專利名稱：一種包括溶血磷脂酸的藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及包括溶血磷脂酸(LPA)或其藥學(xué)上可接受的鹽類的藥用組合物。
背景技術(shù)：
敗血癥最初伴隨著極度的炎癥反應(yīng)而發(fā)生，如當宿主，比如哺乳動物處于極度的由于細菌感染(例如，格蘭氏陰性菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素)引起的極度炎癥反應(yīng)時發(fā)生，并且導(dǎo)致宿主死亡率接近45％。雖然傳統(tǒng)的抗生素或類固醇用于治療敗血癥，但其治療效果并不顯著，由敗血癥引起的宿主死亡率依然很高。
中風是一種最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病，其導(dǎo)致突然的昏迷和肌肉感覺障礙，且與癌癥和心臟病一起并列為導(dǎo)致人類死亡的三大疾病。中風分為阻塞性腦血管疾病(例如，腦血栓，腦栓塞等)和出血性腦血管疾病(例如，腦出血，蛛網(wǎng)膜下出血等)兩種情況。特別的，由于阻塞性腦血管疾病引起的局部缺血中風占所有中風病人的約80％。
在中風的病例中，由于發(fā)生了幾秒鐘至幾分鐘功能障礙，從而引起血液循環(huán)障礙，進而腦局部缺血供氧阻塞或減少，從而導(dǎo)致核心部位的細胞受到攻擊，產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的損傷。另一方面，如果在中風發(fā)生的早期階段得到正確的治療，受到新陳代謝障礙攻擊的處于邊緣部位的細胞損傷，將不是不可修復(fù)的(Choi DW(1992)Excitotoxic cell death.J.Neurobiol.231261-1276；Lipton P(1999)Ischemic cell death in brain neurons.Physiol Rev 791431-1568)。
根據(jù)現(xiàn)階段的知識，由于腦部缺血造成的神經(jīng)損傷涉及一復(fù)雜的機制，包括由線粒體功能障礙，細胞膜通透性顯著改變，興奮性神經(jīng)遞質(zhì)例如谷氨酸鹽的過度釋放，胞內(nèi)Ca2+的增加，Ca2+-依賴性蛋白酶的活化，自由基的形成，炎癥及其他的引起的ATP-生產(chǎn)量下降(Lipton P(1999)Ischemiccell death in brain neurons. Physiol Rev 791431-1568)。
在臨床實踐中，各種藥劑包括溶栓劑，例如組織血纖維蛋白溶酶原激活劑(TPA)或尿激酶，抗血小板劑，抗凝劑，腦血管擴張劑，Ca2+-通道阻斷劑，腦水腫抑制劑用于中風的治療(SandercoSck P，Lindl ey R and WardlawJ(1992)Antiplatelet，anticoagulant and fibrinolytic agents inacute ischemic stroke and transient ischemic attack.Br.J.Hosp.Med.47731-736)。但是，眾所周知，一旦沒有及時治療，則這類藥物只有平常的效果，無法有效的阻止急性腦出血向腦梗塞轉(zhuǎn)變的進程(Steinberg P(1994)StrokeThe way things really are.Stroke 251290-12945)，同時還帶來許多負面的效果，例如非特異性出血，血纖維蛋白原溶解和再度梗塞。
近來，許多研究者在采用新原理治療方面進行了多方嘗試，基于腦缺血引起的神經(jīng)損傷機制封閉或防止不可修復(fù)性損傷。換句話說，近來的研究者主要致力于谷氨酸鹽受體拮抗劑，Ca2+-通道阻斷劑，Na+-通道阻斷劑，自由基清除劑，鈣蛋白酶抑制劑，和一氧化氮合成酶抑制劑的研究(LeesonPD and Iversen LL(1994)The glycine site on the NMDA receptorstructure-activity relationships and therapeutic potential.J.Med.Chem.374053-4067；Muir KW and Lees KR(1995)Clinical experiencewith excitatory amino acid antagonist drugs.Stroke 26503-513)。因此，目前有許多新開發(fā)的藥物正在進行臨床實驗。但是，由于神經(jīng)損傷是一非常復(fù)雜的過程，新開發(fā)的藥物存在負面效果或滲入腦組織等各種問題，事實上，目前還沒有開發(fā)出有效的藥物組合物。
本發(fā)明的發(fā)明人對溶血磷脂酸(LPA)的療效進行了數(shù)年研究，觀察到LPA對敗血癥和中風有治療和預(yù)防的效果，從而完成了本發(fā)明。
到目前為止，還沒有有關(guān)LPA對敗血癥和中風有預(yù)防治療效果的報道。
發(fā)明目的本發(fā)明的一個目的是提供一種能較好的預(yù)防和治療敗血癥的藥物組合物，該組合物包括溶血磷脂酸(LPA)或其藥學(xué)上可接受的鹽類作為活性成分。
本發(fā)明的另一目的是提供一種能較好的預(yù)防和治療中風的藥物組合物，該組合物包括溶血磷脂酸(LPA)或其藥學(xué)上可接受的鹽類作為活性成分。
發(fā)明簡介為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明一方面提供了一種能預(yù)防和治療敗血癥的組合物，該組合物包括溶血磷脂酸(LPA)或其藥學(xué)上可接受的鹽類作為活性成分。
本發(fā)明另一方面提供了一種能預(yù)防和治療中風的組合物，該組合物包括溶血磷脂酸(LPA)或其藥學(xué)上可接受的鹽類作為活性成分。
附圖簡述

圖1為顯示對照組小鼠和測試組小鼠(經(jīng)LPA給藥)大腦皮層和紋狀體平均總大腦梗塞面積的曲線圖；和圖2為顯示對照組和測試組小鼠大腦皮層和紋狀體中梗塞的總體積及其平均數(shù)的柱形圖。
發(fā)明詳述下面將詳細介紹本發(fā)明。
本發(fā)明的組合物中，有效活性成分溶血磷脂酸(LPA)的分子式I如下圖所示 其中R1為一含有取代基或不含取代基的直鏈或支鏈4-30的烷基。
LPA可以很容易的經(jīng)商業(yè)途徑購得。此外，LPA也可以從植物或動物中分離，或采用本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)進行合成制得，比如，采用磷脂酶A從磷脂酸中合成。
溶血磷脂酸的藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括，但不僅限于如下的例子含有鈉，鉀，鎂，鈣，等無機鹽類，銨鹽類，含有二氨基乙酸，N，N，-二芐基乙二胺，當歸酸等的有機鹽類。
LPA及其藥學(xué)上可接受的鹽類對預(yù)防和治療敗血癥顯示出明顯的效果，因此，能顯著降低敗血癥引起的死亡率。同樣的，LPA及其藥學(xué)上可接受的鹽類能明顯的防治腦出血造成的腦血栓，因此，對中風的治療和預(yù)防有顯示的療效。
由于LPA本身在哺乳動物體內(nèi)存在，因此其安全性好。
本發(fā)明的藥物組合物可以制成適于非腸道給藥或口服的各種劑型。非腸道給藥的例子包括等滲水溶液或注射懸液等。口服給藥的例子包括片劑或膠囊形式。該藥物除了活性成分外，還可進一步包括如乳糖，葡萄糖，蔗糖，甘露醇，山梨醇，纖維素和/或甘氨酸類的一種稀釋劑，或一種潤滑劑，比如二氧化硅，滑石粉，硬脂酸，鎂或鈣的鹽類，和/或聚乙烯乙二醇。片劑還可進一步包括一種黏合劑比如，鈣鎂硅酸鹽類，淀粉粘劑，明膠，黃芪膠，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯吡咯烷酮。在某些實施例中，片劑還可包括一種可分解的試劑，例如淀粉，瓊脂，褐藻酸或其鹽類，或其沸騰混合物和/或可吸收劑，著色劑，芳香劑，和甜味劑。這類物質(zhì)通常是采用混合或制成外包衣的形式。
本發(fā)明中的藥物組合物還經(jīng)過滅菌處理和/或進一步包括如下添加劑防腐劑，穩(wěn)定劑，水合或乳化加速劑，滲透平衡鹽類和/或緩沖液，和有治療作用的物質(zhì)。這些成分可用本領(lǐng)域公知的技術(shù)進行混合。
作為本發(fā)明的一有效成分，LPA及其藥學(xué)上可接受的鹽類可每日經(jīng)非腸道或口服途徑一次或多次給藥，哺乳動物包括人類的劑量為0.1至100mg/kg(體重)。
如下的實施例將對本發(fā)明作進一步的詳述。如下實施例用于進一步詳細介紹本發(fā)明，但本發(fā)明保護的范圍不僅限于如下實施例。
在如下實施例中，所有的固體/固體，液體/液體，和液體/固體混合物比例分別用重量/重量，體積/體積，和重量/體積百分比(％)表示，同時，如果沒有特別標明，所有的反應(yīng)都在室溫下進行。
實施例1盲腸結(jié)扎和穿刺(CLP)模型實驗為了證實本發(fā)明中的藥物組合物的活性成分LPA對敗血癥良好的治療和預(yù)防作用，本實驗采用了CLP模型進行實驗，采用盲腸結(jié)扎和穿刺的方式誘導(dǎo)敗血癥的發(fā)生。
15ICR的小鼠(重約25-30g；購于MJ Ltd.)經(jīng)戊巴比妥麻醉后，在其腹部一恰當?shù)奈恢们虚_1cm長的切口使其盲腸暴露，然后在回盲腸瓣膜的下端進行結(jié)扎，并用21標準針對盲腸進行6次穿刺，然后將腹部縫合，從而在模式小鼠誘導(dǎo)了敗血癥的發(fā)生。
在縫合后2-4小時后，經(jīng)腹膜內(nèi)途徑將溶于10％DMSO溶液的LPA(oleoyl-sn-glycerol-3-phosphate；Sigma Co.)給藥于一只5 ICR小鼠，劑量約為10mg/kg(組A)，給藥另一只5 ICR小鼠劑量約為50mg/kg(組B)，經(jīng)腹膜內(nèi)途徑將10％DMSO溶液給藥于另一只小鼠(對照組)。最后，對組A和B及對照組的ICR小鼠的存活率進行調(diào)查。調(diào)查結(jié)果見下表1。
表1

正如表1所述，經(jīng)LPA給藥的小鼠存活率顯著高于對照組小鼠，證實LPA對敗血癥有預(yù)防和治療的作用。
實施例2為了證實，本發(fā)明中的以LPA為活性成分的藥用組合物對中風的預(yù)防和治療作用，本實驗所采用的模式小鼠均存在由于腦中樞動脈閉合產(chǎn)生的永久腦缺血病灶，具體實驗設(shè)計，操作步驟如下。
由腦中樞動脈閉合誘導(dǎo)的帶有永久腦缺血病灶的模式小鼠取12只重量約為250-269g的雄性Sprague-Dawley小鼠對其進行麻醉，使其吸入含有70％二氧化氮和30％氧氣的混合溶液，該溶液中還含有2％的異氟烷(Choongwae Pharma Corp.，韓國)，然后采用略經(jīng)修改的Nagasawa and Kogure’s方法對小鼠進行手術(shù)(Nagasawa H and Kogure K(1989)Correlation between cerebral blood flow and histologicchanges in a new rat model of middle cerebral artery occlusion.Stroke201037-1043)，使小鼠右腦中樞動脈閉合。具體地，小鼠經(jīng)麻醉后，沿頸部中央將頸部剪開。然后分別將其右側(cè)頸動脈和外部頸動脈小心的進行結(jié)扎，同時小心避免損害其迷走神經(jīng)。其外部頸動脈連接處將被小心的切開，一17mm長的硅膠圓柱體將被小心的植入動脈，然后在頸動脈植入圓柱體處進行結(jié)扎。該圓柱體是由4-0尼龍線(購于Nitcho Kogyo Co.，Ltd.，日本)制成，尼龍線的一端覆蓋有5mm厚的硅膠溶液(商品名稱Xantopren；Bayer Dental)和0.25至0.3mm厚的硬化劑(商品名稱Optosil-XantoprenActivator；Bayer Dental)組成的混合溶液，尼龍線的另一端則經(jīng)熱處理使其光滑。在整個15分鐘長的外科手術(shù)過程中，將采用加熱墊和白熾電燈使體溫保持在37±0.5℃。
LPA對發(fā)生腦梗塞的模式小鼠的影響為了證實LPA對腦梗塞的效果，將溶于0.9％鹽溶液的LPA(oleoyl-sn-glycerol-3-phosphate；Sigma Co.)以皮下給藥的方式對4只經(jīng)腦動脈閉合處理誘導(dǎo)存在永久性腦缺血病灶的模式小鼠進行給藥，分別于手術(shù)前1小時、手術(shù)后2-6小時給藥，劑量為20mg/kg(試驗組)。
對于對照組的8只小鼠，相應(yīng)于試驗組的相同時間段，相同劑量，對其進行鹽溶液皮下給藥。
梗塞面積和梗塞體積的測量在手術(shù)后24小時，試驗組和對照組小鼠被處死，然后迅速將其大腦取出，并在冷鹽溶液中漂洗。然后采用腦模型床(購于Harvard Apparatus Ltd.，England)，從腦前額1mm遠處開始切割，使其成為厚度為2mm的7個部分。然后根據(jù)Bederson et al，(1986)Stroke 171304中記載的方法，將該組織浸于2％2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)鹽溶液中37℃染色30分鐘。在經(jīng)TTC染色后的腦組織在10％磷酸福爾馬林溶液中固定后，由于在組織的后面的腦梗塞部分為非染色區(qū)域，因此采用圖象分析器可將其與腦皮層和紋狀體區(qū)分開。
為了糾正腦水腫造成的腦梗塞區(qū)域變化帶來的誤差，將從左半球非閉合的中樞腦動脈面積中減去右半球閉合中樞腦動脈的面積，進而確定每部分腦梗塞的面積?？偟墓Ｈ娣e為將各部分腦皮層和紋狀體中的梗塞面積相加，并平均，其結(jié)果在圖1中顯示。參考圖1，試驗組的小鼠(經(jīng)LPA給藥)相對于對照組的小鼠總梗塞面積顯著降低。
梗塞的總體積是用每部分腦組織梗塞的面積乘以每部分腦組織的厚度，同時取8個對照組和4個試驗組小鼠資料的平均±標準差，最后采用單研究t-檢測來進行顯著性判斷。圖2分別顯示了對照組小鼠和實驗組小鼠腦皮層和紋狀體的平均梗塞體積，及其總的平均梗塞體積。根據(jù)圖2，試驗組小鼠的皮層和紋狀體部位與對照組小鼠相比，腦梗塞體積分別下降了44.6±3.6％和55.3±21.0％(p＜0.001)?？偣Ｈw積下降了47.8±7.1％(p＜0.001)。因此，有理由相信LPA對神經(jīng)元有保護作用，能降低梗塞體積。
工業(yè)實用性含有LPA及其藥學(xué)上可接受的鹽類作為活性成分的藥物組合物能有效的預(yù)防和治療敗血癥和中風。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防和治療敗血癥的藥物組合物，包括溶血磷脂酸或其藥學(xué)上可接受的鹽類作為有效活性成分。
2.一種預(yù)防和治療中風的藥物組合物，包括LPA或其藥學(xué)上可接受的鹽類作為有效活性成分。
3.溶血磷脂酸或其藥學(xué)上可接受的鹽類在制備預(yù)防和治療敗血癥藥物組合物上的應(yīng)用。
4.溶血磷脂酸或其藥學(xué)上可接受的鹽類在制備預(yù)防和治療中風藥物組合物上的應(yīng)用。
5.一種通過給予有效量的溶血磷脂酸或藥學(xué)上可接受的鹽類來預(yù)防和治療敗血癥的方法。
6.一種通過給予有效量的溶血磷脂酸或藥學(xué)上可接受的鹽類來預(yù)防和治療中風的方法。
全文摘要
本發(fā)明提供一種能有效防治和治療敗血癥和中風的藥用組合物。該藥用組合物包括溶血磷脂酸或藥學(xué)上可接受的鹽類作為其有效成分。
文檔編號A61K31/661GK1509178SQ02809791
公開日2004年6月30日 申請日期2002年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月25日
發(fā)明者宋東根, 許星五, 趙貞淑, 徐江源, 金永姬 申請人:碧歐塞根公司