專利名稱：醫(yī)療用核苷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有寶貴的抗病毒特性的新的酯9-(2-羥基乙氧基甲基)鳥(niǎo)嘌呤。
9-(2-羥基乙氧基甲基)鳥(niǎo)嘌呤，又稱為acyclovir，具有強(qiáng)抗病毒作用，特別是抗皰疹病毒(H.J.Scheaffer等人，“Nature”，272583-585(1978)，英國(guó)專利說(shuō)明書(shū)1523865和美國(guó)專利說(shuō)明書(shū)No.4199574)。但是，acyclovir在水中的溶解性很差，所以就限制了在需要溶解度的水劑藥物配制中藥物的組成。
還有，acyclovir口服后很少?gòu)奈改c道被吸收(在老鼠身上試驗(yàn)時(shí)由尿中回收15%，在人身上試驗(yàn)由尿中回收20%)。在這樣低的生物利用率的情況下，為了在血液中達(dá)到并維持有效的抗病毒水平，就需要服用大劑量的藥品。
歐洲專利說(shuō)明書(shū)99493闡述了acyclovir的氨基酸酯，特別是甘氨酸和丙氨酸酯，與acyclovir相比，它們?cè)谒械娜芙舛鹊玫搅烁倪M(jìn)。
現(xiàn)在我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其特征為側(cè)鏈分支與α-碳原子鄰接的纈氨酸和異亮氨酸酯，與上述丙氨酸和甘氨酸酯相比，口服后生物利用率有驚人的提高，并且它們?cè)跉W洲專利說(shuō)明書(shū)99493中沒(méi)有被揭示。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特征，我們給出該類化合物，其結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)
式中R1表示化學(xué)式為-CH〔CH3〕2或-CH〔CH3〕CH2CH3的基及其藥物適用鹽。結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物也可以分別稱為2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H(嘌呤-9-基)甲氧基)-乙基 L-纈氨酸酯和2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H(嘌呤-9-基)甲氧基)-乙基 L-異亮氨酸酯。纈氨酸和異亮氨酸部分可以是D，L或是外消旋DL構(gòu)型，但最好是L型構(gòu)型。
在老鼠身上進(jìn)行試驗(yàn)，口服后測(cè)量acyclovir的尿回收(占服用劑量的百分?jǐn)?shù))，與其它酯和acyclovir相比較，本發(fā)明的化合物從胃腸道的吸收率大大提高，這樣就可以服用少的劑量，而口服吸收后在血液中仍能提供等劑量的水平。纈氨酸酯化合物被優(yōu)先選用，這是由于它具有特別好的從胃腸道的吸收作用。
除了比較高的生物利用率外，本發(fā)明的化合物在玻璃管內(nèi)具有顯著的，與acyclovir一樣的抗病毒作用。因而該化合物在生物利用率方面的有利增長(zhǎng)并沒(méi)有損失抗病毒的能力。實(shí)際上，在一些臨床應(yīng)用中，例如在基質(zhì)角膜炎的治療中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一些氨基酸酯能提供比acyclovir更優(yōu)越的治療作用(EP99493)。
結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物的合格藥用鹽最好是由適當(dāng)?shù)乃嵫苌乃峒映甥}，例如鹽酸、硫酸、磷酸、馬來(lái)酸、富馬酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、乙酸或?qū)妆交撬岬募映甥}。特別優(yōu)先選用的鹽是結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物的鹽酸鹽。
在動(dòng)物身上進(jìn)行的試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)口服上述結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物在血液中產(chǎn)生適量的acyclovir。因而，根據(jù)本發(fā)明的另一觀點(diǎn)，我們通過(guò)給動(dòng)物服用上述結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物或它的醫(yī)藥適用鹽，從而提供了一種在活體內(nèi)產(chǎn)生acyclovir的手段。
本發(fā)明的化合物可以以普通的方式，例如以下面所述的方法制備。
根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的特征，我們提供一種制備上述結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物及其醫(yī)藥適用鹽的方法，它包括a)使結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)的化合物用任意被保護(hù)的纈氨酸或異亮氨酸或它的功能等同物反應(yīng)
(式中X是一個(gè)任意被保護(hù)的羥基，Y是一個(gè)任意被保護(hù)的氨基);
b)使結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)的化合物轉(zhuǎn)變成結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物或它的醫(yī)藥適用鹽
(式中R1的定義如上述;M表示一個(gè)羥基，G表示可以被氨基取代或轉(zhuǎn)變成氨基的一個(gè)原子或基;或者G表示一個(gè)氨基，M表示可以被羥基取代或轉(zhuǎn)變成羥基的一個(gè)原子或基);或c)使結(jié)構(gòu)式(Ⅳ)的化合物與化學(xué)式(Ⅴ)的化合物反應(yīng)
(式中X和Y的定義如上，Q表示離去原子或基)
(式中R1的定義如上，A表示離去基或原子，R2是任意被保護(hù)的氨基);按任何需要的次序任意完成一個(gè)或多個(gè)下列轉(zhuǎn)變ⅰ)除去任何保護(hù)基;
ⅱ)在得到的產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物的場(chǎng)合，將所述化合物轉(zhuǎn)變成它的醫(yī)藥適用鹽;和ⅲ)在所得產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)化合物的醫(yī)藥適用鹽的場(chǎng)合，將所述鹽轉(zhuǎn)變成母體化合物。
按照方法a)，可以普通方式進(jìn)行酯化反應(yīng)，該方式例如是在溶劑(如吡啶或二甲基甲酰胺)中，在偶合劑(如N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺)存在的情況下，任意地在堿催化劑(如4-二甲胺基吡啶)存在時(shí)進(jìn)行。如果需要，反應(yīng)時(shí)生成的水可以用普通方式除去，例如通過(guò)蒸餾或添加親水物質(zhì)。接著可以用普通方式將反應(yīng)得到的酯離析。
作為使用纈氨酸或異亮氨酸本身的替換物，可以采用功能等同的酸，例如鹵酸(如鹽酸)或酸酐。在這種情況下，為了避免不希望有的付反應(yīng)，使用被保護(hù)的氨基的衍生物是有利的。優(yōu)先選用的保護(hù)氨基的基的例子包括酰基，例如C1-4鏈烷酰基(alkanoyl)(如乙?；?和芳氧基羰基(如芐氧基羰基)。合適的被保護(hù)的氨基的衍生物例如是這樣一種衍生物，在那里氨基酸的氨基被疊氮基所取代。
用方法b)將結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)的化合物轉(zhuǎn)變成結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物可以采用各種方法。利用G可以表示疊氮基，使用合適的催化劑(例如放在碳上的鈀)用催化氫化法可將它還原成氨基。用另一種方法，G可以分別表示鹵原子或硫代烷基或烷基磺?；鼈兛梢赞D(zhuǎn)變成疊氮基，再使用例如碳鈀存在下的氫，通過(guò)催化氫可將其轉(zhuǎn)變成氨基。為了制備結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物，結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)的化合物(其中的M代表氨基)可以例如用脫氨基的酶(如腺苷脫氨酶)處理，從而轉(zhuǎn)變成羥基。
這些方法和其它傳統(tǒng)方法在下列文獻(xiàn)中有敘述FusedPyrimidines，PartⅡ，Purines，Ed，byD.J.Brown(1971)，Wiley-Interscience。
在方法C)中，結(jié)構(gòu)式(Ⅳ)中的基Q例如可以表示一個(gè)氫原子;一個(gè)?；鏑1-4鏈烷酰基(如乙?；?或芳酰基(如苯甲?；?;或三-C1-4烷基甲硅烷基(如三甲基硅基)。結(jié)構(gòu)式(Ⅴ)中的原子團(tuán)A例如可以表示鹵原子(例如氯)或酰氧基，其中酰基部分可以是例如C1-4鏈烷?；?如乙酰基)或芳酰基(如苯甲酰基)。原子團(tuán)R2可以表示保護(hù)氨基的基，例如C1-4鏈烷基(alkanoyl)(如乙?；?或芳氧基羥基(aryloxycarbanoyl)(如芐氧基羥基)，它也可以表示疊氮基。反應(yīng)可以方便地在強(qiáng)極性溶劑中，例如在二甲基甲酰胺或六甲基磷酰胺中進(jìn)行，在堿存在的情況下，例如在三乙胺電碳酸鉀存在的情況下是有利的。另一方面，在強(qiáng)酸，例如硫酸的催化劑量存在的情況下，加熱結(jié)構(gòu)式(Ⅳ)和(Ⅴ)的化合物可以產(chǎn)生熱濃縮。
在合成結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)化合物中，作為中間物被使用的化學(xué)式(Ⅱ)至(Ⅴ)的化合物可以以普通的方法制備。例如用英國(guó)專利說(shuō)明書(shū)NO1523865中所敘述的方法。這些方法依靠由簡(jiǎn)單取代并可購(gòu)到的嘌呤所制備的中間產(chǎn)物，或者靠按已知的和文獻(xiàn)中敘述的技術(shù)，例如上述版本書(shū)中鶚齙募際踔票?。举例来藫?dān)梢雜糜敕椒╟)類似的方法，即將適合的嘌呤與化學(xué)式(Ⅴ)的化合物反應(yīng)一般可以制備結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)的化合物。
用普通的方式可以任意地實(shí)現(xiàn)ⅰ)、ⅱ)和ⅲ)的轉(zhuǎn)變。例如用合適的水解、溶劑分解或氫解可以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)變ⅰ)中保護(hù)基的去除。關(guān)于氨基酸?；系谋Ｗo(hù)基的去除，則優(yōu)先選用氫解(例如芳氧基羰基保護(hù)基的氫解)，以及疊氮基的轉(zhuǎn)變〔例如用催化氫化(如用鈀催化劑)〕。關(guān)于嘌呤核的2位置和/或6位置中基的保護(hù)，可以由例如芳基甲基(如芐基);或者三-C1-4烷基硅烷基(如三甲基硅烷基)中選擇。芳基甲基保護(hù)基可以通過(guò)例如氫解(如在Raney鎳或鈀催化劑存在情況下的氫化)去除。用溶劑分解(例如醇解)，可以去除三烷基硅烷基保護(hù)基。
將結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物轉(zhuǎn)變成醫(yī)藥適用鹽可以按普通的方式進(jìn)行，例如用合適的酸處理該化合物以形成酸加成鹽，如用酸溶液冷凍干燥母體酯的甲醇溶液。
同樣，用普通方式可以將一種鹽轉(zhuǎn)變成結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的母體化合物。
本發(fā)明還提供用于醫(yī)學(xué)治療的結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)化合物及其醫(yī)藥適用鹽(下文稱為“有效化合物”)，例如用于治療和預(yù)防動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物(如人)的病毒疾病。對(duì)于治療和預(yù)防DNA病毒，例如皰疹感染(如單式皰疹、水痘或帶狀皰疹、細(xì)胞巨大病毒)引起的疾病，以及乙型肝炎或Epstein-Barr病毒或人的皰疹病毒-6(HHV-6)，該化合物是特別有用的。該有效化合物也可用來(lái)治療和預(yù)防retro病毒感染，例如HIV感染和乳頭痛或疣病毒感染。除了用于人的醫(yī)療外，該結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物可以給其它動(dòng)物(例如其它哺乳動(dòng)物)服用，以治療和預(yù)防病毒疾病。例如對(duì)治療馬的鼻肺炎，該有效化合物特別有用。
本發(fā)明也提供了治療或預(yù)防動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物(如人)病毒疾病的方法，它包括給動(dòng)物服用抗病毒有效劑量的結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)化合物或其醫(yī)療適用鹽。
本發(fā)明還提供在制造治療和預(yù)防病毒感染的藥物中，結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)化合物的使用。
該有效化合物可以通過(guò)適合治療條件的任何途徑施用，合適的途徑包括口的、直腸的、鼻的、局部的(包括口部的和舌下的)，陰道的和腸胃外的(包括皮下的，肌肉的，靜脈的，皮內(nèi)的，膜內(nèi)的和硬膜的)。很明顯，優(yōu)選的途徑可以隨例如接受者的條件而變化。
上述的每一應(yīng)用和有效成份(如上面所定義)的需要量將取決于一個(gè)因數(shù)，包括嚴(yán)格的治療條件和接受者的個(gè)性，最終憑在場(chǎng)醫(yī)生或獸醫(yī)的判斷。但是對(duì)一般的每個(gè)應(yīng)用和決定，合適的有效劑量為接受者每公斤體重每天0.1到250毫克，較好是每公斤體重每天1到100毫克，最好是每公斤體重每天5到20毫克;一個(gè)最佳的劑量是每公斤體重每天約10毫克(除非另有說(shuō)明，有效成份的所有重量均以結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的母體化合物來(lái)計(jì)算，對(duì)于它的鹽，數(shù)值將按比例增加)。需要的劑量最好在每天合適的間隔時(shí)間內(nèi)給出服用的二、三、四或更多的分劑量。這些分劑量可以按單位劑量形式施用，例如每單位劑量形式含有效成份10到1000毫克，較好20到500毫克，最好100到400毫克。
本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)施用或與其它藥劑合用，例如與9-(2-羥基乙氧基甲基)鳥(niǎo)嘌呤(acyclovir)合用，以治療皰疹病毒感染，特別是HSV(Ⅰ)感染，與Zidovudine合用來(lái)治療后病毒(retroviral)感染，特別是HIV感染。
當(dāng)有效成份可單獨(dú)施用時(shí)，要選擇給出醫(yī)藥配方。既為獸醫(yī)使用又為人使用的本發(fā)明的配方，包括至少一種上面所定義的有效成份，并結(jié)合一種或多種合適載體和任意的其它醫(yī)藥成份。載體必須是“合適的”是與配方的其它成份比較而言，并且應(yīng)是對(duì)接受者無(wú)害的。
該配方適合口的、直腸的、鼻的、局部的(包括口部的和舌下的)陰道的和注射的(包括皮下的、肌肉的、靜脈的、皮內(nèi)的、膜內(nèi)的和硬膜的)施用。一般以單位劑量形式給出該配方，并可以用藥學(xué)中現(xiàn)有技術(shù)的任何方法制備。這些方法包括將有效成份與含有一種或多種次要成份的載體相結(jié)合的步驟。通常，制備該配方靠均勻完全地將有效成份與經(jīng)過(guò)仔細(xì)分離的固體載體或液體載體或二者相混合，如果需要，然后使產(chǎn)物成型。
適合口服的本發(fā)明的配方可以制成單個(gè)的藥劑，例如膠囊、扁囊或片劑恐侄己泄娑康撓行С煞 也可以制成粉劑或顆粒;制成溶液或含水液體或不含水液體的懸浮液;制成水中油的乳狀液或油中水的乳狀液。有效成份也可以制成丸劑、糖劑或糊劑。
片劑可以任意和一種或多種次要成份一起壓制或模制。壓制的片劑可以通過(guò)在合適的機(jī)器內(nèi)壓制不流動(dòng)形式的有效成份制備，不流動(dòng)的有效成份例如是與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑相混合的粉劑或顆粒。模制片劑可通過(guò)在合適的機(jī)器內(nèi)模壓用惰性稀釋劑濕潤(rùn)的粉狀化合物的混合物來(lái)制備。片劑可以任意地被涂復(fù)或刻劃，可以配制成慢慢地或有控制地釋放其有效成份。
對(duì)于眼睛或其它外部組織，例如嘴和皮膚的感染，優(yōu)先選用含有效成份的專門(mén)油膏或乳劑的配方，含量例如為0.075到20%W/W較好的是0.2到15%W/W，最好的是0.5到10%W/W。當(dāng)配制油膏時(shí)，該有效成份可以使用石臘的或可摻水的油膏基。另一方面，有效成份可以用水中油的乳劑為基配制乳劑。此外，借助于離子電滲儀可以作貫穿皮膚的局部應(yīng)用。
如果需要，乳劑基的含水相可以含有例如至少30%W/W的多元醇，即具有二個(gè)或更多個(gè)羥基的醇(例如丙二醇、1，3-丁二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇以及它們的混合物)。局部施用的配方可以合乎要求地含有能通過(guò)皮膚或其它作用區(qū)提高有效成份的吸收和穿透能力的化合物。這種皮穿透提高劑的例子包括二甲亞砜和有關(guān)的類似物。
適合施用于眼睛的局部配方還包括滴眼劑，其中有效成份溶解或懸浮在合適的載體中，特別是在適于有效成份的含水溶劑中。在該配方中有效成份的濃度為0.5到20%，更有利地為0.5到10%，特殊地約為1.5%W/W。
適合于嘴中施用的局部配方包括在加味基料中含有效成份的糖錠，加味基料通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠，錠劑在惰性基料中，例如在動(dòng)物膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中含有效成份;漱口劑在合適的液態(tài)載體中含有有效成份。
用于直腸施用的配方可制成帶有含例如可可豆脂或水楊酸酯的適用基料的栓劑。
適合鼻用的配方，其中載體是一種固體，該配方含顆粒尺寸例如20到500微米的粗粉末，它按鼻煙的方式施用，即從一個(gè)舉近鼻子的裝有粉末的盒中快速吸入通過(guò)鼻腔。載體為液體的合適配方，包括有效成份的水溶液或油質(zhì)溶液，以鼻噴霧或滴鼻的方式施用。
適于陰道施用的配方可以制成陰道栓劑、塞劑、乳劑、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧劑，除了有效成份外，配方含有那些在現(xiàn)有技術(shù)中已知的適用載體。
適于注射施用的配方包括水的和非水無(wú)菌注射液，它可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和溶質(zhì)，它使配方與預(yù)定接受者的血液等滲;水的和非水無(wú)菌懸浮制劑可以含懸浮劑和稠化劑。該配方可以以單劑量或多劑量容器(例如密封的安瓿和小瓶)的形式提供。該配方在立即使用前，僅需要加入無(wú)菌的液體載體(例如注射用水)就可以以凍干狀態(tài)貯存。臨時(shí)注射液和懸浮劑可由前述種類的無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。肌肉施用的配方特別選用。
所選用的單位劑量配方是上述有效成份日劑量的，或單位日分劑量的。或者含有其適當(dāng)部分的配方。
應(yīng)當(dāng)了解，除了在上面特別敘述的成份外，顧及到所述配方的類型，本發(fā)明的配方可以含有現(xiàn)有技術(shù)中通常的其它制劑，例如適于口服的配方可以含香料制劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供獸醫(yī)學(xué)的組合物，它至少含有一種上述規(guī)定的有效成分，并帶有獸醫(yī)學(xué)載體。
獸醫(yī)學(xué)載體是施用該組合物的有用材料，它可以是固體、液體或氣體材料。另外，它們是惰性的或是適于獸醫(yī)技術(shù)的，并且是同有效成份相容的。這些獸醫(yī)學(xué)組合物可以口服、注射或通過(guò)任何其它需要的途徑。
用于口服，該組合物的形式可以是片劑、顆粒獸用頓服藥、糊劑、扁囊劑、膠囊式喂料添加劑。顆?？梢园船F(xiàn)有技術(shù)由濕制粒、預(yù)壓制或壓制而制備。它們可以在惰性液體載體中形成獸用頓服藥給動(dòng)物服用，或在帶水或油基料的懸浮劑中給動(dòng)物服用。它最好還含有次要成份，例如調(diào)劑。這些配方最好含15到85%的有效成份。
用下述實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1A.2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9-H(嘌呤-9-基)甲氧基)乙基L-纈氨酸酯a)2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基N-〔(芐氧基)羥基〕L-纈氨酸酯將在無(wú)水二甲基甲酰胺(DMF)(150毫升)中的acyclovir(2，000克;BurroughsWellcome公司)的懸浮液加熱到到60℃成無(wú)色溶液。將CBZ-L-纈氨酸〔3.012克;SigmaChemicals，圣路易斯市，MO和美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)志，79，5697(1957)〕，4-二甲基氨基吡啶(154毫克;DMAP，Chem.Ber.89.2921-33〔1956〕)和二環(huán)Z基碳二亞胺(2.998克;DCC，美國(guó)專利2656383)加到該溫?zé)崛芤褐?。將淡黃色的溶液冷卻到室溫并攪拌一夜。30分鐘后觀察到白色沉淀。再向反應(yīng)混合物中加入上述劑量的CBZ-L-纈氨酸、DMAP和DCC，將混濁的懸浮液在室溫下攪拌2天。過(guò)濾該懸浮液除去1.418克白色固體。將該無(wú)色濾液濃縮成淺黃色的油。在硅膠上用快速色層分離提純?cè)撚停眉状及炊燃淄樘荻?0-15%)洗提得到3.751克(92.1%)白色固體的標(biāo)題化合物。
b)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基L-纈氨酸酯將2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基 N-〔(芐氧基)羰基〕 L-纈氨酸酯(5.0克)，5%碳鈀催化劑-50%水(2克)和二甲基甲酰胺(50毫升)的混合物，在Parr裝置上于40磅/英寸2壓力的氫中振動(dòng)3小時(shí)。通過(guò)Celite墊過(guò)濾反應(yīng)混合物，并在真空中蒸發(fā)得到一種油。從水/乙醇(1∶3V/V)中結(jié)晶出一種固體，再次結(jié)晶得到1.5克標(biāo)題化合物。
分析計(jì)算C48.14;H6.22;N25.91測(cè)定C47.84;H6.26;N25.75
實(shí)施例1B2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H(嘌呤-9-基)甲氧基)乙基L-纈氨酸酯氫氯化物-水化物a)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基N-〔(芐氧基)羰基〕L-纈氨酸酯將在無(wú)水二甲基甲酰胺(DMF)(150毫升)中的acyclovir(2.000克，BurroughsWellcome公司)的懸浮液加熱到60℃成無(wú)色溶液。將CBZ-L-纈氨酸〔3.012克，SigmaChemicals，圣路易斯市MO和美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)志，79，5697(1957)〕，4-二甲基氨基吡啶(154毫克，DMAP，Chem.Ber.892921-33〔1956〕)和二環(huán)己基碳二亞胺(2.998克，DCC，美國(guó)2656383)加到該溫?zé)崛芤褐小⒃摰S色溶液冷卻到室溫，并攪拌一夜。30分鐘后觀察到白色沉淀。再向反應(yīng)混合物中加入上述劑量的CBZ-L-纈氨酸、DMAP和DCC，將混濁的懸浮液在室溫下攪拌2天。過(guò)濾該懸浮液除去1.418克白色固體。將無(wú)色濾液濃縮成淺黃色油。在硅膠上用快速色層分離法將該油提純，用甲醇按二氯甲烷梯度(0-15%)洗提得到3.751克(92.1%)白色固體的標(biāo)題化合物。
b)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基L-纈氨酸酯氫氯化物-水化物將2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基N-〔(芐氧基)羰基〕L-纈氨酸酯(3.730克)、5%碳鈀催化劑(377毫克)、甲醇(100毫升)、四氫呋喃(THF)(100毫升)和0.5摩爾HCI水溶液(18毫升)的混合物在Parr裝置上于50磅/英寸2壓力的氫中振動(dòng)一天。通過(guò)Celito墊過(guò)濾該反應(yīng)混合物，然后濃縮得到一種白色固體。將該固體從水/乙醇中再次結(jié)晶得到1.762克(60.0%)白色粉末的標(biāo)題化合物;熔點(diǎn)150℃(固體收縮)，逐漸變成油，并在195℃起泡分解。
分析計(jì)算C41.22;H6.12;N22.19;CI9.36測(cè)定C41.09;H6.10;N22.12;CI9.28實(shí)施例1C2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H(嘌呤-9基)甲氧基)乙基D-纈氨酸酯氫氯化物-水化物a)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基N-〔(芐氧基)羰基〕D-纈氨酸酯將在無(wú)水二甲基甲酰胺(DMF)(80毫升)中的acylovir(1.00克，BurroughsWellcome公司)的懸浮液加熱到60℃成無(wú)色溶液。將CBZ-D-纈氨酸(1.70克，美國(guó)4411925)、4-二甲基氨基吡啶(74毫克，DMAP，Chem.Ber.892921-33〔1956〕)和二環(huán)己基碳二亞胺(1.60克，DCC，美國(guó)2656383)加到該溫?zé)崛芤褐校瑢⑼该鞯娜芤豪鋮s到室溫，并在氮?dú)庵袛嚢?天。再向反應(yīng)混合物中加入上述劑量的CBZ-D-纈氨酸、DMAP和DCC，并將混濁的懸浮液在室溫下攪拌2天。過(guò)濾該懸浮液除去白色固體。將無(wú)色濾液濃縮，并將來(lái)自濾液的殘余物溶解在甲醇/二氯甲烷中，并在硅膠上色層分離，再用10%甲醇/二氯甲烷洗提得到1.10克(52%)白色固體的標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)155-158℃。
分析計(jì)算C52.05;H6.01;N17.34測(cè)定C52.02;H5.98;N17.32b)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基D-纈氨酸酯氫氯化物-水化物將2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基 N-〔(芐氧基)羰基〕 D-纈氨酸酯(0.94克)、5%碳鈀催化劑(200毫克)、甲醇(25毫升)、四氫呋喃(THF)(25毫升)和0.5摩爾HCl水溶液(4.5毫升)的混合物在Parr裝置上于44磅/英寸2壓力的氫中振動(dòng)4小時(shí)。通過(guò)微孔薄膜過(guò)濾該反應(yīng)混合物，并將濾液濃縮和干燥，得到分離的灰白色固體的標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)185-188℃。
分析計(jì)算C40.47;H6.18;N21.37;CI10.82C40.62;H5.98;N21.20;CI10.91實(shí)施例1D2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-(嘌呤-9-基)甲氧基)乙基DL-纈氨酸酯氫氯化物-水化物a)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基N-〔(芐氧基)羰基〕DL-纈氨酸酯將在無(wú)水二甲基甲酰胺(DMF)(150毫升)中的acyclovir(2.000克，BurroughsWellcome公司)的懸浮液加熱到60℃得到無(wú)色溶液。將CBZ-DL-纈氨酸(3.012克，SigmaChemicals，圣路易斯市MO和化學(xué)文摘，Vol101(5)，38799)，4-二甲基氨基吡啶(154毫克，DMAP，Chem.Ber.892921-33〔1956〕)和二環(huán)己基碳二亞胺(2.998克，DCC，美國(guó)2656383)加到溫?zé)崛芤褐?。將該溶液冷卻到室溫并攪拌一夜。向該反應(yīng)混合物中再加入上述劑量的CBZ/DL-纈氨酸、DMAP和DCC，并將該懸浮液在室溫下攪拌2天。然后過(guò)濾該懸浮液除去白色固體。將濾液濃縮，并在硅膠上用快速色層分離法提純，用甲醇按二氯甲烷梯度(0-15%)洗提得到標(biāo)題化合物。
b)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基DL-纈氨酸酯氫氯化物-水化物將2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基 N-〔(芐氧基)羰基〕 DL-纈氨酸酯(3.730克)、5%碳鈀催化劑(377毫克)、甲醇(100毫升)、四氫呋喃(THF)(100毫升)和0.5摩爾HCI溶液(18毫升)的混合物在Parr裝置上于50磅/英寸2壓力的氫中振動(dòng)一天。通過(guò)Celite墊過(guò)濾該反應(yīng)混合物，然后濃縮得到一種固體，將該固體從水/乙醇中再次結(jié)晶得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例22-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-(嘌呤-9-基)甲氧基)乙基L-異亮氨酸酯氫氯化物a)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基N〔(芐氧基)羰基〕L-異亮氨酸酯將acyclovir(1.0克，4.4毫摩爾，BurroughsWellcome公司)、4-二甲基氨基吡啶(74毫克，0.6毫摩爾;Aldrich化學(xué)公司和Chem.Ber.892921-33〔1956〕)、1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(1.6克，8.0毫摩爾，Aldrich化學(xué)公司和美國(guó)2656383)、N-芐酯基-L-異亮氨酸(1.8克，6.6毫摩爾，SigmaChemical公司和日本Bull化學(xué)學(xué)會(huì)，(1966)39947或Tetrahedron40(24)5207-11〔1984〕)和分子篩(0.3克，Davison3A型，F(xiàn)isherScientific公司)在無(wú)水N，N-二甲基甲酰氨(80毫升)中的混合物在室溫下氮?dú)庵袛嚢琛?天后，添加1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(1.6克，8.0毫摩爾)和N-芐酯基-L-異亮氨酸(1.8克，6.6毫摩爾)。在室溫下繼續(xù)攪拌7天。將所得到的混合物過(guò)濾，在真空中將透明濾液濃縮成半固體剩余物。用2.5-5%甲醇/二氯甲烷由硅膠60(EM，230-400目，8.5×14厘米)洗提該剩余物，得到2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-N-〔(芐氧基)羰基〕-L-異亮氨酸酯(0.8克，45%)的白色固體，熔點(diǎn)155-157℃;
紫外線(UV)(MeOH)，入最大255毫微米(∈17700)，入Sh279(9800)，入最小230(6100);
核磁共振(MMR)(200兆赫，ME2SO-d6)0.73-0.80ppm(m，6H)，1.13-1.33(m，2H)，1.66-1.70(m，1H)，3.64(t，2H)，3.92(t，1H)，4.16(m，2H)，5.00(s，2H)，5.32(s，2H)，6.47(br s，2H)，7.33(s，5H)，7.65(d，j＝8赫，1H)，7.78(S，1H)，10.59(brs，1H);
質(zhì)譜(MS)(CI/CH4，70℃)m/Z473(1.0%M+1)，347(23.2，M-125)，225(100.0M-247);〔α〕20℃d-3.07°(CO.488 6NHCI)。
薄層色譜法(TLC)在硅膠上一個(gè)點(diǎn)用10% MeOH/CH2CI2。Rf＝0.38高壓液相色譜法(HPLC)在Supelco LC8上一個(gè)峰用50% MeOH/H2O;100% K′＝7.02C22H28N6O6，H20分析計(jì)算C53.87;H6.16;N17.13;
測(cè)定C53.94;H6.20;N17.04;
b)2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基L-異亮氨酸酯氫氯化物將2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)-甲氧基〕乙基-N-〔(芐氧基)羰基〕-L-異亮氨酸酯(1.1克，2.2毫摩爾)的甲醇-四氫呋喃(1∶1，50毫升)溶液用0.5N鹽酸(5毫升)和在活性炭上5%的鈀(0.30克，MCB Reagents)處理。在Parr氫化器上于50磅/英寸2壓力下將該混合物氫化11小時(shí)，通過(guò)Celite墊過(guò)濾，并將濾液在真空中濃縮得到2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H-嘌呤-9-基)甲氧基〕乙基-L-異亮氨酸酯氫氯化物(0.86克，92%)的分離的灰白色固體，熔點(diǎn)180-182℃(起泡軟化大約150℃)
紫外線(UV)(MeOH)入最大254毫微米(∈13400)，入sh272(9000)，入最小224(3600);
核磁共振(NMR)(200兆赫，Me2SO-d6)0.77-0.84ppm(m，6H)，1.13-1.37(m，2H)，1.82(m，1H)，3.73(t，2H)，3.87(br t，1H)，4.14-4.40(m，2H)，5.36(s，2H)，6.70(br s，2H)，7.97(s，1H)，8.46(br s，3H)，10.87(s，1H);
質(zhì)譜(MS)(CI/CH4;150℃)m/Z367(6.9%，M+29)，339(100，M+1)，225(92.9，M-113);〔α〕20℃D+11.15°(C2.0，HOAc)。
薄層色譜法(TLC)在硅膠上一個(gè)點(diǎn)，用10% MeOH/CH2CI2Rf＝0.12;HPLC在Versapack C13上一個(gè)峰，用10% MeOH/H2O/0.1%F3CCOOH;100%K′＝3.74。
C14H22N6O4.1.25HCI.1.10MeOH.0.25H2O分析計(jì)算C42.81;H6.70;N19.84;CI10.46;
測(cè)定C42.82;H6.50;N19.64;CI10.46;
實(shí)施例3片劑配方將帶有聚乙烯吡咯烷酮溶液成份的濕球粒制備下列配方A、B和C，接著添加硬脂酸鎂并壓制。
配方A毫克/片毫克/片有效成份250250乳糖B.P.21026聚乙烯吡咯烷酮B.P.159羥基乙酸淀粉鈉2012硬脂酸鎂53500300配方B毫克/片毫克/片有效成份250250乳糖150-微晶纖維素PH1016026聚乙烯吡咯烷酮B.P.159羥基乙酸淀粉鈉2012硬脂酸鎂53500300配方C毫克/片有效成份100乳糖200淀粉50聚乙烯吡咯烷酮B.P.5硬脂酸鎂4359
將混合成份直接壓制，制備下列配方D和E，在配方E中的乳糖是壓縮型。
配方D毫克/膠囊有效成份250微晶纖維素150硬脂酸鎂4404配方E毫克/膠囊有效成份250乳糖150微晶纖維素100硬脂酸鎂5505配方F(控制釋放配方)將帶有聚乙烯吡咯烷酮溶液的下列成份的濕顆粒制備該配方，接著添加硬脂酸鎂并壓制。
毫克/片有效成份500羥基丙基甲基纖維素112(Methocel K4M Premium)乳糖B.P.53聚乙烯吡咯烷酮B.P.28
硬脂酸鎂7700實(shí)施例4膠囊配方配方A將上述實(shí)施例3中配方D的成份混合并裝入一個(gè)分為兩部分的硬膠體中以制備膠囊配方。用類似的方式制備如下的配方B。
配方B毫克/膠囊有效成份250乳糖B.P.143羥基乙酸淀粉鈉25硬脂酸鎂2420配方C毫克/膠囊有效成份250聚乙二醇4000B.P.350600將聚乙二醇4000BP熔化，將有效成分散布到熔體中并將該熔體裝入一個(gè)分為兩部分的硬膠體中，以制備膠囊。
配方D毫克/膠囊有效成份250卵磷脂100
花生油100450將有效成份散布到卵磷脂和花生油中，將該分散體裝入軟的、彈性的膠體中以制備膠囊。
配方E(控制釋放膠囊)用擠壓機(jī)擠壓成份a、b和c，接著將擠出物制粒(Spheronisation)并干燥。然后將干燥的球團(tuán)涂覆控制釋放膜(d)，并裝入一個(gè)分為兩塊的硬膠體中，以制備下述控制釋放膠囊。
毫克/膠囊有效成份250微晶纖維素125乳糖B.P.125乙基纖維素13513實(shí)施例5眼用溶液有效成分0.5克丙二醇0.2克乙基汞硫代水楊酸鈉0.001克凈化水至100毫升PH值調(diào)到7.5實(shí)施例6注射配方有效成份0.200克無(wú)菌無(wú)熱原的檸檬酸緩沖劑(PH7.0)至10毫升將有效成份溶解到大部分檸檬酸緩沖劑(35-40℃)中，然后補(bǔ)償體積，并通過(guò)無(wú)菌顯微過(guò)濾器過(guò)濾到一個(gè)無(wú)菌的10毫升淡黃色玻璃瓶(1型)中，并使用無(wú)菌閉合密封和外封實(shí)施例7肌肉注射有效成份0.20克苯甲醇0.10克Glycofurol751.45克注射用水q.s.至3.00毫升將有效成分溶解到glycofurol中。然后添加苯甲醇并使其溶解，加水到3毫升。然后通過(guò)無(wú)菌顯微過(guò)濾器過(guò)濾，并密封在無(wú)菌的3毫升淡黃色玻璃瓶(1型)中。
實(shí)施例8糖漿懸浮液有效成分0.25克山梨醇溶液1.50克甘油2.00克苯甲酸鈉0.005克香料0.0125毫升凈化水q.s.至5.00毫升將苯甲酸鈉溶解在部分凈化水中，添加山梨醇溶液，添加有效成分并使其溶解。添加甘油和香料并在其中混合。加水至最終體積5毫升。
實(shí)施例9栓劑毫克/栓劑有效成份(63微米)＊250
硬脂肪BP(WitepsolH15-DynamitNoBel17001950＊有效成分使用至少90%顆粒直徑63微米或更小的粉末。
在最大值為45℃的蒸汽套容器中，將五分之一的WitepsolH15熔化。將有效成份通過(guò)200微米的篩網(wǎng)過(guò)篩，并將其添加到熔化基料中，伴隨用帶有切頭的銀棒(Silverson)混合，直到均勻分布。將該混合物保持在45℃，把剩余的WitepsolH15添加到懸浮劑中，攪拌得到均勻的混合物。將全部懸浮劑通過(guò)一個(gè)250微米的不銹鋼篩網(wǎng)，伴隨繼續(xù)攪拌冷卻到40℃。在38℃到40℃的溫度下，把2.02克該混合物裝入合適的塑料模子中。將該栓劑冷卻到室溫。
實(shí)施例10陰道栓劑毫克/陰道栓劑有效成份(63微米)250無(wú)水葡萄糖543淀粉200硬脂酸鎂71000將上述各成分直接混合，并將所得到的混合物直接壓制成陰道栓劑。
實(shí)施例11a)抗病毒活性在多槽盤(pán)(multiwell)里的單層vero細(xì)胞中試驗(yàn)單一皰疹病毒(HSVI)。以斑點(diǎn)減少試驗(yàn)確定化合物的活性。用HSVI的懸浮液感染單層細(xì)胞，然后覆蓋膠質(zhì)形式的營(yíng)養(yǎng)瓊脂糖，以保證在整個(gè)培養(yǎng)期間病毒沒(méi)有擴(kuò)散。把一系列已知體積克分子濃度的化合物加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂糖層。將每一濃度時(shí)的斑點(diǎn)數(shù)表示為控制百分?jǐn)?shù)并畫(huà)出劑量響應(yīng)曲線。由該曲線來(lái)判斷50%抑制濃度(IC50)。
化合物IC50μM實(shí)施例10.84實(shí)施例23.8Acyclovir0.08-0.1b)測(cè)定口服生物利用率將相當(dāng)于25毫克/公斤acyclovir的試驗(yàn)化合物用管飼法喂給LongEvans老鼠。延續(xù)24小時(shí)和48小時(shí)收集超濾后劑量的尿，用反相高壓液體色層分離法分析。該化合物的口服生物利用率以尿中排出的acyclovir劑量的百分?jǐn)?shù)表示。
化合物acyclovir的尿回收率(劑量百分?jǐn)?shù)%)實(shí)施例163實(shí)施例250Acyclovir(ACV)15ACV的甘氨酰酯30ACV的L-丙氨酰酯34d)毒性數(shù)據(jù)測(cè)定抗感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制所選擇的化合物抑制D98細(xì)胞(人的)和L細(xì)胞(鼠的)生長(zhǎng)的能力是這樣測(cè)定的將標(biāo)準(zhǔn)數(shù)目的細(xì)胞暴露到各種稀釋化合物中，三天后再測(cè)量其細(xì)胞數(shù)(Rideout，J.L.，KrenitskyT.A.，Koszalka，G.W.，Cohn，N.K.，Chao，E.Y.，Elion，G.B.，Latter，V.S.，以及Williams，R.B.(1982)J.MedChem.25∶1040-1044)。然后將該細(xì)胞數(shù)與沒(méi)有這些化合物時(shí)獲得的細(xì)胞數(shù)比較。細(xì)胞計(jì)數(shù)的進(jìn)行或是通過(guò)單層受胰酶作用后的直接顆粒計(jì)數(shù)，或是通過(guò)分光光度測(cè)定染色的活細(xì)胞數(shù)，兩種方法都獲得類似的結(jié)果。
數(shù)據(jù)分析在50%控制值(IC50)下得到的化合物濃度是這樣計(jì)算的由化合物濃度對(duì)控制值百分?jǐn)?shù)的記錄曲線，或由按同一算法分析數(shù)據(jù)的計(jì)算表使用直接插入法。在這些計(jì)算中使用控制范圍為20%到80%的數(shù)據(jù)。
實(shí)施例細(xì)胞毒性(在100μm下控制的百分?jǐn)?shù)%)D-98細(xì)胞L-細(xì)胞ACV(acyclovir)99721B91852808權(quán)利要求
1.一種制備結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物或它的醫(yī)藥適用鹽的方法
式中R1表示化學(xué)式為-CH[CH3]2或-CH[CH3]CH2CH3的基，該方法包括a)使結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)的化合物同任意被保護(hù)的纈氨酸或異亮氨酸或它的功能等同物反應(yīng)
(式中X是一個(gè)任意被保護(hù)的羥基，Y是一個(gè)任意被保護(hù)的氨基)；或b)使結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)的化合物轉(zhuǎn)變成結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物或它的醫(yī)藥適用鹽
(式中R1的定義如上述；M表示一個(gè)羥基，G表示可以被氨基取代或轉(zhuǎn)變成氨基的一個(gè)原子或基；或者G表示一個(gè)氨基，M表示可以被羥基取代或轉(zhuǎn)變成羥基的一個(gè)原子或基)；或c)使結(jié)構(gòu)式(Ⅳ)的化合物與化學(xué)式(Ⅴ)的化合物反應(yīng)
(式中X和Y的定義如上，Q表示離去原子或基)(式中R1的定義如上，A表示離去基或原子，R2是任意被保護(hù)的氨基)；按任意需要的次序任意完成一個(gè)或多個(gè)下列轉(zhuǎn)變i)去除任何保護(hù)基；ii)在得到的產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物的場(chǎng)合，將所述化合物轉(zhuǎn)變成它的醫(yī)藥適用鹽；和iii)在得到的產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物的醫(yī)藥適用鹽的場(chǎng)合，將所述的鹽轉(zhuǎn)變成母體化合物。
2.一種制備2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H(嘌呤-9-基)甲氧基)乙基L-纈氨酸酯的方法。
3.一種制備2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧基-9H(嘌呤-9-基)甲氧基)乙基L-異亮氨酸酯的方法。
4.一種制備按照上述任何權(quán)利要求的化合物的鹽的方法，包括將結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物與一種酸混合形成一種鹽。
5.按照權(quán)利要求4的方法，其中所述的酸是鹽酸。
6.一種制備含有結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)(如權(quán)利要求1定義)的化合物或它的醫(yī)藥適用鹽的配方的方法，包括制備結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物或它的醫(yī)藥適用鹽a)使結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)的化合物與任意被保護(hù)的纈氨酸或異亮氨酸或它的功能等同物反應(yīng)
(式中X是一個(gè)任意被保護(hù)的羥基，Y是一個(gè)任意被保護(hù)的氨基);或b)使結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)的化合物轉(zhuǎn)變成結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物或它的醫(yī)藥適用鹽
(式中R1已為上面所定義;M表示一個(gè)羥基，G表示可以被氨基取代或轉(zhuǎn)變成氨基的一個(gè)原子或基;或者G表示一個(gè)氨基，M表示可以被羥基取代或轉(zhuǎn)變成羥基的一個(gè)原子或基);或c)使結(jié)構(gòu)式(Ⅳ)的化合物同化學(xué)式(Ⅴ)的化合物反應(yīng)
(式中X和Y如上面所定義，Q表示離去原子或基)(式中R1定義如上所述，A表示離去基或原子，R2是任意被保護(hù)的氨基);并且按任何所需的次序任意完成一個(gè)或多個(gè)下列轉(zhuǎn)變ⅰ)除去任何保護(hù)基;ⅱ)在所得產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物的場(chǎng)合，將所述化合物轉(zhuǎn)變成它的醫(yī)藥適用鹽;和ⅲ)在得到的產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物的醫(yī)藥適用鹽的場(chǎng)合，將所述鹽轉(zhuǎn)變成母體化合物，(2)將得到的化合物同它的醫(yī)藥適用載體結(jié)合。
全文摘要
本發(fā)明涉及嘌呤核苷q-(2羥基乙氧基甲基)鳥(niǎo)嘌呤的一些氨基酸酯、它的醫(yī)藥適用鹽和它們?cè)谥委熀皖A(yù)防皰疹病毒感染中的使用。本發(fā)明還包括醫(yī)藥配方，以及制備這些化合物的方法。
文檔編號(hào)A61K31/522GK1032538SQ8810653
公開(kāi)日1989年4月26日 申請(qǐng)日期1988年8月12日 優(yōu)先權(quán)日1987年8月15日
發(fā)明者托馬斯·安東尼·克倫尼斯基, 莉莉亞·瑪麗·比徹姆 申請(qǐng)人:惠爾康基金會(huì)集團(tuán)公司