專利名稱：一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法，屬于功能性植物多糖提取技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
烏飯樹是一種藥食兼用的傳統(tǒng)植物資源，在我國(guó)分布廣泛。烏飯樹樹葉中含有如多糖、花色苷、黃酮、酚類、單寧等多種有效成分，具有改善血液微循環(huán)、抗?jié)儭⒖寡装Y、抗疲勞、抗衰老、抗腫瘤等多種藥理活性。植物多糖是一類重要的大分子天然產(chǎn)物，具有多種生理功能，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血壓、抗凝血、降血糖和降血脂等，尤其是對(duì)糖尿病的預(yù)防和治療方面具有重要的作用。國(guó)內(nèi)外對(duì)于多糖降血糖方面的研究從未間斷，越來(lái)越多的活性多糖的降血糖功能被發(fā)掘。
糖尿病是一種以慢性高血糖為特征的代謝紊亂性疾病，已經(jīng)成為繼心血管和腫瘤之后的第三位“健康殺手”。楊文英教授等2010年3月25日發(fā)表于《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》——《中國(guó)人的糖尿病患病率》一文指出在中國(guó)，9240萬(wàn)20歲以上的成年人(9.7%的成年人口)患有糖尿病，并且糖尿病患病率正快速升高，呈現(xiàn)發(fā)病年輕化的趨勢(shì)。以烏飯樹樹葉為原料，經(jīng)過(guò)粉碎、熱水水提、乙醇沉淀、大孔樹脂、凝膠色譜分離純化，最后用胰島￠-細(xì)胞膜色譜柱進(jìn)行功能驗(yàn)證，得到具有調(diào)節(jié)血糖活性的烏飯樹多糖。這將使烏飯樹這一傳統(tǒng)植物資源及我國(guó)豐富的功能性植物資源得到更大的開(kāi)發(fā)利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法，該方法工藝設(shè)計(jì)科學(xué)合理，能有效的分離純化具有調(diào)節(jié)血糖活性的多糖，提高了烏飯樹資源的開(kāi)發(fā)利用，為植物多糖的開(kāi)發(fā)提供了依據(jù)。本發(fā)明的技術(shù)方案以烏飯樹樹葉為原料，經(jīng)過(guò)粉碎、熱水水提、乙醇沉淀，再經(jīng)過(guò)大孔樹脂和凝膠色譜分離純化，最后用胰島3 -細(xì)胞膜色譜柱驗(yàn)證活性，得到具有調(diào)節(jié)血糖活性的烏飯樹多糖。(I)原料粉碎烏飯樹樹葉干燥，粉碎，過(guò)60-80目篩網(wǎng)，得到樹葉粉末；(2)熱水提取烏飯樹樹葉粉末加水，料液比控制在I : 40-1 50，pH調(diào)節(jié)至9. 0-9. 5，溫度調(diào)節(jié)至60-65°C，浸提時(shí)間為2_3h，4000r/min離心15min，取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到濃縮液A ;(3)乙醇沉淀濃縮液A與適量乙醇混合，調(diào)節(jié)至混合液中乙醇純度為75-85%，沉淀時(shí)間為6-7h，4000r/min離心15min，取沉淀，加水復(fù)溶，得到濃縮液B ;(4)大孔樹脂純化濃縮液B上大孔吸附樹脂，先用2-3倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用3-5倍柱體積的體積濃度為95%的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過(guò)5 %，得到濃縮液C ；(5)凝膠色譜純化濃縮液上凝膠柱，收集分子量在80_100KDa范圍內(nèi)的洗脫液，濃縮得到濃縮液D ；(6)胰島0 -細(xì)胞膜色譜柱驗(yàn)證活性以處理好的載體細(xì)胞膜作為胰島P -細(xì)胞膜色譜柱的固定相，流速為0. 2mL/min，柱溫為37°C，流動(dòng)相為硫酸銨緩沖液。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明工藝設(shè)計(jì)科學(xué)合理，操作簡(jiǎn)便，能有效的分離純化具有調(diào)節(jié)血糖活性的多糖，提高了烏飯樹資源的開(kāi)發(fā)利用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I取經(jīng)過(guò)干燥粉碎、過(guò)60目篩的50g烏飯樹樹葉粉末，加入2. OL /K，調(diào)節(jié)pH至9. 0，60°C下恒溫?cái)嚢?h,提取液4000r/min離心15min,取上清液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,得到濃縮液A ;向濃縮液A中加入濃度為80%的乙醇調(diào)節(jié)最終乙醇濃度為75%，靜置沉淀7h，沉淀后4000r/min離心15min，將沉淀加水復(fù)溶得到濃縮液B ;濃縮液B上AB-8型大孔吸附樹脂，先用2倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用3倍柱體積的濃度為95%的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過(guò)5%，得到濃縮液C ;濃縮液C過(guò)ShodexOHPak SB_g03HQ型色譜柱，收集分子量在80-100KDa范圍內(nèi)的洗脫液，濃縮后得到濃縮液D ；以處理好的載 體細(xì)胞膜作為胰島P -細(xì)胞膜色譜柱的固定相，用低壓濕法裝入色譜柱中，流速為0. 2mL/min，柱溫為37°C，用硫酸銨緩沖液為流動(dòng)相平衡3h后，加入濃縮液D驗(yàn)證其具有調(diào)節(jié)血糖活性。實(shí)施例2取經(jīng)過(guò)干燥粉碎、過(guò)80目篩的50g烏飯樹樹葉粉末，加入2. 5L水，調(diào)節(jié)pH至9. 5,65°C下恒溫?cái)嚢?h,水提后4000r/min離心15min,得到上清液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,得到濃縮液A ;向濃縮液A中加入加入濃度為95%的乙醇調(diào)節(jié)最終乙醇濃度為85%，靜置沉淀6h，沉淀后4000r/min離心15min，將沉淀加水復(fù)溶得到濃縮液B ;濃縮液B上D3520型大孔吸附樹脂，先用3倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用5倍柱體積的體積濃度為95 %的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過(guò)5 %，得到濃縮液C ;濃縮液C過(guò)Shodex0HPakSB-803HQ型色譜柱，收集分子量在80_100KDa范圍內(nèi)的洗脫液，濃縮得到濃縮液D ;以處理好的載體細(xì)胞膜作為胰島￠-細(xì)胞膜色譜柱的固定相，用低壓濕法裝入色譜柱中，流速為0. 2mL/min，柱溫為37°C，用硫酸銨緩沖液為流動(dòng)相平衡3h后，加入濃縮液D驗(yàn)證其具有調(diào)節(jié)血糖活性。
權(quán)利要求
1.一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法，其特征是以烏飯樹樹葉為原料，經(jīng)過(guò)粉碎、熱水水提、乙醇沉淀，再經(jīng)過(guò)大孔樹脂和凝膠色譜分離純化，最后用胰島β -細(xì)胞膜色譜柱驗(yàn)證活性，得到具有調(diào)節(jié)血糖活性的烏飯樹多糖； 具體工藝如下 (1)原料粉碎烏飯樹樹葉干燥，粉碎，過(guò)60-80目篩網(wǎng)，得到樹葉粉末； (2)熱水提取烏飯樹樹葉粉末加水，料液比控制在I: 40-1 50，？!1調(diào)節(jié)至9.0-9.5，溫度調(diào)節(jié)至60-65°C，浸提時(shí)間為2-3h，4000r/min離心15min，取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到濃縮液A ； (3)乙醇沉淀濃縮液A與適量乙醇混合，調(diào)節(jié)至混合液中乙醇純度為75-85%，沉淀時(shí) 間為6-7h,4000r/min離心15min,取沉淀,加水復(fù)溶,得到濃縮液B ； (4)大孔樹脂純化濃縮液B上大孔吸附樹脂，先用2-3倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用3-5倍柱體積的體積濃度為95%的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過(guò)5%，得到濃縮液C ; (5)凝膠色譜純化濃縮液上凝膠柱，收集分子量在80-100KDa范圍內(nèi)的洗脫液，濃縮得到濃縮液D ； (6)胰島細(xì)胞膜色譜柱驗(yàn)證活性以處理好的載體細(xì)胞膜作為胰島細(xì)胞膜色譜柱的固定相，流速為O. 2mL/min，柱溫為37°C，流動(dòng)相為硫酸銨緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的具有降血糖作用的烏飯樹多糖的提取方法，其特征是(I)大孔樹脂是 AB-8、D3520、D4020 中的一種；(2)凝膠為 Shodex OHPak SB-803HQ ； (3)載體細(xì)胞膜的制備在低溫反應(yīng)管中加入硅膠作為細(xì)胞膜的載體，加入細(xì)胞膜懸浮液適量，反應(yīng)2h后，加入生理鹽水，控制溫度為25°C，使凝脂雙層進(jìn)行自身相互作用，最終在硅膠表面形成均勻的細(xì)胞膜，用Tris-HCl緩沖液洗滌。
全文摘要
一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法，屬于功能性植物多糖精深加工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明工藝步驟是以烏飯樹樹葉為原料，經(jīng)過(guò)粉碎、水提、醇沉，再經(jīng)過(guò)大孔樹脂和凝膠色譜分離純化，最后用胰島β-細(xì)胞膜色譜柱驗(yàn)證活性，得到具有調(diào)節(jié)血糖活性的烏飯樹多糖。本發(fā)明工藝設(shè)計(jì)科學(xué)合理，能有效的分離純化具有調(diào)節(jié)血糖活性的多糖，提高了烏飯樹資源的開(kāi)發(fā)利用，為植物多糖的開(kāi)發(fā)提供了依據(jù)。
文檔編號(hào)A61P3/08GK102964464SQ20121049965
公開(kāi)日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月30日
發(fā)明者王立, 程素嬌, 張暉, 錢海峰, 齊希光 申請(qǐng)人:江南大學(xué)