專利名稱：含有腺苷三磷酸類似物的藥物組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥上有用的化合物及其制備方法。
腺苷三磷酸(ATP)對多種組織具有有效的藥理作用，ATP以及其它胞外腺嘌嶺核苷酸、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷一磷酸(AMP)的活性是由P2-嘌呤受體傳遞的。然而，在某些組織，例如膀胱中ATP的效力通過在這些組織中存在的外核苷酸酶由于快速脫磷酸作用可降低到AMP和腺苷。
在新近的研究中，已經(jīng)使用抗脫磷酸作用的ATP類似物作為生物探測劑以探查在多種組織中存在的P2-嘌呤受體。
Cusack等人(Br.J.Pharmacol.，1987，90，791-795)公開了2-甲硫基-5＇-腺苷酸與亞甲基雙膦酸的單酐，2-甲硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐和2-甲硫基-5＇-腺苷酸與二氟亞甲基雙膦酸的單酐對豚鼠結(jié)腸帶和膀胱的活性。Stone和Cusack(Br.J.Pharmacol.，1989，97，631-635)公開了在探查大鼠海馬中的P2-嘌呤受體中特別使用2-甲硫基-5＇-腺苷酸與二氟亞甲基雙膦酸的單酐。在“Physiological and RegulatoryFunctions of Adenosine and AdenineNucleotides”(Ed.H.P.Baer and G.I.Drummond，Raven Press.New York，1979，P.33-43)中Maguire and Satchell公開了2-氯-5＇-腺苷酸與亞甲基雙膦酸的單酐對豚鼠結(jié)腸帶的抑制作用。
Cusack和Hourani(Nucleosides &Nucleotides，1991，10(5)，1019-1028)還報導了2-甲硫基-5＇-腺苷酸與亞甲基雙膦酸的單酐抑制ADP-β-S誘導的血小板聚集。
現(xiàn)在我們發(fā)現(xiàn)了一組顯示藥理活性的新的2-取代的ATP衍生物。
按照本發(fā)明的第一方面，提供式I的化合物及其可藥用的鹽類， 式中Q表示CR1R2，R表示O或CR3R4，W表示O或CH2，R1、R2、R3和R4各自獨立地表示氫或鹵素。
X表示S(O)nR5、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6酰氨基、CONR6R7、NR8R9、鹵素、5-或6-節(jié)含S雜環(huán)、或任選地由C1-6烷基取代的苯基，n表示0、1或2，
R5表示芳基或任選地由一個或多個選自羥基、C1-6烷氧基、鹵素和芳基的取代基取代的C1-6烷基，R6、R7、R8和R9各自獨立地表示氫或C1-6烷基，Y表示NH2或C1-6烷氧基，Z表示一個酸性基團，此外，當R表示CR3R4時，則-Q-Z也可以表示羥基或-OP(O)(OH)2，其條件是i)當R是O，W是O，X是Cl，Y是NH2，Z是-P(O)(CH)2時，則CR1R2不表示CH；ii)當R是O，W是O，X是SCH，Y是NH2，Z是-P(O)(OH)2時，則CR1R2不表示(a)CH2，(b)CF2或(c)CCl2；iii)當R是CH2’W是O2，X是Cl，Y是NH2時，則-Q-Z不表示羥基；iv)當R是O，W是O，X和Y均為NH2，Z是-P(O)(OH)2時，CR1R2不表示CH2、CHF、CF2、CHCl或CCl2。
式I的化合物可以互變的，對映的和非對映的形式存在，所有這些化合物都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
按照本發(fā)明，另外還提供了一種制備式I化合物及其鹽類的方法，該方法包括a)通過將式II化合物或其鹽與式III化合物或其鹽反應(yīng)，制備R表示O的式I化合物或其鹽， 式中W、X和Y如上所定義，而L1表示一個離去基團， 式中Z和Q如上所定義。
b)通過將式IV化合物或其鹽與式V化合物或其鹽反應(yīng)，制備R表示CR3R4的式I化合物或其鹽， 式中W、X、和Y如上所定義，而L2表示一個離去基團， 式中Z、Q、R3和R4如上所定義。
c)通過將其中-Q-Z為羥基的相應(yīng)的式I化合物與式VI化合物或其鹽反應(yīng)，制備R為CR3R4和-Q-Z為-OP(O)(OH)2的式I化合物或其鹽， 式中L3是一個離去基團。
d)從其中一個或多個官能團被保護的相應(yīng)的被保護的式I化合物中除去保護基團，和在需要時或必要時將得到的式I化合物或其另一種鹽轉(zhuǎn)化成一種其可藥用的鹽，或反之亦然。
在方法a)和c)中，L1和L3可以表示的離去基團包括胺類，例如二烷基胺類或飽和的或不飽和的環(huán)胺類；可提到的特殊離去基團包括嗎啉基、咪唑基和三唑基。
在方法b)中，L2可以表示的離去基團包括烷基或芳基磺酰氧基，例如甲磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基或?qū)妆交酋Ｑ趸?；或三氟乙酰氧基?br> 在方法a)、b)和c)中，所用的溶劑較佳的是一種偶極非質(zhì)子傳遞溶劑，例如吡啶、二甲基甲酰胺、乙腈、六甲基磷酰三胺、N，N＇-二甲基丙烯脲或1-甲基-2-吡咯烷酮。該反應(yīng)可以在-20至100℃，例如10至30℃溫度下進行。
式II至VI的化合物或是已知的，或可用現(xiàn)有技術(shù)中普通技術(shù)人員公知的方法或通過類似于實施例中給出的技術(shù)來制備。例如，其中L1表示嗎啉基的式II化合物可以通過在有縮合劑，如二環(huán)己基碳化二亞胺存在下，較佳是在有保護(Protic)溶劑或溶劑混合物，如t丁醇和水存在時用嗎啉處理，由相應(yīng)的5＇-一磷酸鹽來制備。
對于其中W為O的化合物，5＇-一磷酸核苷和在制備式II和IV化合物中所用的核苷分別或是已知的，或可以用已知技術(shù)，例如參見“Chemistry of Nucleosides and Nucleotides”Vol.2.Ed.Leroy B.Townsend，Plenum Press1991，由已知化合物來制備。
在上述方法中，對原料中存在的任何官能團，例如羥基或氨基，可能必須保護，從而方法d)可以包括除去一種或多種保護基團。
合適的保護基團和將其除去的方法，例如是在“ProtectiveGroups in Organic Chemistry”(TheodoraGreene，John Wiley and Sons Inc.，1981)中所描述的那些。羥基，例如可以被芳基甲基，如苯甲基、二苯甲基或三苯甲基，或作為四氫呋喃基衍生物所保護。合適的氨基保護基團包括芳基甲基，如芐基、(R，S)-α-苯乙基、二苯乙基或三苯乙基，和?；缫阴；?、三氯乙?；蛉阴；??？梢允褂玫某Ｒ?guī)脫除保護的方法包括氫解、酸或堿水解、或光解。芳基甲基例如可以通過在有金屬催化劑(如炭上鈀)存在下氫解除去。四氫吡喃基可以在酸性條件下通過水解而分解。?；梢酝ㄟ^用堿，如氫氧化鈉或碳酸鉀水解而除去，或一種基團，如三氯乙?；梢酝ㄟ^用例如鋅和乙酸還原來除去。
通過將游離酸或其一種鹽，或游離堿或其一種鹽或其衍生物與一種或多種適當?shù)膲A或酸的等同物反應(yīng)可以形成式I化合物的鹽類。該反應(yīng)可以在其中鹽是不溶的溶劑或介質(zhì)中或在其中鹽是可溶的溶劑，例如乙醇、四氫呋喃或乙醚中進行，該溶劑可以在真空中或通過冷凍干燥除去。該反應(yīng)也可以是一種復(fù)分解過程或該反應(yīng)可以在離子交換樹脂上進行。
式I化合物的可藥用鹽類包括堿金屬鹽類，例如鈉和鉀的鹽類；堿土金屬鹽類，例如鈣和鎂的鹽類；第III族元素的鹽類，例如鋁的鹽類；和銨的鹽類；含有合適的有機堿的鹽類，例如含羥基胺的鹽類；低級烷基胺類，例如甲胺或乙胺；含有取代的低級烷基胺類，例如羥基取代的烷基胺類；或含有單環(huán)氮雜環(huán)化合物，例如哌啶或嗎啉；和含有氨基酸，例如含精氨酸、氨酸等的鹽類，或其N-烷基衍生物；或含一種氨基糖，例如N-甲基-D-葡糖胺或葡糖胺。盡管例如在分離或純化產(chǎn)品時其它鹽類也是有用的，但較佳的是無毒的生理上可接受的鹽類。
烷基包括直鏈、支鏈或環(huán)狀、飽和或不飽和烷基。
芳基包括碳環(huán)和雜環(huán)基團兩者。這些基團可以含有不同C-原子數(shù)目的環(huán)并可以是稠合的環(huán)結(jié)構(gòu)?？梢蕴峒暗奶囟ㄌ辑h(huán)芳基是苯基和萘基。雜芳基包括氮、氧或硫雜環(huán)并可以含有一個或多個雜原子。僅含一個雜原子的雜環(huán)實例包括吡咯、呋喃、噻吩和吡啶。含有一個以上雜原子的基團包括吡唑、惡唑、噻唑、三唑、惡二唑、噻二唑等。
X、R1、R2、R3和R4可以表示的鹵素包括F、Cl、Br和I。
當Q表示CR1R2時，我們優(yōu)選R1和R2為相同的，我們特別優(yōu)選其中R1和R2兩者都表示Cl的化合物。
當R表示CR3R4時，我們優(yōu)選R3和R4為相同的，我們特別優(yōu)選其中R3和R4兩者都表示氫或Cl的化合物。
我們優(yōu)選其中Q表示CR1R2的式I化合物。
我們優(yōu)選其中R表示O的式I化合物。
我們特別優(yōu)選其中Q表示CR1R2而R表示O的式I化合物。
我們優(yōu)選其中W表示O的式I化合物。
X可以表示的含S雜環(huán)包括含1或2個S原子的飽和的和不飽和的雜環(huán)兩者?？梢蕴峒暗奶囟s環(huán)基團是噻吩基，特別是2-噻吩基。
我們優(yōu)選其中X表示S(O)nR5的式I化合物，特別是其中n表示O的那些化合物。我們優(yōu)選其中R5表示C1-6烷基的式I化合物，可以提及的特定烷基包括乙基、丁基和丙基，特別是正丙基。
我們優(yōu)選其中Y表示NH2的化合物。
Z可以表示的酸性基團包括-P(O)(OH)2、-SO3H和-GO2H。
我們優(yōu)選其中Z表示-P(O)(OH)2的式I化合物。
式I的化合物是有用的，因為它們在哺乳動物中顯示出藥理活性。特別是，它們顯示出在防止血小板聚集方面的活性。
式I化合物作為血小板聚集抑制劑的效力可以由其作為P2T受體拮抗物的能力而測出，參見實施例X。
這些化合物可以在涉及血小板聚集或解聚的任何條件下使用。從而這些化合物可以作為抗血栓形成劑并適用于治療或預(yù)防不穩(wěn)定心絞痛、血栓栓塞發(fā)作和末梢血管病。它們也適用于治療或預(yù)防由血管成形術(shù)、血栓溶解、動脈內(nèi)膜切除術(shù)、冠狀動脈和血管移植外科手術(shù)、腎透析和心肺旁通引起的血栓形成并發(fā)癥的后遺癥。另外的適應(yīng)癥包括治療或預(yù)防散布的血管內(nèi)血凝固、深靜脈血栓形成、驚厥前/驚厥、在外科或意外創(chuàng)傷后的組織補救、脈管炎、動脈炎、血小板增多(thrombocythaemia)、局部缺血以及偏頭痛。
按照本發(fā)明的另一方面，從而我們提供如上所定義的式I化合物作為藥物，但不附帶條件iv)。
根據(jù)所用的特定式I化合物，治療的特定條件及其藥力，連同其它因素，所服用的劑量將是很寬的。然而，通?？偟娜談┝繛?g可能是合適的，該劑量可以分劑量每天6次服用。
這些化合物通常以醫(yī)藥組合物的形式服用。
從而，按照本發(fā)明的另一方面，提供一種混合可藥用的輔劑、稀釋劑或載體的醫(yī)藥組合物，該組合物較佳含有小于80％(重量/重量)，更佳小于50％(重量/重量)，例如0.1-20％如上所定義的式I化合物或其可藥用的鹽，而沒有附帶條件iv)。
可以使用的這些醫(yī)藥制劑的實例，以及合適的輔劑、稀釋劑或載體如下所述對于靜脈內(nèi)注射或注入—純化水或鹽水溶液；對于吸入組合物—粗乳糖；對于片劑、膠囊和糖衣丸—微晶纖維素、磷酸鈣、硅藻土、糖，如乳糖、右旋糖或甘露糖醇、滑石、硬脂酸、淀粉、碳酸氫鈉和/或明膠；對于栓劑—天然或硬化油或石蠟。
當化合物以水溶液使用時，如對于注入，可能必須摻入其它賦形劑。特別是可提及螯合劑、抗氧化劑、張力調(diào)節(jié)劑、PH調(diào)節(jié)劑以及緩沖劑。
如果需要，可以將含有式I化合物的溶液蒸發(fā)，例如通過冷凍干燥或噴霧干燥，以得到固體組合物，該溶液可以在使用前重新形成。
當不是以溶液形式時，式I的化合物較佳的是以具有平均直徑0.01-10μm的塊狀形式。這些組合物也可含有合適的保存、穩(wěn)定和增濕劑、加溶劑，例如水溶性纖維素聚合物(如羥丙基甲基纖維素)或水溶性二元醇(如丙二醇)、香化劑和著色劑以及調(diào)味劑。在合適的場合，可以以持久釋放的形式構(gòu)成這些組合物。
按照本發(fā)明的又一方面，從而我們提供將式I化合物或其可藥用的鹽用于制備治療涉及血小板聚集或解聚狀況的醫(yī)藥組合物，而沒有附帶條件i)、ii)(b)、(ii)(c)、(iii)和iv)。
按照本發(fā)明的另一方面，從而我們提供一種治療涉及血小板聚集或解聚狀況的方去，該方法包括給遭受該狀況的病人服用治療上有效量的如上所定義的式I化合物，而沒有附帶條件i)、ii)(b)、(ii)(c)、(iii)和iV)。
本發(fā)明的化合物其優(yōu)點在于，它們與上述治療領(lǐng)域中以前所用的化合物相比毒性較小，更有效，作用時間更長，具有更廣的作用范圍，藥力更強、更穩(wěn)定、產(chǎn)生更少的付作用，更易于吸收、更易于從體內(nèi)清除或具有其它有用的藥理性能。
通過以下實施例來說明本發(fā)明，但決不是對其限制，其中給出的溫度為攝氏度。使用化學文摘的術(shù)語命名這些實施例。實施例12-丙硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽i)2-丙硫基腺苷將在水(15ml)、甲醇(45ml)和1N氫氧化鈉溶液(8.36ml)中的腺苷-2-硫酮(2.5g)在冰浴上冷卻并加入碘丙烷(5ml)。四天后，將反應(yīng)混合物蒸發(fā)并將殘余物色譜分離(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1)，得到定量產(chǎn)率的小標題化合物。
NMR δ1H(d6DMSO)8.22(s，1H)，7.36(brs，2H)，5.80(d，1H，J＝5.9Hz)，5.61(t，1H，J＝5.5Hz)，5.13(m，1H)，3.90(dd，1H，J＝4.0和7.7Hz)，3.64(dd，1H，J＝4.2和11.8Hz)，3.52(dd，1H，J＝4.4和11.8Hz)，3.0-3.2(m，2H)，1.67(hextet，2H，J＝7.3Hz)，0.99(t，3H，J＝7.3Hz)。ii)2-丙硫基-5＇-腺苷酸將步驟i)的產(chǎn)物(1.0g)在-10℃下加到攪拌的氯氧化磷(1.06ml)和磷酸三乙酯(25ml)的混合物中。3小時后，將反應(yīng)混合物倒在冰上并用固體碳酸氫鈉將PH調(diào)至7。用醚(3×150ml)洗滌該溶液，然后冷凍干燥。將得到的固體溶在去離子水中并施于Dowex50WX8(H+形式)柱，用水洗滌該柱直至洗脫液為PH6，然后用1M氫氧化銨洗脫。冷凍干燥得到小標題化合物(0.4g)。
NMRδ31P(D2O)1.32(s)。iii)2-丙硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽將步驟ii)的產(chǎn)物(0.4g)和三正丁胺(0.175g)在小體積水中混合，然后蒸發(fā)該溶液至干。用吡啶(3×15ml)，隨后用無水二甲基甲酰胺(2×15ml)共沸干燥得到殘余物，將殘余物溶解在無水二甲基甲酰胺(10ml)中。添加羰基二咪唑(0.77g)，使反應(yīng)置于室溫4小時，然后添加甲醇(0.24g)。30分鐘后加入在無水二甲基甲酰胺(30ml)中的二溴亞甲基雙膦酸單三正丁銨鹽(6.5mmol)，將該混合物在室溫攪拌18小時。過濾并蒸發(fā)得到一種殘余物，通過色譜法(DEAE-Sepharose，碳酸氫鈉水溶液(0-0.4M)作為洗脫液)將其提純。冷凍干燥得到銨鹽，將其重新溶于水中(200ml)并用三乙胺(10ml)處理。在真空中蒸發(fā)得到四重三乙銨鹽。將該鹽溶解在甲醇(2ml)中并添加碘化鈉溶液(丙酮中1M，30ml)使其轉(zhuǎn)化成四鈉形式。通過離心法收集沉淀并通過重新懸浮在丙酮中(4×40ml)來洗滌并再次離心。最后，將固體溶解在水中并冷凍干燥，得到白色粉末狀的標題鹽(0.42g)。
NMRδ31P(D2O)8.95(d，J＝36Hz)，1.35(dd，J＝36和69Hz)，-9.15(d，J＝69Hz)。實施例2按照實施例1的方法制備如下化合物a)2-丙硫基-5＇-腺苷酸與二氟亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMR δ31P(D2O)3.94(dt，J＝145.8和196Hz)，3.11至-4.92(m)，-10.15(d，J＝75Hz)。b)2-丙硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMRδ31P(D2O)9.4(d，J＝46Hz)，2.3(dd，J＝46和73.1Hz)，-9.15(d，J＝73.1Hz)。c)2-戊硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽i)2-戊硫基腺苷NMRδ1H(d6DMSO)8.22(s，1H)，7.35(brs，1H)，5.80(d，1H，J＝5.9Hz)，5.42(d，1H，J＝6.16Hz)，5.16(d，1H，J＝4.86Hz)，5.02(t，1H，J＝5.6Hz)，4.61(q，1H，J＝5.76Hz)，4.07-4.15(m，1H)，3.85-3.95(m，1H)，3.6-3.7(m，1H)，3.48-3.6(m，1H)，3.0-3.15(m，2H)，1.6-1.7(m，2H)，1.3-1.45(m，4H)，0.88(t，3H，J＝7.02Hz)。
ii)2-戊硫基-5＇-腺苷酸NMRδ31P(D2O)1.2(s)iii)2-戊硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐。
四鈉鹽NMRδ31P(D2O)8.55(d，J＝46.2Hz)，2.5-3.5(m)，-9.12(d，J＝70.34Hz)。d)2-戊硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，一銨鹽通過色譜法(DEAE-Sepharose，0-0.4M碳酸氫銨作為洗脫液)將粗產(chǎn)物提純得到標題的鹽。
NMRδ31P(D2O)7-8(brs)，2.5-3.5(m)，-9.07(d，J＝83.5Hz)。e)2-乙硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽i)2-乙硫基-5＇-腺苷酸二鈉鹽NMRδ31P(D2O)5.01(g)。
ii)2-乙硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐。四鈉鹽NMRδ31P(D2O)8.25(d，J＝17.04Hz)3.28(dd，J＝18.9和28.22Hz)，-9.22(d，J＝28.22Hz)。f)2-乙硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMR δ31P(D2O)6.5-7.5(m)，2.88(dd，J＝14.75和27.33Hz)，-10.9(d，J＝28.22Hz)。g)2-丁硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，一銨鹽i)2-丁硫基-5＇-腺苷酸NMRδ31P(D2O)1.84(s)。
ii)2-丁硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，一銨鹽NMRδ31P(D2O)8.05-8.25(m)，3.66(dd，J＝18.48和27.8Hz)，-9.03(d，J＝27.8Hz)。h)2-丙硫基-5＇-腺苷酸與亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMRδ31P(D2O)15.8(d，J＝8.3Hz)，10.7(dd，J＝8.4和27Hz)，-9.44(d，J＝25.8Hz)。i)2-乙酰氨基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽i)2-乙酰氨基-5＇-腺苷酸NMRδ31P(D2O)4.16(s)。
ii)2-乙酰氨基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMRδ31P(D2O)8.99(d，J＝14.7Hz)，1.42(dd，J＝14.8和28.3Hz)，-9.16(d，28.3Hz)。j)2-氯-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽UVλmax(H2O)210nm(ε20，900)265nm(ε12，700)。k)2-碘-5＇-腺苷酸與二氟亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMRδ31p(D2O)4.72(dt，J＝57和73Hz)，-1.89(ddt，J＝64、88和31Hz)，-9.86(d，J＝32Hz)。l)L-2-甲硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMRδ31P(D2O)8.12(d，J＝15Hz)，-0.03(dd，J＝15和26Hz)，-9.88(d，J＝28Hz)。m)2-丙氨基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽NMRδ31p(D2O)8.87(d)，0.99(dd)，-9.3(d)。n)2-丙硫基-5＇-腺苷酸與磺基二氟甲基膦酸的單酐，三鈉鹽NMRδ31p(D2O)-8.8(dt)，-10.0(d)。o)2-丙硫基-5＇-腺苷酸與膦酰乙酸的單酐，三鈉鹽NMRδ31P(D2O)11.4(d)，-9.57(d)p)2-(2-噻吩基)-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽i)2-(2-噻吩基)-5＇-腺苷酸
NMRδ31P(D2O)2.14(s)ii)2-(2-噻吩基)-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMRδ31P(D2O)9.53(d，J＝14Hz)，3.91(dd，J＝14和30Hz)，-8.96(d，J＝30Hz)。q)2-苯基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽i)2-苯基-5＇-腺苷酸NMRδ31p(D2O)0.22(s)。
ii)2-苯基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽NMRδ31P(D2O)8.55(d，J＝14.1Hz)，2.92(dd，J＝14.2和29.6Hz)，-9.87(d，J＝29.3Hz)。實施例32-丁基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽i)2-丁基-5＇-腺苷酸將實施例2p)i)的產(chǎn)物(1.4g)與活化的阮內(nèi)鎳(1.5g)在水中(50ml)于70℃加熱2小時。在過濾并用水洗滌固體后，蒸發(fā)濾液得到無色固體的小標題化合物(0.56g)。
MS(FAB)404(M+＋1)，426(M+＋Na)，192(100％)。
ii)2-丁基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽
NMRδ31p(D2O)8.8(d)，1.0(dd)，-9.4(d)。實施例42-丙氧基-5＇--腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，四鈉鹽i)2-丙氧基-腺苷酸將2-氯腺苷(3.5g)加到熱的NaOH(3.2g)正丙醇(80ml)溶液中，將該混合物在回流下加熱3小時。在真空下除去揮發(fā)物，將殘余物溶于水(40ml)，冷卻并用1M鹽酸酸化至PH7。15分鐘后，將懸浮液過濾并蒸發(fā)濾液。將殘余物溶于乙醇中并吸附到置于色譜柱中的二氧化硅上先用9∶1，然后用4∶1CHCl3洗脫得到小標題化合物(0.65g)。
MS(FAB)326(M+＋H)ii)2-丙氧基-5＇-腺苷酸，-銨鹽用實施例1的方法制備。
NMRδ31p(D2O＋NaOD)3.17(s)。
iii)2-丙氧基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽NMRδ31P(D2O)9.4(d，J＝14.5Hz)，3.77(dd，J＝14.3和29.2Hz)，-9.0(d，J＝29.7Hz)。實施例52-(1-甲基乙基)硫-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽i)2＇，3＇，5＇-三-O-乙酰-6-氯-2-(1-甲基乙基)硫-腺苷將9-(2＇，3＇，5＇-三-O-乙酰-β-D-呋喃核糖基)-2-氨基-6-氯嘌呤(6.6g)溶于無水乙腈(65ml)中。添加二硫異丙酯(21ml)和亞硝酸異戊酯(12.1ml)將得到的溶液用氮氣沖洗45分鐘，然后在氮氣中于60°加熱16小時。在真空下除去揮發(fā)物，將殘余物色譜分離得到黃色油狀的小標題化合物(3.69g)。
NMRδ1H(d6-DMSO)8.70(g，1H)，6.29(d，1H)，6.02(m，1H)，5.61(t，1H)，4.39(m， 2H)，4.20(m，1H)，4.00(Septet，1H)，2.12、2.07、1.98(3×s，3×1H)，1.41(d，6H)。
ii)2-(1-甲基乙基)硫-腺苷將在乙醇(400ml)中的步驟i)產(chǎn)物(3.6g)冷卻至0°并用氨飽和。使該溶液加溫至約15°，然后在高壓釜中加熱24小時至70°，在真空下除去揮發(fā)物，將殘余物色譜分離得到小標題化合物(1.95g)。
MS(FAB)342(M+＋H)(100％)。
iii)2-(1-甲基乙基)硫-5＇-腺苷酸按照實施例1的方法制備小標題化合物。
NMRδ31P(D2O)1.1(s)iv)2-(1-甲基乙基)硫-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽按照實施例1的方法制備標題化合物。
NMRδ31P(D2O)9.21(d，J＝21Hz)，2.0(dd，J＝19和30Hz)，9.33(d，J＝32Hz)實施例62-丙硫基腺苷酸與雙〔(二羥基氧磷基)甲基〕次膦酸的5＇-p′-單酯，二鈉鹽i)2＇，3＇-O.O-(1-甲基亞乙基)-2-丙硫基腺苷以小份額用1小時將對苯磺酸-水合物(1.46g)加到在AR丙酮(97ml)和2，2-二甲氧基丙烷(11.3ml)中的2-丙硫基腺苷(2.6g)的懸浮液中。在室溫將生成的溶液攪拌18小時，用水(300ml)稀釋并用三乙胺處理至pH7。在真空下將體積減至一半，剩下的溶液入三氯甲烷(3×100ml)中萃取。將萃取物干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)。通過色譜法(SiO2，乙酸乙酯)提純殘余物，得到小標題化合物(1.8g)。
MS(FAB)382(M+＋H)，BP210。ii)5＇-4-甲苯磺酰-2＇，3＇-O，O-(1-甲基亞乙基)-5＇-脫氧-2-丙硫基腺苷。
將4-二甲基氨基吡啶(1.33g)加到在無水二氯甲烷(100ml)中的步驟i)產(chǎn)物(1.6g)的冰冷的溶液中，然后用15分鐘添加對甲苯磺酰氯(0.88g)的無水二氯甲烷(20ml)溶液。于0-4°下18小時后，在真空下除去揮發(fā)物，通過色譜法(SiO2，乙酸乙酯)提純殘余物，得到小標題的化合物(1.9g)。
NMRδ1H(CDCl3)7.7(s，1H)，7.6(d，2H)，7.1(d，2H)，6.0(d，1H)，5.7(s，2H)，5.4(d，1H)，5.0(m，1H)，4.4(m，1H)，4.2(m，2H)，3.0(m，2H)，2.4(s，3H)，1.7(q，2H)，1.6(s，3H)，1.4(s，3H)，1.1(t，3H)。iii)2-丙硫基腺苷與雙〔(二羥基氧磷基)甲基〕次膦酸的5＇-P＇-單酯，二鈉鹽通過添加40％(重量/體積)氫氧化四丁銨溶液將雙〔(二羥基氧磷基)甲基〕次膦酸(0.66g)的水(10ml)溶液調(diào)至PH8.7，然后冷凍干燥，得到一種膠，進一步通過反復(fù)溶在乙腈中并蒸發(fā)溶劑(3×50ml)將該膠干燥。將殘余物溶于無水乙腈(10ml)中并用步驟ii)的產(chǎn)物(0.81g)處理，該混合物在真空中濃縮成稠漿。在室溫攪拌過夜后，用水稀釋該混合物并施于DEAE-Sepharose(Fast Flow)柱。冷凍干燥后用0-0.6M三乙銨的碳酸氫鹽洗脫，得到殘余物，將該殘余物溶于80％(體積/體積)乙酸中并加熱4小時至80°。蒸干后，將殘余物與水(2×20ml)共沸處理，溶于甲醇(5ml)中并用幾滴三乙胺處理。向溶液添加1M碘化鈉丙酮溶液以沉淀鈉鹽，通過離心分離收集鈉鹽并用丙酮洗滌幾次。將固體溶于水中并冷凍干燥以得到無色固體的標題的鹽(96mg)。
NMRδ31P(D2O)28.17(d)，18.86(dd)16.39(d)。實施例72-丙硫基腺苷與雙〔(二氯(二羥基氧磷基))甲基〕次膦酸的5＇-P＇-單酯，四鈉鹽i)雙〔(二氯(二羥基氧磷基))甲基〕次膦酸，五乙基酯將雙〔(二羥基氧磷基)甲基〕次膦酸五乙基酯(3.94g)的三氯甲烷(100ml)溶液與工業(yè)次氯酸鈉溶液(5.25％有效氮，400ml)在室溫下劇烈攪拌24小時。分離有機相并蒸發(fā)，得到小標題化合物(4.7g)MS(FAB)531/533/535/537(M+＋H)，BP533。ii)雙〔(二氯(二羥基氧磷基))甲基〕次膦酸將在無水二氯甲烷(10ml)中的步驟i)產(chǎn)物(0.532g)用溴化三甲基硅(0.912g)在室溫下處理18小時。在真空中除去揮發(fā)物，將殘余物溶于甲醇(5ml)中，兩小時后蒸發(fā)掉甲醇，將生成的油溶于去離子水(10ml)中并用醚完全萃取。添加環(huán)己胺直至PH為約10，然后添加甲醇直至持久混濁。收集在冷卻時沉積的固體并干燥，然后溶于水(10ml)中并施于Dowex50WX8(H+)柱。用蒸餾水洗脫并冷凍干燥，得到小標題化合物(0.15g)。
NMRδ31P(D2O)9.2(d，J＝20.4Hz)，17.9(t，J＝18.7Hz)。iii)2-丙硫基腺苷與雙〔(二氯(二羥基氧磷基))甲基〕次膦酸的5＇-p′-單酯，四鈉鹽按照實施例6的方法由步驟(ii)的產(chǎn)物(0.35g)制備標題化合物。
NMRδ31P(D2O)20.81(t，J＝14.1Hz)11.18(d，J＝12.1Hz)，9.9(d，J＝12.3Hz)。實施例82-丙硫基腺苷與亞甲基雙膦酸的5＇-P＇-單酯，與磷酸的P2-單酐四鈉鹽i)2-丙硫基腺苷與亞甲基雙膦酸的5＇-P＇-單酯，二鈉鹽通過實施例6iii)的方法制備小標題化合物。
NMRδ31P(D2O)20.97(d，J＝8.56Hz)15.3(d，J＝8.57Hz)。ii)2-丙硫基腺苷與亞甲基雙膦酸的5＇-P＇-單酯，與磷酸1-(2-硝基苯基)乙酯的P2-單酐，單三乙基銨鹽用去離子水通過Dowex50WX8(n-Bu4N+形式)柱洗脫步驟i)的產(chǎn)物，將洗脫液冷凍干燥以得到雙膦酸酯物料的四正丁基銨鹽。在無水吡啶(5ml)中于室溫下將該鹽(0.73mmol)和偶磷酰嗎啉1-(2-硝基苯基)乙酯，N，N＇-二環(huán)已基嗎啉-1-碳氨肟鎓(carboxamidinium)鹽(1.09mmol)攪拌48小時。將溶劑蒸發(fā)并將殘余物溶于水(100ml)中，并用三氯甲烷(2×50ml)洗滌。在30°將水相的體積減少至10ml并施于DEAE-Sepharose柱，用0-0.4M三乙基銨的碳酸氫鹽溶液洗脫該柱。合并適當?shù)酿s分并冷凍干燥，得到小標題化合物(0.3g)。
NMRδ31P(D2O)18.43(d，J＝11.31Hz)7.8(dd)，-10.96(d，J＝26.3Hz)。iii)2-丙硫基腺苷與亞甲基雙膦酸的5＇-P1-單酯，與磷酸的P2-單酐，四鈉鹽在10°下將步驟ii)產(chǎn)物(0.3g)的0.4M含鹽酸氨基脲(0.3g)的三乙基銨的碳酸氫鹽溶液(100ml)用高壓UV燈照射2小時。在真空中于30°除去溶劑并在用0-0.6M三乙基銨的碳酸氫鹽緩沖液洗脫的DEAE-Sepharose上通過色譜法將殘余物提純。合并有關(guān)的餾分并冷凍干燥，將殘余物通過實施例6iii)的方法轉(zhuǎn)化成四鈉鹽(1.13g)NMRδ31P(D2O)19.34(d，J＝8.56Hz)，6.7(dd)，-6.6(d，J＝20.96Hz)。實施例93-(6-氨基-2-丙硫基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥基-甲基)-1，2-環(huán)戊二醇5-磷酸二氫酯與二氯亞甲基雙磷酸的單酐，三鈉鹽i)2-丙硫基-嘧啶-4，6-二醇向4，6-二羥基-2-巰基嘧啶(100g)的氫氧化鉀(2.5N，571ml)溶液中加入丙基碘(76.8ml)并將全部溶液攪拌4天。將該溶液酸化至PH2-3并過濾，得到小標題約化合物(15g)。
MS330M+(di-TMS)，BP315。ii)5-硝基-2-丙硫基嘧啶-4，6-二醇用1小時將步驟i)的產(chǎn)物(2g)加到冰冷卻的發(fā)煙硝酸(10ml)中并在0°下再攪拌1小時。傾倒在冰上隨后干燥，得到本色固體的小標題化合物(1.7g)。
MS375M+(di-TMS)，BP360。iii)4，6-二氯-5-硝基-2-丙硫基嘧啶將步驟ii)的產(chǎn)物(1.7g)、磷酰氯(10ml)和N，N-二乙基苯胺(3ml)加熱1小時至回流，然后濃縮至一半體積并傾倒到冰上得到黑焦油。用醚萃取該焦油得到一種溶液，該溶液經(jīng)干燥(MgSO4)，然后蒸發(fā)。將殘余物色譜分離(SiO2，輕汽油)得到小標題化合物(0.8g)。
MS267/269/271M+，BP41。iv)4，6-二氯-2-丙硫基-嘧啶-5-胺將還原鐵粉(1.1g)加到步驟iii)產(chǎn)物(1g)的冰醋酸(10ml)溶液中。通過冷卻將溫度降至60°，然后在60°加熱15分鐘。將反應(yīng)物蒸發(fā)至干，殘余物萃取入到醚(100ml)中，用稀氫氧化鈉溶液洗并干燥。蒸發(fā)得到暗油狀的小標題化合物(0.8g)。
NMRδ1H(CDCl3)4.2(brs，2H)，3.1(t2H)，1.71(q，2H)，1.05(t，3H)。v)3-(5-氨基-6-氯-2-丙硫基嘧啶-4-基氨基)-5-(羥甲基)-環(huán)戊烷-1，2-二醇將步驟iv)的產(chǎn)物(4.6g)加到含有三乙胺(10ml)的3-氨基-5-(羥甲基)-環(huán)戊烷-1，2-二醇(1.41g)的丁-1-醇(200ml)溶液中，將全部溶液加熱48小時至回流。蒸發(fā)得到一種暗色殘余物，經(jīng)色譜分離(SiO2，10％乙醇/二氯甲烷)，得到小標題化合物(2.8g)MS349/350(M+＋H)，BP349。vi)3-(6-氨基-丙硫基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)-1，2-環(huán)戊烷二醇將步驟v)的產(chǎn)物(0.2g)和乙酸二乙氧基甲酯(10ml)于室溫在氮氣下攪拌1小時，然后于80°經(jīng)24小時。蒸發(fā)得殘余物，將該殘余物在高壓釜中于60°用液氨處理16小時。將氨蒸發(fā)并將殘余物于60°在45分鐘內(nèi)溶于0.5M鹽酸(10ml)中。在真空中除去揮發(fā)物，將剩余的物料溶于水(10ml)中。用濃氨中和時結(jié)晶出小標題化合物，并收集和干燥(0.15g)。
MS(FAB)340(M+＋H)，BP340。vii)3-(6-氨基-2-丙硫基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)-1，2-環(huán)丙烷二醇5-磷酸二氫酯通過實施例1的方法將步驟vi)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成小標題化合物。
NMRδ31P(D2O)2.85(s)viii)3-(6-氨基-2-丙硫基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)-1，2-環(huán)丙烷二醇5-磷酸二氫酯與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽通過實施例1的方法將步驟vii)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成標題的鹽。
NMRδ31P(D2O)8.54(d，J＝18.73Hz)，0.84(dd)，-9.5(d，J＝29.61Hz)。實施例101-(6-甲氧基-2-丙硫基-嘌呤-9-基)-呋喃核糖-5＇-基-磷酸酯與二氨亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽i)2＇，3＇，5＇-三-O-乙?；?6-氯-2-丙硫基腺苷按照實施例5i)的方法，使用二正丙二硫化物制得小標題化合物NMRδ1H(CDCl3)8.13(s，1H)，6.14(d，1H)，5.93(t，1H)，5.60(t，1H)，4.3-4.5(m，3H)，3.21(t，2H)，2.15，2.13，2.11(3xs，3x3H)，1.8(m，2H)，1.07(t，3H)。ii)6-甲氧基-2-丙硫基-9-呋喃核糖基-嘌呤將步驟i)的化合物(5.2g)溶于1M甲醇鈉的甲醇溶液(53ml)中并在氮氣中加熱1小時至回流。用水(100ml)稀釋，用稀鹽酸中和并蒸發(fā)甲醇得到一種油。用水，然后用二氯甲烷研制得到無色固體的小標題化合物(1.35g)。
MS(FAB)357(M+＋H)，BP225。iii)1-(6-甲氧基-乙-丙硫基-嘌呤-9-基)-呋喃核糖-5＇-基-磷酸酯按照實施例1的方法制得小標題化合物。
NMRδ31P(D2O)1.69(s)iv)1-(6-甲氧基-2-丙硫基-嘌呤-9-基)-呋喃核糖-5＇-基-磷酸酯與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，三鈉鹽按照實施例1的方法制得標題的鹽。
NMRδ31P(D2O)8.59(d，J＝18Hz)，1.73(dd，J＝18和29Hz)，-9.94(d，J＝29Hz)。實施例X在沖洗的人體血小板中P2T受體興奮劑/拮抗物活性的定量試驗。制備將人體靜脈血液(100ml)等分在三個試管中，每個試管含3.2％檸檬酸三鈉(4ml)作為抗凝血劑。將這些試管在240G離心分離15分鐘以得到富血小板的血漿(PRP)，向該血漿加入300ng/ml前列環(huán)素(PGI2，來自1mg/ml乙醇貯液的1/10鹽水稀釋液的3μl/mlPRP)以在洗滌步驟中穩(wěn)定這些血小板。通過在125G離心10分鐘，隨后在640G再離心15分鐘得到無紅細胞的PRP。除去上清液并將血小板片狀沉淀物重新懸浮在改進的，無鈣的臺羅德氏液〔(10ml)CFT，組分NaCl137mM(8g/l)、NaHCO311.9mM(1g/l)、NaH2PO40.38mM(0.06g/l)、KCl2.86mM(1ml20％溶液/l)、MgCl1.05mM(1ml10％溶液/l)、右旋糖5.55mM(1g/l)〕中，通95％O2/5％CO2氣體并保持在37°。再添加300ng/mlPGI2后，立即將匯集的懸浮液于640G再次離心分離15分鐘。除去上清液并將血小板最初懸浮在10ml CFT中，再添加CFT以調(diào)節(jié)最終血小板數(shù)至2×105/μl。將最終懸浮液于3°下貯存在隔絕空氣的60ml的注射器中。
為了恢復(fù)PGI2抑制正常功能，在最后懸浮后不快于2小時將這些血小板用于聚集研究。在全部研究中，將430μl血小板懸浮液的等分試樣加到含有CaCl2溶液(10μl45mM溶液，最終濃度1mM)的硅烷化的聚集杯中并在PAP4聚集器(Biodata)中以900rpm攪拌。添加人體纖維蛋白原(Sigma F4883)和8-磺苯基茶堿(8-SPT，以阻礙任何化合物的P1興奮劑活性)，得到最后濃度分別為0.2mg/ml(10μl10mg/ml可凝固蛋白質(zhì)的鹽水溶液)和3×10-4M(10μl5.6mg/ml葡萄糖溶液。然后開始記錄聚集。試驗程序a)接近最大ADP濃度的選擇通過在整個10-300μm范圍內(nèi)繪制濃度/響應(yīng)曲線選擇得到剛好為接近最大響應(yīng)的ADP濃度。在開始出現(xiàn)聚集跡象后20分鐘將合適的ADP溶液加到體積為10μl的聚集杯中。利用透光的最大變化率測量聚集響應(yīng)，通過PAP4斜率讀數(shù)器得出指數(shù)。將在本程序的這一階段所選擇的接近最大濃度的ADP用于以后對化合物拮抗物效力的評價。所有測定都以雙份用每個供體的血小板作用。b)興奮劑/拮抗物效力的評價在開始出現(xiàn)聚集跡象后5分鐘，將試驗化合物的鹽水或適當溶液加到體積為30μl的聚集杯中，得到最終濃度為0、10、100或1000μm。在這一時刻的聚集是興奮劑活性的征兆，如果發(fā)生，則通過在a)得到的對照ADP響應(yīng)比較測定該興奮劑效力。如果不發(fā)生聚集，在試驗化合物之后15分鐘加入10μl體積先前選擇的接近最大濃度的ADP。將拮抗物效力測定為％抑制對照ADP響應(yīng)，得到一個近似的IC50。在低濃度范圍內(nèi)重新測試在最初濃度時完全抑制ADP響應(yīng)的化合物。IC50＜10-8M的化合物在有8-SPT存在下也被重新測試以證實沒有任何P1興奮劑非活性并用2分鐘而不是15分鐘培育以檢查抑制作用是否與時間有關(guān)結(jié)果以由每4個供體的雙份形式得到的拮抗物效力(PIC50)的負對數(shù)報導結(jié)果。對于PIC50＞8的化合物，如果沒有P1興奮劑活性的證據(jù)，則作出評論“純化”。IC50＜3定義為“非活性的”。
權(quán)利要求
1.一種制備含式I化合物或其可藥用鹽類的藥物組合物的方法， 式中Q表示CR1R2；R表示O或CR3R4；W表示O或CH2；R1、R2、R3和R4各自獨立地表示氫或鹵素；X表示SR2；R5表示乙基、丙基或丁基；Y表示NH2或C1-6烷氧基；Z表示酸性基團；此外，當R表示CR3R4時，則-Q-Z也可以表示羥基或-OP(O)(OH)2；當R和W表示O，Q表示CCl2或CBr2，Y表示NH2，Z表示-P(O)(OH)2時，則R5也可以表示戊基；該方法包括使式I化合物與可藥用載體、稀釋劑或助劑混合。
2.權(quán)利要求1的方法。其中Z是-P(O)(OH)2。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中Q是CR1R2，R是O。
4.上述權(quán)利要求中任一項的方法，其中W是O。
5.權(quán)利要求1的方法，其中式I化合物是2-丙硫基-5′-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐，或其可藥用的鹽。
6.權(quán)利要求1的方法，其中式I化合物是下列化合物或其可藥用的鹽2-丙硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐；2-丙硫基-5＇-腺苷酸與二氟亞甲基雙膦酸的單酐；2-戊硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐；2-戊硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙磷酸的單酐；2-乙硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐；2-乙硫基-5＇-腺苷酸與二溴亞甲基雙膦酸的單酐；2-丁硫基-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐；2-丙硫基-5＇-腺苷酸與亞甲基雙膦酸的單酐；2-丙硫基-5＇-腺苷酸與磺基二氟甲基膦酸的單酐；2-丙硫基-5＇-腺苷酸與膦酰乙酸的單酐；2-(1-甲基乙基)硫-5＇-腺苷酸與二氯亞甲基雙膦酸的單酐；2-丙硫基腺苷與雙[(二羥基氧磷基)甲基]次膦酸的5＇-P1單酯；2-丙硫基腺苷與雙[(二氯二羥基氧磷基)甲基]次膦酸的5＇-P1單酯；2-丙硫基腺苷與亞甲基雙膦酸的5＇-P1單酯，與磷酸的P2-單酐；2-丙硫基腺苷與亞甲基雙膦酸的5＇-P1單酯；3-(6-氨基-2-丙硫基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)-1，2-環(huán)戊二醇5-磷酸二氫酯與二氯亞甲基雙膦酸的單酐；1-(6-甲氧基-2-丙硫基嘌呤-9-基)呋喃核糖-5＇-基磷酸酯與二氯亞甲基雙膦酸的單酐。
全文摘要
本發(fā)明公開了含有式I化合物及其可藥用鹽的藥物組合物的制備方法。式I中Q、R、W、X、Y、Z的定義如說明書所述。
文檔編號A61K31/708GK1120936SQ95109290
公開日1996年4月24日 申請日期1995年8月5日 優(yōu)先權(quán)日1991年4月6日
發(fā)明者A·H·英戈爾, P·A·凱奇 申請人:菲索斯有限公司