專利名稱：抗體靶向納米制劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種抗體靶向納米制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
5-氟尿嘧啶(5-FU)是嘧啶類的氟化物，屬于抗代謝類抗腫瘤藥物，能夠抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻斷脫氧嘧啶核苷酸轉(zhuǎn)換成胸腺核苷酸，干擾DNA的合成。此外尚能抑制RNA的形成，從而抑制腫瘤細胞的增殖，是臨床上廣泛運用的抗代謝類抗腫瘤藥物，但是 5-FU有可能引起嚴重的消化道反應與骨髓抑制等不良反應。抗體靶向納米制劑作為一種納米級藥物載體，在提高藥物溶解度、增加藥物穩(wěn)定性、緩控釋給藥、靶向給藥等方面有著廣闊的應用前景。在目前的腫瘤研究中，已有藥物與單克隆抗體偶聯(lián)的研究報道。有研究表明，VEGF蛋白的過度表達與腫瘤血管的形成及轉(zhuǎn)移有密切關系，因此以VEGF及其受體為靶點的抗腫瘤藥物就成為了治療腫瘤的方法之一。由于5-氟尿嘧啶的毒副作用限制了其應用，如果能靶向性使其直接作用腫瘤細胞，而少作用或不作用正常的細胞的話，那么可以減少其毒副作用，并且減少劑量，降低了患者的耐藥性的風險。本發(fā)明提供抗體靶向納米制劑，其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體與聚乳酸納米微粒，可以有效解決現(xiàn)有技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明采用超聲乳化-溶劑蒸發(fā)法制備納米制劑藥物，制備出了一種具有緩釋作用、增加藥物在體內(nèi)滯留時間、具有靶向作用的抗體靶向納米制劑。技術(shù)方案抗體靶向納米制劑，其特征在于其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體、聚乳酸納米微粒，偶聯(lián)劑；其中聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為10 1 8 1; 偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1。偶聯(lián)劑為碳二亞胺。聚乳酸納米微粒由聚乳酸、5-氟尿嘧啶、血清白蛋白構(gòu)成，其質(zhì)量比為4 2 1。所述的抗體靶向納米制劑的平均粒徑小于300納米。所述抗體靶向納米制劑的平均粒徑為230-280納米。所述抗體靶向納米制劑為凍干粉制劑。所述的血清白蛋白為牛血清白蛋白或人血清白蛋白。一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于下列步驟組成a.配制5-氟尿嘧啶水溶液，作為內(nèi)水相備用；b.稱取聚乳酸溶于有機溶劑中，作為油相，將內(nèi)水相在300w，3min超聲條件下滴加油相中，形成乳白色的水/油初乳溶液；
c.稱取血清白蛋白溶于飽和的5-氟尿嘧啶水溶液中，配制成血清白蛋白水溶液作外水相，將水/油初乳溶液在300W，6min超聲分散條件下滴加到外水相中，形成W/0/W復合體系；d.電磁攪拌W/0/W復合體系，使其中的有機溶劑緩慢揮發(fā)至揮發(fā)完全；獲得聚乳酸納米微粒，其中聚乳酸納米微粒的由聚乳酸、5-氟尿嘧啶、血清白蛋白構(gòu)成，其質(zhì)量比為 4:2:1;e.稱取質(zhì)量比為10 1的聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體，溶于pH 為6. 86的緩沖溶液中，在攪拌狀態(tài)下加入碳二亞胺，其中偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1，4°C下攪拌2h，制得抗體靶向納米微粒。步驟b和d中所述的有機溶劑為丙酮。步驟e中偶聯(lián)劑為碳二亞胺。本發(fā)明的制備過程流程示意圖見圖1?？寡軆?nèi)皮生長因子抗體的編碼氨基酸序列(重鏈)MDWTWILFLVAAATRVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDHGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKZ抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的編碼氨基酸序列(輕鏈)MDffTffILFLVAAATRVHSQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNNLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSZ有益效果本發(fā)明原理解釋本發(fā)明采用抗血管內(nèi)皮生長因子抗體結(jié)合納米微粒，其中納米微粒中包含有5-FU。其中全人源抗VEGF單克隆抗體特異性結(jié)合VEGF ；而血管生成是生殖、 生長發(fā)育和修復的基礎，絕大多數(shù)惡性實體腫瘤如卵巢癌、肝癌、宮頸癌和乳腺癌等都是血管依賴性腫瘤。在腫瘤血管內(nèi)皮細胞中，VEGF表現(xiàn)為上調(diào)，而正常組織中VEGF表達量很低； 因此采用抗血管內(nèi)皮生長因子抗體特異性結(jié)合腫瘤細胞中上調(diào)的VEGF，實現(xiàn)靶向性目的； 該抗人血管內(nèi)皮生長因子抗體，是中國藥科大學與上海轉(zhuǎn)基因研究中心合作，利用轉(zhuǎn)入人免疫球蛋白基因的五特征轉(zhuǎn)基因小鼠成功制備的全人源抗血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)單克隆抗體，其本身具有顯著的體內(nèi)外抗腫瘤活性；本發(fā)明抗血管內(nèi)皮生長因子抗體結(jié)合納米微粒的5-FU，不僅靶向性結(jié)合腫瘤細胞，并且使得抗腫瘤活性大大增強，并且減少了 5-FU 的用量，減少了 5-FU的副作用，增加了病人的耐受性。如下是詳細的說明1、從圖3可知，全人源抗VEGF單克隆抗體可以在血液、心臟、肝、脾、肺和骨中，靜脈給藥后，其放射性迅速達到最大值，然后隨著時間的延長放射性逐步降低；而在胃、肌肉、性腺和小腸中，其放射性在給藥后Ih達到最大，然后在隨著時間的延長而降低；腦中的放射性始終很低，表明全人源抗VEGF單克隆抗體無法通過血腦屏障。從表一可知，抗體靶向納米微粒的抗體活性可以保存80%以上，因此，靶向納米制劑可以在某些部位聚集，從而有效的減小全身毒性。2、5_氟尿嘧啶價格便宜并且對多種腫瘤如消化道腫瘤、乳腺癌、卵巢癌、絨毛膜上皮癌、子宮頸癌、肝癌、膀胱癌、皮膚癌(局部涂抹)外陰白斑(局部涂抹)等均有一定療效。 單獨或與其他藥物聯(lián)合應用于乳腺癌和胃腸道腫瘤手術(shù)輔助治療，也用于一些非手術(shù)惡性腫瘤的姑息治療，尤其是那些胃腸道、乳腺、頭頸部、肝、泌尿系統(tǒng)和胰腺的惡性腫瘤。但是由于5-氟尿嘧啶有著強烈全身毒性，如胃腸道反應與骨髓抑制，影響了其臨床使用價值， 因此我們制備5-氟尿嘧啶聚乳酸靶向納米制劑，洗完可以減小其5-氟尿嘧啶全身毒性。由圖3的結(jié)果可知，靶向納米制劑的緩釋效果為4-5天，并且靶向制劑可以在靶部位富集，緩慢釋放5-氟尿嘧啶，從而達到緩釋的效果。由于其在靶向部位釋放5-氟尿嘧啶，靶向制劑可以大大減少5-氟尿嘧啶的全身毒性。3、制備5-氟尿嘧啶聚乳酸靶向納米制劑，其顯著的優(yōu)點就是可以利用碳二亞胺 (EDC)偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體偶聯(lián)，從而提高5-氟尿嘧啶聚乳酸靶向納米制劑的腫瘤靶向性，減小毒性。從圖4、圖5和圖6的結(jié)果分析可知，全人源單克隆抗體對血管生長因子VEGF的表達有顯著的抑制作用，且在特定組織聚集說明抗體對VEGF有著很好的靶向性。從表二可知，抗體2.靶向納米微粒的抗體活性可以保存80%左右，因此可以顯著的提高偶聯(lián)后的納米制劑對癌細胞的靶向性。4、從表三可知，制備5-氟尿嘧啶聚乳酸靶向納米制劑在相同的5-FU劑量下，其對腫瘤模型老鼠的全身毒性較小，模型老鼠的體重減輕較少，證明靶向制劑有效的降低了 5-FU的全身毒性；而且從抑瘤率結(jié)果來看，相同劑量的靶向制劑比單獨的5-FU的制劑的抑瘤效果要好，5-FU的藥效得到了明顯的提高。5、本發(fā)明采用超聲乳化-溶劑蒸發(fā)法制備納米制劑藥物，操作方法簡單。利用本方法制備的納米制劑藥物，通過光子相關光譜測定其粒徑及分布，結(jié)果見圖7。圖中可見，平均粒徑為280nm，多分散性指數(shù)為0. 07，粒徑分布范圍較窄且少見大粒子，說明采用本方法制得的納米制劑乳業(yè)為穩(wěn)定溶液體系。


圖1為本發(fā)明的制備過程流程示意圖。圖2為靶向納米制劑釋放度曲線。圖3為靜脈給藥后全人源抗VEGF單克隆抗體在小鼠組織中的分布圖4為全人源抗VEGF單克隆抗體對血管生成的影響。(a.正常組、b.模型組、c.低劑量組、d.高劑量組、e.陽性對照)圖5為全人源抗VEGF單克隆抗體對VEGF表達的影響。(a.正常組、b.模型組、 c.低劑量組、d.高劑量組、e.陽性對照)圖6為納米制劑的粒徑分布圖。圖7為靶向納米制劑的粒徑分布圖。
具體實施方式
以下實施例所用材料和儀器設備為實施材料牛血清白蛋白(南京奧多福尼生物科技有限公司)、人血清白蛋白(北京寰宇科技發(fā)展有限公司)、5_氟尿嘧啶原料藥(南京奧多福尼生物科技有限公司)、聚乳酸(Mw = 30000)(山東濟南岱罡科技有限公司)、抗血管內(nèi)皮生長因子抗體(按文獻方法
備 Yu Liu, Dong-jie Yun, Jian-quan Chen, Jian-yang Zhao, Si-guo Liu, Guo-xiang Cheng. Isolation and characterization of human anti-VEGF 165monoclonal antibody with antitumor efficacy from transgenic mice expressing human immunoglobulin loci. Cancer letters, 2009)、碳二亞胺(Sigma 公司)。儀器設備超聲細胞破碎儀(寧波新芝生物科技有限公司)、激光粒度儀(美國布魯克-海文公司)、冷凍離心機(美國Thermo公司)、磁力加熱攪拌器(上海司樂儀器有限公司)、電子天平(Satourius公司)、紫外-可見分光光度計(上海菁華儀器科技有限公司)。本實施例中采用方法參照《藥劑學》第三版(屠錫德、張鈞壽、朱家壁主編)989 999頁；《藥物控釋新劑型》(賈偉、高文遠主編)337 348頁。實施例1抗體靶向納米制劑，其特征在于其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體、聚乳酸納米微粒，偶聯(lián)劑；其中聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為10 1;偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1。偶聯(lián)劑為碳二亞胺。聚乳酸納米微粒由聚乳酸、5-氟尿嘧啶、牛血清白蛋白構(gòu)成，其質(zhì)量比為 4:2:1。所述的抗體靶向納米制劑的平均粒徑小于300納米。一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于下列步驟組成a.配制質(zhì)量體積比為5% 10%的5_氟尿嘧啶水溶液，所得溶液作為內(nèi)水相備用；b.將聚乳酸溶于有機溶劑中，配制成質(zhì)量體積比為5% 6%的溶液作油相，將 2. 5ml的內(nèi)水相在300w，3min超聲條件下滴加油相中，形成乳白色的水/油初乳溶液；c.稱取牛血清白蛋白溶于飽和的5-氟尿嘧啶水溶液中，配制成質(zhì)量體積比為 0. 3% 0. 5%的牛血清白蛋白水溶液作外水相，將初乳溶液在300W，6min超聲分散條件下滴加到外水相中，形成W/0/W復合體系；d.電磁攪拌W/0/W復合體系，使其中的有機溶劑緩慢揮發(fā)至揮發(fā)完全；獲得聚乳酸納米微粒，其由聚乳酸、5-氟尿嘧啶和牛血清白蛋白組成，其質(zhì)量比為4 :2:1;e. 16000轉(zhuǎn)/分的高速離心機分離收集制得的聚乳酸納米微粒，用去離子水洗滌三至四次，冷凍干燥，于-20°C冰箱中保存?zhèn)溆?；f.稱取質(zhì)量比為10 1的聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體，溶于 PH為6. 86的緩沖溶液中，在攪拌狀態(tài)下加入碳二亞胺，其中碳二亞胺與單抗的質(zhì)量比為 2 1，4°C下攪拌池，將所得溶液16000r/min，5min離心分離，超聲分散后用去離子水洗滌三遍，冷凍干燥，所得白色粉狀固體即為抗體靶向納米微粒。實施例2
抗體靶向納米制劑，其特征在于其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體、聚乳酸納米微粒，偶聯(lián)劑；其中聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為8 1;偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1。偶聯(lián)劑為碳二亞胺。聚乳酸納米微粒由聚乳酸、5-氟尿嘧啶、牛血清白蛋白構(gòu)成，其質(zhì)量比為 4:2:1。所述抗體靶向納米制劑的平均粒徑為230-280納米。一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于下列步驟組成a.配制質(zhì)量體積比為5% 10%的5_氟尿嘧啶水溶液，所得溶液作為內(nèi)水相備用；b.將聚乳酸溶于有機溶劑中，配制成質(zhì)量體積比為5% 6%的溶液作油相，將 2. 5ml的內(nèi)水相在300w，3min超聲條件下滴加油相中，形成乳白色的水/油初乳溶液；c.稱取牛血清白蛋白溶于飽和的5-氟尿嘧啶水溶液中，配制成質(zhì)量體積比為 0. 3% 0. 5%的牛血清白蛋白水溶液作外水相，將初乳溶液在300W，6min超聲分散條件下滴加到外水相中，形成W/0/W復合體系；d.電磁攪拌W/0/W復合體系，使其中的有機溶劑緩慢揮發(fā)至揮發(fā)完全；獲得聚乳酸納米微粒，其由聚乳酸、5-氟尿嘧啶和牛血清白蛋白組成，其質(zhì)量比為4 :2:1;e. 16000轉(zhuǎn)/分的高速離心機分離收集制得的聚乳酸納米微粒，用去離子水洗滌三至四次，冷凍干燥，于-20°C冰箱中保存?zhèn)溆?；f.稱取質(zhì)量比為8 1的聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體，溶于pH為 6. 86的緩沖溶液中，在攪拌狀態(tài)下加入碳亞胺，其中碳二亞胺與單抗的質(zhì)量比為2 1， 4°C下攪拌池，將所得溶液16000r/min，5min離心分離，超聲分散后用去離子水洗滌三遍， 冷凍干燥，所得白色粉狀固體即為抗體靶向納米微粒。實施例3抗體靶向納米制劑，其特征在于其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體、聚乳酸納米微粒，偶聯(lián)劑；其中聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為8 1;偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1。偶聯(lián)劑為碳二亞胺。聚乳酸納米微粒由聚乳酸、5-氟尿嘧啶、人血清白蛋白構(gòu)成，其質(zhì)量比為 4:2:1。所述抗體靶向納米制劑的平均粒徑為230-280納米。一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于下列步驟組成a.配制質(zhì)量體積比為5% 10%的5_氟尿嘧啶水溶液，所得溶液作為內(nèi)水相備用；b.將聚乳酸溶于有機溶劑中，配制成質(zhì)量體積比為5% 6%的溶液作油相，將 2. 5ml的內(nèi)水相在300w，3min超聲條件下滴加油相中，形成乳白色的水/油初乳溶液；c.稱取人血清白蛋白溶于飽和的5-氟尿嘧啶水溶液中，配制成質(zhì)量體積比為 0. 3% 0. 5%的人血清白蛋白水溶液作外水相，將初乳溶液在300W，6min超聲分散條件下滴加到外水相中，形成W/0/W復合體系；
d.電磁攪拌W/0/W復合體系，使其中的有機溶劑緩慢揮發(fā)至揮發(fā)完全；獲得聚乳酸納米微粒，其由聚乳酸、5-氟尿嘧啶和牛血清白蛋白組成，其質(zhì)量比為4 :2:1;e. 16000轉(zhuǎn)/分的高速離心機分離收集制得的聚乳酸納米微粒，用去離子水洗滌三至四次，冷凍干燥，于-20°C冰箱中保存?zhèn)溆?；f.稱取質(zhì)量比為8 1的聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體，溶于pH為 6. 86的緩沖溶液中，在攪拌狀態(tài)下加入碳二亞胺，其中碳二亞胺與單抗的質(zhì)量比為2 1， 4°C下攪拌池，將所得溶液16000r/min，5min離心分離，超聲分散后用去離子水洗滌三遍， 冷凍干燥，所得白色粉狀固體即為抗體靶向納米微粒。實施例4抗體靶向納米制劑，其特征在于其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體、聚乳酸納米微粒，偶聯(lián)劑；其中聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為10 1;偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1。偶聯(lián)劑為碳二亞胺。聚乳酸納米微粒由聚乳酸、5-氟尿嘧啶、人血清白蛋白構(gòu)成，其質(zhì)量比為 4:2:1。所述的抗體靶向納米制劑的平均粒徑小于300納米。一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于下列步驟組成a.配制質(zhì)量體積比為5% 10%的5_氟尿嘧啶水溶液，所得溶液作為內(nèi)水相備用；b.將聚乳酸溶于有機溶劑中，配制成質(zhì)量體積比為5% 6%的溶液作油相，將 2. 5ml的內(nèi)水相在300w，3min超聲條件下滴加油相中，形成乳白色的水/油初乳溶液；C.稱取人血清白蛋白溶于飽和的5-氟尿嘧啶水溶液中，配制成質(zhì)量體積比為 0. 3% 0. 5%的牛血清白蛋白水溶液作外水相，將初乳溶液在300W，6min超聲分散條件下滴加到外水相中，形成W/0/W復合體系；d.電磁攪拌W/0/W復合體系，使其中的有機溶劑緩慢揮發(fā)至揮發(fā)完全；獲得聚乳酸納米微粒，其由聚乳酸、5-氟尿嘧啶和人血清白蛋白組成，其質(zhì)量比為4 :2:1;e. 16000轉(zhuǎn)/分的高速離心機分離收集制得的聚乳酸納米微粒，用去離子水洗滌三至四次，冷凍干燥，于-20°C冰箱中保存?zhèn)溆?；f.稱取質(zhì)量比為10 1的聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體，溶于 pH為6. 86的緩沖溶液中，在攪拌狀態(tài)下加入碳二亞胺，其中碳二亞胺與單抗的質(zhì)量比為 2 1，4°C下攪拌池，將所得溶液16000r/min，5min離心分離，超聲分散后用去離子水洗滌三遍，冷凍干燥，所得白色粉狀固體即為抗體靶向納米微粒。實施例5a.用Elisa檢測法檢測抗體抗體2.抗體靶向納米微粒的抗體活性1.使用VEGF蛋白包被96孔板。2.每孔加lOOul，1 % BSA 一緩沖溶液，4°C封閉M小時，洗滌2次，吸凈殘留液體。3.稀釋緩沖液將單克隆抗體和抗體靶向納米微粒按單克隆抗體量梯度稀釋，每孔加入lOOul，37°C孵育2小時。4.洗滌5次，加入二抗(1 2000稀釋)100ul每孔，37°C孵育2小時。
5.洗滌5次，加入底物液IOOul每孔，37°C孵育0.5小時，加終止液。6.酶標儀檢測492nm波長處OD值，以單克隆抗體和抗體靶向納米微粒的吸光度值對應單克隆抗體濃度作圖，結(jié)果見表1 ；表一
權(quán)利要求
1.抗體靶向納米制劑，其特征在于其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體、聚乳酸納米微粒， 偶聯(lián)劑；其中聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為10 1 8 1;偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體靶向納米制劑，其特征在于偶聯(lián)劑為碳二亞胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體靶向納米制劑，其特征在于聚乳酸納米微粒由聚乳酸、 5-氟尿嘧啶、血清白蛋白構(gòu)成，其質(zhì)量比為4 2 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體靶向納米制劑，其特征在于所述的血清白蛋白為牛血清白蛋白或人血清白蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體靶向納米制劑，其特征在于所述的抗體靶向納米制劑的平均粒徑小于300納米。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述抗體靶向納米制劑，其特征在于所述抗體靶向納米制劑的平均粒徑為230-280納米。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗體靶向納米制劑，其特征在于所述抗體靶向納米制劑為凍干粉制劑。
8.一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于下列步驟組成a.按聚乳酸、5-氟尿嘧啶、血清白蛋白的質(zhì)量比為4 2 1稱取原料；配制5-氟尿嘧啶水溶液，作為內(nèi)水相備用；b.稱取聚乳酸溶于有機溶劑中，作為油相，將內(nèi)水相在300w，3min超聲條件下滴加油相中，形成乳白色的水/油初乳溶液；c.稱取血清白蛋白溶于飽和的5-氟尿嘧啶水溶液中，配制成牛血清白蛋白水溶液作外水相，將水/油初乳溶液在300W，6min超聲分散條件下滴加到外水相中，形成W/0/W復合體系；d.電磁攪拌W/0/W復合體系，使其中的有機溶劑緩慢揮發(fā)至揮發(fā)完全；獲得聚乳酸納米微粒；e.稱取質(zhì)量比為10 1 8 1的聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體，溶于 PH為6. 86的緩沖溶液中，在攪拌狀態(tài)下加入碳二亞胺，其中偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2 1，4°C下攪拌池，制得抗體靶向納米微粒。
9.根據(jù)權(quán)利8所述的一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于步驟b和d中所述的有機溶劑為丙酮。
10.根據(jù)權(quán)利8所述的一種抗體靶向納米制劑的制備方法，其特征在于步驟e中偶聯(lián)劑為碳二亞胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗體靶向納米制劑的制備方法?？贵w靶向納米制劑，其特征在于其包括抗血管內(nèi)皮生長因子抗體、聚乳酸納米微粒，偶聯(lián)劑；其中聚乳酸納米微粒與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為10∶1～8∶1；偶聯(lián)劑與抗血管內(nèi)皮生長因子抗體的質(zhì)量比為2∶1。本發(fā)明抗血管內(nèi)皮生長因子抗體結(jié)合納米微粒的5-FU，不僅靶向性結(jié)合腫瘤細胞，并且使得抗腫瘤活性大大增強，并且減少了5-FU的用量，減少了5-FU的副作用，增加了病人的耐受性。
文檔編號A61K9/19GK102283810SQ20111013827
公開日2011年12月21日 申請日期2011年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月26日
發(fā)明者劉煜, 王宗凱, 石晨陽 申請人:中國藥科大學