專利名稱：抗鴨瘟及鴨病毒性肝炎的異源動(dòng)物高免血清的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物血清的制備方法，具體為一種抗鴨瘟及病毒性肝炎的異源動(dòng)物血清的制備方法。
鴨瘟和鴨病毒性肝炎都是由病毒引起的急烈性傳染病所致，涉及面廣、發(fā)病率高、死亡率均在90％以上，給飼養(yǎng)鴨禽的單位或個(gè)人帶來(lái)極大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)，由于對(duì)病亡的鴨禽處理不當(dāng)，往往造成病毒的漫延，產(chǎn)生更大的惡果。目前，社會(huì)上尚未發(fā)現(xiàn)一種專用于治療鴨瘟和鴨病毒性肝炎的特效藥物，這是鴨禽飼養(yǎng)單位或個(gè)人最感頭痛的事。
本發(fā)明的任務(wù)在于提供一種專用于預(yù)防和治療鴨瘟和鴨病毒性肝炎的特效藥物的制備方法，即抗鴨瘟及病毒性肝炎的異源動(dòng)物血清的制備方法。
本發(fā)明抗鴨瘟和鴨病毒性肝炎的異源動(dòng)物血清的制備方法包括鴨瘟種毒的制取、鴨病毒性肝炎種毒的制取、一免抗原的制取、二免抗原的制取、異源動(dòng)物血清的制取，其具體制備方法為a、鴨瘟種毒的制取1、在無(wú)菌條件下取因患鴨瘟病死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)，放入組織搗碎機(jī)中搗碎；2、按總重量為100計(jì)算，取占總量為10-20％的被搗碎的鴨組織與占總重量為80-90％的濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液；3、將混合組織懸液放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20-40分鐘后取其上清液；4、在其上清液中，按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素后即形成鴨瘟種毒，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用；b、鴨病毒性肝炎種毒的制取在無(wú)菌條件下取因患鴨病毒性肝炎死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)，采取與a所述方法完全相同的方法即獲鴨病毒性肝炎種毒，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用。
c、一免抗原的制取1、將a中所述方法制取的鴨瘟種毒，放入濃度為0.8％的生理鹽水中稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48-120小時(shí)之間具有出血、水腫等特征死亡的鴨胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000單位的毒霉素和2000單位的鏈霉素后即形成為一免鴨瘟抗原，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用。
2、將a中所述方法制取的鴨病毒性肝炎種毒放入濃度為0.8％的生理鹽水中稀釋100倍，形成鴨病毒性肝炎種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨病毒性肝炎種毒稀釋液接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48-120小時(shí)之間具有出血、水腫等特征死亡的鴨胚，取其尿囊液，在其每毫升尿囊液中加入2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素后即形成為一免鴨病毒性肝炎抗原，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用。
d、二免抗原的制取取一免抗原的制取方法中經(jīng)接種鴨瘟種毒后死亡的鴨胚體放入組織搗碎機(jī)中搗碎，按總重量為100計(jì)算，取占總重量為10-20％的被搗碎的鴨胚體組織與占總重量為80-90％的濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，將混合組織懸液放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20-40分鐘后取其上清液，在其上清液中按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素，并按總重量的0.4％的配比加入福爾馬林液做成滅活苗，即成為二免鴨瘟抗原，并在室溫下保存?zhèn)溆?。采取一免抗原的制取方法中?jīng)接種鴨病毒性肝炎種毒死亡的鴨胚體用同樣的辦法可獲得二免鴨病毒性肝炎抗原，并在室溫下保存?zhèn)溆谩?br> e、異源動(dòng)物血清的制取1、異源動(dòng)物二聯(lián)高免血清的制取選健康無(wú)病的異源動(dòng)物(如馬、牛、豬、羊、兔等)，按所選異源動(dòng)物體重每10公斤在其頸部、腹部?jī)蓚?cè)多點(diǎn)(5-10點(diǎn))皮下注射一免鴨瘟抗原和一免鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后進(jìn)行二免，即對(duì)一免后的異源動(dòng)物，按其體重每10公斤在其皮下多點(diǎn)(5-10點(diǎn))各注射1毫升二免鴨瘟抗原和1毫升二免鴨病毒性肝炎抗原，再經(jīng)7天后進(jìn)行三免，即對(duì)二免后的異源動(dòng)物，按其體重每10公斤在頸、腹部多點(diǎn)(5-10點(diǎn))注射3.5毫升一免鴨瘟抗原和3.5毫升一免鴨病毒性肝炎抗原。三免注射后每隔5天采血一次，進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)，30天后當(dāng)抗體效價(jià)在1∶16-1∶128范圍時(shí)，對(duì)該異源動(dòng)物在無(wú)菌條件下進(jìn)行采血，將被采集的血放入無(wú)菌容器中進(jìn)行自然分離后吸取其血清，在其血清中按每毫升血清加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后，再按其總重量的1/10000量加入硫柳汞后即成為二聯(lián)高免血清，對(duì)其高免血清分裝、封口，并置于一18℃條件下保存。
2、異源動(dòng)物單一高免血清的制取在健康無(wú)病的異源動(dòng)物(如馬、牛、豬、羊、兔等)上單一注射鴨瘟抗原或鴨病毒性肝炎抗原，其它方法完全和異源動(dòng)物二聯(lián)高免血清制取方法相同，即可分別制取單一功能的高免血清，即抗鴨瘟異源動(dòng)物高免血清或抗鴨病毒性肝炎異源動(dòng)物高免血清。
以下將根據(jù)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明抗鴨瘟及鴨病毒性肝炎的異源動(dòng)物高免血清的制備方法作進(jìn)一步說(shuō)明實(shí)施例1在無(wú)菌條件下取因患鴨瘟病死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的10％的被搗碎的鴨組織，占總重量的90％濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。在無(wú)菌條件下取因患鴨病毒性肝炎死亡鴨的內(nèi)臟后采用上述方法即可獲鴨病毒性肝炎種毒。將鴨瘟種毒或鴨病毒性肝炎種毒放入濃度為0.8％的生理鹽水中稀釋100倍，形成鴨瘟或鴨病毒性肝炎種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟或鴨病毒性肝炎稀釋液接種于9日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素，即形成一免鴨瘟抗原或鴨病毒性肝炎抗原。取接種鴨瘟種毒或鴨病毒性肝炎種毒后死亡的鴨胚體放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總量為10％的被搗碎的鴨胚體組織與占總量為90％濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘后，取其上清液，在其上清液中按每毫升各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，并按總量的0.4％的配比加入福爾馬林液做成滅活苗、即成為二免鴨瘟或鴨病毒性肝炎抗原。選健康無(wú)病的豬，按其體重每10公斤在其腹部?jī)蓚?cè)5點(diǎn)皮下注射一免鴨瘟和鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后對(duì)其按體重每10公斤在皮下5點(diǎn)各注射二免鴨瘟和二免鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，再經(jīng)7天后對(duì)其體重每10公斤在皮下5點(diǎn)注射一免鴨瘟抗原和一免鴨病毒性肝炎抗原各3.5毫升，注射后每隔5天采血一次進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)，30天后當(dāng)抗體效價(jià)在1∶16時(shí)，對(duì)該異源動(dòng)物在無(wú)菌條件下采血，將被采集的血放入無(wú)菌容器中實(shí)行自然分離后吸取其血清，在血清中按每毫升血清加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后再按其總重量的1/10000量加入硫柳汞后即為本發(fā)明所述的二聯(lián)高免血清。
實(shí)施例2在無(wú)菌條件下取因患鴨瘟病死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的15％的被搗碎的鴨組織，占總重量的85％濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。在無(wú)菌條件下取因患鴨病毒性肝炎死亡鴨的內(nèi)臟后采用上述方法即可獲鴨病毒性肝炎種毒。將鴨瘟種毒或鴨病毒性肝炎種毒放入濃度為0.8％的生理鹽水中稀釋100倍，形成鴨瘟或鴨病毒性肝炎種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟或鴨病毒性肝炎稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素，即形成一免鴨瘟或鴨病毒性肝炎抗原。取接種鴨瘟種毒或鴨病毒性肝炎種毒死亡的鴨胚體放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總量為15％的被搗碎的鴨胚體組織與占總量為85％濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，在其上清液中按每毫升各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，并按總量的0.4％的配比加入福爾馬林液做成滅活苗、即成為二免鴨瘟或鴨病毒性肝炎抗原。選健康無(wú)病的牛，按其體重每10公斤在其頸部?jī)蓚?cè)8點(diǎn)皮下注射一免鴨瘟和鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后對(duì)其按體重每10公斤在皮下8點(diǎn)各注射二免鴨瘟和二免鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，再經(jīng)7天后對(duì)其體重每10公斤在皮下5點(diǎn)注射一免鴨瘟抗原和一免鴨病毒性肝炎抗原各3.5毫升，注射后每隔5天采血一次進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)，30天后當(dāng)抗體效價(jià)在1∶64時(shí)，對(duì)該異源動(dòng)物在無(wú)菌條件下采血，將被采集的血放入無(wú)菌容器中實(shí)行自然分離后吸取其血清，在血清中按每毫升血清加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后再按其總重量的1/10000量加入硫柳汞后即為本發(fā)明所述的二聯(lián)高免血清。
實(shí)施例3在無(wú)菌條件下取因患鴨瘟病死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的20％的被搗碎的鴨組織，占總重量的80％濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心40分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。在無(wú)菌條件下取因患鴨病毒性肝炎死亡鴨的內(nèi)臟后采用上述方法即可獲鴨病毒性肝炎種毒。將鴨瘟種毒或鴨病毒性肝炎種毒放入濃度為0.8％的生理鹽水中稀釋100倍，形成鴨瘟或鴨病毒性肝炎種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟或鴨病毒性肝炎稀釋液接種于12日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素，即形成一免鴨瘟或鴨病毒性肝炎抗原。取接種鴨瘟種毒或鴨病毒性肝炎種毒死亡的鴨胚體放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總量為20％的被搗碎的鴨胚體組織與占總量為80％濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并其放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心40分鐘后，取其上清液，在其上清液中按每毫升各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，并按總量的0.4％的配比加入福爾馬林液做成滅活苗、即成為二免鴨瘟或鴨病毒性肝炎抗原。選健康無(wú)病的羊，按其體重每10公斤在其腹部?jī)蓚?cè)10點(diǎn)皮下注射一免鴨瘟和鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后對(duì)其按體重每10公斤在皮下10點(diǎn)各注射二免鴨瘟和二免鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，再經(jīng)7天后對(duì)其體重每10公斤在皮下10點(diǎn)注射一免鴨瘟抗原和一免鴨病毒性肝炎抗原各3.5毫升，注射后每隔5天采血一次進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)，30天后當(dāng)抗體效價(jià)在1∶128時(shí)，對(duì)該異源動(dòng)物在無(wú)菌條件下采血，將被采集的血放入無(wú)菌容器中實(shí)行自然分離后吸取其血清，在血清中按每毫升血清加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后再按其總重量的1/10000量加入硫柳汞后即為本發(fā)明所述的二聯(lián)高免血清。
實(shí)施例2為本發(fā)明最佳實(shí)施例。
本發(fā)明抗鴨瘟及鴨病毒性肝炎的異源動(dòng)物高免血清的使用方法為1、如同時(shí)預(yù)防鴨瘟和鴨病毒性肝炎，每只鴨皮下注射0.5-1毫升二聯(lián)高免血清；2、如單一預(yù)防鴨瘟或鴨病毒性肝炎，每只鴨皮下注射0.25-0.5毫升的抗鴨瘟高免血清或鴨病毒性肝炎高免血清；3、如同時(shí)治療鴨瘟和鴨病毒性肝炎，每只鴨皮下注射1-3毫升二聯(lián)高免血清；4、如單一治療鴨瘟或鴨病毒性肝炎，每只鴨皮下注射0.5-1.5毫升的抗鴨瘟高免血清或鴨病毒性肝炎高免血清。
用本發(fā)明所述的抗鴨瘟及鴨病毒性肝炎的異源動(dòng)物高免血清的制備方法制成的高免血清對(duì)于預(yù)防和治療鴨瘟和鴨病毒性肝炎具有顯著療效，其預(yù)防率為95％，治愈率87％，可有效的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的任務(wù)，為社會(huì)提供一種專用預(yù)防和治療鴨瘟和鴨病毒性肝炎的特效藥物的制備方法。
權(quán)利要求
1.一種抗鴨瘟及鴨病毒性肝炎的異源動(dòng)物高免血清的制備方法，包括鴨瘟種毒的制取、鴨病毒性肝炎種毒的制取、一免抗原的制取、二免抗原的制取，異源動(dòng)物血清的制取，其特征在于a、鴨瘟種毒的制取(1)在無(wú)菌條件下取因患鴨瘟病死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)，放入組織搗碎機(jī)中搗碎；(2)按總重量為100計(jì)算，取占總量為10-20％的被搗碎的鴨組織與占總重量為80-90％的濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液；(3)將混合組織懸液放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20-40分鐘后取其上清液；(4)在其上清液中，按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素后即形成鴨瘟種毒，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用；b、鴨病毒性肝炎種毒的制取在無(wú)菌條件下取因患鴨病毒性肝炎死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)，采取與a所述方法完全相同的方法即獲鴨病毒性肝炎種毒，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用；c、一免抗原的制取(1)將a中所述方法制取的鴨瘟種毒，放入濃度為0.8％的生理鹽水中稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48-120小時(shí)之間具有出血、水腫等特征死亡的鴨胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000單位的毒霉素和2000單位的鏈霉素后即形成為一免鴨瘟抗原，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用；(2)將a中所述方法制取的鴨病毒性肝炎種毒放入濃度為0.8％的生理鹽水中稀釋100倍，形成鴨病毒性肝炎種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨病毒性肝炎種毒稀釋液接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48-120小時(shí)之間具有出血、水腫等特征死亡的鴨胚，取其尿囊液，在其每毫升尿囊液中加入2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素后即形成為一免鴨病毒性肝炎抗原，并將其放入冰箱中在-4℃條件下儲(chǔ)藏備用；d、二免抗原的制取取一免抗原的制取方法中經(jīng)接種鴨瘟種毒后死亡的鴨胚體放入組織搗碎機(jī)中搗碎，按總重量為100計(jì)算，取占總重量為10-20％的被搗碎的鴨胚體組織與占總重量為80-90％的濃度為0.8％的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，將混合組織懸液放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20-40分鐘后取其上清液，在其上清液中按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素，并按總重量的0.4％的配比加入福爾馬林液做成滅活苗，即成為二免鴨瘟抗原，并在室溫下保存?zhèn)溆?。采取一免抗原的制取方法中?jīng)接種鴨病毒性肝炎種毒死亡的鴨胚體用同樣的辦法可獲得二免鴨病毒性肝炎抗原，并在室溫下保存?zhèn)溆?；e、異源動(dòng)物血清的制取異源動(dòng)物二聯(lián)高免血清的制取選健康無(wú)病的異源動(dòng)物(如馬、牛、豬、羊、兔等)，按所選異源動(dòng)物體重每10公斤在其頸部、腹部?jī)蓚?cè)多點(diǎn)(5-10點(diǎn))皮下注射一免鴨瘟抗原和一免鴨病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后進(jìn)行二免，即對(duì)一免后的異源動(dòng)物，按其體重每10公斤在其皮下多點(diǎn)(5-10點(diǎn))各注射1毫升二免鴨瘟抗原和1毫升二免鴨病毒性肝炎抗原，再經(jīng)7天后進(jìn)行三免，即對(duì)二免后的異源動(dòng)物，按其體重每10公斤在頸、腹部多點(diǎn)(5-10點(diǎn))注射3.5毫升一免鴨瘟抗原和3.5毫升一免鴨病毒性肝炎抗原。三免注射后每隔5天采血一次，進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)，30天后當(dāng)抗體效價(jià)在1∶16-1∶128范圍時(shí)，對(duì)該異源動(dòng)物在無(wú)菌條件下進(jìn)行采血，將被采集的血放入無(wú)菌容器中進(jìn)行自然分離后吸取其血清，在其血清中按每毫升血清加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后，再按其總重量的1/10000量加入硫柳汞后即成為二聯(lián)高免血清，對(duì)其高免血清分裝、封口，并置于-18℃條件下保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗鴨瘟及鴨病毒肝炎異源動(dòng)物高免血清的制備方法，其特征在于在健康無(wú)病的異源動(dòng)物上單一注射鴨瘟抗原或鴨病毒性肝炎抗原，可分別制取單一功能的高免血清，即抗鴨瘟異源動(dòng)物高免血清或抗鴨病毒性肝炎異源動(dòng)物高免血清。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗鴨瘟及鴨病毒性肝炎的異源動(dòng)物高免血清的制備方法，包括鴨瘟種毒的制取，鴨病毒性肝炎種毒的制取，一免抗原的制取，二免抗原的制取、異源動(dòng)物血清的制取，用該方法制成的高免血清對(duì)預(yù)防和治療鴨瘟和鴨病毒性肝炎具有顯著療效，其預(yù)防率為95％，治愈率87％。
文檔編號(hào)A61K39/42GK1127139SQ9511218
公開(kāi)日1996年7月24日 申請(qǐng)日期1995年10月30日 優(yōu)先權(quán)日1995年10月30日
發(fā)明者鹿忠孝, 郝金法, 張紹謙 申請(qǐng)人:鹿忠孝