專利名稱：家畜粘膜競爭性排斥培養(yǎng)以減少腸致病性細(xì)菌的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及從無病原體哺乳動物腸道制備的細(xì)菌培養(yǎng)物。其也涉及該培養(yǎng)物的傳代培養(yǎng)和用此傳代培養(yǎng)物保護(hù)家畜免受腸致病性細(xì)菌定居的方法。
相關(guān)領(lǐng)域描述腸病原體，如沙門氏菌和大腸桿菌0157:H7導(dǎo)致人類異常高的發(fā)病率和致死率并且降低家畜種群的生產(chǎn)力。人類胃腸病原體一般來自人類消費肉類的腸道污染，在1995年1月召開的有關(guān)從農(nóng)場到餐桌追蹤食物傳染的病原體數(shù)據(jù)需要評價對照組的專題討論會上，提出的問題是“食物傳染的疾病有多重要？”(從農(nóng)場到餐桌追蹤食物傳染的病原體數(shù)據(jù)需要評價對照組，華盛頓特區(qū)，3-29,1995)。宣稱在美國，每年估計有650萬到3,300萬的食物傳染病例，導(dǎo)致達(dá)9,000例死亡。USDA經(jīng)濟(jì)研究部估計美國用于7種食物傳染病原體的醫(yī)藥費用和生產(chǎn)力損失達(dá)56億到94億美元。Menning估計在美國每年有超過500萬肉類和家禽食物傳染病例并且較大的比例可歸就于沙門氏菌和彎曲桿菌感染(美國獸醫(yī)協(xié)會會刊，192卷，494-497,1988)。Roberts估計每例沙門氏菌病損失700美元(美國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)雜志，71卷，468-474,1989)。根據(jù)對別的國家估計食物傳染疾病的調(diào)查，作出以下的估計將不會是不合理的，即每年世界范圍內(nèi)可歸就于沙門氏菌的食物傳染腹瀉的數(shù)量超過1000億，估計損失超過250億美元。這些病原體同時造成疼痛、痛苦和生命的喪失。此外，腸致病性細(xì)菌也可經(jīng)家畜感染而造成實際的經(jīng)濟(jì)損失。
競爭性排斥(CE)技術(shù)用于減少腸致病性細(xì)菌在家禽中的定居。Nurmi等(自然，241卷，210-211,1973)發(fā)現(xiàn)來自成熟健康雞的制品賦予還沒有建立抵抗沙門氏菌定居的微生物區(qū)系(microflora)的小雞以保護(hù)措施。施用未鑒定的CE制品至小雞加速了新孵出鳥類腸道菌群的成熟并且提供了用于從成雞傳遞微生物區(qū)系至其后代的自然過程的培養(yǎng)基。
Snoeyenbos等(美國專利No.4,335,107,1982年6月)通過冷凍干燥糞便并厭氧培養(yǎng)此制品而開發(fā)了用于預(yù)防沙門氏菌定居的CE微生物區(qū)系技術(shù)。Mikola等(美國專利No.4,657,762,1987年4月)用腸道糞便和盲腸內(nèi)容物作為CE微生物區(qū)系的來源用于預(yù)防沙門氏菌定居。用此種培養(yǎng)物處理需要培養(yǎng)基無氧且pH達(dá)到平衡。
Stern等(美國專利Number5,451,400,1995年9月19日)公開了用于保護(hù)家禽免受沙門氏菌和彎曲桿菌定居的粘膜CE組合物，其中刮下預(yù)先洗過盲腸的粘蛋白層并且厭氧培養(yǎng)保持于無氧環(huán)境中的刮下來的碎屑。
Nisbet等(美國專利No.5,478,557；1996年12月26日)公開了一種微生態(tài)制劑，其可從多種家養(yǎng)動物，包括但不限于家禽(fowl)同時也包括馬、豬和牛中獲得。Nisbet等描述穩(wěn)定而確定的微生態(tài)制劑優(yōu)選通過直接從成年目標(biāo)動物糞便、盲腸和/或大腸內(nèi)容物制備的一批培養(yǎng)物的連續(xù)培養(yǎng)而獲得。他們進(jìn)一步描述大量的該微生態(tài)制劑可或者是批量培養(yǎng)或者是連續(xù)培養(yǎng)而制備，其中的批量培養(yǎng)一直持續(xù)到乙酸濃度大于或等于約20mM，丙酸濃度大于或等于約10mM并且丁酸加上異丁酸的濃度大于或等于15mM。
Asplund等(應(yīng)用細(xì)菌學(xué)雜志，81卷，217-223,1996)報導(dǎo)了一種豬腸道的體外模型及其使用以顯示豬回腸和盲腸微生物區(qū)系對小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)0∶3的抑制。收集盲腸及小腸的distil部分，保存于無菌條件下并且收集、合并和培養(yǎng)內(nèi)容物。盲腸和回腸接種顯示抑制培養(yǎng)的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的生長，其中盲腸系統(tǒng)較回腸系統(tǒng)更為有效一些。
本發(fā)明首次提供了用于減少體內(nèi)和/或預(yù)防腸致病性細(xì)菌對哺乳動物，特別是家畜定居的組合物和方法。
發(fā)明概述因此，本發(fā)明的一個目的是提供動物粘膜來源的傳代培養(yǎng)用于控制腸致病性細(xì)菌在動物中的定居。
本發(fā)明的另一個目的是通過用來自粘膜培養(yǎng)物的制品處理動物以控制腸致病性細(xì)菌在動物中定居的方法。
通過下面的描述，進(jìn)一步的目的和優(yōu)勢將變得顯而易見。
發(fā)明詳述在過去的十幾年內(nèi)越來越認(rèn)識到人類腸道感染的重要性。家畜污染和人類感染間關(guān)系同樣受到詳細(xì)記錄。在生產(chǎn)和加工動物如家畜過程中，含有病原體的糞便物質(zhì)可能被轉(zhuǎn)移到肉中并一直維持到食物加工廚房。豬，與家禽、家畜和海產(chǎn)品一起為沙門氏菌重要的載體(Bean等食物保護(hù)雜志，53卷，804-817,1990；Lammerding等，食物保護(hù)雜志，51卷，47-52,1988)。幼小動物被污染的食物、導(dǎo)入該種群中的長期載體、感染的嚙齒類或污染的農(nóng)場員工所感染(Heard,Vet.Rec.,85卷，482-484,1969；Williams等，J.Hyg.Camb.,66卷，281-293,1968；Wilcock等，豬中的疾病，Leman等編，愛荷華州立大學(xué)出版社，Ames IA,570-583,1992；Duhamel等，第12屆國際專題討論會論文集，新的和正在出現(xiàn)的傳染病，San Diego,CA,381,1992)。對于豬來說，在屠宰場，最初的污染源為載體豬，并認(rèn)為傳遞通過豬-到-豬間的接觸或暴露至污染的物理環(huán)境而發(fā)生(Newell等，美國獸醫(yī)協(xié)會會刊，158卷，89-98,1971)。這些感染的動物反過來污染房屋、設(shè)備和員工導(dǎo)致終產(chǎn)品的污染(Williams等，美國大眾健康雜志，60卷，926-929,1970；Newel等，見上；Morgan等，流行病學(xué)感染，98卷，323-330,1987)。然而，最初的來源保持該載體豬。由于缺乏有關(guān)家畜中沙門氏菌的流行病學(xué)和病原發(fā)生方面的信息，目前鑒定和根除家畜中載體種群的努力受到阻礙。因為沙門氏菌種類廣泛分布并很好地存留于環(huán)境中，去除和控制困難。存在大量關(guān)于與人類病原發(fā)生有關(guān)沙門氏菌毒性的信息。然而，很少得到有關(guān)該感染物質(zhì)動物來源的信息。對生產(chǎn)食物動物來源中感染過程的理解認(rèn)為具有更大的優(yōu)越性并且載體動物的控制和排除將阻止該疾病的寄生蟲傳播。食物傳染疾病的控制可經(jīng)鑒定和根除載體種群而最好地獲得。既然載體狀態(tài)可發(fā)生于整個動物生活周期中的任何時間，出生時的暴露將是被暴露至此病原體動物的第一次機會。應(yīng)用粘膜培養(yǎng)用于控制病原體在生產(chǎn)食物動物中的定居已被發(fā)現(xiàn)。術(shù)語控制意為減少或預(yù)防腸致病性細(xì)菌的定居。術(shù)語生產(chǎn)食物動物意為由人類所消耗的任何動物。
從無病原體動物的腸道刮下的碎屑中獲得獨特的細(xì)菌培養(yǎng)物。此動物可以為任何的年齡，最優(yōu)選的是使用年幼的動物以保護(hù)新生和更年長的動物。將起始的培養(yǎng)物傳代培養(yǎng)且然后施用至年幼的動物。本發(fā)明方法可應(yīng)用于無論是家養(yǎng)還是野生的任何動物且特別是飼養(yǎng)用于人類消耗并可用作靶病原體載體的家畜。家畜包括牛、小牛、食用豬、豬、綿羊、羔羊、水牛、山羊、兔、海產(chǎn)品等。在分娩后頭24小時內(nèi)二次施用家畜粘膜競爭性排斥傳代培養(yǎng)物(LMCES)制品是優(yōu)選的。然而，該制品可，例如，在動物生活中任何時間，如連續(xù)基礎(chǔ)或整個動物生活周期的選定時間施用。術(shù)語“連續(xù)基礎(chǔ)”意為LMCES的持續(xù)來源通過經(jīng)飲水、食物口腔管飼法或霧化的施用來提供。對于連續(xù)基礎(chǔ)，LMCES可每日、每周、每月等以食物或水施用。術(shù)語“動物整個生活周期的選定時間”意為在關(guān)鍵的控制點施用LCME，如在出生、斷奶、疾病、抗生素施用、過熱、脫水、冷、運輸過程中如在生產(chǎn)過程中轉(zhuǎn)移至其它建筑及運輸至屠宰場等之前進(jìn)行。
靶病原體包括所有能夠定居在動物，尤其是飼養(yǎng)用于人類消耗家畜中的人類腸致病性細(xì)菌。如這里所用的，“人類腸致病性細(xì)菌”為能夠或已知定居于人消化道或在其中散播毒素并能夠?qū)е氯祟愃拗髂c道疾病的細(xì)菌。人類腸致病性細(xì)菌的實例包括但不限于沙門氏菌類、彎曲桿菌類和大腸桿菌。
LMCES可與有效控制動物中沙門氏菌的其它培養(yǎng)物或處理物，例如乳酸桿菌、果糖寡糖(fructooligosaccharides)和酵母聯(lián)合。只要其不影響LMCES制品的活性可將其它常規(guī)或已知的動物處理物，并且特別是用于腸病原體抑制的處理物加入到LMCES中。
在本發(fā)明方法中，家畜粘膜競爭性排斥傳代培養(yǎng)物(LMCES)的組合物被施用至動物。如這里所使用的，“施用”包括本領(lǐng)域已知的用于口腔運送該組合物至動物的任何合適的方法，例如通過口腔管飼法、喂食、噴灑或經(jīng)施用的牛奶等應(yīng)用膏狀物至母本乳頭或人工乳頭。LMCES也可經(jīng)低位腸開口(lower intestinal opening)施用。該制劑可以為本領(lǐng)域已知的任何形式用于施用，如液態(tài)、膏狀、凝膠帽(gel cap)或氣溶膠形式。LMCES制品在任何年齡包括新出生的動物以至少有效減少在動物腸道中發(fā)現(xiàn)的人類腸致病性細(xì)菌的量施用至動物。如這里所使用的，‘細(xì)菌的減少’或‘至少減少人類腸致病性細(xì)菌’指與沒有根據(jù)本發(fā)明方法接受治療的動物中預(yù)期的情況相比細(xì)菌數(shù)量的減少。任何準(zhǔn)確的測量、計數(shù)和比較存在于動物腸道中細(xì)菌的方法可用于此比較，這些方法對本領(lǐng)域的技術(shù)人員將是顯而易見的。如這里所用的，“以有效量”、或“有效量”指施用的LMCES制品的量，其中施用的效應(yīng)至少減少在所有年齡動物中發(fā)現(xiàn)的人腸致病性細(xì)菌。施用的量將隨被處理動物的大小和施用方法而變化。對于小型動物，包括小型的新出生的動物，可通過口腔管飼法施用約4-8ml第二次或后來傳代的48小時傳代培養(yǎng)LMCES培養(yǎng)物，其中5ml為優(yōu)選的劑量。對于大型動物，包括大型新生的動物，LMCES的第二次48小時傳代培養(yǎng)物或后來的培養(yǎng)物可在液體懸液中不加稀釋或稀釋達(dá)大約10倍用于口腔施用，其中的稀釋劑可以為，例如，牛奶、水等。其它的傳代培養(yǎng)物也可利用但很可能將不太有效。稀釋和未稀釋的液態(tài)LMCES制品均可直接施用。對于新生的動物，在出生后約2-48小時內(nèi)，更優(yōu)選約出生后2-6小時給以LMCES制品，接著在大約18-24小時后給以第二次劑量。最優(yōu)選的處理方案為出生后約6小時給以第一次劑量然后在出生后約24小時給以第二次劑量。一般地，第一次處理劑量在斷奶、運輸或轉(zhuǎn)移至其它建筑物前2到48小時給予，優(yōu)選的時間約2-6小時。在這些實例中，可能僅一次處理是需要的但第二次處理可在第一次處理后18-24小時施用。處理方案的變化將反映商業(yè)畜牧業(yè)的實踐。在斷奶、生產(chǎn)設(shè)備轉(zhuǎn)移之前或運輸至屠宰場之前可給以額外的劑量。如果以喂食或飲水給予，每日施用將發(fā)生。
LMCES制品通過無菌去除動物低位腸包括盲腸并將其置于無菌容器中而加以制備。如果這里所使用的，低位腸定義為從胃末端起始的部分并且包括盲腸。將此容器在制備培養(yǎng)物的整個過程中保存于無氧環(huán)境中。將選定長度的該腸通過本領(lǐng)域已知的任何方法加以內(nèi)翻。通過聯(lián)合清洗和刮擦去除腸的內(nèi)容物。清洗用適當(dāng)?shù)臒o氧介質(zhì)進(jìn)行。清洗步驟可利用任何對所述目的有效的介質(zhì)，包括水。優(yōu)選的介質(zhì)為無氧介質(zhì)，特別優(yōu)選的為預(yù)先還原的、Eh平衡的無氧介質(zhì)。表面刮擦用鈍端的工具，例如鈍端的手術(shù)刀片進(jìn)行。刮擦后，再次清洗里襯然后以鋒利末端的工具，例如鋒利端手術(shù)刀或其它合適的工具刮擦。以上述介質(zhì)清洗此鋒利末端的工具和里襯壁以獲得上皮細(xì)胞和其固有的微生物區(qū)系并將清洗物收集于無菌瓶中。此組織也可不經(jīng)第一次刮擦而直接切入培養(yǎng)基中。當(dāng)開始此步驟時將組織維持于還原的環(huán)境中，即氮氣環(huán)境中是優(yōu)選的。懸浮具有附著上皮細(xì)胞和微生物區(qū)系的清洗物或切下的節(jié)段并將此內(nèi)容物接種至無菌無氧培養(yǎng)基中培養(yǎng)。如這里所使用的，術(shù)語微生物區(qū)系欲包括固有的細(xì)菌。將該培養(yǎng)物于大約35-40℃無氧孵育約48小時，轉(zhuǎn)移至新鮮無氧培養(yǎng)基中并再次孵育約48個多小時。此第二次孵育為第二個48小時傳代培養(yǎng)并且為所用的最為優(yōu)選的LMCES制品。其它傳代培養(yǎng)物也可按上述使用。然后用任何適當(dāng)?shù)暮统Ｒ?guī)的分離技術(shù)分析該培養(yǎng)物中人類腸病原體的存在。無病原體的培養(yǎng)物立即施用、冷凍干燥或用冷凍培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)技術(shù)加以冷凍。應(yīng)該血清學(xué)測試供體動物血液對永久宿主動物包括人、病原體的抗體水平。應(yīng)該使用僅僅來自沒有血清轉(zhuǎn)變的動物的培養(yǎng)物。
下面的實施例僅僅意在進(jìn)一步說明本發(fā)明且并不意在限制由權(quán)利要求所定義的本發(fā)明范圍。
實施例1家畜牛粘膜CE培養(yǎng)物的制備從當(dāng)?shù)赝涝讏霁@取健康成年牛的腸并于1小時內(nèi)于塑料袋內(nèi)的無菌無氧環(huán)境中運輸至實驗室。去除待用場的碎片之前，用線扎緊周圍區(qū)域以防止腸內(nèi)容物的泄漏。無菌取下約4到5英寸長度并置于無菌容器中。然后將容器置于一直充滿無氧氮氣的盆中。所有的操作在該盆邊緣以下進(jìn)行以保持該培養(yǎng)物在無氧環(huán)境中收獲。將一段腸組織小心地內(nèi)翻于無菌玻棒上而不觸及內(nèi)表面。一旦內(nèi)翻出來，聯(lián)合清洗和刮擦去除內(nèi)容物。通過注射器應(yīng)用預(yù)先還原的心腦灌注培養(yǎng)基(PR-BHIB)完成清洗。任何其它適當(dāng)?shù)臒o氧培養(yǎng)基可用于該清洗步驟。用無菌手術(shù)刀片的鈍端完成刮擦。清洗、刮擦且然后再次清洗里襯。此時在刮擦中用手術(shù)刀鋒利端輕輕刮下盲腸上皮是優(yōu)選的。然而，該組織可直接切入到培養(yǎng)基中。刮擦內(nèi)翻的腸之后，再次以PR-BHIB清洗手術(shù)刀和里襯壁末梢。將這最后一次清洗物收集于無菌瓶中。用無菌注射器和針頭抽吸具有附著上皮和細(xì)菌細(xì)胞的清洗物并經(jīng)橡皮中隔(rubber septum)用于接種至無菌PR-BHIB的管中。將這些管于35℃孵育48小時，轉(zhuǎn)移并再孵育第二個48小時。檢查培養(yǎng)物中人目的腸病原菌如沙門氏菌、大腸桿菌和彎曲桿菌種類的存在。如果該培養(yǎng)物既無人類又無動物病原體并認(rèn)為是安全的，那么其可立即使用或保存供以后使用。
實施例2牛LMCES效率的檢測將上述實施例1中所述的牛LMCES組合物施用至出生約頭24個小時內(nèi)的新生小牛約2次。通過用瓶和橡皮乳頭口腔給以此培養(yǎng)物。每次施用中每只處理的小牛接受約500ml未稀釋或以牛奶稀釋約10倍的LMCES。施用后，讓小牛正常取食。施用后約24小時，每只小牛通過口腔管飼法給以約108個細(xì)胞的萘啶酸抗性的大腸桿菌0157:H7。接種后，將這些小牛飼養(yǎng)于隔離室中約7天以讓任何路過的大腸桿菌0157:H7細(xì)胞穿過(clear)腸道。然后殺死小牛，無菌取下盲腸并置于無菌塑料袋中。然后分析此盲腸大腸桿菌0157:H7的存在和水平。將整組每克盲腸的靶病原體平均對數(shù)值稱為定居因子(CF)。將CF比率(未處理對照/CF(處理組))稱為保護(hù)因子(PF)。通過比較一種粘膜CE培養(yǎng)物的PF與另一種培養(yǎng)物的PF，得到此培養(yǎng)物保護(hù)程度的相對值。
實施例3豬粘膜CE培養(yǎng)物的制備用本領(lǐng)域常用的混合藥物將健康、約1到6月齡至完全成熟的小豬鎮(zhèn)定。使用8mg/kg氯胺酮、6mg/kg和4mg/kg甲苯噻嗪的混合物。然后通過放血殺死該豬。無菌取下一段盲腸并置于無菌碟中。然后將該碟置于始終充滿無氧氮氣的盤中。所有操作必須在該盤的邊緣以下完成以維持該培養(yǎng)物收獲于無氧的環(huán)境中。將該段盲腸小心地內(nèi)翻于無菌工具上而不觸及內(nèi)表面。一旦內(nèi)翻，通過聯(lián)合清洗和刮擦去除內(nèi)容物。清洗通過注射器施用預(yù)還原的培養(yǎng)基完成。刮擦用無菌工具的鈍端完成。清洗、刮擦且然后再次清洗里襯。此時盲腸上皮用手術(shù)刀鋒利端輕輕刮下或可切成小段(約5cm)。刮擦翻轉(zhuǎn)的盲腸后，再次以PR-BHIB清洗手術(shù)刀和里襯壁末梢。將此最后的清洗物或盲腸節(jié)段收集于無菌瓶中。用無菌注射器和針頭抽吸具有附著細(xì)菌細(xì)胞的清洗物，用經(jīng)橡皮中隔用于接種至無菌PR-BHIB的管中。將這些管于大約35℃孵育約48小時、轉(zhuǎn)移并再次孵育約第二個48小時。檢測該培養(yǎng)物人類目的腸病原體如沙門氏菌、大腸桿菌和彎曲桿菌種類的存在。如果該培養(yǎng)物無病原體并認(rèn)為是安全的，那么其可立即施用或保存。
實施例4家畜豬粘膜CE培養(yǎng)物(LMCES)效率的測定將已知產(chǎn)仔日期的母豬保存于隔離的產(chǎn)仔箱中。在已知產(chǎn)仔日期之前的一天開始每4小時檢查每只母豬以確保第一次LMCES培養(yǎng)物以及時的方式施用。產(chǎn)仔時，讓小豬哺乳以確它們獲得初乳并且在出生后約2和6小時間通過口腔管飼法給每只小豬施以約5ml的LMCES。在大約24小時施用約5ml的第二次劑量。出生后約48小時(最后一次LMCES施用后24小時)通過鼻內(nèi)灌注給這些小豬接種以約103CFU的豬霍亂沙門氏菌。施用該制品后，讓小豬正常取食。接種后7天內(nèi)每天給每只小豬測直腸溫度和取直腸棉拭培養(yǎng)沙門氏菌。約接種后第7天，殺死所有小豬并進(jìn)行尸體解剖。收集組織用于定性細(xì)菌學(xué)并且包括扁桃體(ton)、下頜淋巴結(jié)(mln)、肺、臂(brachiale)淋巴結(jié)(bln)、肝臟、胰腺(spl)、中回腸、回腸結(jié)節(jié)(junction)(icj)、回腸淋巴結(jié)、盲腸(cec)、盲腸內(nèi)容物(cc)、結(jié)腸(col)、結(jié)腸淋巴結(jié)和胃壁(sw)。定性細(xì)菌學(xué)也在盲腸內(nèi)容物和回腸連接上進(jìn)行以測定組織內(nèi)沙門氏菌的水平。
為了分析母豬對小豬可能具有的影響，在產(chǎn)仔前、產(chǎn)仔后約48小時內(nèi)以及小豬接種后約第7天也收集和培養(yǎng)母豬糞便(母豬從不直接接種豬霍亂沙門氏菌)。對照小豬沒有給以LMCES但在約48小時齡接種。按上述收集和處理組織。
在整個實驗過程中所有小豬的臨床表現(xiàn)不明顯。沙門氏菌從直腸棉拭的回收是可變的。然而，LMCES處理的小豬約有41％的組織為陽性而對照小豬約63％的組織為陽性(表1，試驗1和2小結(jié))。來源于陰性母豬(試驗1-母豬1、2、3及試驗2-母豬2)小豬的組織為陽性而對照母豬78％[47/60](實驗1-對照母豬陰性)組織為陽性。CE處理較未處理小豬得到了沙門氏菌的減少。當(dāng)與對照組比較時在LMCES處理小豬的盲腸內(nèi)容物(CC)或回腸連結(jié)(ICJ)中觀察到約2到5個沙門氏菌的對數(shù)減少(log reduction)(分別來自2和1號母豬的小豬的ICJ和CC中清除沙門氏菌)(表2，試驗1和2)。在試驗1中，所有的母豬均無病原體。所有母豬最初流出一個血清組(Shedding one serogroup)然后在產(chǎn)仔前停止。產(chǎn)仔時，母豬1和對照母豬流出血清組B。在試驗2中，來自母豬1和2的小豬僅流出B型沙門氏菌并且沒有接種物豬霍亂沙門氏菌。試驗1和2的對照沒有接受任何LMCES。僅有接種物有機體。如可見到的，不僅有接種有機體水平下降而且有本來定居水平的下降。雖然在已定居有沙門氏菌而不是從接種物接受病原體的小豬中觀察到下降，但保護(hù)程度的下降表明在哺乳的小豬中，可確保以更早的施用。
前面的詳細(xì)描述是用于說明的目的。這些細(xì)節(jié)僅是為了該目的并且本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不偏離本發(fā)明精神和范圍的情況下可作出變動。
表一提供LMCE處理或未提供(對照)處理小豬中沙門氏菌的出現(xiàn)率和水平小結(jié)Log10/g棉拭％POS 組織％POS CC ICJ競爭排斥57/28120.3157/380 41.33.193.13對照72/11463.295/15063.35.095.45表二在提供LMCE處理或未提供(對照)處理小豬中接種后2天沙門氏菌的出現(xiàn)率和水平試驗1母豬/NO.POS. NO.POS. ％POS. Log10 log10小豬編號Pass.No. 棉拭組織 組織CCICJ1-//2 036/4090 3.863.652-//2 121/6035 2.513.353-/124/5 243/120 36 1.5 0和Ns 100/220 45 3.16 3.14對照 C/6 047/60 79 5.39 5.74所有母豬陰性組織扁桃體 臂淋 肺 肝臟 胰腺 結(jié)腸 回腸 盲腸 盲腸 胃臂巴結(jié) 連接 內(nèi)容物1(4) 34434443432(6) 03333042213(12)212 97603130c(6) 4455555554試驗2所有沙門氏菌母豬/No.Pos. No.Pos. ％Pos. log10log10小豬編號Pass.No. 棉拭組織組織 CC ICJ1+/74/4 50/56*37/70532.321.382-/96/7 4/49*20/9022-0- -0-和 na57/160 36 2.02 1.08C+/972/72*48/90 53 3.33 4.23*僅流出B續(xù)表二組織扁桃體 臂淋 肺 肝臟 胰腺 結(jié)腸 回腸 盲腸盲腸 胃臂巴結(jié) 連接內(nèi)容物1(7) 26654442402(9) 1532311220c2333269992僅僅Cl母豬/ No.Pos. No.Pos. ％Pos. log10 log10小豬編號 Pass.No.棉拭組織組織 CC ICJ1+/7 4/4na 19/7027 -0--0-2-/9 6/7na 18/9020 -0--0-和 na 37/160 23 -0--0-C+/9na 16/9818 2.98 4.23組織扁桃體 臂淋 肺 肝臟 胰腺 結(jié)腸 回腸 盲腸 盲腸 胃臂巴結(jié) 連接 內(nèi)容物1(7) 15544000002(9) 1532311110C133221111權(quán)利要求
1．用于處理家畜的方法包括提供來自無病原體動物的家畜粘膜競爭性排斥培養(yǎng)物，和施用所述的培養(yǎng)物至動物，其中所述動物與預(yù)期沒有所述施用步驟的動物相比具有至少降低水平的人類腸致病性細(xì)菌。
2．權(quán)利要求1的方法，其中所述的培養(yǎng)物在至少出生約48小時內(nèi)施用至所述的動物。
3．權(quán)利要求1的方法，其中所述的培養(yǎng)物在生命的大約頭24小時內(nèi)施用約2次。
4．權(quán)利要求1的方法，其中所述的培養(yǎng)物在出生后約6小時內(nèi)施用至所述的動物且然后在出生后約24小時內(nèi)再次施用。
5．權(quán)利要求1的方法，其中所述的培養(yǎng)物在應(yīng)急的時候施用。
6．權(quán)利要求1的方法，其中所述的培養(yǎng)物在動物的整個生命周期中施用。
7．權(quán)利要求1的方法，其中所述的培養(yǎng)物為厭氧培養(yǎng)物。
8．權(quán)利要求1的方法，其中所述的人類腸致病性細(xì)菌選自沙門氏菌、彎曲桿菌、大腸桿菌及其混合物。
9．權(quán)利要求1的方法，其中所述的培養(yǎng)物以至少減少人類腸致病性細(xì)菌在所述動物內(nèi)定居的有效量施用。
全文摘要
培養(yǎng)來自健康動物刮下碎屑并施用至動物。該制品賦予抵御隨后由腸致病性細(xì)菌,包括沙門氏菌類、彎曲桿菌類和大腸桿菌0157:H7的定居以強有力的措施,其中所述的細(xì)菌導(dǎo)致人類異常高的發(fā)病率和致死率以及降低家畜種群的生產(chǎn)力。
文檔編號A61P31/04GK1233285SQ97198680
公開日1999年10月27日 申請日期1997年10月10日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月11日
發(fā)明者N·J·斯特恩, N·A·科克斯, J·S·拜萊, P·J·克雷 申請人:美國政府農(nóng)業(yè)部