專利名稱：一種香薷提取物的制劑、質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物的制劑、質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種香薷提取物的制劑、質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
腹瀉(感染性、非感染性)發(fā)病率高，在某些地區(qū)病死率亦較高，是遍及全球的嚴(yán)重問題。中醫(yī)對腹瀉的治療則多進(jìn)行辨證論治，寒濕證者藿香正氣散主之，濕熱證者葛根芩連湯主之，食滯證者保和丸主之，肝郁乘脾者痛瀉要方主之，脾胃虛弱證者參苓白術(shù)散主之，腎陽虛衰證者四神丸主之。然亦有采用土單驗(yàn)方對腸胃炎進(jìn)行辨病治療者。近些年來，中醫(yī)治療病毒性腹瀉的報導(dǎo)不少，但形成新藥者較少。中醫(yī)藥的特點(diǎn)是擅長調(diào)理胃腸道功能，副作用少，但對病原體的作用強(qiáng)度略遜于西藥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對感染性腹瀉多用抗菌藥配合液體療進(jìn)行治療，明顯提高了療效。近十多年來微生態(tài)制劑的研究與應(yīng)用引起了學(xué)者的重視，同時開展了疫苗研究，但是由于引起腹瀉的病原體很多，彼此之間缺乏交叉免疫，故對疫苗的研制一直進(jìn)展緩慢。隨著研究的深入，對抗菌藥的毒副作用也越來越清楚，如對腎、肝、神經(jīng)精神、血液的毒性及胃腸道反應(yīng)、過敏反應(yīng)和二重感染等。目前對病毒性腹瀉尚缺乏特效的藥物，國外有用乳酸桿菌、干擾素、病毒唑等進(jìn)行治療的報導(dǎo)，國內(nèi)有用病毒感染雞，然后從雞卵中制備抗體制劑進(jìn)行治療者，但仍在研發(fā)之中。近年研制了輪狀病毒活疫苗，正在推廣應(yīng)用之中。據(jù)WHO的資料，全世界每年腹瀉病例可達(dá)30-50億例次，約有500-1000萬病例因嚴(yán)重腹瀉而死亡。亞、非、拉地區(qū)5歲以下兒童中，每年發(fā)生腹瀉者在10億人次以上，死者約500萬。據(jù)報導(dǎo)，中國每年約8.36億人次發(fā)生腹瀉，其中5歲以下兒童約占2.09億人次，約占1/4。據(jù)1993年衛(wèi)生部報告，我國急性胃腸炎兩周患病率為11.74％，兩周急病按病種構(gòu)成約占8.36％，排在急性鼻咽炎和流行性感冒之后，居全國城鄉(xiāng)居民兩周患病的第三位。輪狀病毒是1973年由Bishop等發(fā)現(xiàn)的。全世界5歲以下兒童每年可發(fā)生1.4億人次輪狀病毒腹瀉，死亡可達(dá)100萬人。輪狀病毒是嬰幼兒腹瀉的重要病原，后來又發(fā)現(xiàn)了引起成人腹瀉的成人輪狀病毒。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種治療腹瀉的香薷提取物制劑。
本發(fā)明目的還在于提供香薷及其提取物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的香薷揮發(fā)油的制備香薷全草，切段，加6-10倍量水，水蒸氣蒸餾提取4-8小時，分離出揮發(fā)油層，即得。
本發(fā)明的藥物制劑含有1％-99％的香薷揮發(fā)油和99％-1％的賦形劑(包括其它配用的藥物)，優(yōu)選含有30％-80％的香薷揮發(fā)油和70％-20％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，最好含有60％-70％的香薷揮發(fā)油和40％-30％的賦形劑(包括其它配伍用的藥物)。
按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的香薷揮發(fā)油制備成多種臨床藥物劑型，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑中的任何一種；所說的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的一種。
本發(fā)明的藥物中的輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。本發(fā)明藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的莫拉油為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學(xué)藥品。
上述揮發(fā)油(莫拉油)為微黃色的澄清液體；有特異的芳香氣，味辛；儲存日久，色稍變深。
莫拉油的質(zhì)量控制方法中含有如下鑒別和/或含量測定方法鑒別按莫拉油含量測定方法，高效液相色譜圖在與百里香酚和香芹酚對照品相同的保留時間，有相應(yīng)的吸收峰。
含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；50-70∶50-30∶1-3甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm。理論板數(shù)按百里香酚峰計算應(yīng)不低于10000，按香芹酚峰計算應(yīng)不低于15000。對照品溶液的制備，精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg。供試品溶液的制備，取本品約0.017g，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.9ml，至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品含香芹酚(C10H14O)和百里香酚(C10H14O)的總量不得少于55％。
鑒別按莫拉油含量測定方法，高效液相色譜圖在與百里香酚和香芹酚對照品相同的保留時間，有相應(yīng)的吸收峰。
本發(fā)明所述香薷的質(zhì)量控制方法中含有如下含量測定方法含量測定精密稱取香薷細(xì)粉約0.2g，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；50-70∶50-30∶1-3甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm。理論板數(shù)按百里香酚峰計算應(yīng)不低于10000，按香芹酚峰計算應(yīng)不低于15000。對照品溶液的制備，精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg。測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。香薷含香芹酚(C10H14O)和百里香酚(C10H14O)的總量不得少于0.80％。
本發(fā)明所述香薷及其揮發(fā)油的藥效學(xué)研究結(jié)果顯示，莫拉油具有如下功能1.莫拉油的抗病毒作用12.5～25nl/ml莫拉油能抑制小兒輪狀病毒RDTA-I型(Wa株)在非洲綠猴腎細(xì)胞上生長繁殖。
2.莫拉油的抗細(xì)菌作用莫拉油能降低腸炎沙門氏菌腹腔感染小鼠的死亡率(P＜0.05)；能降低腸炎沙門氏菌經(jīng)口感染的小鼠大便中致病菌的含量(P＜0.05～0.01)；在體外，對致病性大腸桿菌、志賀氏桿菌、普通變形桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等常見致病菌，有較強(qiáng)的抑制生長作用，試驗(yàn)用44株菌株中，最低抑菌濃度≤1ul油/ml的占79.5％。
3.莫拉油的止瀉作用顯著地降低100％番瀉葉煎劑所致的腹瀉模型小鼠的稀便率、腹瀉率、腹瀉指數(shù)及腹瀉程度(P＜0.05～0.001)。
4.莫拉油對胃腸功能的影響該藥能降低正常的和新斯的明所致亢進(jìn)的小鼠小腸推進(jìn)功能(P＜0.05～0.001)，延長排便時間、降低排便數(shù)量(P＜0.05～0.001)，減緩胃排空運(yùn)動(P＜0.01～0.001)，降低胃分泌功能(P＜0.001)，抑制正常豚鼠離體腸平滑肌自律運(yùn)動和乙酰膽堿所致腸平滑肌興奮。
5.莫拉油的止痛作用莫拉油非常顯著地減少由0.7％醋酸所致的小鼠扭體數(shù)(均P＜0.001)，抑制率達(dá)51.3～55.7％。
6.莫拉油的抗炎作用莫拉油顯著地抑制由二甲苯所致小鼠耳腫脹(P＜0.01～0.001)，顯著地抑制組織胺引起的血管通透性(P＜0.05～0.001)，抑制羧甲基纖維素鈉所致腹腔白細(xì)胞游走(P＜0.05～0.001)。
7.莫拉油的退熱作用莫拉油對酵母菌所致的大鼠體溫升高和內(nèi)毒素所致家兔體溫升高均有顯著地抑制作用(P＜0.05～0.001)。
下列實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例莫拉油抑制小兒輪狀病毒ROTA-I型(Wa株)的作用材料與方法1.藥物受試物莫拉油，淡黃色，比重0.95726g/ml，16mg油/1g生藥，批號20000601，北京巨杉醫(yī)藥研究所提供。取0.5ml莫拉油加0.5ml吐溫-80(上海第十八制藥廠生產(chǎn)，批號960520)混均后加4ml生長液稀釋。放4℃冰箱備用。
對照藥葛根芩連微丸，廣西柳州市中藥廠生產(chǎn)，桂衛(wèi)準(zhǔn)字(1991)第017004號，批號990721。取1g藥加蒸餾水10毫升溶解，2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液水浴煮沸10分鐘滅菌，放4℃冰箱保存。
上述藥用前調(diào)pH＝7.22.細(xì)胞非洲綠猴腎(Vero)傳代細(xì)胞，長成單層的細(xì)胞經(jīng)胰酶消化液消化為單個細(xì)胞，用生長液配成6萬個細(xì)胞/ml，接入細(xì)胞管，1ml/管。
3.病毒小兒輪狀病毒ROTA-1型(Wa株)，由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所提供，TCID5010-7，試驗(yàn)時用100個TCID500.1ml。Wa株用前，用1ml病毒液加0.05ml胰酶(200ug/ml)37℃水浴30分鐘。
4.試劑Eagles MEM干粉，美國GIBCO產(chǎn)品。胎牛血清，天津血液研究所生產(chǎn)；批號9925，L-谷氨酰胺，Sigma進(jìn)口分裝，批號911015。青霉素、鏈霉素。
試劑配制生長液Eagles加1％青鏈霉素、1％谷氨酰胺、10％小牛血清，用前調(diào)PH＝7.4。
維持液Eagles加1％青鏈霉素、1％谷氨酰胺，200ug/ml胰酶(終濃度為2ug/ml)，用前調(diào)PH＝7.4。
細(xì)胞消化液0.25％胰酶，用無鈣鎂磷酸鹽緩沖液配制。
5.試驗(yàn)用品及儀器培養(yǎng)瓶、試管、刻度吸管、溫箱、冰箱、烤箱、水浴箱、低溫冰柜、液氮罐等，均為國產(chǎn)。
6.試驗(yàn)方法(1)莫拉油、葛根芩連微丸和吐溫-80對Vero細(xì)胞的毒性作用將稀釋好的藥物、吐溫-80接入長成單層細(xì)胞的試管中，放37℃溫箱培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞變化。
(2)藥物對病毒的直接殺傷作用將稀釋好的藥物與病毒等量混合后放37℃溫箱1小時。然后接入長成單層細(xì)胞的試管中，每管0.2ml，放37℃吸附1小時。用維持液洗兩次后加入維持液1ml。放37℃溫箱培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞病變(CPE)，當(dāng)病毒對照出現(xiàn)++++時，終止試驗(yàn)。
(3)藥物對病毒在細(xì)胞內(nèi)繁殖的抑制作用將已處理的病毒接入細(xì)胞管中，每管0.1ml放37℃吸附1小時，用維持液洗兩次后分別加入含不同藥物濃度的維持液1ml，放37℃培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞病變，當(dāng)病毒對照管出現(xiàn)++++時，終止試驗(yàn)。
注細(xì)胞病變+25％、++50％、+++75％、++++100％。
以上試驗(yàn)同時設(shè)藥物對照、病毒對照、細(xì)胞對照，每試驗(yàn)組4管細(xì)胞，重復(fù)做試驗(yàn)兩次。
結(jié)果1.莫拉油對Vero細(xì)胞的毒性試驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1 莫拉油對Vero細(xì)胞的毒性試驗(yàn)結(jié)果

將4個濃度莫拉油分別接入細(xì)胞管，終濃度為100、50、25、12.5nl/ml。每個濃度4管，觀察7天。結(jié)果莫拉油濃度為100nl/ml時對細(xì)胞有毒性，濃度為50，25，12.5nl/ml時對細(xì)胞沒有毒性；葛根芩連微丸5mg/ml時對細(xì)胞有毒性，2.5mg/ml和1.25mg/ml時對細(xì)胞沒有毒性；吐溫-80 100nl/ml時對細(xì)胞沒有毒性。
2.莫拉油對病毒的直接殺傷作用試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表2。
表2 莫拉油對病毒的直接殺傷作用試驗(yàn)結(jié)果

如表所示莫拉油各給藥組對小兒輪狀病毒ROTA-1型，沒有直接滅活作用。
3.莫拉油對病毒在細(xì)胞內(nèi)的繁殖抑制作用試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表3。
表3莫拉油對病毒在細(xì)胞內(nèi)的繁殖抑制作用試驗(yàn)結(jié)果

如表所示，莫拉油濃度為25nl/ml、12.5nl/ml時，可以完全抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的繁殖，濃度為6.25nl/ml時，對病毒在細(xì)胞內(nèi)繁殖有一定的抑制作用，濃度為3.1nl/ml時對病毒在細(xì)胞內(nèi)繁殖沒有抑制作用。葛根芩連微丸、吐溫-80各濃度組對病毒在細(xì)胞內(nèi)繁殖沒有抑制作用。
實(shí)施例1香薷質(zhì)量控制方法精密稱取香薷細(xì)粉約0.2g，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；60∶40∶2甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm。理論板數(shù)按百里香酚峰計算應(yīng)不低于10000，按香芹酚峰計算應(yīng)不低于15000。對照品溶液的制備精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg。測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，香薷含香芹酚(C10H14O)和百里香酚(C10H14O)的總量不得少于0.80％。
實(shí)施例2莫拉油的質(zhì)量控制方法含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；60∶40∶2甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm。理論板數(shù)按百里香酚峰計算應(yīng)不低于10000，按香芹酚峰計算應(yīng)不低于15000。對照品溶液的制備精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg。供試品溶液的制備 取本品約0.017g，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.9ml，至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，本品含香芹酚(C10H14O)和百里香酚(C10H14O)的總量不得少于55％。
鑒別按莫拉油含量測定方法，高效液相色譜圖在與百里香酚和香芹酚對照品相同的保留時間，有相應(yīng)的吸收峰。
實(shí)施例3膠囊的制備莫拉油250克，淀粉2500克，將淀粉先進(jìn)行干燥，過120目篩，然后與莫拉油混合均勻，過兩次120目篩，充分混勻，共制成1000粒膠囊，每粒內(nèi)含莫拉油250毫克。口服，每日2-3次，每次1-2粒。
實(shí)施例4滴丸的制備稱取300g，聚乙二醇4000，在水浴上熔化，加入莫拉油原料100g，攪拌均勻，傾入保溫管中，調(diào)節(jié)恒溫裝置，使藥液在80-90℃下滴入冷卻過的液體石蠟中(溫度±4℃)，滴完后，將藥丸傾入濾紙上吸干石蠟油，再加入少量滑石粉，混勻，得莫拉油滴丸1000粒?？诜?，一次2-3粒，一日三次，飯后服用。
實(shí)施例5膠囊劑的制備香薷1000g，藥用淀粉1000g，混合均勻，裝入0#膠囊，每粒0.35g，治療腹瀉，每次口服1-2粒，每日兩次。
實(shí)施例6片劑的制備莫拉油原料1000g，藥用淀粉500g，混合均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒機(jī)整粒，壓片，每片0.25g，口服，每次1-2片，每日兩次。
實(shí)施例7顆粒劑的制備莫拉油原料100g，淀粉1000g，糖粉400g，混合均勻，用適量乙醇制粒，干燥、整粒、分裝即得。口服，一次5g，一日兩次。
實(shí)施例8注射劑的制備莫拉油10g，丙二醇20ml，聚乙二醇-400 50ml，注射用水300ml，混合，水浴加熱30分鐘，加苯甲醇50ml，再用注射用水加至1000ml，在超聲波中處理10分鐘，再水浴上加熱30分鐘，調(diào)PH值5.5-6.5，過濾澄明，灌封，滅菌即得。每支2ml，肌肉注射，一次2ml，一日1-2次。
權(quán)利要求
1.一種藥物制劑，其特征在于含有1％-99％的香薷揮發(fā)油和99％-1％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于含有30％-80％的香薷揮發(fā)油和70％-20％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物制劑，其特征在于含有60％-70％的香薷揮發(fā)油和40％-30％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的藥物制劑，其特征在于香薷揮發(fā)油通過如下方法制備香薷全草，切段，加6-10倍量水，水蒸氣蒸餾提取4-8小時，分離出揮發(fā)油層，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的藥物制劑，其特征在于所說的藥物是口服片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑當(dāng)中的任何一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的藥物制劑，其特征在于所說的給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的任何一種。
7.一種香薷揮發(fā)油的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中含有如下鑒別和/或含量測定方法含量測定照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；50-70∶50-30∶1-3甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm；理論板數(shù)按百里香酚峰計算應(yīng)不低于10000，按香芹酚峰計算應(yīng)不低于15000；對照品溶液的制備，精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg；供試品溶液的制備，取香薷揮發(fā)油約0.017g，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.9ml，至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本品含香芹酚和百里香酚的總量不得少于55％；鑒別按香薷揮發(fā)油含量測定方法，高效液相色譜圖在與百里香酚和香芹酚對照品相同的保留時間，有相應(yīng)的吸收峰。
8.如權(quán)利要求7所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中以60∶40∶2甲醇-水-冰醋酸為流動相。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種香薷揮發(fā)油的制劑、質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的藥物制劑含有1％－99％的香薷揮發(fā)油和99％－1％的賦形劑(包括其它配用的藥物)，優(yōu)選含有30％－80％的香薷揮發(fā)油和70％－20％的藥用賦形劑(包括其它配伍用的藥物)，本發(fā)明香薷及其揮發(fā)油制劑有抗病毒、抗細(xì)菌、抗炎、止瀉、止痛、退熱的作用，并能抑制胃腸功能亢進(jìn)。
文檔編號A61P31/12GK1679707SQ20051000499
公開日2005年10月12日 申請日期2002年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月9日
發(fā)明者張瑞祥, 仝燕, 劉建勛, 李彩熙 申請人:張瑞祥