專利名稱：中藥西南九牛躁的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系使用茯苓菌絲體，以九牛躁等中藥復(fù)方構(gòu)成一種新型的培養(yǎng)基，并添加定量的鋅及銅、鐵、錳等微量元素，液體和固體發(fā)酵將其轉(zhuǎn)化、富集后制成為一類新的中藥菌類藥材。本發(fā)明所涉及的是中醫(yī)藥微量元素科學(xué)，真菌學(xué)領(lǐng)域。
九牛躁(Pimpinella diversifolia DC)別名苦爹菜·騷羊古·洋芹菜，已被列入貴州地方藥材，產(chǎn)于西南三省，根部入藥。其性味功用為性平、味甘、補(bǔ)腎、鎮(zhèn)痛、熄風(fēng)、化瘀、解毒，西南原住居民尤看重此藥。貴州威寧方劑治陽萎虛弱50g、燉肉吃；威寧金沙方劑是治跌打損傷，母豬瘋50g，研末開水或酒吞服。習(xí)水方劑是治毒蛇咬傷50g加蘿卡菜5g，搗爛敷傷口，并用100g泡酒500g服。以上流傳久遠(yuǎn)，藥效獨(dú)道的方劑證明九牛躁性平不燥，陰陽兩治，補(bǔ)腎壯陽，藥源珍稀。本發(fā)明復(fù)方故以本品為君。
本發(fā)明復(fù)方臣、佐，使用以下六味中藥構(gòu)成仙茅仙茅科植物仙茅Curculigo Orchioides Geectn的干燥地下根莖，性味辛、熱、有毒、歸腎、脾、肝經(jīng)。補(bǔ)腎壯陽，強(qiáng)筋骨，祛寒濕。用于陽萎精冷，筋骨痿軟，腰膝冷痹，陰虛冷瀉。
淫羊藿小蘗科植物箭葉淫羊藿，Epiraedikum Sagittaram(Coelz)Maxim的干燥莖葉。性味辛、溫、歸肝、腎徑。補(bǔ)腎壯陽，強(qiáng)筋鍵骨，祛風(fēng)濕，止咳平喘，用于陽萎早泄，腰膝無力，慢性腰腿痛。
補(bǔ)骨脂豆科植物補(bǔ)骨脂Psoralea CorylifoliaL的干燥成熟種子。性味辛苦、大溫。歸腎、脾徑。補(bǔ)腎助陽，固精溫脾。用于陽萎泄精，尿頻，腰膝冷痛等。
巴戟天茜草種植物巴戟天Morindon offcinalis How的干燥根部。性味辛、苦、溫。歸腎徑。溫腎壯陽，散寒祛風(fēng)。用于腎虛陽萎、皮膚濕疹，陰道滴蟲，驅(qū)蛔等。
蜂蜜蜜蜂科昆蟲中華蜜蜂Apis Cerana。性味甘、平、歸肺、大腸經(jīng)。補(bǔ)中潤燥、止痛、解毒，用于脘腹虛痛、肺燥干咳、腸燥便秘。
茯苓多孔菌科真菌茯苓，PoriaCo Cos(Schw)Wolf的干燥菌核。性味甘、淡、平。歸心、肺、脾、腎經(jīng)。利水滲濕，健脾寧心，用于水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不安。
上述單方組成的復(fù)方是九牛躁30g，仙茅10g，淫羊藿10g，補(bǔ)骨脂10g，巴戟天10g，蜂蜜30g，(以總量100g計(jì)算)。茯苓既是以菌絲體的存在形式進(jìn)入復(fù)方之中，同時(shí)又以其菌絲體自然轉(zhuǎn)化、富集中藥復(fù)方。
通過增加前列腺分泌的前列腺抗菌固子含量和抑制前列腺生長速率的雄性激素受體功能對(duì)前列腺炎癥和良性，惡性腫瘤進(jìn)行治療的方法，是全球醫(yī)藥專家共同追求的目標(biāo)。中醫(yī)藥學(xué)認(rèn)為，前列腺疾病應(yīng)為中醫(yī)的淋病，白濁，癃閉，陽萎，不育等癥治范疇。本病與腎、脾、肺三臟密切相關(guān)。濕熱為標(biāo)，血腎脾肺虛損為本，本虛標(biāo)實(shí)，虛實(shí)夾雜。因而治療本病的大法應(yīng)是標(biāo)本兼治，辨證施治，激發(fā)人體自身的抗病潛能，補(bǔ)腎益氣助陽，化淤通淋利尿。西南九牛躁便是依據(jù)這一理論而設(shè)計(jì)的中藥內(nèi)服組方。
腎為人體“先天之本”、“精血之?！?、腎氣的盛衰與補(bǔ)腎壯陽中藥所含生命必需微量元素密切相關(guān)。如；核酸代謝所必要的DNA聚合酶，DNA-PNA聚合酶，延伸因子與氨酰tRBA合成酶都是含鋅酶；能清除引起衰老的活性氧自由基的超氧化物歧化酶，主要是Ca-Zn-SOD和Mn-SOD，Zn、Cu、Mn均對(duì)SOD的活性和穩(wěn)定性有重要意義。人體內(nèi)在腎及相關(guān)部位其積量較大的生命元素主要是Zn、Mn、Ca、Fe、Cr、Ni、Ag等，從而提示出這些生命元素是中醫(yī)“腎”病的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。
中藥中策量元素的作用依賴于其所處的環(huán)境和存在的狀態(tài)，單純量的富含并不與藥物的生物效應(yīng)一致。不同的功效，微量元素在藥物中就有不同的，特殊的存在狀態(tài)和生物活性。它包含著無機(jī)成份與有機(jī)成份形成各種鹽類，締合物等而發(fā)揮作用。療效的實(shí)現(xiàn)是這樣一個(gè)整體，而不是組成這個(gè)整體的任何一方。
精氨酸鋅(Zinc Arginine)一種5-a還原酶抑制劑，使人體前列腺縮小和DNA減小而不影響皋丸功能。用中性鋅(鋅葡萄糖＋精氨酸)注入前列腺可治療前列腺增生，前列腺炎而不影響精子的發(fā)生。
貴州國家中藥保護(hù)品種前列舒樂沖劑，在治療前列腺增生，急慢性前列腺炎及男性不育，性功能低下等病癥方面藥效確切。其處方以淫羊藿為君，黃芪為臣，蒲黃、車前草為佐，川牛膝為使。
在公知的技術(shù)中，專利96115802.6復(fù)合蛋白鋅，95105605.0微量元素的生物轉(zhuǎn)化及酶化提取方法，92111199.1一種以鋅金屬硫蛋白為有效成份的保健品，93111469.1核酸中藥抗癌劑，99108733.X多元靈芝硒的生產(chǎn)方法等，均說明了真菌菌絲體通過固體，液體可對(duì)多種微量元素進(jìn)行富集轉(zhuǎn)化，單方或復(fù)方中藥與微量元素的添加具有相應(yīng)的藥效等。但還未有將真菌菌絲體對(duì)中藥復(fù)方，微量元素鋅、銅、鐵、錳等綜合轉(zhuǎn)化，富集而治療前列腺病癥并補(bǔ)腎壯陽這一特殊功效藥物的技術(shù)。
本發(fā)明的目的是通過茯苓菌絲體固體發(fā)酵和液體發(fā)酵兩條工藝途徑，以九牛躁為君藥的復(fù)方中藥作為新型的培養(yǎng)基，添加定量的鋅及銅、錳、鐵人體必需微量元素，利用茯苓菌絲體轉(zhuǎn)化，富集復(fù)方中藥有效成份及微量元素，使之成為治療急、慢性前列腺炎，前列腺肥大，性功能低下等病癥的一類中藥菌類藥材。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是1、茯苓菌株中科院微生物所菌種室引種。
2、茯苓種子培養(yǎng)基(液)配方固體鋸木屑(松木)30％、復(fù)方原藥(粉)40％、石膏1％、精氨硝鋅1％、小麥28％、PH值自然。
液體復(fù)方提取液95％、玉米粉3％、蛋白胨1％、磷酸二氫鉀2‰、精氨鋅8‰，PH5.5。
3、發(fā)酵培養(yǎng)基(液)配方固體復(fù)方原藥粉70％、骨粉5％、小麥23％、石膏1％、精氨酸鋅1％、硫酸錳600ppm、硫酸亞鐵800ppm、硫酸銅400ppm，PH自然。
液體復(fù)方提取液95％、玉米粉3％、蛋白胨1％、磷酸二氫鉀1‰、精氨酸鋅1‰、硫酸錳300ppm、硫酸亞鐵500ppm、硫酸銅200ppm，PH5.5。
4、主要發(fā)酵設(shè)備固體培養(yǎng)常壓滅菌鍋、接種箱(臺(tái))、恒溫培養(yǎng)室，中藥前處理設(shè)備，中藥濃縮提取罐。
液體培養(yǎng)三角瓶、旋轉(zhuǎn)式搖床、種子罐，發(fā)酵罐，空氣過濾機(jī)、空壓機(jī)、離心機(jī)、中藥提取罐。
5、發(fā)酵工藝流程固體培養(yǎng)；中藥前處理、粉碎，混合攪拌，裝袋、滅菌、接種、溫室培養(yǎng)、提取、濃縮、醇沉、乙醇回收、再濃縮裝罐、冷藏。
液體發(fā)酵三角瓶種子液培養(yǎng)，進(jìn)入一級(jí)種子罐發(fā)酵，再進(jìn)入二級(jí)種子罐發(fā)酵，再進(jìn)行發(fā)酵罐發(fā)酵。合格發(fā)酵液離心分離，清洗、得純菌絲體，冷凍、干燥、保藏。
本發(fā)明同現(xiàn)有的技術(shù)相比其優(yōu)點(diǎn)是1、西南地區(qū)地方藥材九牛躁列為復(fù)方之君藥，充分發(fā)掘和利用了九牛躁壯陽補(bǔ)腎而性平味甘、陰陽兩治，藥效獨(dú)道之優(yōu)勢(shì)。
2、在西南九牛躁復(fù)方中，充分保持了其防治前列腺肥大，急慢性前列腺炎，壯陽補(bǔ)腎之優(yōu)勢(shì)地位的同時(shí)，特別注重了寒溫配套，有補(bǔ)有攻，陰陽協(xié)調(diào)。
3、將精氨酸鋅這一治療前列腺疾病、療效顯著的西藥與中藥西南九牛躁復(fù)方有機(jī)配合。
4、利用茯苓菌絲體將微量元素鋅、銅、錳、鐵和西南九牛躁復(fù)方中藥進(jìn)行轉(zhuǎn)化富集。即通過生物技術(shù)在中藥真菌微量元素這一嶄新領(lǐng)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)新的中藥藥材及制劑。
實(shí)施例1西南九牛躁固體發(fā)酵的制備工藝1、茯苓毋種中科院微生物所菌種室引進(jìn)。
2、固體生產(chǎn)種子的培養(yǎng)；2.1種子培養(yǎng)基鋸木屑(松木)30％、復(fù)方原藥粉40％、石膏1％、精氨酸鋅1％、小麥28％、PH值自然。
2.2裝瓶、滅菌600毫升大口瓶、定容75％，滅菌壓力1.2kg/m2，時(shí)間90分鐘。
2.3接種、培養(yǎng)無菌接種，培養(yǎng)溫度25°±2℃，時(shí)間20天，溫室暗光。
2.4合格種子標(biāo)準(zhǔn)菌絲純白、生長整齊、粗壯、無雜菌感染。
3.0固體菌絲體培養(yǎng)3.1培養(yǎng)基復(fù)方原藥(粉)70％、骨粉5％、小麥23％、石膏1％、精氨酸鋅1％、硫酸錳600ppm、硫酸銅400ppm、硫酸亞鐵800ppm，PH值自然。
3.2中藥前處理篩選、清洗、切片、烘干、粉碎。
3.3攪拌、裝袋、滅菌滅菌壓力1.2kg/cm2，180分鐘。
3.4接種無菌條件接種，每瓶生產(chǎn)種子接10袋。
3.5溫室培養(yǎng)溫度25℃±2℃，時(shí)間25天~30天，暗光。
3.6菌絲體合格標(biāo)準(zhǔn)菌絲純白、無雜菌感染，袋口原基突起，即原基分化期。
4.0固體菌絲體提取4.1提取合格固體菌絲體搗散，按1∶5的比例加無菌水煎煮，連續(xù)三次，所得煎煮液混合。
4.2濃縮濃縮標(biāo)準(zhǔn)為50℃條件下熱測為密度1.15，得浸膏。
4.3醇沉95％乙醇按4∶1加入浸膏，時(shí)間72~120小時(shí)，120目過濾，得醇沉液。
4.4乙醇回收醇沉液注入酒精回流器回收至熱測蜜度1.2得浸膏。
4.5成品灌裝不銹鋼桶、低溫保藏。
實(shí)施例2西南九牛躁液體發(fā)酵制備工藝1.0茯苓母種中科院微生物所菌種室引進(jìn)。
2.0液體種子培養(yǎng)2.10復(fù)方提取液工藝將九牛躁復(fù)方中除蜂蜜之外的五味單方中藥混合，第一次加水5倍，煮沸60分鐘，過濾。再加水3倍，煮沸30分鐘，過濾，照此再次重復(fù)一次。3次濾液混合加進(jìn)蜂蜜即中藥復(fù)方提取液。
2.11種子培養(yǎng)液配方玉米粉3％、蛋白胨1％、復(fù)方提取液95％、磷酸二氫鉀2‰、精氨酸鋅8‰、PH自然。
2.2接瓶培養(yǎng)2.21裝瓶三角瓶裝量200毫升。
2.22滅菌壓力1.2kg/m2，時(shí)間60分鐘。
2.23接種、培養(yǎng)無菌接種，靜止培養(yǎng)，溫度24℃~26℃，時(shí)間48小時(shí)，震蕩培養(yǎng)，溫度26℃±2℃，搖床偏心距4cm，頻率150~220轉(zhuǎn)/分，時(shí)間72小時(shí)。
2.24合格種子液標(biāo)準(zhǔn)清澈透明、菌絲小球1-2毫米，菌絲體干重＞10g/升。
2.3一、二級(jí)種子培養(yǎng)2.31定容一級(jí)種子罐容積50升，定容量35升，二級(jí)種子罐容積500升，定容350升。
2.32空消溫度135℃~140℃，壓力2.5~2.8kg/cm2，時(shí)間60分鐘。
2.33實(shí)消1.2kg/cm2，60分鐘，恒溫8分鐘。
2.34降溫降至27℃降壓至0.5kg/cm2。
2.35接種按定容是的10％接入種子液，無菌操作。
2.36培養(yǎng)26℃±2℃，PH5.5，通風(fēng)量1∶0.5(體積/體積/分)，發(fā)酵液溫度升高時(shí)加大至1∶1，罐壓20-40KPa，攪拌速度110~140r/min，時(shí)間48小時(shí)。
2.37質(zhì)監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)0時(shí)查雜菌、OD值(光密度)、初糖12、24、36、48小時(shí)OD、殘?zhí)恰H；48小時(shí)正常標(biāo)準(zhǔn)PH、5.0、OD值凈長值0.5，耗糖一個(gè)單位。
3.0發(fā)酵罐發(fā)酵3.1發(fā)酵液配方復(fù)方提取液95％、玉米粉3％、蛋白胨1％、磷酸二氫鉀1‰、精氨酸鋅1‰、硫酸錳300ppm、硫酸銅200ppm、硫酸亞鐵500ppm、PH值5.5。
3.2定容發(fā)酵罐75％。
3.3空消140℃、2.8kg/cm2、60分鐘。
3.4實(shí)消50~60分鐘，保溫8分鐘，1.2kg/cm2。
3.5降溫0.5kg/cm2，25℃3.6接種二級(jí)種子、定容量10％。
3.7培養(yǎng)26℃±2℃，PH5.5，通風(fēng)量1∶05(體積/體積/分)，發(fā)酵液溫度升高時(shí)加大至1∶1，罐壓10-30kpa，攬拌速度150~180/min。
3.8質(zhì)監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)72小時(shí)后每隔12小時(shí)取樣，測糖、氮、PH、無菌度。
3.9放罐標(biāo)準(zhǔn)PH5.0，殘?zhí)?.5，氨態(tài)氮＜30毫克/毫升，菌球濃度1000~1500個(gè)/毫升。
4.0發(fā)酵產(chǎn)品制取4.1離心分離；所分離的必須是檢驗(yàn)后的合格發(fā)酵液、離心速度2000-3000rpm/min。
4.2菌絲體清洗添加無菌水、比例1∶8，清洗之后，120目過濾，得純菌絲體。
4.3菌絲體干燥冷凍干燥，無菌分裝，低溫貯藏。
權(quán)利要求
1.一種中藥西南九牛躁，以西南地方藥材九牛躁為君藥的中藥復(fù)方，構(gòu)成一種新型的培養(yǎng)基，添加定量的鋅元素及銅、鐵、錳、利用茯苓菌絲體，進(jìn)行固體和液體發(fā)酵，轉(zhuǎn)化、富集中藥復(fù)方有效成份及微量元素，成為治療前列腺疾病及壯陽補(bǔ)腎的一類中藥菌類藥材。
2.如權(quán)利要求1所述中藥西南九牛躁其特征是單方組成的復(fù)方是九牛躁30g，仙茅10g，淫羊藿10g，補(bǔ)骨脂10g，巴戟天10g，蜂蜜30g(以總量100g計(jì)算)。茯苓既是以菌絲體的存在形式進(jìn)入復(fù)方之中，同時(shí)又以其菌絲體自然轉(zhuǎn)化、富集中藥復(fù)方。
3.如權(quán)利要求1所述中藥西南九牛躁其特征是種子培養(yǎng)基(液)；固體鋸木屑(松木)30％，復(fù)方原藥粉40％，小麥28％，石膏1％，精氨酸鋅1％，PH值自然。液體復(fù)方提取液95％，玉米粉3％，蛋白胨1％，磷酸二氫鉀2‰，精氨酸鋅8‰，PH5.5
4.如權(quán)利要求1所述中藥西南九牛躁其特征是發(fā)酵培養(yǎng)基(液)固體復(fù)方原藥粉70％，骨粉5％，小麥23％，石膏1％，精氨酸鋅1％，硫酸錳600ppm，硫酸銅400ppm，硫酸亞鐵800ppm，PH自然。液體復(fù)方提取液95％，玉米粉3％，蛋白胨1％，磷酸二氫鉀1‰，精氨酸鋅1‰，硫酸錳300ppm，硫酸銅200ppm，硫酸亞鐵500ppm，PH5.5
5.如權(quán)利要求1所述中藥西南九牛躁其特征是制取中藥西南九牛躁的工藝途徑是真菌(茯苓)菌絲體固體發(fā)酵和液體發(fā)酵兩條工藝途徑。
6.如權(quán)利要求1所述中藥西南九牛躁其特征是西南九牛躁的主要功用是防治前列腺肥大，急、慢性前列是腺炎、補(bǔ)腎壯陽。
全文摘要
中藥西南九牛躁屬于中藥微量元素科學(xué)及真菌學(xué)領(lǐng)域。該發(fā)明系以西南地方藥材九牛躁為君的復(fù)方中藥作為一種新型培養(yǎng)基、添加精氨酸鋅及錳、鐵、銅等微量元素、利用茯苓菌絲體通過固體發(fā)酵和液體發(fā)酵兩條工藝途徑,轉(zhuǎn)化、富集中藥復(fù)方有效成分及鋅元素,成為一種防治前列腺疾病和補(bǔ)腎壯陽的一類中藥菌類藥材。
文檔編號(hào)A61P13/08GK1336234SQ0112562
公開日2002年2月20日 申請(qǐng)日期2001年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月14日
發(fā)明者李全才 申請(qǐng)人:李全才