專(zhuān)利名稱(chēng)：：中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：益心舒中藥制劑是以人參、丹參等七味藥組成，具有益氣復(fù)脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，用于氣陰兩虛，心悸脈結(jié)代，胸悶不舒、胸痛及冠心病心絞痛見(jiàn)有上述癥狀者，目前臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)上，才能不斷的更新發(fā)展，為了更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，所以必須從源頭加以控制，才能更好的保證用藥的安全性。如今，在中藥制劑作為最具發(fā)展?jié)摿Φ乃幬镔Y源已經(jīng)被全世界所認(rèn)知的情況下，我國(guó)政府已經(jīng)建立了一系列廣泛的政策來(lái)應(yīng)對(duì)傳統(tǒng)中藥制劑標(biāo)準(zhǔn)化，現(xiàn)代化的要求。其中最重要的就是如何控制中藥制劑的質(zhì)量。目前我們最常用的方法就是選擇中藥材的主要活性成分或其指標(biāo)性成份，對(duì)這些成分的鑒別和含量測(cè)定以達(dá)到控制這些中藥制劑質(zhì)量的目的。但是，這種只針對(duì)中藥及中藥制劑指標(biāo)性成分進(jìn)行控制的方法并不能科學(xué)而全面的確保中藥的藥效。丹參有較好的活血化瘀作用,能增加冠狀動(dòng)脈血流量，降低心肌興奮性，對(duì)急性心肌缺血缺氧所致的心肌損傷具有明顯保護(hù)作用,并具有改善微循環(huán)、抗血小板的聚集和血栓形成作用。而益心舒中藥制劑是以人參、麥冬、五味子、丹參等七味藥經(jīng)加工制成的制劑，臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。所以在益心舒制劑中丹參的質(zhì)量直接關(guān)系到該制劑的療效，對(duì)于丹參的質(zhì)量控制方法的提高從而確保益心舒中藥制劑的療效顯得十分必要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供了檢測(cè)的指標(biāo)、檢測(cè)的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制益心舒中藥制劑的質(zhì)量，為臨床提供一種療效確切的益心舒中藥制劑，保證用藥的安全和療效，同時(shí)能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識(shí)益心舒中藥制劑的品質(zhì)。本發(fā)明涉及益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，它包括丹參的產(chǎn)地、采集、加工、鑒別、含測(cè)項(xiàng)目作為該制劑中丹參質(zhì)量控制的指標(biāo)。上述的益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，采用以下的部分或全部(1)丹參的產(chǎn)地為安徽、山西、河北、四川、江蘇、湖北、遼寧、浙江、河南、江西、貴州、江蘇等地。(2)丹參的采集時(shí)間為每年的10次年5月份采挖。(3)丹參的采集加工方法為挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，晾干。(4)丹參的鑒別方法為方法l:采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠Gi^M或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.530Pl之間任一體積，以丹參對(duì)照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對(duì)照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮方法，展開(kāi)劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；方法2:采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類(lèi)型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動(dòng)相，以丹參對(duì)照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對(duì)照品，檢測(cè)波長(zhǎng)在200600nm范圍內(nèi)；(6)丹參含量采用以下方法方法1.*采用高效液相色譜法測(cè)定本品中丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類(lèi)型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)在200600nm范圍內(nèi)；方法2:采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠6^54或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.530W之間任一體積，以丹參對(duì)照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對(duì)照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開(kāi)劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己垸的一種或一種以上試氣熏后再置紫外光燈下或噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10%磷鉬酸乙醇溶液顯色的方法，斑點(diǎn)在薄層掃描儀上采用單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，掃描波長(zhǎng)為400750nm;上述的益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，采用以下方法(1)丹參的產(chǎn)地為四川、山東、河南、江蘇、安徽地區(qū)。(2)丹參的采集時(shí)間為每年的11月上旬至次年3上旬月份采挖。(3)丹參的采集加工方法為挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，切片，晾干，放入鍋內(nèi)，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹參的鑒別方法為采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點(diǎn)樣量為0.5W30W之間某一體積，以丹參對(duì)照藥材、丹參素、丹酚酸B、丹參酮IIA中全部或部分品種作為對(duì)照品，樣品前處理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚單獨(dú)使用或者是按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┤芙獾姆椒?，展開(kāi)劑為苯、甲苯、醋酸乙酯，檢視條件為日光下檢視。(5)丹參含量采用以下方法采用高效液相色譜法測(cè)定本品中丹參酮nA或/和丹酚酸B的含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類(lèi)型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)在200600nm范圍內(nèi)；上述的益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，采用以下方法(1)丹參的產(chǎn)地為四川、山東、河南地區(qū)。(2)丹參的采集期為每年ll月份上旬。(3)丹參的釆集加工方法為挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，切片，晾干，放入鍋內(nèi)，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹參的鑒別方法為取本品內(nèi)容物2g，加乙醚20ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取丹參酮IIA對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述三種溶液各5ii1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑點(diǎn)。(5)丹參的含測(cè)方法為采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定丹參酮IU和丹酚酸B的含量。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-乙腈-O.5%甲酸水溶液(28:8:64);流速lml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):286mn。理論踏板數(shù)以丹酚酸B峰計(jì)算不低于2000。對(duì)照品溶液制備精密稱(chēng)取丹酚酸B對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml含0.14mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物lg，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入75。/。甲醇50ml。稱(chēng)定重量，加熱回流l小時(shí)，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的、更進(jìn)一步的控制一種益心舒中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全性，使用本發(fā)明后，使生產(chǎn)該產(chǎn)品的單位或檢測(cè)機(jī)構(gòu)從源頭原料丹參來(lái)控制，確保該益心舒的療效，能夠保證藥物制成品的質(zhì)量；我們?cè)谶M(jìn)行試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)為了達(dá)到益心舒中藥制劑的確切療效，就必須從源頭開(kāi)始控制，包括丹參的產(chǎn)地、采集、加工、鑒別、含測(cè)項(xiàng)目。這樣更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)，讓消費(fèi)者全面認(rèn)識(shí)產(chǎn)品品質(zhì)、放心使用這類(lèi)藥品。對(duì)于丹參高效液相色譜的研究也漸有報(bào)道，但都是單一研究脂溶性成分或水溶性成分，對(duì)脂溶性和水溶性同時(shí)研究的高效液相色譜法還未見(jiàn)報(bào)道。根據(jù)在05版《藥典》記載，HPLC法測(cè)定丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的含量是分別制樣、分別采用不同的測(cè)定條件，在兩張色譜圖上反映出丹參酮IIA及丹酚酸B的含量。為了簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作、更直觀的反映出丹參酮nA及丹酚酸B的含量、更加全面有效地控制藥材的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)用同一種提取溶劑，在相同的測(cè)定條件下，在一張色譜圖上同時(shí)反映丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的含量。本發(fā)明選取脂溶性代表成分丹參酮IIA和水溶性代表成分丹酚酸B，建立同一的HPLC測(cè)定方法，為簡(jiǎn)便而全面地控制丹參藥材的質(zhì)量提供更為有效的分析方法。為證明利用本發(fā)明提供的丹參質(zhì)量控制方法能更好的控制益心舒中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，得到的藥物具有有效的效果，申請(qǐng)人進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)；試驗(yàn)例1益心舒中藥制劑中丹參產(chǎn)地的考察本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)相同采集時(shí)期以及相同加工方法的四川丹參和安徽丹參中的丹參酮IIA和丹酚酸B的含量測(cè)定來(lái)考察不同產(chǎn)地的丹參的品質(zhì)。l.l儀器與材料高效液相色譜儀(日本島津公司)，丹參酮IIA，丹酚酸B(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)，甲醇(上海正興化工一廠,色譜純)，乙腈(上海正興化工一廠，色譜純)，其他試劑為分析純。丹參(采于四川和安徽)。1.2試驗(yàn)方法1.2.1色譜條件色譜柱為L(zhǎng)ichrosorbC18。流動(dòng)相A泵甲醇乙腈(3:1):B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時(shí)進(jìn)行梯度洗脫，洗脫時(shí)間為60min。流速為1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)丹參酮IIA為270nm，丹酚酸B為286nm。1.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取丹參酮IIA對(duì)照品O.lmh，丹酚酸B對(duì)照品1.52mg,同時(shí)置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對(duì)照品溶液，根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)的需要稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。1.2.3供試品溶液的制備取丹參粉末(過(guò)3號(hào)篩)約O.3g，精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min,超聲頻率為30kHz，功率為30W,取續(xù)濾液，即得。1.2.4測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。1.3結(jié)果和討論1.3.1樣品測(cè)定結(jié)果不同產(chǎn)地丹參藥材樣品，單位(％),結(jié)果見(jiàn)表l一l樣品_丹參酮IIA_丹酚酸B四川丹參0.27705.6122山東丹參0.25815.7270河南丹參0.27215.5662湖北丹參0.20573.98531.3.2討論研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地丹參中的丹參酮IIA和丹酚酸B的成分含量差異較大，說(shuō)明不同產(chǎn)地藥材的種內(nèi)變異造成藥材品質(zhì)的差異。其中以四川、山東、河南的丹參為佳，其中四川丹參中丹參酮IIA的含量最高，而山東丹參中丹酚酸B的含量最高，而以河南丹參中兩者中的總含量最高。故綜合評(píng)價(jià)其品質(zhì)優(yōu)良。試驗(yàn)例2益心舒中藥制劑中丹參采集時(shí)期的考察本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同采集期四川丹參中丹酚酸B和丹參酮IIA的含量測(cè)定來(lái)考察的丹參品質(zhì)。2.1儀器與材料高效液相色譜儀(日本島津公司)，丹參酮IIA，丹酚酸B(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)，甲醇(上海正興化工一廠，色譜純)，乙腈(上海正興化工一廠，色譜純)，其他試劑為分析純。丹參采集期為ll月、12月、次年3月2.2試驗(yàn)方法2.2.1色譜條件色譜柱為L(zhǎng)ichrosorbC18。流動(dòng)相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時(shí)進(jìn)行梯度洗脫,洗脫時(shí)間為60min。流速為1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)丹參酮IIA為270nm，丹酚酸B為286nm。2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取丹參酮IIA對(duì)照品O.lmh，丹酚酸B對(duì)照品1.52mg，同時(shí)置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對(duì)照品溶液,根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)的需要稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。2.2.3供試品溶液的制備取丹參粉末(過(guò)3號(hào)篩)約O.3g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min，超聲頻率為30kHz,功率為30W，取續(xù)濾液，即得。2.2.4測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。2.3結(jié)果及討論2.3.1結(jié)果不同采集期丹參藥材樣品，單位(％),結(jié)果見(jiàn)表2—1樣品丹參酮IIA丹酚酸B11月上旬0.28705.712212月上旬0.26855.4272次年3月0.21214.9662次年4月0.18573.98512.3.2討論研究結(jié)果表明，不同采集期丹參中的丹參酮IIA和丹酚酸B成分含量差異較大，說(shuō)明不同采集期采集的藥材的種內(nèi)變異造成藥材品質(zhì)的差異。其中以ll月份至次年3月份變化較小，并且含量呈逐漸減少的狀況，但是減少量并不明顯，同時(shí)以ll月份采集的含量最高為佳。試驗(yàn)例3益心舒中藥制劑中丹參的加工方法考察本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)河南丹參不同的加工方法，依其丹酚酸B和參酮IIA的含量為指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)麥冬加工方法的考察。3.l儀器與材料高效液相色譜儀(日本島津公司)，丹酚酸B(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)，甲醇(上海正興化工一廠,色譜純)，乙腈(上海正興化工一廠，色譜純)，其他試劑為分析純。樣品A:挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，切片，晾干，放入鍋內(nèi)，以文火炒至有焦斑即可。樣品B:挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，切片，曬干即可。3.2試驗(yàn)方法3.2.1色譜條件色譜柱為L(zhǎng)ichrosorbC18。流動(dòng)相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時(shí)進(jìn)行梯度洗脫，洗脫時(shí)間為60min。流速為1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)丹參酮IIA為270nm，丹酚酸B為286nm。3.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取丹參酮IIA對(duì)照品O.lmh,丹酚酸B對(duì)照品1.52mg，同時(shí)置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對(duì)照品溶液，根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)的需要稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。3.2.3供試品溶液的制備取丹參粉末(過(guò)3號(hào)篩)約O.3g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min，超聲頻率為30kHz，功率為30W，取續(xù)濾液，即得。3.2.4測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。3.3結(jié)果及討論3.3.1結(jié)果不同加工方法丹參藥材樣品，單位(％)，結(jié)果見(jiàn)表3—1樣品丹酚酸B丹參酮IIA樣品A0.27465.5634樣品B0.20144.38073.3.2討論研究結(jié)果表明，依照樣品A采集加工的丹參以及依照樣品B采集加工的丹參中的丹酚酸B和丹參酮IIA成分含量差異較大，說(shuō)明不同的樣品加工方法對(duì)丹參中的成分影響較大，其中樣品A的加工方法為佳?？梢员ＷC丹參中有效成分的含量，所以以樣品A加工方法的丹參為佳。試驗(yàn)例4益心舒中藥制劑中丹參鑒別的穩(wěn)定性考察本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)5批丹參進(jìn)行鑒別方法學(xué)考察，以確定該方法的穩(wěn)定性。4.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備4.1.1取丹參5g，加乙醚20ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。4.1.2取丹參對(duì)照藥材lg,加乙醚20ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解，制成對(duì)照藥材溶液；再取丹參酮IIA對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。4.2鑒別吸取上述三種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑點(diǎn)。4.3結(jié)果供試品與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；同時(shí)5批樣品均比較穩(wěn)定，說(shuō)明此方法可以作為丹參藥材的鑒別方法來(lái)進(jìn)行丹參藥材的鑒別。試驗(yàn)例5益心舒中藥制劑中丹參含測(cè)的方法學(xué)考察采用高效液相色譜法，以梯度洗脫的方式，60min內(nèi)在同一譜中完成脂溶性成分丹參酮IIA和水溶性成分丹酚酸B的含量測(cè)定。5.1儀器高效液相色譜儀(日本島津公司，型號(hào)LC220AB)，島津Solution液相工作站。5.2色譜條件色譜柱為L(zhǎng)ichrosorbC18。流動(dòng)相A泵甲醇乙腈(3:1)B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時(shí)進(jìn)行梯度洗脫,洗脫時(shí)間為60min，洗脫程序見(jiàn)表5.1。流速為lml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)丹參酮IIA為270nm,丹酚酸B為286nm.表5.1洗脫程序洗脫時(shí)間(min)A泵(y。)B泵(呢)020356516<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>5.3測(cè)定法5.3.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取丹參酮IIA對(duì)照品O.10mg，丹酚酸B對(duì)照品1.52mg,同時(shí)置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對(duì)照品溶液，根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)的需要稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。5.3.2供試品溶液的制備取丹參粉末(過(guò)3號(hào)篩)約0.3g,精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min,超聲頻率為30kHz,功率為30W,取續(xù)濾液，即得。5.4線性關(guān)系5.4.1丹參酮IIA的線性關(guān)系考察:從上述配好的高濃度對(duì)照品溶液中精密移取O.3，0.4，0.5,0.6，0.7ml配成濃度分別為O.006，0.008，0.010，0.012，0.014mg/ml的溶液，分別取樣20ul進(jìn)樣，按上文中色譜條件測(cè)定，以峰面積為橫坐標(biāo)，以濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為尸lX10、+96922，r=0.999,丹參酮IIA在濃度為O.0060.014mg/ml范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。5.4.2丹酚酸B的線性關(guān)系考察:從上述配好的高濃度對(duì)照品溶液中精密移取0.3，0.4，0.5，0.6,0.7ml配成濃度分別為O.0912，0.1216，0.1520，0.1824，0.2128mg/ml的溶液，分別取樣20ul進(jìn)樣,按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為/=3X10V—83361，_r=0.9998，丹酚酸B在O.09120.2128mg/ml范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。5.5精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液20ul，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，丹參酮IIA:RSD=0.579&，丹酚酸B:RSD=0.43%。兩份樣品的RSD值均小于2y。，表明此儀器精密度良好。5.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液20ul，按上述色譜條件，分別于0,2,4，6，8，10，12，24h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，24h內(nèi)丹參酮IIA峰面積基本不變，RSD為1.95Q/。;丹酚酸B峰面積基本不變，RSD為l.73%,說(shuō)明樣品閉光保存在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。5.7重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一樣品6份，按供試品的提取方法制備，精密吸取上述6份溶液各20u1，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果丹參酮IIA的RSD值為O.997%，丹酚酸B的RSD值為O.585%，表明試驗(yàn)方法重現(xiàn)性良好。5.8加樣回收率考察準(zhǔn)確稱(chēng)取同一丹參樣品6份，分別加入丹參酮IIA、丹酚酸B對(duì)照品，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。丹參酮IIA回收率為99.41%,RSD為O.92%;丹酚酸B回收率為99.30%，RSD為O.89%。5.9樣品測(cè)定取丹參藥材供試品的制備方法處理后，進(jìn)樣分析測(cè)定含量。結(jié)果用藥典法測(cè)得的丹參酮IIA和丹酚酸B分別為O.227%和5.612%,而用改良法測(cè)得上述兩種成分分別為O.239%和5.603%。5.IO結(jié)果和討論由于丹參酮IIA和丹酚酸B存在于同種中藥中，且兩種成分相互間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，所以在標(biāo)準(zhǔn)品的制備過(guò)程中筆者將丹參酮IIA和丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品放入同一容量瓶中進(jìn)行配制，按方法學(xué)考察方法對(duì)各考察指標(biāo)測(cè)定，這樣較分別配制丹參酮IIA和丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行方法學(xué)考察更加簡(jiǎn)便。試驗(yàn)例6不同產(chǎn)地的丹參在益心舒中藥制劑中丹酚酸B的影響本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)四川丹參、山東丹參、江蘇丹參、安徽丹參在益心舒中藥制劑中丹參酮IIA和丹酚酸B的含量為指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)丹參對(duì)益心舒制劑的影響。6.l儀器與材料高效液相色譜儀(日本島津公司)，丹參酮IIA，丹酚酸B(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)，甲醇(上海正興化工一廠，色譜純)，乙腈(上海正興化工一廠，色譜純)，其他試劑為分析純。四川丹參的益心舒制劑(川制)、山東丹參的益心舒制劑(山制)、江蘇丹參的益心舒制劑(江制)、安徽丹參的益心舒制劑(安制)。6.2試驗(yàn)方法6.2.1色譜條件色譜柱為L(zhǎng)ichrosorbC18。流動(dòng)相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時(shí)進(jìn)行梯度洗脫，洗脫時(shí)間為60min。流速為lml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)丹參酮IIA為270nm，丹酚酸B為286nm。6.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取丹參酮IIA對(duì)照品O.lmh，丹酚酸B對(duì)照品1.52mg，同時(shí)置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對(duì)照品溶液，根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)的需要稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。6.2.3供試品溶液的制備取丹參粉末(過(guò)3號(hào)篩)約O.3g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min，超聲頻率為30kHz，功率為30W，取續(xù)濾液，即得。6.2.4測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。6.3結(jié)果及討論2.3.1結(jié)果不同產(chǎn)地丹參制劑的含量比較，單位(mg/g)，結(jié)果見(jiàn)表2—1樣品丹參酮IIA丹酚酸B<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>2.3.2討論研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地丹參的益心舒制劑中的丹參酮IIA和丹酚酸B成分含量差異較大，說(shuō)明不同產(chǎn)地丹參對(duì)益心舒制劑有較大的影響，其中，以四川和山東的丹參藥材較好。7具體實(shí)施例益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法丹參的產(chǎn)地為四川、山東、河南地區(qū)。丹參的采集期為每年ll月份上旬。丹參的采集加工方法為挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，切片，晾干，放入鍋內(nèi)，以文火炒至有焦斑即可。丹參的鑒別方法為取本品內(nèi)容物2g，加乙醚20ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取丹參酮IIA對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述三種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑點(diǎn)。益心舒中藥制劑中丹參的含測(cè)方法為采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定丹參酮IIA和丹酚酸B的含量色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-乙腈-0.5%甲酸水溶液(28:8:64);流速lml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):286nm。理論踏板數(shù)以丹酚酸B峰計(jì)算不低于2000。對(duì)照品溶液制備精密稱(chēng)取丹酚酸B對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml含0.14mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物lg，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入75。/o甲醇50ml。稱(chēng)定重量，加熱回流l小時(shí)，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品丹酚酸B含量不得少于l.Omg/g及參酮IIA不得少于0.3mg/g。權(quán)利要求1、益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，其特征在于它是將丹參的產(chǎn)地、采集、加工、鑒別、含測(cè)項(xiàng)目一項(xiàng)或多項(xiàng)作為該制劑中丹參質(zhì)量控制的指標(biāo)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，其特征在于采用以下方法的部分或全部(1)丹參的產(chǎn)地為安徽、山西、河北、四川、江蘇、湖北、遼寧、浙江、河南、江西、貴州、江蘇等地。(2)丹參的采集時(shí)間為每年的10次年5月份采挖。(3)丹參的采集加工方法為挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，晾干。(4)丹參的鑒別方法為-方法l:采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF2^或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.530W之間任一體積，以丹參對(duì)照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對(duì)照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮方法，展開(kāi)劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；方法2:采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類(lèi)型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動(dòng)相，以丹參對(duì)照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對(duì)照品，檢測(cè)波長(zhǎng)在200600nm范圍內(nèi)；(6)丹參含量采用以下方法方法l:采用高效液相色譜法測(cè)定本品中丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類(lèi)型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)在200600nm范圍內(nèi)；方法2:采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠G&54或硅膠H為薄層板，點(diǎn)樣量為0.530W之間任一體積，以丹參對(duì)照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對(duì)照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開(kāi)劑可以為正己垸、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，置紫外光燈下或采用氨氣熏后再置紫外光燈下或噴以變色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸氣或10%磷鉬酸乙醇溶液顯色的方法，斑點(diǎn)在薄層掃描儀上采用單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，掃描波長(zhǎng)為400750nm;3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，其特征在于(1)丹參的產(chǎn)地為四川、山東、河南、江蘇、安徽地區(qū)。(2)丹參的采集時(shí)間為每年的11月上旬至次年3月份上旬采挖。(3)丹參的采集加工方法為挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，切片，晾干，放入鍋內(nèi)，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹參的鑒別方法為采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點(diǎn)樣量為0.5W30lil之間某一體積，以丹參對(duì)照藥材、丹參素、丹酚酸B、丹參酮IIA中全部或部分品種作為對(duì)照品，樣品前處理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚單獨(dú)使用或者是按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì),然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┤芙獾姆椒?，展開(kāi)劑為苯、甲苯、醋酸乙酯，檢視條件為日光下檢視。(5)丹參含量采用以下方法采用高效液相色譜法測(cè)定本品中丹參酮IIA或/和丹酚酸B的含量，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類(lèi)型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)在200600nm范圍內(nèi)；4、根據(jù)權(quán)利要求l3所述的益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，其特征在于(1)丹參的產(chǎn)地為四川、山東、河南地區(qū)。(2)丹參的采集期為每年ll月份上旬。(3)丹參的采集加工方法為挖取的鮮丹參，除去泥土、洗凈，切片，晾干，放入鍋內(nèi)，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹參的鑒別方法為取本品內(nèi)容物2g，加乙醚20ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取丹參酮IIA對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述三種溶液各5it1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑占。j、、、o(5)丹參的含測(cè)方法為采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定丹參酮IIA和丹酚酸B的含量。色譜條件色譜柱為L(zhǎng)ichrosorbC18。流動(dòng)相A泵甲醇乙腈(3:1)B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時(shí)進(jìn)行梯度洗脫，洗脫時(shí)間為60min。流速為1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)丹參酮IIA為270nm，丹酚酸B為286nm。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取丹參酮IIA對(duì)照品O.lmh，丹酚酸B對(duì)照品1.52mg，同時(shí)置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對(duì)照品溶液，根據(jù)以下實(shí)驗(yàn)的需要稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備取丹參粉末(過(guò)3號(hào)篩)約O.3g，精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min,超聲頻率為30kHz,功率為30W，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。全文摘要本發(fā)明是一種中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
。益心舒中藥制劑是以人參、黃芪、丹參、麥冬、五味子等七味藥組成，具有益氣復(fù)脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，目前臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。本發(fā)明提供了一種益心舒中藥制劑中丹參的質(zhì)量控制方法，方法的提供直接向有關(guān)的生產(chǎn)益心舒制劑中丹參的品質(zhì)提供了檢測(cè)的指標(biāo)、檢測(cè)的手段、技術(shù)方法該等等；以便更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性和療效，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，為消費(fèi)者提供一種品質(zhì)優(yōu)良的產(chǎn)品。文檔編號(hào)A61K36/8968GK101637566SQ20091010267公開(kāi)日2010年2月3日申請(qǐng)日期2009年7月17日優(yōu)先權(quán)日2009年7月17日發(fā)明者張觀福申請(qǐng)人:貴州信邦制藥股份有限公司