專利名稱：一種骨肽提取物、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種骨肽提取物、其制備方法及其用途，具體地說，涉及一種由從除人以外的哺乳動物四肢骨中經(jīng)提取分離制備的骨肽提取物、其制備方法及用途。
背景技術(shù)：
眾所周知，哺乳動物體內(nèi)有不少人體所需的各種營養(yǎng)成份及活性成分，進而有不少針對從哺乳動物的心臟、肝臟及肌肉組織中提取活性多肽的報道。
利用動物骨作為藥物來治療疾病已經(jīng)有悠久的歷史，早在1500多年前，古醫(yī)藥典籍就有牲畜骨治病的記載，《本草綱目》中，對虎骨、狗骨、豬骨等藥用性能均有專門的論述。1976年我國研制成功了新的生化藥物-骨寧注射液(即骨肽注射液)，相繼用狗骨制成的祛風濕注射液，鯨骨制成的761注射液，用梅花鹿骨制成的松梅樂注射液等，均適用于風濕性關(guān)節(jié)炎和類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種骨肽提取物，該產(chǎn)品為含有從除人以外的哺乳動物四肢骨中提取制備的骨肽提取物。
本發(fā)明的另一目的在于提供骨肽提取物的制備方法。
本發(fā)明的再一目的是提供骨肽提取物在用于促進骨折愈合的藥物。
本發(fā)明所述的骨肽提取物，為從除人以外的哺乳動物四肢骨中提取而成的活性小分子多肽，分子量小于10000道爾頓。其中，優(yōu)選的分子量小于8000道爾頓，最優(yōu)選的分子量小于6000道爾頓。
本發(fā)明所述的哺乳動物可為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔等。從豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔等四肢骨均可提取本發(fā)明所述的活性多肽。從生產(chǎn)成本、生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性、臨床療效等因素考慮，上述哺乳動物優(yōu)選豬和小牛四肢骨作為骨肽提取物的生產(chǎn)原料。
本發(fā)明所述的骨肽提取物，將哺乳動物四肢骨經(jīng)熱壓提取，冷藏去脂肪、調(diào)節(jié)pH值沉淀、加熱、離心過濾、超濾等步驟制得四肢骨提取物，其分子量可通過選用截留分子量為10000或10000道爾頓以下不同截留分子量的超濾膜來控制。
本發(fā)明所述的骨肽提取物的制備方法，包括如下步驟A)取動物四肢骨，加水熱壓提取三次，合并提取液，冷藏，冷藏后的提取液除去上層浮脂；
B)調(diào)節(jié)pH值，沉淀，加熱、離心、超濾；C)將超濾后的藥液補加適量注射用水，灌裝、滅菌、包裝。
其中，所述的四肢骨是將新鮮或凍存的健康四肢骨通過除肌肉、脂肪等附著物后的凈四肢骨。
熱壓溫度為115～121℃，時間為1～2小時，壓力為0.15～0.2Mpa；離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15～30分鐘；超濾用截留分子量10000以下的超濾膜超濾。
具體地說，本發(fā)明所述的骨肽提取物的制備方法，包括如下步驟A)取動物四肢骨，加水熱壓提取三次，合并提取液，冷藏，冷藏后的提取液除去上層浮脂；B)調(diào)節(jié)pH值，沉淀，加熱、離心、超濾；C)將超濾后的藥液補加適量注射用水，灌裝、滅菌、包裝。
更為優(yōu)選的，本發(fā)明所述的脾多肽提取物的制備方法，包括如下步驟A)取新鮮或凍存的動物四肢骨，剔除附著的肌肉及脂肪組織等，加1～10倍量的注射用水，熱壓提取三次，合并提取液，冷藏12～48小時，除去上層浮脂。
B)上清液調(diào)節(jié)pH值2.0～3.0，放置12～24小時，濾過，濾液加熱65～80℃，時間為15～20分，冷卻后離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15～30分鐘，過濾，得清液；C)清液用截留分子量超濾膜超濾1～2次，超濾液為骨肽提取物。
對清液進行超濾時，可采用截留分子量為6000～10000的超濾膜或6000以下的超濾膜超濾，為骨肽提取物中的活性多肽分子量的控制步驟。比如，使用截留分子量1000、3000、5000、6000、8000或10000的超濾膜，優(yōu)選使用截留分子量為6000的超濾膜超濾。使用的超濾膜為市售產(chǎn)品，其生產(chǎn)商應為行業(yè)認可的生產(chǎn)單位，使用的濾膜型號與尺寸可根據(jù)具體的生產(chǎn)量、選用的超濾器尺寸來確定。
當然，為了進一步獲取所需分子量段的骨肽提取物，可以用不同的超濾膜進行截取，這樣即可獲得分子量為1000-10000，1000-8000，1000-6000，1000-5000或3000-8000等所需的骨肽提取物。
為使本發(fā)明生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，調(diào)節(jié)pH值2.0～3.0，放置12～24小時，濾過，濾液加熱65～80℃，冷卻后離心除雜。
本發(fā)明所述的骨肽提取物可經(jīng)后處理，制成藥劑學上可接受的不同劑型，比如片劑、膠囊劑、口服液、小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑等，優(yōu)選為小容量注射劑、凍干粉針劑，最優(yōu)選為小容量注射劑。所述的劑型可按照制備藥劑學上可接受的劑型的常規(guī)方法進行。
本發(fā)明最優(yōu)選小容量注射劑的規(guī)格為，2ml、10ml、15ml、20ml。
靜脈滴注，一次10～20ml，一日1次，溶于200ml 0.9％氯化鈉溶液，15～30天為一療程。肌內(nèi)注射，一次2ml，一日1次，20～30日為一個療程。
本品亦可在痛點和穴位注射或遵醫(yī)囑。
本發(fā)明的研究人員經(jīng)過大量的實驗及藥效學研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所述的骨肽提取物藥物具有調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成，以及調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防治骨質(zhì)疏松作用。
本發(fā)明所述的骨肽提取物的制備工藝穩(wěn)定成熟，通過熱壓提取、離心、超濾等手段來提取哺乳動物四肢骨中天然存在且具有特定比例組成的活性多肽，活性多肽成分分子量可在1000～10000的范圍進行控制，用于促進骨折愈合。
具體實施例方式
下面用實施例進一步描述本發(fā)明，有利于對本發(fā)明及其優(yōu)點、效果更好的了解，但所述實施例僅用于說明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。
實施例1步驟(1)A)取新鮮或凍存的豬四肢骨，剔除附著的肌肉及脂肪組織等，加5倍量的注射用水，熱壓提取三次，時間分別為2小時、1小時、1小時，合并提取液，冷藏24小時，除去上層浮脂。
B)上清液調(diào)節(jié)pH值2.3，放置12小時，濾過，濾液加熱70℃，時間為20分鐘，冷卻后離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為30分鐘，過濾，得清液；C)清液用截留分子量6000的超濾膜超濾2次，超濾液為骨肽提取物。
步驟(2)將上述骨肽提取物1000ml，加注射用水至2L，無菌過濾后灌裝，制成2ml/支的小容量注射劑，100℃滅菌30分鐘，包裝入庫，每ml含有多肽8mg。
實施例2步驟(1)A)取新鮮或凍存的胎牛四肢骨，剔除附著的肌肉及脂肪組織等，加1倍量的注射用水，熱壓提取三次，時間為1小時、1小時、40分鐘合并提取液，冷藏12小時，除去上層浮脂。
B)上清液調(diào)節(jié)pH值2.0，放置12小時，濾過，濾液加熱65℃，時間為15分鐘，冷卻后離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15分鐘，過濾，得清液；
C)清液分別用截留分子量10000和8000的超濾膜超濾1次，超濾液為骨肽提取物。
步驟(2)將上述骨肽提取物1000ml，加注射用水至2L，無菌過濾后灌裝，制成5ml/支的小容量注射劑，110℃滅菌30分鐘，包裝入庫，每ml含有多肽5mg。
實施例3步驟(1)A)取新鮮或凍存的羊四肢骨，剔除附著的肌肉及脂肪組織等，加8倍量的注射用水，熱壓提取三次，合并提取液，冷藏48小時，除去上層浮脂。
B)上清液調(diào)節(jié)pH值2.8，放置24小時，濾過，濾液加熱80℃，時間為18分鐘，冷卻后離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為25分鐘，過濾，得清液；C)清液分別用截留分子量10000和5000的超濾膜超濾1次，超濾液為骨肽提取物。
步驟(2)將上述骨肽提取物1000ml，加注射用水至2L，無菌過濾后灌裝，制成10ml/支的小容量注射劑，121℃滅菌15分鐘，包裝入庫，每ml含有多肽5mg。
實施例4步驟(1)A)取新鮮或凍存的馬四肢骨，剔除附著的肌肉及脂肪組織等，加6倍量的注射用水，熱壓提取三次，時間為2小時、2小時、1小時合并提取液，冷藏36小時，除去上層浮脂。
B)上清液調(diào)節(jié)pH值3.0，放置18小時，濾過，濾液加熱70℃，時間為20分鐘，冷卻后離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為20分鐘，過濾，得清液；C)清液分別用截留分子量10000和6000的超濾膜超濾1次，超濾液為骨肽提取物。
步驟(2)將上述骨肽提取物1000ml，加注射用水至2L，無菌過濾后灌裝，制成5ml/支的小容量注射劑，108℃滅菌25分鐘，包裝入庫，每ml含有多肽6mg。
實施例5參照實施例1～3，骨肽提取物制備后，按公知的方法，先將提取物適當濃縮后，加適量干燥淀粉混勻后制成軟材，過16目篩制成顆粒，干燥后加潤滑劑混勻，用10mm沖模壓制成片，即得藥物片劑。
實施例6參照實施例1～3，骨肽提取物制備后，加入適宜的賦型劑(如右旋糖酐40、甘露醇等)，進行除菌灌裝，按公知的方法，冷凍干燥制成凍干粉針產(chǎn)品。
實施例7參照實施例1～3，將骨肽提取物投入到稀配罐中；在濃配罐中投入0.9％最終配制總體積的氯化鈉，加入0.4‰活性炭煮沸脫炭過濾，冷卻后，將藥液過濾至稀配罐中，在稀配罐中補加注射用水至配液量，調(diào)pH為6.8～7.0，過濾。灌封于輸液瓶中，121℃滅菌30分鐘，即得輸液產(chǎn)品。
實施例8參照實施例1～3，骨肽提取物制備后，按公知的方法，先將提取物適當濃縮后，加適量干燥淀粉混勻后制成軟材，過16目篩制成顆粒，濃縮干燥后，整粒，裝袋，得顆粒劑。
實施例9參照實施例1～3，骨肽提取物制備后，按公知的方法，將骨肽提取物加適量注射用水，過濾，再加入單糖漿、山梨酸，再加水至1000毫升，冷藏，過濾。灌封于10ml口服液瓶中，以100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，即得口服液。
實施例10參照實施例1～3，骨肽提取物制備后，按公知的方法，先將提取物適當濃縮后，加適量干燥淀粉混勻后制成軟材，過16目篩制成顆粒，于60℃烘干干燥后整粒，裝膠囊，得膠囊劑。
實驗例1本實驗例為本發(fā)明所述最優(yōu)選小容量注射劑的規(guī)格2ml、10ml、15ml、20ml外觀性狀、pH值、蛋白質(zhì)及其它規(guī)定的注射劑檢查項目的檢測。
性狀 本品為微黃色至淡黃色澄明液體。
pH值 應為6.5～7.5(中國藥典2000年版二部附錄VI H)。
蛋 白 質(zhì) 取本品1ml，加30％磺基水楊酸溶液1ml，不得發(fā)生混濁。
其他 應符合注射劑項下有關(guān)各項規(guī)定(中國藥典2000版二部附錄I B)。
本品上述項目檢查符合規(guī)定。
實驗例2本實驗例為本發(fā)明所述最優(yōu)選小容量注射劑2ml、10ml、15ml、20ml的規(guī)格的定性測定。
取本品2ml，加茚三酮約2mg，加熱，溶液應顯藍紫色。本品符合規(guī)定。
實驗例3本實驗例為本發(fā)明所述最優(yōu)選小容量注射劑2ml、10ml、15ml、20ml的規(guī)格所含多肽定量測定。每ml含多肽應不低于5mg。
精密量取本品2ml，置試管中，精密加入縮脲試液(取硫酸1.50g和酒石酸鉀鈉6.0g，加水500ml使溶解，邊攪邊加入10％氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻)4ml，混勻，室溫放置30分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)在540nm的波長處測定吸收度，另精密稱取酪蛋白對照品適量，加0.05mol/L氫氧化鈉試液制成每1ml中約含7mg的溶液，精密量取2ml，自“置試管”起，同法操作，測定吸收度，計算。
通過三批測定，每ml含量結(jié)果見下表(以2ml為例)

實驗例4本實驗例為本發(fā)明所述最優(yōu)選小容量注射劑的規(guī)格2ml、10ml、15ml、20ml的規(guī)格毒性實驗異常素性取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI C)，按靜脈注射法給藥，應符合規(guī)定。
過敏試驗取本品，依法檢查(附)，應符合規(guī)定。
供試動物健康豚鼠，雌雄均可，體重250～350g，試驗前及試驗的觀察期內(nèi)，均應按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)，做過本試驗的動物不得重復使用。
檢查法取上述豚鼠6只，間日腹腔注射本品0.5ml，3次，然后分成兩組，每組3只，分別在第一次注射后第14日及第21日靜脈注射1.0ml，結(jié)果判斷靜脈注射后15分鐘內(nèi)均不得出現(xiàn)過敏性反應，如豎毛，呼吸困難、噴嚏、干嘔或咳嗽3聲等現(xiàn)象中的兩種以上者或羅音、抽搐、虛脫或死亡現(xiàn)象之一者應判為陽性。
熱原取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI D)，劑量按家兔體重每kg注射0.5ml，應符合規(guī)定。
結(jié)論本發(fā)明藥物組合物注射液符合注射液要求，無任何毒性作用，應用人體安全。
權(quán)利要求
1.一種哺乳動物四肢骨提取物，其特征在于，為從除人以外的哺乳動物四肢骨中提取而成的活性小分子多肽，分子量小于10000道爾頓。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種四肢骨提取物，其特征在于，所述的活性小分子多肽的分子量小于8000道爾頓，優(yōu)選的分子量小于6000道爾頓。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種四肢骨提取物，其特征在于，所述的哺乳動物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔中任意一種，優(yōu)選為豬和胎牛。
4.一種制備權(quán)利要求1所述的四肢骨提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟A)取動物四肢骨，加水熱壓提取三次，合并提取液，冷藏，冷藏后的提取液除去上層浮脂；B)調(diào)節(jié)pH值，沉淀，加熱、離心、超濾；C)將超濾后的藥液補加適量注射用水，灌裝、滅菌、包裝。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取物的制備方法，其特征在于，熱壓溫度為115～121℃，時間為1～2小時，壓力為0.15～0.2Mpa；離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15～30分鐘，離心過濾后，調(diào)pH值為6.5～7.5。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的四肢骨提取物藥物制備方法，其特征在于，包括如下步驟A)取新鮮或凍存的動物四肢骨，剔除附著的肌肉及脂肪組織等，加1～10倍量的注射用水，熱壓提取三次，合并提取液，冷藏12～48小時，除去上層浮脂；B)上清液調(diào)節(jié)pH值2.0～3.0，放置12～24小時，濾過，濾液加熱65～80℃，時間為15～20分，冷卻后離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15～30分鐘，過濾，得清液；C)清液用超濾膜超濾1～2次，超濾液為骨肽提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的四肢骨提取物藥物制備方法，其特征在于，包括如下步驟清液用截留分子量10000以下的超濾膜超濾1～2次，得超濾液，即為骨肽提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的骨肽提取物，其特征在于，所述的骨肽提取物可經(jīng)后處理，制成藥劑學上可接受的不同劑型，比如口服液、小容量注射劑、大容量注射劑、片劑、膠囊劑或凍干粉針劑，優(yōu)選為小容量注射劑、凍干粉針劑，最優(yōu)選為小容量注射劑。
9.權(quán)利要求1或2所述骨肽提取物在制備用于促進骨折愈合的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從除人以外的哺乳動物四肢骨中提取制備的提取物，將哺乳動物四肢骨經(jīng)熱壓提取，冷藏去脂肪、調(diào)節(jié)pH值沉淀、加熱、離心過濾、超濾等步驟制得四肢骨提取物；該藥具有調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成，以及調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防治骨質(zhì)疏松作用。用于促進骨折愈合。
文檔編號A61K9/19GK1831001SQ20051005147
公開日2006年9月13日 申請日期2005年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月8日
發(fā)明者郭智華 申請人:諾氏制藥(吉林)有限公司