專利名稱：用增強(qiáng)代謝活性的丹參衍生物治療肥胖和代謝綜合癥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)防和治療代謝綜合癥的組合物，所述組合物含有作為有效組分的丹參酮衍生物。更具體地，本發(fā)明涉及預(yù)防和治療代謝綜合癥的組合物，含有作為有效成分， 在提高代謝活性中表現(xiàn)出優(yōu)良活性的丹參酮衍生物。
背景技術(shù)：
代謝綜合癥是指包括健康危險(xiǎn)因子，例如高甘油三酯血癥，高血壓，糖代謝紊亂， 血凝紊亂和肥胖的綜合癥。代謝綜合癥本是并不是致命的，但卻指示了對諸如糖尿病和缺血性心血管疾病的嚴(yán)重疾病的傾向，并演變成了現(xiàn)代人群眾最具威脅性的疾病。由于缺乏對這種綜合癥的病因的了解，代謝綜合癥一度是通過包括綜合癥X的多種其他名稱為人所知的，通過由WHO和NIH國立心臟，肺和血液研究所實(shí)施的成年治療計(jì)劃III (Adult Treatment Plan ATP III)，現(xiàn)將其正式地稱為代謝綜合癥或抗胰島素綜合癥。由國立膽固醇教育計(jì)劃(NCEP)專家委員會對成年人中高血液膽固醇(成年治療委員會III)的測定、評估和治療的第三次報(bào)告在2001年公開的建議標(biāo)準(zhǔn)，是最近和最廣泛地用于診斷所述代謝綜合癥的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)所述ATP III的標(biāo)準(zhǔn)，可通過以下三種或更多種成分的存在診斷個(gè)體患有代謝綜合癥I)男人的腰圍為40英寸(102cm)或更多，女人的腰圍為35英寸(88cm)或更多(通過腰部周長測定中度肥胖)，2)甘油三酸酯水平高于150mg/ dl，3)高密度脂蛋白水平(HDL)低于40mg/dl (男人)或50mg/dl (女人)，4)血壓130/85mm Hg或更高和5)快速血液葡萄糖(糖)水平高于110mg/dl。對東方人而言，可將中度肥胖的標(biāo)準(zhǔn)略微調(diào)節(jié)成男人的腰圍為90cm或更多，而女人的腰圍為80cm或更多。近來的研究表明，在這些條件下，大約25%的韓國人都患有代謝綜合癥。胰島素耐受是指這樣的現(xiàn)象， 其中即使胰島素正常體內(nèi)分泌，胰島素也不能誘導(dǎo)對細(xì)胞的足量葡萄糖供給。因此，血液中的葡萄糖不能進(jìn)入細(xì)胞，由此引起了高血糖癥，細(xì)胞由于缺乏葡萄糖不能行使正常功能，導(dǎo)致了代謝綜合癥的出現(xiàn)。目如，還沒有可用的藥物治療代謝綜合癥。已使用過治療糖尿病、聞血脂癥和聞血壓的藥物進(jìn)行過治療代謝綜合癥的嘗試，但這些藥物在治療代謝綜合癥中的藥物作用有限。作為目前可用的藥物，可用于治療糖尿病的二甲雙胍，屬于TZD(噻唑烷二酮類)家族的藥物，葡萄糖苷酶抑制劑，雙PPAR γ/α激動劑和DDP ( 二肽基肽酶)IV抑制劑，其受到了作為最有希望治療代謝綜合癥藥物的極大關(guān)注。此外，還有大量的關(guān)注致力于作為抗血壓藥和抗高血脂癥藥，以及CETP (旦固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)抑制劑的靶的apo A-I及其相關(guān)肽的異構(gòu)體。公知的直接或間接與代謝綜合癥的病因和治療相關(guān)的因素包括物理鍛煉，飲食習(xí)慣和類型，體重，血液葡萄糖，甘油三酸酯水平，膽固醇水平，胰島素耐受，adiponectin,瘦蛋白，AMPK活性，諸如雌激素的性激素，遺傳因素和體內(nèi)丙二酰CoA濃度。目前，對抗與代謝綜合癥相關(guān)病癥的最有效方法是多作鍛煉，減肥和飲食控制。目前所有對抗代謝綜合癥方法的共同之處在于促進(jìn)能量代謝，由此導(dǎo)致體內(nèi)多余能量的最大消耗從而阻止能量積累。由于從加工食品和快餐中攝取的高卡路里，與不充分的鍛煉相比， 多余能量以脂肪的形式進(jìn)行了累積，并由此變成了包括代謝紊亂的多種疾病的根本原因。 有效的消除這些多余能量可考慮作為治療代謝紊亂的方法。提高代謝活性對有效地消除多余能量至關(guān)重要。出于這一目的，一般認(rèn)為必須抑制脂肪合成，抑制糖原異生，協(xié)助葡萄糖消耗，協(xié)助脂肪氧化，協(xié)助能量代謝中心細(xì)胞器線粒體的生物發(fā)生，以及活化參與代謝活化的因子。與促進(jìn)代謝相連的活化因子包括，例如，AMP-活化的蛋白激酶(AMPK)，過氧物酶體擴(kuò)增子活化受體Y共活化劑I a (PGC-1 α )，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白I和4 (GLUT I和4)，肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶I (CPT I)，解偶聯(lián)蛋白1，2和3 (UCP-1，2和3)，以及乙酰-Cok羧化酶I和 IKACC I和II)，其在能量代謝中具有重要作用。這些因子在與代謝紊亂的能量代謝中具有以下主要功能。I、糖代謝在肌肉組織和心肌組織中，AMPK促進(jìn)肌肉收縮并因此協(xié)助葡萄糖的攝取，其依次活化了 GLUT 1，或誘導(dǎo)GLUT 4向質(zhì)膜的遷移，而不考慮胰島素的作用，從而導(dǎo)致了葡萄糖向細(xì)胞的輸送增加(Arch. Biochem. Biophys. 380, 347-352, 2000, J. Appl. Physiol. 91， 1073-1083,2001)。在葡萄糖攝入增加之后，AMPK可激活已糖激酶，由此增加糖代謝處理的流量并同時(shí)抑制糖原合成。眾所周知在缺血性條件下，在心肌組織中，AMPK能通過磷酸化過程活化6-磷酸果糖-2-激酶(PFK-2)，由此導(dǎo)致代謝級聯(lián)的激活從而增加了糖代謝的流量(Curr. Biol. 10，1247-1255，2000)。此外，在肝臟中AMPK的活化抑制了葡萄糖從肝細(xì)胞中的釋放。與此同時(shí)，現(xiàn)已確定用作糖異生用酶的磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶可被AMPK所抑制(Diabetes 49，896-903，2000)，說明無論是否存在胰島素， AMPK都可獨(dú)立地抑制葡萄糖從肝臟中的釋放，由此參與血糖水平的調(diào)控。2、線粒體的生物生成線粒體的一個(gè)重要功能是進(jìn)行氧化磷酸化，其可將從諸如葡萄糖和脂肪酸的燃料代謝物產(chǎn)生的能量轉(zhuǎn)化成ATP。功能性的線粒體變化會影響到與衰老相關(guān)的退行性疾病，例如糖尿病，心血管疾病，帕金森氏癥和老年性癡呆的發(fā)病機(jī)制(Curr. Opin. Cell Biol. 15， 706-716,2003)。Peterson 等人(Science 300，1140-1142，2003)報(bào)道了線粒體的氧化磷酸化功能在老年人中降低了約40%，暗示了線粒體功能的削弱很可能是胰島素耐受綜合癥的致病原因。Lee 等人(Diabetes Res. CLin. Pract. 42,161-167,1998)證實(shí)了在外周血中線粒體DNA含量的降低發(fā)生在糖尿病之前。公知在肌肉中線粒體的生物生成可由適應(yīng)反應(yīng)得以提高，其中肌肉細(xì)胞中氧化磷酸化的代謝活性是由持續(xù)的能量消耗和鍛煉提高的。同時(shí)，公知過氧物酶體擴(kuò)增子活化的受體Y共活化劑I a (PGC-1 α )是促進(jìn)核 DNA轉(zhuǎn)錄的共活化劑，并且在葡萄糖代謝，線粒體生物生成，肌肉纖維特化和適應(yīng)性生熱作用中具有重要功能。已知PGC-Ια的較高表達(dá)促進(jìn)線粒體DNA拷貝數(shù)的升高和線粒體增殖 (Cell,98,115-124，1999)。需要注意的是在小鼠模型中UCP-2和UCP-3的過量表達(dá)導(dǎo)致了脂肪細(xì)胞數(shù)量的降低，代謝率升高和氧氣消耗的升高，因此UCP-2和UCP-3在能量代謝和肥胖控制中具有重要的作用(Nutrition, 20，139-144，2004)。3、脂肪代謝的控制在涉及AMPK參與的脂肪代謝的機(jī)理中，公知AMPK能夠誘導(dǎo)乙酰-CoA羧化酶的磷酸化，結(jié)果抑制脂肪酸的合成，因此導(dǎo)致作為脂肪酸合成過程中的中間體和作為肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶I (CPT I)抑制劑的丙二酰Co-A在細(xì)胞內(nèi)的濃度降低，從而增強(qiáng)了脂肪酸氧化。CPT I是在脂肪酸進(jìn)入線粒體和被氧化過程中的關(guān)鍵酶，并公知受到丙二酰Co-A 細(xì)胞內(nèi)濃度的調(diào)控。此外，公知AMPK能夠通過磷酸化對參與膽固醇和三酰甘油合成過程中的HMG-CoA還原酶和甘油磷酸?；D(zhuǎn)移酶(GPAT)的活性進(jìn)行抑制(J. Biol. Chem. 277， 32571-32577，2002，J. Appl. Physiol. 92，2475-2482，2002)。與此同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)在肝臟中 AMPK的活化通過糖反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(ChREBP)的磷酸化抑制了丙酮酸激酶、脂肪酸合成酶和 ACC 的活性(J. Biol. Chem. 277，3829-3835，2002)。如上所述，與代謝相關(guān)的活化劑公知地在體外和體內(nèi)葡萄糖、蛋白和脂肪能量代謝中具有中心的作用。Neil 等人(Nature drug discovery, 3 (April), 340, 2004)證實(shí)了 AMPK和丙二酰Co-A是治療代謝綜合癥和治療患有具有胰島素耐受、肥胖、高血壓、血脂異常、胰腺β細(xì)胞功能紊亂，II型糖尿病和動脈硬化表現(xiàn)的代謝綜合癥的患者的靶點(diǎn)?？杉俣ㄅc多種異常相連的共有特征是AMPK/丙二酰CoA燃料感應(yīng)和信號網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控異常。一般認(rèn)為這樣的調(diào)控異常導(dǎo)致了細(xì)胞脂肪酸代謝的改變，其隨后引起了異常的脂肪積累、細(xì)胞功能紊亂和最終的疾病。已有證據(jù)表明，活化AMPK和/或降低丙二酰CoA水平的因子能夠逆轉(zhuǎn)這些異常和綜合癥，或預(yù)防它們發(fā)生。Genevieve 等人(J. Biol. Chem. 279，20767-74，2004)報(bào)道了 AMPK 的活化抑制了 iNOS酶的活性，其是在慢性炎癥病癥或包括與肥胖相關(guān)的糖尿病的內(nèi)毒素休克中的炎癥介質(zhì)，并因此可有效地用來開發(fā)具有提高胰島素敏感性的機(jī)理的新藥。此外，他們還報(bào)道了對iNOS活性的抑制是由AMPK的活化造成的，因此這一發(fā)現(xiàn)對諸如敗血病、多發(fā)性硬化、心肌梗塞、炎性腸病和胰腺細(xì)胞功能紊亂的疾病具有臨床應(yīng)用性。Zing-ping等人(FEBS Letters 443，285-289，1999)報(bào)道了 AMPK通過磷酸化，在存在Ca-調(diào)鈣蛋白的大鼠肌肉細(xì)胞和心肌細(xì)胞中活化了內(nèi)皮NO合成酶。這說明AMPK與包括心絞痛的心臟疾病相關(guān)。Alan D等人(Nature genetics, 34 (3), 244, 2003)證明了肌肉線粒體呼吸代謝是由衰老或糖尿病降低的，由此導(dǎo)致了在所述氧化磷酸化過程中所涉及到的基因表達(dá)的協(xié)同改變，同時(shí)他們還報(bào)道了 PGC-I α主導(dǎo)了基因表達(dá)的這種改變。Mary等人(PNAS 100，8466，2003)報(bào)道了 PGC-I α較低水平的表達(dá)是糖尿病患者中膜島素耐受:和代謝失調(diào)的主要原因。Isabella等人(Am. J. Physiol. Cell Physiol. 284, cl669，2003)報(bào)道了 PGC-1 α 是刺激線粒體適應(yīng)于由甲狀腺激素、Τ3和肌肉收縮引起的環(huán)境改變的主要因素。Kim等人(The Korean Journal of Biochemistry & Molecular Biology, 11,16, 2004)報(bào)道了通過葡萄糖 / 脂肪酸代謝中的偶然關(guān)聯(lián)，線粒體數(shù)量和質(zhì)量的異常誘導(dǎo)了胰島素耐受，不僅如此，其還是代謝綜合癥的主要原因。基于能夠活化代謝的物質(zhì)都可有效地用于治療代謝綜合癥疾病這一假設(shè)，本發(fā)明人對代謝活化藥物進(jìn)行了深入研究，結(jié)果證明了丹參酮衍生物是有效的治療劑成分。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明旨在解決上述問題，以及之前希望解決的技術(shù)問題。本發(fā)明人進(jìn)行了多種廣泛和深入的研究和實(shí)驗(yàn)。作為這些廣泛研究的結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，從丹參(Salivia miItiorrhiza)提取的丹參酮衍生物能夠有效的激活細(xì)胞和組織中的代謝，本發(fā)明人還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，當(dāng)對用丹參酮衍生物治療ob/ob小鼠、由降低的瘦蛋白分泌引起的肥胖模型，db/db小鼠、肥胖/糖尿病模型，以及由高脂肪膳食導(dǎo)致的DIO(善食誘導(dǎo)的肥胖)小鼠時(shí)，這些材料可有效地預(yù)防和治療包括肥胖和糖尿病的代謝綜合癥。 基于這些發(fā)現(xiàn)完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的目的是提供預(yù)防和治療代謝綜合癥的組合物，其包括在成肌細(xì)胞 C2C12和脂肪細(xì)胞以及動物疾病模型中，通過激活代謝活化劑，對這樣的代謝綜合癥具有預(yù)防和治療效果的作為有效成分的丹參酮衍生物。發(fā)明的詳細(xì)描述如本發(fā)明的一個(gè)方面,可通過提供包括有來自丹參(Salivia miltiorrhiza)提取物的治療和/或預(yù)防有效量的丹參酮衍生物作為有效成分的預(yù)防或治療肥胖和代謝綜合癥疾病的組合物來實(shí)現(xiàn)以上和其他目的。迄今為止，已知的丹參酮衍生物生理活性如下。Toshiyuki等人(Planta Med. 2002. 68，1103-1107)報(bào)道了丹參酮VI減弱了心肌細(xì)胞肥大并且通過成心肌纖維細(xì)胞抑制了膠原的合成，由此阻礙了成心肌纖維細(xì)胞的纖維化。Choi等人(Planta Med. 2004, 70,178-180)建議了通過抑制肥大細(xì)胞脫顆粒來將丹參酮衍生物用作抗過敏劑的可能性。Ip等人(Planta Med. 2002. 68，1077-1081)證明了二氫異丹參酮I在肝細(xì)胞中對甲萘醌誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的護(hù)肝作用。Ren等人(Planta Med. 2004，70，201-204)證明了丹參酮衍生物抑制乙酰膽堿酯酶的酶活性。Kyoto等人(Biochemical Pharmacolgy,64, 745-750 (2002))報(bào)道了丹參酮IIA磺酸鹽能夠減弱由血管緊張素II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大。 Lee 等人(Biosci. Biotechnol. Biochem. 63 (12)，2236-2239，1999)報(bào)道了丹參酮衍生物能夠產(chǎn)成過氧化物，并由此表現(xiàn)出抗菌活性。Kang等人(Immunopharmacology, 49, 355-361, 2000)報(bào)道了丹參酮衍生物能夠在免疫細(xì)胞中抑制IL-12和INF-Y的產(chǎn)生。Ko等人(Arch. Pharm. Res. 25，446-448，2002)報(bào)道了丹參酮衍生物能夠抑制DGAT的酶活性。Zhou等人 (Biochemical Pharmacology,65, 51-57, 2003)報(bào)道了丹參酮IIA橫酸鹽促進(jìn)線粒體中的電子傳遞反應(yīng)。Wang 等人(Antimicrobial Agent &Chemotherapy, June, 1836-1841, 2003) 報(bào)道了丹參酮衍生物能夠抑制氨基葡糖苷誘導(dǎo)的自由基形成。Yun等人(Korean Patent Publication Laid-open No. 2000-0027306)證明了丹參酮衍生物可作為治療乙型肝炎的有效治療劑。Sohn 等人(Korean Patent Publication Laid-open No. 2004-0084482)公開了含有丹參酮I作為有效成分的治療肝纖維化或肝硬化的治療組合物。然而，上述出版物和專利中并未公開或暗示如本發(fā)明所述的通過提高AMPK的活性來預(yù)防和治療肥胖和代謝綜合癥。在本發(fā)明組合物中被用作有效成分的丹參衍生物，主要存在于被用作諸如丹參 (Salivia miltiorrhiza)和(Perovskia abrotanoides)的生藥材丹參中。丹參衍生物可廣泛地分成四氫菲衍生物和菲衍生物。優(yōu)選地，如本發(fā)明所述的組合物包括選自上述衍生物及其混合物中的一種或多種化合物。
優(yōu)選地，四氫菲衍生物是選自隱丹參酮(通式I)和丹參酮IIA(通式2)的一種或多種化合物。通式I
權(quán)利要求
1.以下組合物在制備用于預(yù)防或治療肥胖和代謝綜合癥疾病的藥物中的應(yīng)用，所述組合物包括作為有效成分的治療和/或預(yù)防有效量的丹參(Salivia miltiorrhiza)提取物， 其中所述丹參提取物包括選自四氫菲衍生物和菲衍生物中的一種或多種化合物，以及四氫菲衍生物菲衍生物的比率在10 1-1 10(w/w)的范圍內(nèi)。
2.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其中所述四氫菲衍生物包括選自隱丹參酮和丹參酮IIA 中的一種或多種化合物。
3.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其中所述菲衍生物包括選自丹參酮I和15，16-二氫丹參酮I中的一種或多種化合物。
4.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其中所丹參提取物包括選自隱丹參酮，丹參酮IIA，15， 16-二氫丹參酮I和丹參酮I中的一種或多種化合物。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，進(jìn)一步包括選自I β -羥基隱丹參酮，I-氧代隱丹參酮，丹參醇B，丹參醇ΙΙΒ，紫丹參甲素，二氫異丹參酮I，丹參酮IIA磺酸鹽，I，2-二氫丹參酮I和丹參酮VI中的一種或多種化合物。
6.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其中四氫菲衍生物菲衍生物的比率在5 1-1 5的范圍內(nèi)。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中四氫菲衍生物菲衍生物的比率在2.5 1-1 2.5 的范圍內(nèi)。
8.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其中所述四氫菲衍生物包括隱丹參酮和丹參酮ΙΙΑ，其比率在1:5-5: I (w/w)的范圍內(nèi)。
9.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其中所述菲衍生物包括15，16-二氫丹參酮I和丹參酮 I，其比率在I : 5-5 I (w/w)的范圍內(nèi)。
10.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為主要成分的隱丹參酮。
11.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為主要成分的15，16-二氫丹參酮I。
12.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為主要成分的丹參酮IIA。
13.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為主要成分的丹參酮I。
14.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為基本成分的隱丹參酮，且任選，包括選自丹參酮IIA，15，16-二氫丹參酮I和丹參酮I中的一種或多種化合物。
15.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為基本成分的丹參酮IIA，且任選，包括選自隱丹參酮，15,16-二氫丹參酮I和丹參酮I中的一種或多種化合物。
16.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為基本成分的15，16-二氫丹參酮I，且任選，包括選自隱丹參酮，丹參酮IIA和丹參酮I中的一種或多種化合物。
17.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括作為基本成分的丹參酮I，且任選， 包括選自隱丹參酮，丹參酮IIA和15，16-二氫丹參酮I中的一種或多種化合物。
18.如權(quán)利要求14或16所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括隱丹參酮和15，16-二氫丹參酮I。
19.如權(quán)利要求14或15所述的應(yīng)用,其中所述組合物包括隱丹參酮和丹參酮IIA。
20.如權(quán)利要求15或16所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括丹參酮IIA和15，16-二氫丹參酮I。
21.如權(quán)利要求15或17所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括丹參酮IIA和丹參酮I。
22.如權(quán)利要求16或17所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括15，16-二氫丹參酮I和丹參酮I。
23.如權(quán)利要求14或17所述的應(yīng)用，其中所述組合物包括丹參酮I和隱丹參酮。
24.如權(quán)利要求18-23任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中兩種組分的混合比率在 10 1-1 10 (w/w)的范圍內(nèi)。
25.如權(quán)利要求24所述的應(yīng)用，其中所述混合比率在5 1-1 5的范圍內(nèi)。
26.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其中所述代謝綜合癥疾病是選自肥胖癥，糖尿病，動脈硬化，高血壓，高脂血，肝病，腦溢血，心肌梗塞，局部缺血疾病和心血管疾病中的至少一種。
27.以下藥物制劑在制備用于預(yù)防和/或治療肥胖和代謝綜合癥疾病的藥物中的應(yīng)用，所述藥物制劑包括作為活性組分的權(quán)利要求I的組合物和一種或多種可藥用的載體或賦型劑。
28.如權(quán)利要求27所述的應(yīng)用，其中所述活性組分的含量在按重量計(jì)O.0001-10%的范圍內(nèi)。
29.如權(quán)利要求27所述的應(yīng)用，其中的制劑為適于口服或腸胃外給藥的多劑型或單位劑型，包括片劑，粉劑，硬或軟膠囊，懸液，可注射制品和乳液。
全文摘要
本發(fā)明涉及用增強(qiáng)代謝活性的丹參衍生物治療肥胖和代謝綜合癥，所述組合物含有作為有效成分的丹參酮衍生物，更具體地，所述組合物含有在提高代謝活性中表現(xiàn)出較高活性的作為有效成分的丹參酮衍生物。
文檔編號A61K31/343GK102579460SQ20111043893
公開日2012年7月18日 申請日期2004年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月30日
發(fā)明者樸明奎, 郭泰煥 申請人:韓國煙草人參公社, 麥仁斯有限公司