P二0. 047)天，臨床得分明顯降 低。除了 ICE抑制劑+環(huán)丙沙星治療組外，還觀察到組內(nèi)臨床得分隨時(shí) 間變化的顯著性差異(載體，P-O. 0001;載體+環(huán)丙沙星，P=0. 009; ICE 抑制劑，P=0. 0014; ICE抑制劑+環(huán)丙沙星，P=0. 77)。
在ICE抑制劑處理的小鼠中，與載體-處理的小鼠相比，在p. i. 第3 (P-0.007)、 5(P-0. 015)和7(P=0. 007)天發(fā)現(xiàn)疾病嚴(yán)重程度明顯 降低(綠膿假單胞菌KEI-1025)。與在感染綠膿假單胞菌菌株19660的 角膜中用ICE抑制劑和環(huán)丙沙星處理類似，與載體加環(huán)丙沙星處理的 角膜相比，在B+D和環(huán)丙沙星處理的角膜中，p.i.第3(P=0. 007)、 5(P=0. 015)和7(P=0. 031)天，該組(感染KEI-1025)臨床得分也明顯降低。該組臨床得分隨時(shí)間的變化而明顯不同(載體，P-O. 0001;載體 +環(huán)丙沙星，P-0. 04; ICE抑制劑,P-O, 0002; ICE抑制劑+環(huán)丙沙星， P-0. 04)。
使用ICE抑制劑治療感染綠膿假單胞菌(19660)環(huán)丙沙星抗性菌 林的角膜時(shí)，與栽體處理的小鼠相比，顯示p. i.第3(P-0. 03)、 5(P=0. 03)和7(P=0. 007)天，臨床得分明顯降低。同樣，在ICE抑制 劑和環(huán)丙沙星處理的組中，觀察到與載體和環(huán)丙沙星的處理組相比， p.i.第3(P-0. 03)、 5(P=0. 03)和7(P=0. 007)天，臨床得分明顯降低。 ICE抑制劑和環(huán)丙沙星處理的小鼠表現(xiàn)出與ICE抑制劑類似的臨床得 分(相對(duì)于載體處理的小鼠)，證實(shí)了該菌林對(duì)環(huán)丙沙星的體內(nèi)抗性。 在載體(P=0. 01)和ICE抑制劑(P-O. 002)處理組中，臨床得分隨時(shí)間變 化而明顯不同。在載體+環(huán)丙沙星，或ICE抑制劑+環(huán)丙沙星處理組中， 沒有觀察到臨床得分隨時(shí)間變化的差異。
p. i.第7天，在ICE抑制劑(與載體相比)處理組中進(jìn)行的裂隙 燈顯微鏡檢查證實(shí)了臨床得分。在ICE抑制劑處理的角膜中，觀察到 細(xì)胞浸潤(rùn)明顯更少，其主要位于瞳孔上的中心角膜處。在下方角膜區(qū) 見到的混濁是由于浸潤(rùn)細(xì)胞重力沉降到前房中。相反，所有用載體處 理的小鼠均顯示角膜穿孔。在ICE抑制劑和環(huán)丙沙星處理的角膜中進(jìn) 行的裂隙燈檢查顯示出與載體和環(huán)丙沙星處理的角膜相比，較輕微的 角膜混濁，其表明在角膜及前房中，細(xì)胞浸潤(rùn)更嚴(yán)重。
ICE抑制劑處理后的眼睛的病理組織學(xué)檢查顯示角膜基質(zhì)中的浸 潤(rùn)細(xì)胞顯著降低，具有最小前房炎性細(xì)胞反應(yīng)。相反，栽體處理的B6 小鼠顯示角膜中的細(xì)胞浸潤(rùn)較為嚴(yán)重，具有角膜上皮完全剝脫、中心 基質(zhì)降解、嚴(yán)重水腫和嚴(yán)重前房炎性細(xì)胞反應(yīng)。用ICE抑制劑和環(huán)丙 沙星處理的角膜顯示與典型的用載體和環(huán)丙沙星處理的眼睛相比，沿 著角膜內(nèi)皮和前房中僅有很少的炎性細(xì)胞，這表明前房中更為嚴(yán)重的 炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和與角膜內(nèi)皮粘連。
測(cè)定髓過氧化物酶(MPO)活性以量化p. i.第7天，ICE抑制劑(與 載體相比)處理的小鼠角膜中的PMN浸潤(rùn)。ICE抑制劑處理的小鼠顯示與載體處理的小鼠相比，PMN數(shù)顯著降低(P-O. 04)。同樣，在ICE
抑制劑加環(huán)丙沙星與載體加環(huán)丙沙星相比處理的小鼠中，P. i.第7天， 角膜中的MP0活性顯著降低(P-O. 0024)?？擅枋鯩PO活性單位/角膜 (SEM)。
p. i.第7天，測(cè)定ICE抑制劑(與載體相比)處理組的角膜中(n=5/ 組)的活細(xì)菌平板數(shù)。與安慰劑處理組相比，發(fā)現(xiàn)ICE抑制劑處理組角 膜中的活細(xì)菌數(shù)明顯降低(P-O. 02)。 p. i.第7天，在ICE抑制劑和環(huán) 丙沙星及載體和環(huán)丙沙星處理組角膜中的平板計(jì)數(shù)中未分離出細(xì)菌菌 落。可描述平均活細(xì)菌1og,o數(shù)/角膜(SEM)。
使用ELISA分析，在p. i.第7天，測(cè)定ICE抑制劑(與載體相比) 處理組中IL-1 P和MIP-2的蛋白水平。在ICE抑制劑組檢測(cè)到與載體 處理組相比明顯更低的IL-1|3 (P=0. 023)和MIP-2(P=0. 012)蛋白水 平。環(huán)丙沙星處理明顯降低了 IL-1 P和MIP-2水平，推測(cè)是由于通過 消除感染而使促炎癥反應(yīng)刺激物減少。然而，在ICE抑制劑和環(huán)丙沙 星處理組中，IL-1^(P=0. 036)和MIP-2(P=0. 04)的蛋白水平與載體 和環(huán)丙沙星處理組相比，也進(jìn)一步且明顯降低。
實(shí)施例12
ICE抑制
可通過本領(lǐng)域熟知的方法(見，例如，本文引證的文獻(xiàn))測(cè)試化合 物抑制ICE的能力。參考文獻(xiàn)
Akita., K., Ohtsuki, T., ISIukada, Y., Tanimoto, T., iSFamba, M. , Okura, T-, Takakura-Yamamoto, R., To:rigoe, K. , Gu, Y., Su, M. S*, Fujii, M, , Satoh-工toh, M. , Yamamoto, K., Kohno, K., 工keda, M. 和 Kurimoto, M. (1997) . Involvement of caspase-1 和 caspase-3 in the production 和 processing of mature human interleuki:n 18 in monocytic THP-1 cells. J Biol Chem, 272, 26595-26603.
Barr, J\ , Zadnik, K. , Wilson, B. S - , Edrington, T* B., Everett, D. F., Fink, B. A. , Shovlin, J. P., Weissman, B. A., Siegmund, K. 和.Gordon, M. O. (2000) . Factors associated with corneal sca:ra:irig in the Collaborative Longitudinal Evaluation of Keratoconus《C!LEK) Study. Cornea, 19, 501-507.
Baum, J. and Barza, M- (2000). The evolution of
antibiotic therapy for bacterial conjunctivitis 和.keratitis: 1970-200CK Cornea, 19, 659-672.
Bjorkman, J,, Hughes, D. 和 Andersson,工.(1998) Virulence of antibiotic-resistant Salmonella typhimu;rium. Procr胸tl Acad Sci t7 S A, 95, 3949-3953.
Bresnihan, B,, Alvaro-Gracia, J. M. , Cobby, M-,
Doherty, M., Domljan, Z., Emery, P*, Nuki, G,, Pavelka, K. , Rau, R. , Roz脆n, B. , Watt,工.， Williams, B. , Aitchison, R. , McCabe, D. 和 Musikic, P. (1998). Treatment of rheumatoid arthritis with recombinaiat human interleukin-1
receptor antagonist. Arthritis RZieum, 41, 2196-2204.
Chaudhry, N. A., Flynn, H. W., Jr., Murray, T. Gw Tabandeh, H., Mello, M. O., Jr. 和 Miller, D. (1999) Emerging ciprofloxacin-resistant Pseudomonas aeruginosa. Am J" Qphthaimol, 128, 509 — 51。
Dart, J, K. 和 Seal, D. V. (1988). Pathogenesis 和
therapy of Pseudomonas aeruginosa keratitis. J ye, 2 Suppl, S46-55.
Engel, Lj. S. , Hill, J. , Moreau, J. , Green, L. C,, Hofaden, J. A. 和 CVCallaghan, R. J. (1998), Pseudomonas aeruginosa protease工V produces corneal damage 和 contributes to bacterial virulence. Jtovest Qphth^linol Vis Sci, 39, 662-665-
Fa11tuz2i, G., Ku, G., Harding, M. W., Livingston, D. J., Sipe, J- I>., Kuida, K. , Flavell, R. A, 和 Dinarello, C* A. (1997) , Response to local inflammation of 工L-1 beta-converting enzyme-deficient mice. J" I"mmu;nol, 158, 1818-1824.
Garg, P., Sharma, S. and Rao, G. N. (1999).
Ciprofloxacin-resistant Pseudomonas keratitis . Ophthalmol ogy, 106, 1319-1323.
Guzek, J. P., Chacko, D-, Kettering, J- D., Wessels, 工. F. 和Aprecio, R, M. (1994) . Comparison oftopical ciprofloxacin to conventional antibiotic therapy in the treatment of experimental Pseudomonas aeruginosa keratitis. Corvnea, 13, 500-504 .
Hazlett, L. (2002) . Pathogenic mechanisms of P.
aeruginosa keratitis: a review of the role of T cells, Langerhans cells, PMN,和 cytokines. IMA CeU Biol, 21, 383-390.
Hazlett, L. D., McClellan, S-, Kwon, B.和Barrett, R. (20 00》.Increased severity of Pseudomonas aeruginosa corneal infection in strains of mice designated as Thl versus Th2 responsive. JTnyest Ophthalmo_Z Vis Sci, 41, 805-810.
Hazlett, L. D. , Moon, M. M. , Stre]'c, M.和Berk, R. S. (19 87) . Evidence for N-acetylmannosamin'e as an ocuLlar receptor for1 P- aeruginosa adherence to scarified cornea. Znvest QphtJialmoJ Vis Sci, 28, 1978-1985.
Hobden, J. A., Engel, L. S., Hill, J.' M. , Callegan, M. C.和■ O'Callaghan, R. J. (1993). Prednisolone acetate or prednisolone phosphate concurrently administered with ciprofloxacin for the therapy of experimental Pseudomonas aeruginosa keratitis. Curr取e i es, 12, 469 — 473.
Hobden, J. A., O'Callaghan, R. J., Hill, J- M., Hagenah, M., Insler, M. S, 和i Reidy, J. J. (1992)- Ciprofloxacin 和 prednisolone therapy for experimental Pseudomonas keratitis. Curr丑ye i es, 11, 259-265-
Huang, X., McClellan, S. A., Barrett, R. P- 和
Hazlett, L. D. (2002)、 工L-18 contributes to host resistance against infection with Pseudomonas aeruginosa through induction of 工FN-gamma' production. J Immunol, 168, 5756-5763.
Kernacki, K. A., Barrett, R. P., Hobden, J. A. 和.
Hazlett, Ij. D. (2000) . Macrophage inflammatory protein—2 is a mediator of polymorphonuclear neutrophil influx in ocular bacterial infection. J" 工minunol, 164, 1037-1045.
Kernacki, K. A-, Hobden, J. A., Hazlett, L- D., Fridman, R.和.Berk, R. S. (1995).工n vivo bacterial protease production during Pseudomonas aeruginosa corneal infection. Xnvest Ophthalmol Vis Sci, 36, 1371-0378.
Kowalski, R. P., Pandya, A. N., Karenchak, L. M.,
Romanowski, E. G., Husted, R. C-, Ritterband, D. C., Shah, M- K. 和.Gordon, Y. J. (2001). An in vitro resistance study of levofloxacin, ciprofloxacin,和 ofloxacin using keratitis isolates of Staphylococcus aureus 和 Pseudomonas aeruginosa. Ophthalmolosfy, 108, 1826-1829.
G- Ru, A. Qadri 和 John C.R..Handle, (2001a)
工nterleukin-ip' converting enzyme (caspase-l)inhibition with VX-765 reduces inflammation 和 cytokine levels in murine oxazolone-induced dermatitis, J".Invest. DezmatoL June issue, poster 856.
Ku, G., Qadri, A.,和 J.C.R- Handle (2001b)
工nterleukin-iP converting enzyme (ICE; caspase-1) ixihibitioii with VX-765 reduces inflammation 和 cytokine levels in murine dermatitis 和 arthritis modsIs.
Kuida, K., Lippke, J. A., Ku, G., Harding, M. W-,
Livingston, D. J., Su, M. SZ和Flavell, R. A: (1995). Altered cytokine export 和，apoptosis in mice deficient in interleqkin-l.beta converting-enzyme. Science, 267, 2000-2003.
Kunimoto, D. Y., Sharma, S., Garg, P- 和.Rao'.G. N. (1999).工n vitro susceptibility of bacterial keratitis pathogens to ciprofloxacin. Emerging resistance. Qphthaimoiogy, 106, 80-85-
Kwon, B. 和.Hazlett, !L. D. (1997). Association of CD4+ T cell-dependent keratitis with genetic
susceptibility to Pseudomonas aeruginosa ocular infection. J工mmunol, 159, 6283-6290.
Laibscm, P- R- (1972). Cornea和 sclera. Arch Qphfchal加ol, 88', 553-574.
Landman, D., Quale, J- M., Mayorga, D., Adedeji, A., Vangala, K., Ravishankar, J., Flores, C. 和 Brooks, S- (2 002). Citywide clonal outbreak of multiresistant Acinetobacter baumaimii 和， Pseudomonas aeruginosa in Brooklyn, NY: the preantibiotic era has returned. Arch Znteru Me<3, 162, 1515-1520.
Leibowitz, H. M. (1991). Clinical evaluation of ciprofloxacin 0.3%. ophthalmic solution for treatment of bacterial keratitis. Am J Qphtha2moJ, 112, 34S-47S.
Leibowitz, H. M., Bartlett, J. D., Rich, R. , McQuirter, ■H., Stewart, R- 和.Assil, K. (1996). Intraocular pressure-raising potential of 1.0% rimexolone in patients responding to corticosteroids. Arch QphthaJmol, 1H 933-937.
Li, P., Allen, ,H… Banerjee, S., Franklin, S., Herzog, L., Johnston, C., McDowell, J., 'Paskind, M., 'Rodman, L. , ■ Salf eld, J. 和et al. (1995). Mice deficient in工Ii-l beta-converting enzyme a:re defective in production of mature工L-l beta 和， resistant to endotoxic shock. Cell, 80, 401-411.
Liesegang, T. J. (1997)- Contact lens-related microbial keratitis: Part工Epidemiology. Cornea, 16, 125-131.
McClellan, S. A., Huang, X., Barrett, R. P., van
Rooijen, N- 和 Hazlett, L- D. (2003). Macrophages restrict Pseudomonas aeruginosa growth, regulate polymorphonuclear neutrophil influx,和balance pro-和 anti-inflammatory cytokines in BALB/cmice. J* JmrmmoJl, 170, 5219-5227.
Mohler, K. M. , Torrance, D. S. , Smith, C. A. , Goodwin, R. G. , Stremler, K. E. , Fung, V. P., Madani, H. 和 W丄dmer, M. B. (1993) . Soluble tumor necrosis factor (TNF) receptors are effective therapeutic agents in lethal endotoxemia 和 function simultaneously' as both TNF carriers 和 TNF antagonists, J" Jmmuncxl, 151, 1548-1561.
Nuki, G , Bresnihan, B , Bear, M. B 和McCabe, D. (2002 ) Long-term safety和maintenance of clinical improvement following treatment with anakinra (recombinant human interleukin-l receptor antagonist) in patients with rheumatoid arthritis: extension phase of a randomized, double—blind, placebo-controlled trial. Arthritis Rheum, 46,
2838-2846.
Parks, D, J., Abrams, D. A., Sarfarazi, F. A.和 Katz, H. R. (1993). Comparison of topical ciprofloxacin to conventional antibiotic therapy in the treatment of ulcerative keratitis. Am J" Qphthali7icQ, 115, 471-477.
Phillips, K., Arffa, H., Cintron, C., Rose, J., Miller,
D. , Rublin, C, L. 和i Kenyon, K. R. (1983). Effects of prednisolone and medroxyprogesterone on corneal wound healing, ulceration, 和 neovascularization. Aroh Qphthslmol, 101, 640—643.
Poggio, E. C,, Glynn, R. Schein, O. D., Seddon, J.
M. , Shannon, M. J., Scardino, V. A.和 Kenyon, K, R.
(1989) . The incidence o:E ulcerative keratitis among
users of daily—wear 和.extended—wear soft contact
lenses. W丑ngri J" Med, 321, 779-783-
Rudner, X. L. , Kernacki, K. A. , Barrett, R. P 和
Hazlett, L. D. (2000》.Prolonged elevation of 工L-l in Pseudomonas aeruginosa ocular infection regulates macrophage—inflammatory protein—2 production, polymorphonuclear neutrophil persistence, 和'corneal perforation. J" I"mmonoJ, 164, 6576-6582.
Sanchez, P_ , !Liiia:res, J. F. , Ruiz-Diez, B. , Camparaai:io,
E. , Navas, A,, Baquero, F.和 Martinez, J. L. (2002)Fitness of in vitro selected Pseudomonas aeruginosa nalB 和 nfxB multidrug resistant mutants. J" Antiiniarojb Chemother, 50, 657-664.
Schein, 0. D. , Glynn, R. J. , Poggio, E. C. , Seddon, J, M. and Kenyon, K. R, (1989) . The relative risk of ulcerative keratitis among users of daily-wear 和 extended—wear soft contact lenses * A case-control study- Microbial Keratitis Study Group. Engi J" Med, 321, 773:778.
Schein, O. D.和 Poggio, E. C. (1990). Ulcerative
keratitis in contact lens wearers. Incidence 和 risk factors. Comea, 9 Suppl 1, S55 —58,-discussion S62—53.Singh, G, (1985) Corticosteroids in corneal
endothelial wound healing. Aon Qphtiialincd, 17, 238-243.
Steuhl, K. P., Doring, G. , Henni, A., Thiel, H. 0*. 和 Botzenhart, K. (1987) Relevance of host-derived 和 bacterial factors in Pseudomonas aeiruginosa corneal infectionsI"nvest Ophthalmol Vis Sci, 28, 1559-1568-
Steuhl, K. P., Doring, G、 和Thiel, H. J, (1989). [The significance of bacterial 和 host factors in corneal infections caused by Pseudomonas
* aeruginosa]. Portschr Qphthaimol, 86, 283-286* Thakur, A., Xue, M., Stapleton, F., Lloyd, A. R,,
Wakefield, D. 和.Willcox, M. D. (2002)， Balance of pro— and anti-inflammatory cytokines correlates with outcome of acute experimental Pseudomcmas ae;ruginosa keratitis. Xnfect Zmmon, 70, 2187-2197. van Deveixter, S. J. (1999). Anti-TNF antibody treatment of Crohn's disease. Ann處eum Dis, 58 Suppl 1, 1114-120.
Waterbury, L. , Kunys z, E. A - 和Beuerman, R (1987), Effects of steroidal 和 non-ste:roidal anti-inflammatory agents cm corneal wound healing. iJ Ocui Pbar脂col, 3, 43-54.
Wilhelirrus, K. R. (2002), Indecision about
corticosteroids for bacterial keratitis: an evidence—based update. Qphthalmolo^ry, 109, 835" 842; ciuiz 843.
Williams, R. ISI., Paterson, C. A. , Eakins, K. E. 和
Bhattacherjee, P. (1982). Quantification of ocular inflammation: evaluation of polymorphonuclear leucocyte infiltration by measuring myeloperoxidase activity. Curr Eye i es, 2, 465-470.
Xue, M. L,, Thakur, A. , Willcox,D., Zhu, H. , Lloyd, A. H.和 Wakefield, D. (2003a). Role ,和 regulation of CXC-chemokines in acute experimental keratitis- _Exp丑ye i es, 76, 221-231.
Xue, M. L., Wakefield, D., Willcox, M. D. , Lloyd, A, R. , Di Girolamo, ISJ. , Cole, ISI.和 Thakur, A. (2 003b) . Regulation of MMPs和T工MPs by工L-lbeta during corneal ulceration 和 infection. Xnvesfc Qphthaiino2 Vis Scd, 44, 2020—2 025.本文引證的文獻(xiàn)引入作為參考。
雖然我們描述了本發(fā)明的許多實(shí)施方案，但是很明顯可對(duì)我們的 基礎(chǔ)實(shí)施例進(jìn)行改變，從而提供其它實(shí)施方案，其使用本發(fā)明的化合 物和方法。因此，應(yīng)了解本發(fā)明的范圍是由附加的權(quán)利要求而不是已 經(jīng)通過實(shí)施例提出的具體實(shí)施方案來(lái)限定。
權(quán)利要求
1.下列化合物及其每個(gè)立體異構(gòu)體在制備用于治療受治療者眼睛感染的藥物中的用途
2.根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述化合物的立體異構(gòu)體為:
3. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述感染是細(xì)菌、病毒、寄生蟲、 或真菌感染。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中所述感染是細(xì)菌感染。
5. 根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中將化合物配制成用于給予眼睛的制 劑形式。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)的用途，其中將化合物與選自抗細(xì)菌、 抗病毒、抗寄生蟲、或抗真菌劑的另外的藥物共同給藥。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中另外的藥物是抗細(xì)菌劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中抗細(xì)菌、抗病毒、抗寄生蟲、或抗 真菌劑是眼用藥物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中將另外的藥物與化合物以單一劑量 形式給藥。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中將每種另外的藥物與化合物以分 開的劑量形式給藥。
11.下列化合物及其每個(gè)立體異構(gòu)體在制備用于治療受治療者眼 睛的損傷、變態(tài)反應(yīng)、化學(xué)刺激、或燒傷、干眼癥、斯耶格倫氏綜合征、眼睛老化的藥物中的用途
12.根據(jù)權(quán)利要求ll的用途，其中所述化合物的立體異構(gòu)體為:
13. 根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中將化合物與另外的藥物共同給藥。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中另外的藥物是眼用藥物。
15. 根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中將另外的藥物與化合物以單一劑 量形式給藥。
16. 根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中將每種另外的藥物與化合物以分 開的劑量形式給藥。
17. 根據(jù)權(quán)利要求11-16任何一項(xiàng)的用途，其中將化合物配制成用 于給予眼睛的制劑形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過給予ICE抑制劑治療感染和其它疾病，特別是眼睛的方法。本發(fā)明還涉及通過給予ICE抑制劑治療眼睛的損傷、變態(tài)反應(yīng)、化學(xué)刺激、或燒傷的方法。
文檔編號(hào)A61K38/05GK101524351SQ20091012864
公開日2009年9月9日 申請(qǐng)日期2004年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月1日
發(fā)明者G·庫(kù), J·C·R·蘭德爾, L·哈茲勒特 申請(qǐng)人:沃泰克斯藥物股份有限公司