專利名稱：人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液及其制備方法
人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液及其制備方法
本發(fā)明涉及注射液的制備方法，尤其涉及一種人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化 注射液及其制備方法。肝纖維化是繼發(fā)于各種原因引起的肝臟炎癥或損傷后組織修復過程的代償反 應，是細胞外基質(zhì)在肝內(nèi)過渡沉積的病理改變的結果，也是慢性肝病發(fā)展為肝硬化的重 要中間環(huán)節(jié)。目前這個階段的肝臟病變是可逆轉(zhuǎn)的，但若沒有得到及時有效的治療，則 最終往往導致肝硬化、上消化道出血、肝腹水、肝癌和肝功能衰竭等，是引起人類死亡 的主要原因之一，因而逆轉(zhuǎn)或延緩肝纖維化過程是肝病治療的一個重要環(huán)節(jié)。引起肝纖 維化的病因很多，在國內(nèi)以病毒性肝炎，尤其是慢性乙型和丙型肝炎所致的肝纖維化最 為常見。在我國，乙型肝炎病毒表面抗原的檢出率約為10%，其中慢性無癥狀乙型肝炎 病毒感染者或慢性無癥狀HBV攜帶者就超過1.3億，現(xiàn)慢性乙肝患者約3000萬人。慢 性感染患者中40%可能發(fā)生肝硬化或者肝癌，是正常人群的100-200倍。在國外，特別 是北美、西歐則以酒精性肝纖維化為最多。此外某些遺傳和代謝疾病、化學毒物或藥物 損傷、血吸蟲感染、各種原因?qū)е碌母闻K淤血、膽汁淤積、自身免疫性肝病都可以出現(xiàn) 肝纖維化。因此，肝纖維化的治療成為現(xiàn)今人們關注的焦點。如何有效地防治肝纖維化， 阻斷其進展，對改善慢性肝病的預后有重要的意義，不僅為國家節(jié)省大量的資源，還促 進了社會更加和諧發(fā)展。然而，現(xiàn)代醫(yī)學并無治療肝纖維化的特異性藥物，多采用休 息、加強營養(yǎng)、補充維生素等對癥治療方式，嚴重者需被迫停止用藥，以免加重肝纖維 化。盡管中醫(yī)藥對肝纖維化有一定的促再生和修復作用，但效果仍不是十分理想。目前也有利用干細胞移植的方法治療肝纖維化，但多采用骨髓間充質(zhì)干細胞， 細胞來源有限。且輸注前細胞處理過程比較簡單，不能保證使用過程中細胞的穩(wěn)定性， 不能較長時間保持細胞活性，因此不適于遠距離運輸。且間充質(zhì)干細胞表面表達多種黏 附分子，主要參與細胞_細胞，細胞-基質(zhì)之間的特異性粘連過程，影響細胞遷移。因 此，在干細胞輸注過程中極易促使細胞聚集成團，形成細胞栓，增加了間充質(zhì)干細胞臨 床治療的危險性。對此問題，目前尚無極好的解決辦法。本發(fā)明采用人臍帶組織分離出來的間充質(zhì)干細胞，加入肝素鈣、人血白蛋白、 勃脈力A，制備成注射液形式。穩(wěn)定性高，較好的解決了細胞聚集成團的問題，增加了 注射液保存及運輸過程穩(wěn)定性、提高了臨床使用安全性，進而更好的保持了注射液的療 效，為臨床使用干細胞開辟了新的道路。本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝 纖維化注射液及其制備方法，其具有穩(wěn)定性高、療效好、安全性高、便于儲存和運輸，適應臨床大規(guī)模使用，應用前景廣闊的特點，本發(fā)明可為肝纖維化患者帶來福音，為臨 床上干細胞的使用開辟了新的道路。
本發(fā)明提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液，由10%-50%人血白蛋 白原液、49.5% 89.50%的勃脈力A液和0.5%肝素鈣組成，其中所述人血白蛋白原液的濃 度為10%，Iml注射液中含有人臍帶間充質(zhì)干細胞6X 105-7X IO5個。肝素鈣是一種含有 多糖類化合物，并具有防止細胞聚集成團功能的制劑。所述注射液由20%人血白蛋白原液和79.5%勃脈力A液以及0.5%肝素鈣組成， 其中該注射液中的人臍帶間充質(zhì)干細胞的濃度為6.8 X IO5個/ml。所述注射液使用靜脈輸注方式，按照人臍帶間充質(zhì)干細胞0.5X IO6-I X IO6個細 胞/公斤體重注入患者體內(nèi)。本發(fā)明又提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，包括提 供間充質(zhì)干細胞保存液，預冷、備用，所述的間充質(zhì)干細胞保存液包括人血白蛋白原 液、勃脈力A液和肝素鈣；提供人臍帶間充質(zhì)干細胞；將獲得的人臍帶間充質(zhì)干細胞加 入到間充質(zhì)干細胞保存液中；通過重懸的方式，調(diào)整加入到間充質(zhì)干細胞保存液中的人 臍帶間充質(zhì)干細胞數(shù)量為6 X IO5-IX IO5個細胞/1ml。所述間充質(zhì)干細胞保存液是由10% -50%的濃度為10%的人血白蛋白原液 49.50% -89.5%勃脈力A液、0.5%肝素鈣混勻組成。所述間充質(zhì)干細胞保存液由20%人血白蛋白原液和79.5%勃脈力A液、0.5%肝 素鈣組成。所述人臍帶間充質(zhì)干細胞通過如下的方式制備(1)取放有第3-7代人臍帶間充 質(zhì)干細胞的培養(yǎng)瓶；(3)吸棄培養(yǎng)瓶中原有培養(yǎng)基，每瓶用IOml的D-hank’ s平衡鹽液 緩沖液清洗兩次，吸棄洗液；(4)每瓶中加入Iml胰酶-EDTA，放入37°C孵箱中5_7分 鐘；(5)在倒置顯微鏡下觀察細胞，用手掌輕輕拍打培養(yǎng)瓶確保人臍帶間充質(zhì)干細胞完 全消化下來；(6)每瓶中加入0.2ml血清終止消化；每瓶中加入IOml的D-hank，s平衡 鹽液，反復吹打，制得細胞懸液；(7)將細胞懸液移入離心管中，以900rpm的離心速度 離心5秒，離心結束，吸棄上清，獲得人臍帶間充質(zhì)干細胞。通過如下的方式調(diào)整干細胞保存液中的細胞量(8)用間充質(zhì)干細胞保存液重 懸人臍帶間充質(zhì)干細胞，用微量加樣槍吸取少許細胞懸液，用做細胞計數(shù)及細胞活力檢 測，舍棄死細胞，并計數(shù)活細胞；如活細胞數(shù)濃度為6X 105-7X 105個細胞/lml，進行 步驟(10)；否則繼續(xù)用步驟(9)再進行調(diào)整；(9)然后以900rpm的離心速度離心5秒， 吸棄上清，加入保存液，使細胞濃度為6 X 105-7 X IO5個細胞/lml，再進行步驟(10)； (10)將調(diào)整后的6X 105-7X IO5個細胞/lml的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液進 行封裝保存。吸棄培養(yǎng)瓶中原有培養(yǎng)基前需對培養(yǎng)瓶進行消毒處理，具體為用酒精棉球擦拭 培養(yǎng)瓶蓋口四周，然后旋開瓶蓋。所述細胞計數(shù)及細胞活力檢測具體為將細胞懸液和0.4%的臺盼蘭溶液按 1 1進行混合；輕輕混勻，1分鐘后，在顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)細胞；活細胞排斥 臺盼蘭，染成藍色的細胞是死細胞。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有以下優(yōu)點
本發(fā)明打破了肝纖維化的傳統(tǒng)治療方法，巧妙的運用人臍帶來源的間充質(zhì)干細 胞(簡稱MSCs，英文全稱mesenchymal stem cells)，并將其與其他成分組合制備成注
射液形式，即人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液，其穩(wěn)定性高，解決了現(xiàn)有技術在 干細胞輸注過程中細胞容易聚集成團的問題，并且延長了待使用細胞的保質(zhì)時間，24h內(nèi) 細胞活率仍維持在90%以上，療效好、使用更安全，適于較長時間的保存及運輸，用后 無任何毒副作用，為臨床大規(guī)模使用奠定了基礎。本發(fā)明提供的注射液可分化成有功能 的肝細胞；具有再生修復實質(zhì)器官和發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的雙向作用，提高免疫功能，改善肝 臟的微環(huán)境以及降低炎性細胞因子分泌的能力，減輕炎癥反應；抑制肝星狀細胞活化、 阻止細胞外基質(zhì)的生成，逆轉(zhuǎn)肝纖維化；激活卵原細胞，促進肝細胞再生，修復實質(zhì)器 官和慢性肝損害，間接地提高了抗病毒治療療效。且本發(fā)明注射液中的人臍帶間充質(zhì) 干細胞由于來源廣泛，不受倫理限制、免疫原性低使其成為肝纖維化治療的新的有效手 段，應用前景十分廣闊。

圖1為本發(fā)明提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法的流程 圖。圖2為本發(fā)明提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液和與本發(fā)明提供的 人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液成分相同但不加入肝素鈣的細胞溶液靜置12h后 顯微鏡下的照片。其中A、B為本發(fā)明提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液靜 置12h后顯微鏡下照片，其中A為4倍鏡下的照片，B為10倍鏡下的照片；C、D為含 有與本發(fā)明提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液成分相同但不加入肝素鈣的細 胞溶液靜置12h顯微鏡下照片，其中C為4倍鏡下的照片，D為10倍鏡下的照片。為更進一步闡述本發(fā)明為達成預定目的所采取的技術手段及功效，以下結合附 圖及較佳實施例，對依據(jù)本發(fā)明提出的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液及其制備 方法，其具體實施方式
、結構、特征及其功效，說明如后。本發(fā)明提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液，由10% -50%的人血白 蛋白原液和49.5%-89.5%的勃脈力A液、0.5%肝素鈣組成，所述人血白蛋白原液的濃度 為10%，注射液中人臍帶間充質(zhì)干細胞的濃度為6X 105-7X IO5個/ml。本發(fā)明實施例的 注射液由20%的濃度為10%的人血白蛋白原液和79.5%勃脈力A液、0.5%肝素鈣組成， 其中該注射液中的人臍帶間充質(zhì)干細胞的濃度為6.8X IO5個/ml。所述注射液使用靜脈輸 注方式，按照人臍帶間充質(zhì)干細胞0.5X 106-1 X 106個細胞/公斤體重注入患者體內(nèi)。本 發(fā)明注射液中的人血白蛋白原液是哈爾濱世亨生物工程藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的國藥準 字為S10920005的人血白蛋白原液，該原液濃度為10%。本發(fā)明提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，如圖1所 示，包括四步驟1、提供間充質(zhì)干細胞保存液，預冷、備用，所述的間充質(zhì)干細胞保存液包括人 血白蛋白原液、勃脈力A液、肝素鈣；
2、提供人臍帶間充質(zhì)干細胞；3、將獲得的人臍帶間充質(zhì)干細胞加入到間充質(zhì)干細胞保存液中；4、通過重懸的方式，調(diào)整加入到間充質(zhì)干細胞保存液中的人臍帶間充質(zhì)干細胞 數(shù)量為6X 105-7X 105個細胞/lml。本發(fā)明實施例的間充質(zhì)干細胞保存液是由10% -50%的濃度是10%的人血白蛋 白原液和49.5% -89.5%勃脈力A液、0.5%肝素鈣混勻組成。本發(fā)明實施例提供的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，具體 包括以下步驟1、提供間充質(zhì)干細胞保存液，預冷、備用，該間充質(zhì)干細胞保存液由20%的人 血白蛋白原液和79.5%的勃脈力A液、0.5%肝素鈣組成，其中該人血白蛋白原液的濃度 為 10%。2、由下述步驟(1)至(7)制備并獲得本發(fā)明注射液所需的人臍帶間充質(zhì)干細 胞(1)取放有第3-7代人臍帶間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)瓶；(2)用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶蓋口四周，然后旋開瓶蓋；(3)吸棄培養(yǎng)瓶中原有培養(yǎng)基，每瓶用IOml的D-hank’ s平衡鹽液緩沖液(該 D-hank，s 平衡鹽液緩沖液含有 0.8% 的 NaCl，0.04% 的 KC1，0.006% 的 Na2HPO4 · H2O 和0.006%的KH2PO4)清洗兩次，吸棄洗液；(4)每瓶中加入Iml胰酶-EDTA(EDTA的中文全稱乙二胺四乙酸鈉，英文全 稱ethylenediamine traacetic acid)，放入 37°C 孵箱中 5-7 分鐘；(5)在倒置顯微鏡下觀察細胞，用手掌輕輕拍打培養(yǎng)瓶確保人臍帶間充質(zhì)干細胞 完全消化下來；(6)每瓶中加入0.2ml血清終止消化；每瓶中加入IOml的D_hank，s平衡鹽液，
反復吹打，制得細胞懸液；(7)將細胞懸液移入離心管中，以900rpm的離心速度離心5秒，離心結束，吸
棄上清，獲得人臍帶間充質(zhì)干細胞。3、將獲得的人臍帶間充質(zhì)干細胞加入到間充質(zhì)干細胞保存液中。4、通過重懸的方式，調(diào)整加入到間充質(zhì)干細胞保存液中的人臍帶間充質(zhì)干細胞 數(shù)量為6 X 105-7 X IO5個細胞/lml，具體調(diào)整過程為(8)用間充質(zhì)干細胞保存液重懸人臍帶間充質(zhì)干細胞，用微量加樣槍吸取少許細 胞懸液，用做細胞計數(shù)及細胞活力檢測，舍棄死細胞，并計數(shù)活細胞；如活細胞數(shù)濃度 為6X 105-7X 105個細胞/lml，進行步驟(10)；否則繼續(xù)用步驟(9)再進行調(diào)整；所述 細胞計數(shù)及細胞活力檢測具體為將細胞懸液和0.4%的臺盼蘭溶液按1 1進行混合； 輕輕混勻，1分鐘后，在顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)細胞；活細胞排斥臺盼蘭，染成藍 色的細胞是死細胞；(9)然后以900rpm的 離心速度離心5秒，吸棄上清，加入保存液，使細胞濃度 為6X 105-7X 105個細胞/lml，再進行步驟(10)；(10)將調(diào)整后的6X 105-7X IO5個細胞/lml的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化
注射液進行封裝保存。
下面以間充質(zhì)干細胞保存液為50ml，制得人臍帶間充質(zhì)干細胞濃度為6.8X105 個細胞/Iml為例，進行具體詳細的說明本發(fā)明注射液的制備過程(1)、吸取人血白蛋白原液10ml，0.25ml肝素鈣，剩余部分用勃脈力A液補充至 50ml,混勻制得間充質(zhì)干細胞保存液，預冷、備用；(2)、取裝有第3-7代人臍帶間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)瓶；
(3)、用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶蓋口四周，旋開瓶蓋；(4)、吸棄培養(yǎng)瓶中原有培養(yǎng)基，每瓶用IOml的D-hank’ s緩沖液清洗兩次， 吸棄洗液；(5)、每瓶中加入Iml胰酶-EDTA，放入37°C孵箱中5-7分鐘；(6)、在倒置顯微鏡下觀察細胞，用手掌輕輕拍打培養(yǎng)瓶確保人臍帶間充質(zhì)干細 胞完全消化下來；(7)、每瓶中加入0.2ml血清終止消化；(8)、每瓶中加入IOml的D-hank’ s緩沖液，反復吹打，制得細胞懸液；(9)、將細胞懸液移入若干離心管中，以900rpm的離心速度離心5秒，離心結
束，吸棄上清，制得人臍帶間充質(zhì)干細胞；(10)、取出所需間充質(zhì)干細胞保存液，將獲得的人臍帶間充質(zhì)干細胞加入到間 充質(zhì)干細胞保存液中；(11)、用20ml間充質(zhì)干細胞保存液重懸人臍帶間充質(zhì)干細胞，并合并到50ml離 心管中；(12)、用微量加樣槍吸取少許細胞懸液，用做細胞計數(shù)及細胞活力檢測，舍棄 死細胞，并計數(shù)活細胞；所述細胞計數(shù)及細胞活力檢測具體為將細胞懸液和0.4%的臺 盼蘭溶液按1 1進行混合；輕輕混勻，1分鐘后，在顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)細胞， 活細胞排斥臺盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞；(13)、如活細胞數(shù)濃度為6.8 X IO5個細胞/lml，進行步驟(15)；否則繼續(xù)用步 驟(14)再進行調(diào)整；(14)、然后以900rpm的離心速度離心5min，吸棄上清，加入保存液，使細胞濃 度為6.8 X IO5個細胞/lml，再進行步驟(15)；(15)、將調(diào)整后的6.8X IO5個細胞/lml的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射 液進行封裝保存。制備好的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液需要在4_8°C避光環(huán)境下保存和 運輸，自分裝之時起有效期為12小時。本發(fā)明的注射液適用于靜脈輸注，按患者體重公 斤數(shù)計算，推薦用量為0.5 X IO6-I X IO6個細胞/公斤體重。將本發(fā)明提供的注射液和不含肝素鈣的注射液二者均置于4°C的溫度環(huán)境下保 存。在保存24小時后取樣，并在顯微鏡下觀察兩種注射劑中細胞的聚集情況。如圖2 所示，在同等保存條件下，本發(fā)明提供的注射液在24h內(nèi)細胞穩(wěn)定性良好，沒有聚集成 團現(xiàn)象，而未加入抗聚集劑的細胞溶液聚集成團現(xiàn)象嚴重。因此，加入抗聚集劑大大提 高了細胞溶液穩(wěn)定性，降低了臨床使用風險。按本發(fā)明所述方法配制四份含有不同濃度人血白蛋白的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗 肝纖維化注射液，其中人血白蛋白原液加入比例分別為5%、10%, 20%, 50%,所用人血白蛋白原液的濃度為10%，勃脈力A含量分別為94.5%、89.5%, 79.5%, 49.5%,肝 素鈣含量均為0.5%，注射液中的人臍帶間充質(zhì)干細胞的濃度均為6.8X IO5個/ml。將以 上制備好的四份樣品置于4°C溫度下保存，在保存12小時時取樣，并測定細胞存活率。測定方法將細胞懸液0.5ml加入試管中；加入0.5ml濃度為0.2%的臺盼蘭染 液；將細胞懸液吸出10 μ 1，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間；靜置1分 鐘；隨機選取幾個視野，共計數(shù)300個細胞，并計數(shù)其中死細胞數(shù)目，計細胞活力，重 復計數(shù)5次取平均值。如表格1-3所示，為選用三根不同臍帶進行的試驗。0.05的ρ值 通常被認為是可接受錯誤的邊界水平。
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權利要求
1.一種人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液，其特征在于，由10%-50%人血白蛋 白原液和49.5%-89.5%的勃脈力A液、0.5%肝素鈣組成，其中所述人血白蛋白原液的濃 度為10%，Iml注射液中含有人臍帶間充質(zhì)干細胞6 X 105-7 X IO5個。
2.如權利要求1所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液，其特征在于，所述注 射液由20%人血白蛋白原液和79.5%勃脈力A液、0.5%肝素鈣組成，其中該注射液中的 人臍帶間充質(zhì)干細胞的濃度為6.8 X IO5個/ml。
3.如權利要求2所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液，其特征在于，所述注 射液使用靜脈輸注方式，按照人臍帶間充質(zhì)干細胞0.5X IO6-I X IO6個細胞/公斤體重注 入患者體內(nèi)。
4.權利要求1所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，其特征在 于，包括提供間充質(zhì)干細胞保存液，預冷、備用，所述的間充質(zhì)干細胞保存液包括人血白蛋 白原液、勃脈力A液和肝素鈣；提供人臍帶間充質(zhì)干細胞；將獲得的人臍帶間充質(zhì)干細胞加入到間充質(zhì)干細胞保存液中；通過重懸的方式，調(diào)整加入到間充質(zhì)干細胞保存液中的人臍帶間充質(zhì)干細胞數(shù)量為 6X 105-7X 105 個細胞/lml。
5.如權利要求4所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，其特 征在于，所述間充質(zhì)干細胞保存液是由10% -50%的濃度為10%的人血白蛋白原液和 49.5% -89.5%勃脈力A液、0.5%肝素鈣混勻組成。
6.如權利要求5所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，其特征在 于，所述間充質(zhì)干細胞保存液由20%人血白蛋白原液和79.5%勃脈力A液、0.5%肝素鈣 組成。
7.如權利要求6所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，其特征在 于，所述人臍帶間充質(zhì)干細胞通過如下的方式制備(1)取放有第3-7代人臍帶間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)瓶；(3)吸棄培養(yǎng)瓶中原有培養(yǎng)基，每瓶用IOml的D-hank’s平衡鹽液緩沖液清洗兩次， 吸棄洗液；(4)每瓶中加入Iml胰酶-EDTA，放入37°C孵箱中5_7分鐘；(5)在倒置顯微鏡下觀察細胞，用手掌輕輕拍打培養(yǎng)瓶確保人臍帶間充質(zhì)干細胞完全 消化下來；(6)每瓶中加入0.2ml血清終止消化；每瓶中加入IOml的D_hank，s平衡鹽液，反 復吹打，制得細胞懸液；(7)將細胞懸液移入離心管中，以900rpm的離心速度離心5秒，離心結束，吸棄上 清，獲得人臍帶間充質(zhì)干細胞。
8.如權利要求7所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，其特征在 于，通過如下的方式調(diào)整干細胞保存液中的細胞量(8)用間充質(zhì)干細胞保存液重懸人臍帶間充質(zhì)干細胞，用微量加樣槍吸取少許細胞 懸液，用做細胞計數(shù)及細胞活力檢測，舍棄死細胞，并計數(shù)活細胞；如活細胞數(shù)濃度為6X 105-7X 105個細胞/lml，進行步驟(10)；否則繼續(xù)用步驟(9)再進行調(diào)整；(9)然后以900rpm的離心速度離心5秒，吸棄上清，加入保存液，使細胞濃度為 6X 105-7X 105個細胞/lml，再進行步驟(10)；(10)將調(diào)整后的6X105-7X IO5個細胞/lml的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射 液進行封裝保存。
9.如權利要求8所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，其特征在 于，吸棄培養(yǎng)瓶中原有培養(yǎng)基前需對培養(yǎng)瓶進行消毒處理，具體為用酒精棉球擦拭培養(yǎng) 瓶蓋口四周，然后旋開瓶蓋。
10.如權利要求9所述的人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液的制備方法，其特征 在于，所述細胞計數(shù)及細胞活力檢測具體為將細胞懸液和0.4%的臺盼蘭溶液按1 1 進行混合；輕輕混勻，1分鐘后，在顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)細胞；活細胞排斥臺盼蘭，染成藍色的細胞是死細胞。
全文摘要
本發(fā)明公開了人臍帶間充質(zhì)干細胞抗肝纖維化注射液及其制備方法，該注射液由10％-50％人血白蛋白原液和49.5％-89.5％的勃脈力A液、0.5％肝素鈣組成，其中人血白蛋白原液的濃度為10％，1ml注射液中含有人臍帶間充質(zhì)干細胞6×105-7×105個；其制備方法包括提供間充質(zhì)干細胞保存液，預冷、備用，該間充質(zhì)干細胞保存液包括人血白蛋白原液和勃脈力A液、肝素鈣；提供人臍帶間充質(zhì)干細胞并將其加入到間充質(zhì)干細胞保存液中；通過重懸的方式，調(diào)整加入到間充質(zhì)干細胞保存液中的人臍帶間充質(zhì)干細胞數(shù)量為6×105-7×105個細胞/1ml。本發(fā)明注射液療效顯著，穩(wěn)定性高，便于保存和運輸，使用安全，可為肝纖維化患者帶來福音。
文檔編號A61K35/44GK102008507SQ20101055172
公開日2011年4月13日 申請日期2010年11月21日 優(yōu)先權日2010年11月21日
發(fā)明者劉廣洋, 劉擁軍, 徐萌, 朱德琳, 謝姜 申請人:天津和澤干細胞科技有限公司