專利名稱：抗病毒方法的應(yīng)用的制作方法
人巨細(xì)胞病毒(HCMV)是常見于大約50％的一般人群中的皰疹病毒。大約90％具有HIV的人攜帶HCMV。在所述一般人群中，所述病毒在初次感染之后，在人體的組織中保持潛伏狀態(tài)。不過，所述病毒可以通過口腔、尿液和生殖道中排出，作為感染其他人的傳染源。如果免疫系統(tǒng)因為任何原因而受到損害的話，HCMV感染會導(dǎo)致更嚴(yán)重的二次感染。
癥狀主要取決于所述受感染人的年齡及其免疫系統(tǒng)的強健程度。HCMV可以感染子宮中的健康嬰兒。大約5％的通過垂直傳播獲得HCMV的新生兒，具有嚴(yán)重的先天缺陷。所述缺陷可以包括腦損傷、生長缺陷、眼盲和其他缺陷。這種問題通常出現(xiàn)在母親懷孕期間首次受到HCMV感染的場合。當(dāng)HCMV在嬰幼兒期導(dǎo)致感染時，它通常不會導(dǎo)致出現(xiàn)任何癥狀。這被認(rèn)為是HCMV感染的最常見的形式。
在少年和青年階段，HCMV感染可能導(dǎo)致類似于傳染性單核細(xì)胞增多癥“mono”的癥狀。其中所述癥狀包括咽喉痛、疲勞、發(fā)燒、和腺體腫脹，并且可能持續(xù)數(shù)周或數(shù)月。通常，在不進(jìn)行治療的情況下能夠完全恢復(fù)。
在所述普通成年群體中，HCMV處在潛伏狀態(tài)，但是可能與冠狀動脈疾病的發(fā)生相關(guān)。HCMV感染與動脈粥樣斑和粥樣硬化的發(fā)生相關(guān)。
HCMV在具有減弱的免疫系統(tǒng)的人體中會導(dǎo)致嚴(yán)重問題。這是患有AIDS的人或接受免疫抑制治療患者最常見的問題。HCMV能感染75-100％的HIV陽性患者。與HCMV相關(guān)的最常見的并發(fā)癥包括脈絡(luò)視網(wǎng)膜炎；胃腸道感染，包括肝炎，食道炎，結(jié)腸炎，胃炎和胰腺炎；累及神經(jīng)系統(tǒng)，包括腦炎和多發(fā)性神經(jīng)根炎；累及肺；和附睪炎。
具有播散性癌的人或接受器官或骨髓移植的人通常會受到影響。感染可能是由于第一次接觸HCMV或是因為再次激活了HCMV。在移植和癌癥患者中，HCMV通常會導(dǎo)致肺炎或引起腹瀉的胃腸道感染，這些疾病可能導(dǎo)致死亡。另外，HCMV會導(dǎo)致實體器官移植受體的慢性同種異體移植機(jī)能障礙的形成。業(yè)已確立了HCMV疾病和肺移植受體的閉塞性支氣管炎的形成之間的關(guān)系。另外，HCMV是可能導(dǎo)致同種異體損傷的多種危險因素之一。異體的直接病毒入侵可能在肝臟或腎臟移植患者體內(nèi)導(dǎo)致HCMV肝炎。除了由HCMV產(chǎn)生的直接癥狀之外，該病毒感染可能會增加真菌和其他機(jī)會感染的危險，如卡式肺囊蟲肺炎和EB病毒相關(guān)的移植后淋巴增殖病。
大多數(shù)人在其成年時受到過HCMV的感染。任何接受輸血或器官移植的人都有感染HCMV的危險。另外，具有減弱的免疫系統(tǒng)的人和未出生的嬰兒具有患嚴(yán)重疾病的危險。
治療具有減弱的免疫系統(tǒng)的人的活性HCMV是用抗病毒制劑進(jìn)行的，如更昔洛韋、膦甲酸和cidofovir。所述藥物可能具有副作用，這些副作用包括由更昔洛韋引起的粒細(xì)胞減少癥和貧血；由膦甲酸引起的腎中毒、神經(jīng)中毒和電解質(zhì)紊亂；和由cidofovir引起的腎毒性、神經(jīng)毒性和脫發(fā)。最近，業(yè)已發(fā)現(xiàn)Tomudex具有抗HCMV的活性。Tomudex具有副作用，包括發(fā)疹、腹瀉、骨髓生產(chǎn)血細(xì)胞的能力降低、發(fā)熱、惡心和嘔吐、以及食欲不振。盡管有多種治療方法，HCMV仍然是免疫抑制患者病態(tài)率和死亡率的重要原因。
基于吡咯并[2，3-d]嘧啶的抗葉酸藥多年來一直被用作癌癥治療的化療制劑。有多種基于吡咯并[2，3-d]嘧啶的抗葉酸藥是已知的(參見例如，美國專利4,997,838；5,106,974；5,939,420；和5,877,178，以上文獻(xiàn)被收作本文參考)。N-[4-[2-(2-氨基-3，4-二氫-4-氧-7H-吡咯并[2，3-d]-嘧啶-5-基)乙基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二鈉鹽又被稱為ALIMTA，它就是一種這樣的化合物。ALIMTA在目前的臨床試驗中被用作抗癌治療劑，用于治療具有多種實體瘤的患者。深入研究和評估業(yè)已發(fā)現(xiàn)，ALIMTA是若干種需要葉酸的酶的有效抑制劑，包括胸苷酸合成酶，二氫葉酸還原酶和甘氨酰胺核糖核苷酸甲?；D(zhuǎn)移酶。
令人吃驚的、并且出人意料的是，我們業(yè)已發(fā)現(xiàn)ALIMTA可以用作抗巨細(xì)胞病毒制劑。
本發(fā)明提供了一種用于治療需要治療的人的HCMV的方法，該方法包括給所述人施用有效量的ALIMTA。
本發(fā)明還提供了將ALIMTA用于生產(chǎn)用來治療HCMV的藥物的用途。
另外，本發(fā)明涉及分配給或用于分配給接受HCMV治療的患者的治療包裝，該包裝包括一個或多個單位劑量，每一個單位劑量中包括一定量的ALIMTA，以便定期施用一個或多個所述單位劑量能有效治療HCMV；以及其最終的藥物容器，所述容器還含有或包括標(biāo)簽，所述標(biāo)簽標(biāo)明了ALIMTA是用于治療具有HCMV的患者。
另外，本發(fā)明涉及一種制品，包括包裝材料和容納在所述包裝材料中的ALIMTA，其中，ALIMTA對于治療HCMV是治療上有效的，并且，其中所述包裝材料包括標(biāo)明ALIMTA可用于治療HCMV的標(biāo)簽。
ALIMTA，N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧-3H-吡咯并[2，3-d]-嘧啶-5-基)乙基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二鈉鹽通過結(jié)構(gòu)式I表示 結(jié)構(gòu)式I的化合物能夠以與相應(yīng)的4(3H)-氧化合物的互變異構(gòu)平衡形式存在。出于說明目的，下面示出了所述吡咯并嘧啶環(huán)系統(tǒng)的平衡式及其編號 為了方便起見，在式I中示出了4(3H)-氧形式，并且其相應(yīng)的命名被用于本說明書中。不過，應(yīng)當(dāng)理解的是，所述視圖包括相應(yīng)的互變異構(gòu)4-羥基形式。
ALIMTA最初是由美國專利5344932披露的，該專利的內(nèi)容被以全文形式收作本文參考。
在本發(fā)明的所述方法中，術(shù)語“治療”具有其常見含義，它包括預(yù)防、抑制、緩解、減輕、阻止、限制、延緩或逆轉(zhuǎn)進(jìn)展，或減輕HCMV的嚴(yán)重程度。
在本發(fā)明的所述方法中，術(shù)語“HCMV”表示人巨細(xì)胞病毒。人巨細(xì)胞病毒是一種皰疹病毒，它會導(dǎo)致細(xì)胞增大和嗜酸性包含體的形成。
在本發(fā)明的方法中，術(shù)語“有效量”表示能夠?qū)崿F(xiàn)預(yù)期結(jié)果的一定量的化合物或藥物。例如，為了治療HCMV而使用的有效量的ALIMTA是預(yù)防、抑制、緩解、減輕、阻止、限制、延緩或逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)展，或減輕HCMV的嚴(yán)重程度所需要的量。
本發(fā)明還包括使用藥物制劑的方法，該制劑包括與藥用載體結(jié)合的、作為活性成分的ALIMTA。所有熟練的技術(shù)人員都了解所述制劑及其生產(chǎn)，例如，參見REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES，(16thed.1980)。
所述制劑優(yōu)選制備成單位劑型，每一個劑量含有大約0.1-大約100毫克，更優(yōu)選大約10-大約30毫克的活性成分。術(shù)語“單位劑型”表示適合作為人類對象的單位劑量的物理上獨立的單位，每一個單位含有預(yù)定量的活性物質(zhì)，經(jīng)計算，該量的物質(zhì)與合適的藥用賦形劑結(jié)合，能產(chǎn)生需要的治療效果。
ALIMTA在很大的劑量范圍內(nèi)都是有效的。例如，每日的劑量通常在大約0.5-大約30毫克/千克體重的范圍內(nèi)。不過，應(yīng)當(dāng)理解的是，實際施用的ALIMTA的量是由醫(yī)生根據(jù)相關(guān)的情況決定的，所述相關(guān)情況包括要治療的狀況，選擇的施用途徑，每個患者的年齡、體重和反應(yīng)，以及患者癥狀的嚴(yán)重性，因此，上述劑量范圍并非是以任何形式限定本發(fā)明的范圍。在某些場合下，低于上述范圍下限的劑量水平可能更適用，而在其他場合下，還可以使用更大的劑量，而不會導(dǎo)致任何有害的副作用，其前提是，首先將所述較大的劑量分成若干較小的劑量，用于在1天內(nèi)施用。
ALIMTA能夠以與可以藥用的載體或賦形劑組合的藥物組合物形式使用，該組合物的比例和性質(zhì)是由所述化合物在選擇的載體和/或賦形劑中的溶解度和化學(xué)特性、所選擇的施用途徑、和標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)實踐決定的。
藥物組合物是用藥物學(xué)領(lǐng)域眾所周知的方式制備的，例如，參見REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES，(16th ed.1980)。所述載體或賦形劑可以是固體、半固體或液體材料，可將其用作所述活性成分的媒介物或介質(zhì)。合適的載體或賦形劑為本領(lǐng)域所熟知。所述藥物組合物適合口服、吸入、腸胃外或局部使用，并且能夠以片劑、膠囊、氣溶膠、吸入劑、栓劑、溶液、或懸浮液等形式給患者施用。
下面的制劑實施例僅僅是說明性的，并非要以任何形式限定本發(fā)明的范圍。“活性成分”表示ALIMTA。
實施例1活性成分4％(總?cè)芤?L-半胱氨酸 0.03％(總?cè)芤?可以藥用的賦形劑水用氫氧化鈉將該溶液的pH調(diào)整到8.5。對調(diào)整過pH的溶液進(jìn)行遮光保護(hù)。用氮氣吹掃該溶液20分鐘，然后進(jìn)行消毒過濾。然后將該制劑分配到預(yù)先洗滌過的去致熱源的小瓶中，然后用預(yù)先洗滌過的、預(yù)先消毒過的Teflon包衣的瓶塞封蓋。所述瓶蓋是用卷縮機(jī)連接的。所述消毒過濾和分配步驟，是用氮隔離器(5％v/v氧氣)進(jìn)行的。
應(yīng)用測試方法通過用人包皮或胎兒肺細(xì)胞進(jìn)行的試驗，證實了ALIMTA作為抗巨細(xì)胞病毒制劑的出乎預(yù)料的活性。進(jìn)行該試驗所需要的所有材料都可以從商業(yè)渠道獲得。該試驗方法在文獻(xiàn)中有大量報導(dǎo)，例如，參見Colacino，JM和Lopez C.，1983，“某些核苷酸類似物作為抗人巨細(xì)胞病毒制劑的效力和選擇性”Antimicrob.Agents Chemother.24505-508；Colacino，JM和Lopez C.，1985，“2’-脫氧-2’-氟-β-D-阿糖呋喃糖基-5-碘代胞嘧啶在人皮膚成纖維細(xì)胞中抗人巨細(xì)胞病毒的抗病毒活性”，Antimicrob.Agents Chernother.28252-258；和Mauldin，SC，Paget CJ Jr.，Jones CD，Colacino JM，BaxterAJ，Staschke KA，Johansson NG，和Vrang L.，1998，“核苷1-[2′，3′雙脫氧-3′-C-(羥基甲基)-β-D-erythropentofuranosyl]胞嘧啶的前藥的合成和抗病毒活性”。Bioorg.Med.Chem.6577-585。
ALIMTA是通過本領(lǐng)域眾所周知的方法制備的，例如，參見C.J.Barnett等，1999，“多導(dǎo)向抗葉酸藥LY231514的實踐合成”。Org.Process Res.and Dev.，3，184-188。然后用磷酸緩沖的鹽溶液制備ALIMTA的母懸浮液，并且在需要的時候進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
細(xì)胞培養(yǎng)用于檢測不同類型藥物抗HCMV的活性的可以接受的方法是抑制細(xì)胞培養(yǎng)物中病毒的復(fù)制，并且比較在存在ALIMTA的條件下的病毒復(fù)制和不存在ALIMTA的條件下的病毒的復(fù)制，所述藥物與在人體中的HCMV的治療之間存在良好的相關(guān)性。
用人巨細(xì)胞病毒感染人成纖維細(xì)胞、包皮或胎兒肺細(xì)胞。所述細(xì)胞是用不含或含有濃度不斷增加的ALIMTA的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的。在一段時間之后，將在未處理過的感染細(xì)胞對照培養(yǎng)物上出現(xiàn)的噬斑數(shù)量，與在處理過的感染細(xì)胞培養(yǎng)物上出現(xiàn)的噬斑數(shù)量進(jìn)行比較。另外，將在未處理過的感染細(xì)胞對照培養(yǎng)物中產(chǎn)生的病毒的產(chǎn)量，與在處理過的感染細(xì)胞培養(yǎng)物中生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量進(jìn)行比較。
可以確定病毒復(fù)制抑制的百分比，并且可以通過線性回歸分析，計算抑制50％病毒復(fù)制(IC50)和90％病素復(fù)制(IC90)所需要的分子濃度。在沒有細(xì)胞毒性的濃度下的50％或更高的抑制百分比，表明具有選擇性的抗病毒活性，并且表明該藥物可用于治療由HCMV導(dǎo)致的感染。ALIMTA在0.29μM的濃度下具有超過50％的抑制作用(IC50)，并且在＞100μM的濃度下抑制細(xì)胞復(fù)制的50％(TC50)，得到＞344.8的選擇性指數(shù)(TC50/IC50)。
結(jié)果
IC50＝HCMV菌株AD 169誘導(dǎo)的在MRC-5細(xì)胞中噬斑形成的50％抑制濃度。
TC50＝用Promega′s Cell Titer 96 Aqueous One溶液在MRC-5細(xì)胞中測定的50％細(xì)胞毒性濃度TI(治療指數(shù))＝TC50/IC50
權(quán)利要求
1.一種用于在需要治療的人中治療HCMV的方法，該方法包括給所述人施用有效量的ALIMTA。
2.將ALIMTA用于生產(chǎn)用來治療HCMV的藥物的用途。
3.一種分配給或用于分配給接受HCMV治療的患者的治療包裝，該包裝包括一個或多個單位劑量，每一個單位劑量中包括一定量的ALIMTA，以便定期施用一個或多個所述單位劑量能有效治療HCMV；以及其最終的藥物容器，所述容器還含有或包括標(biāo)簽，所述標(biāo)簽標(biāo)明了ALIMTA是用于治療具有HCMV的患者。
4.一種制品，包括包裝材料和容納在所述包裝材料中的ALIMTA，其中，ALIMTA對于治療HCMV是治療上有效的，并且，其中所述包裝材料包括標(biāo)明ALIMTA可用于治療HCMV的標(biāo)簽。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種在需要治療的人中治療HCMV的方法，該方法包括給所述人施用有效量的ALIMTA。
文檔編號A61P31/12GK1491111SQ02805063
公開日2004年4月21日 申請日期2002年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月16日
發(fā)明者D·W·巴洛, J·M·科拉茨諾, D W 巴洛, 科拉茨諾 申請人:伊萊利利公司